Höherwertige Verwertung von xylanhaltiger Biomasse am Beispiel von Biertreber
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- Adam Pfeiffer
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1 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 1 Sachbericht zum Forschungsprojekt: Höherwertige Verwertung von xylanhaltiger Biomasse am Beispiel von Biertreber Projektlaufzeit: Datum: Az.: /1 Berichtverfasser: Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Marie-Curie-Str Pirmasens Dipl. Ing. (FH) Benjamin Pacan, Dr. Stefan Dröge benjamin.pacan@pfi-ps.de stefan.droege@pfi-ps.de Telefon: 6331 / Telefax: 6331 / in Kooperation mit dem Lehrstuhl für Thermische Verfahrenstechnik der TU Kaiserlautern Prof. Dipl.-Ing. Dr. techn. habil. Hans-Jörg Bart Das Forschungsprojekt wurde mit finanzieller Unterstützung des Europäischen Fonds für regionale Entwicklung EFRE und des Ministeriums für Wirtschaft, Verkehr, Landwirtschaft und Weinbau in Rheinland-Pfalz durchgeführt.
2 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 2 1 Arbeitsschrittbezogene Projektaktivitäten und Ergebnisse Arbeitspaket 1 (Entwicklung einer Methode zur Zuckerbestimmung) Im Rahmen dieses Arbeitsschrittes ist eine zuverlässige und genaue Methode zur Zuckerbestimmung von aufgeschlossenem Biertreber erarbeitet worden. Für die Bestimmung der in Xylan vorkommenden Monosaccharide Arabinose, Galactose, Glucose, Mannose und Xylose kommen im Wesentlichen nur 2 Verfahren in Frage: die Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) und die Kapillarzonenelektrophorese (CE). Da mit der CE sowohl die Zucker als auch die Zuckeralkohole in einem Lauf getrennt und bestimmt werden können (Preis für eine Kapillare ca. 1 ), wurde für dieses Projekt zunächst eine CE Methode entwickelt.! " # $ Je nach Aufschlussverfahren gibt es bei der Kapillarzonenelektrophorese (CE) aufgrund von ph-wert Verschiebungen einen Drift der Basislinie. Deshalb wurde eine HPLC-Methode zur Bestimmung der Zuckerkonzentrationen von Hydrolysaten entwickelt. In der HPLC werden spezielle Säulen eingesetzt, die als Träger ein Polystyrol-Divinylbenzolharz aufweisen, an das Sulfonsäuregruppen angebracht wurden. Für die Trennung der Zucker werden diese Säulen mit Blei als Gegenion zur Sulfonsäuregruppe verwendet (Eluent: Wasser), für die Bestimmung der Zuckeralkohole wie z. B. Xylit und Sorbit kommt die H-Form zur Anwendung (Eluent: verdünnte Schwefelsäure).
3 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 3 Die Detektion erfolgt, zumindest für die hohen Konzentrationen, wie sie im Rahmen dieses Projektes bestimmt werden sollen, über den Brechungsindex. $ % & ' ( ) * +, - Diese Methode eignet sich zur Überprüfung von Aufschlüssen und von Fermentationsprodukten. Es sind Kalibrierungen für 2 Substanzen durchgeführt worden (Cellobiose / Glucose / Xylose / Sorbitol / Arabinose / Xylitol / Bernsteinsäure / Milchsäure / Ameisensäure / Essigsäure / Propionsäure / i-buttersäure / n-buttersäure / i-valeriansäure / 3,3-Dimethylbuttersäure (Interner Standard) / n-valeriansäure / Hydroxymethylfurfural / i- Capronsäure / n-capronsäure / Furfural). Aufgrund der Stabilität der Basislinie und der vielseitigen Einsatzmöglichkeiten wird dieses Analyseverfahren nun als Standart-Methode eingesetzt.
4 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 4 Arbeitspaket 2 (Auswahl geeigneter Mikroorganismen) Anhand von Literaturdaten wurden einige geeignete Hefestämme, die in der Lage sind, Xylose zu Xylitol zu verstoffwechseln und die für Forschungszwecke bezogen werden können, ausgewählt. Es handelt sich hierbei um folgende Organismen: Candida mogii (Xylitol-Produzent auf Stroh-Hydrolysaten) Debaryomyces hanseii (Xylitol-Produzent auf Holzhydrolysaten) und Pichia guillermondii bzw. deren ungeschlechtliches Stadium Candida guilllermondii. In Voruntersuchungen zeigte sich, dass die Umsatzraten und Xylitolproduktionsraten der zunächst ausgewählten Stämme für die spätere technische Umsetzung unzureichend waren. Deshalb wurde ein neuer Hefestamm, Candida guilliermondii FTI 237 (=ATCC 21935), für weitere Untersuchungen herangezogen. Der Hefestamm Candida guilliermondii FTI 237 wächst gut auf Biertreberhydrolysaten die mit einer,1 %igen Salpetersäure bei einer Behandlungstemperatur von 16 C erzeugt wurden. Die Umsatzraten im Hydrolysat erreichten je nach Ausgangskonzentration der Xylose Werte zwischen 59 und 67 % (siehe Abb. 3). Bedingt dadurch, dass die Hefen zu Beginn der Fermentation einen Teil der Xylose in Biomasse umwandeln hat die Ausgangskonzentration der Xylose einen Einfluss auf die Gesamteffizienz. So wurden bei einer Startkonzentration von weniger als 3 g/l Xylose am Endpunkt der Fermentationen in der Regel Umsatzraten von unter 5 % erreicht. Wie aus Vergleichsdaten in der Tabelle 1 ersichtlich wird, wurden somit Umsatzraten erzielt welche die Ergebnisse früher Untersuchungen in pflanzlichen Hydrolysaten zum Teil deutlich übertreffen. Die Konversion von Xylose zu Xylitol in definierten und auf die jeweiligen Hefestämme abgestimmten Wachstumsmedien, bei der prinzipiell Umsatzraten von bis zu 9 % zu erreichen sind, wurden im Rahmen des Projekts aufgrund des fehlenden Praxisbezugs nicht weiter verfolgt. Im Hinblick auf möglichst effiziente Konversion sollte das Hydrolysat vor der Fermentation eingeengt werden. Dies kann über Verdampfer oder die Nanofiltration erfolgen. Im Rahmen des Projekts wurde u.a. die Einengung des Biertreberhydrolysats mit einem Fallstromverdampfer untersucht wobei eine Aufkonzentrierung der enthaltenen Zucker um den Faktor 3,5 4 erreicht wurde. Ähnliche Werte wurden in einem weiteren Versuchsansatz mittels Nanofiltration erzielt. Beide Verfahren haben den Vorteil das verschiedenen Hemmstoffe welche die nachfolgende Fermentation beeinträchtigen können, insbesondere die Essigsäure, nicht oder nur im geringen Maße aufkonzentriert werden.
5 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 5 8,8 7,75 Konzentration [g/l) ,7,65,6,55,5 Konversionsrate [g/g] 1,45, ,8 7,75 Konzentration [g/l] ,7,65,6,55,5,45 Konversionsrate [g/g], Konzentration [g/l] ,8,75,7,65,6,55,5,45, Konversionsrate [g/g] Inkubationsdauer [h]. / )!! ( / 1 $.2! + - 3
6 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 6 Tabelle 1: Xyloseabbau und Xylitolbildung verschiedener Hefen in pflanzlichen Hydrolysaten Potentielle Produktionsstämme Xyloseabbau 2 [%] Xyitolbildung 2 [g/g Xylose] C. frareli FTI C. guilliermondii IZ C. guilliermondii IZ C. guilliermondii FTI C. intermedia RJ C. tropicalis C. utilis K. fragilis FTI K. marxianus IZ nach 48h Inkubation; C = Candida; K = Kluyveromyces Wie in Abbildung 4 dargestellt, beträgt die Xyloseabbaurate in Abhängigkeit von der Ausgangskonzentration zwischen,8 1,1 g/h/l bei einer Xylitol-Produktionsrate zwischen,5,75 g/h/l. Wie aus dem Fermentationsverlauf in Abbildung 3 deutlich wird, sinkt die Produktivität deutlich ab sobald die Xylosekonzentration einen Schwellenwert von ca. 8 g/l unterschreitet. Mit weiteren Optimierungsschritten ließe sich die Fermentationsdauer im Batch-Ansatz, ähnlich der Bioethanolherstellung, auf etwa zwei Tage reduzieren. Da Candida tropicalis aufgrund der pathogen Wirkung nicht als Produktionsorganismus in Frage kam, musste auch das Ziel einer sehr hohen Produktionsrate von 5 g/h/l aufgegeben werden. Dieser Nachteil kann durch größere Fermentationsbehälter kompensiert werden.
7 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 7 1,2 1 Umsatzrate [g/l/h],8,6,4,2 Xylose Xylitol Xylose Xylitol Xylose Xylitol Ansatz 1 [32g/l] Ansatz 2 [5g/l] Ansatz 3 [7g/l] 4" / )!! Arbeitspaket 3 (Optimierung des Treberaufschlusses) Die Aufschlüsse wurden mit einem Gerät der Fa Anton Paar (Graz, Österreich) des Typs Multiwave 3 (geschlossenes System) durchgeführt. Die Liner der Aufschlussgefäße bestehen aus modifiziertem Polytetrafluorethylen (PTFE/TFM), der Druckmantel aus Keramik. Diese Gefäße erlauben das Arbeiten bis zu 24 C bei 4 bar Betriebsdruck, der Maximaldruck liegt bei 7 bar (Berstscheibe). In die Probe taucht eine integrierte Druck- und Temperatursonde, die eine genaue Einstellung der Temperatur und die Überwachung des Drucks ermöglicht. Zusätzlich wird die äußere Oberflächentemperatur des Keramikmantels überwacht (Max. 21 C). Die ungepulste Mikrowellenleistung beträgt maximal 14 W. Die Aufschlüsse wurden durchgeführt, indem die Probe innerhalb von 1 min auf die Endtemperatur erwärmt und diese für 1 h gehalten wurde. Anschließend wurde die Probe 15 min gekühlt, filtriert und mit der CE der Gehalt der 5 Monosaccharide Arabinose, Galactose, Glucose, Mannose und Xylose bestimmt. Dabei konnten die Untersuchungen des Fraunhoferinstitut in Pfinztal, die gezeigt hatten, dass Xylane bei Temperaturen zwischen 17 2 C in monomere Zuckermoleküle gespalten werden können, bestätigt werden. In reinem Wasser lag das Maximum der Kurve bei 19 C, allerdings betrug der Xylosegehalt nur 2 bis 2,5 % an der Trockenmasse (TM).
8 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite Xylosegehalt in mg/kg TM XXX Aufschlusstemperatur in C ! $7 Um höhere Ausbeuten zu erzielen, wurde auch die Katalyse durch mineralische Säuren getestet. Dabei ergab sich bei,25 %iger Phosphorsäure allerdings keine wesentliche Erhöhung der Ausbeute (9 % der TS) verglichen mit 1 %iger Milchsäure, und auch das Maximum der Kurve verschob sich nur leicht von 16 auf knapp über 15 C. Eine Steigerung der Ausbeute gelang bei Aufschlüssen unter Zusatz von Schwefelsäure in Konzentrationen von,25 bzw. 2,5 %. Die maximalen Xyloseausbeuten lagen bei 12 % bzw. 13 % bezogen auf die Biertrebertrockenmasse Xylosegehalt in mg/kg TM XXX Aufschlusstemperatur in C,25 % 2,5 %! 9 3 : ; 5 +8 $7
9 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 9 14 Xylosegehalt in mg/kg TM XXX Aufschlusstemperatur in C <! $7 Darüber hinaus wurden auch gute Xyloseausbeuten von 13 % TM bei Mikrowellenaufschlüssen mit einer,1 %igen Salpetersäure erzielt. Im nächsten Schritt wurde die Übertragbarkeit der Ergebnisse aus den Mikrowellenaufschlüssen auf Aufschlüsse in einem 5 l Druckreaktor bestätigt. Dabei wurden nur Aufschlussmedien berücksichtigt, die einen technischen Einsatz in einem Wärmetauschersystem aus Edelstahl ohne Korrosionsprobleme ermöglichen Zuckergehalt in mg/kg TM XXX Xylose mg/kg Glukose mg/kg Arabinose mg/kg Konzentration Milchsäure in % ;, - - < = ( +8 7
10 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 1 Parallel zu den Untersuchungen mit Biertreber wurden zu Vergleichszwecken weitere xylanhaltige Biomassen untersucht. Hierbei erwies sich insbesondere Stroh als ein weiteres vielversprechendes Substrat für eine Xylosegewinnung. So wurden in ersten Voruntersuchungen Xyloseausbeuten von bis zu 2 % bezogen auf die Trockenmasse erzielt. Vor diesen Hintergrund plant das PFI vertiefende Untersuchungen zum Strohaufschluss in einem weiteren Forschungsprojekt. Arbeitspaket 4 (Dimensionierung des Ringspaltchromatographen) Im Rahmen der Untersuchungen wurden an der in Abbildung 8 gezeigten Batchanlage Versuche zur Bestimmung der Retentionszeiten der verschiedenen Monosaccharide durchgeführt. Mit Hilfe dieses Versuchsaufbaus ist es möglich, die verschiedenen Variablen der Versuchsdurchführung abzudecken. Es können variierende Volumenströme des Eluenten, variable Mengen an Feedlösung und unterschiedliche Betthöhen untersucht werden. Die Messung der Retentionszeit und die Bestimmung der Isothermen erfolgt mit einem RI-Detektor, der an den Ausgang der Batchsäule angeschlossen ist. Die Aufzeichnung und Auswertung der gemessenen Daten wird durch das Anschließen der Anlage an einen Rechner mit HPLC-Software via Interface ermöglicht.? 5 ; 4 3? $ & + +# Betthöhe <+@ 8 < +# + 5 A > # ; 3 )
11 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 11 Bei der Versuchsdurchführung wird die Säule wird bis zum Erreichen des stationären Zustands mit Eluent gespült. Hierfür werden unterschiedliche Eluenten, z.b. destilliertes Wasser oder verschiedene verdünnten Säuren, mit und ohne Puffersystem vermessen. Mit Hilfe dieser Daten kann der optimale ph-wert für die Chromatographie bestimmt und in weiterer Folge mit dem optimalen ph-wert der TDH abgestimmt werden. Mit Hilfe der durch diese Messungen erhaltenen Daten werden in der Folge Berechnungen für die Parameter zur Trennung des Zuckergemisches auf der CAC durchgeführt. Die an der Technischen Universität Kaiserlautern aufgebaute CAC Versuchsanlage zur kontinuierlichen Auftrennung ist in Abbildung 9 dargestellt. Abb. 9: Kontinuierlicher annularer Chromatograph im Labormaßstab (Technische Universität Kaiserslautern; Arbeitsgruppe Prof. Bart). Für die chromatographischen Trennungen, zuerst im Batch- und nachfolgend im kontinuierlichen Ansatz, wurde ein PCR 642 Ca Harz der Firma Purolite, mit einem Hauptpartikeldurchmesser von µm verwendet. Die Ergebnisse der Trennung einer aus Treberhydrolysaten gewonnenen Fermentationslösung sind in Abb. 11 dargestellt. Wie aus der Abbildung ersichtlich konnte die während der Fermentation gebildete Xylitolfraktion eindeutig von den übrigen Bestandteilen getrennt werden. Somit hat sich die Methode auf der Basis der bislang durchgeführten Laboruntersuchungen als gut geeignet für die Trennung von Zuckergemischen gezeigt. Durch weitere Optimierungen in Verbindung mit der Einstellung einer definierten Hauptpartikelgröße der Harze lässt sich die Produktreinheit von 99 % gewährleisten.
12 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 12 Zuckerfraktion Xylitol Abb. 1: Trennung einer Fermentationslösung mittels CAC Arbeitspaket 5 (Upscaling zum Technikumsmaßstab) Zusammen mit der Fa. Eugen Schmitt GmbH wurde eine Versuchsanlage zu Xylosefermentation konzipiert (siehe Abb. 11) & B 3 / C /.C % ; 3 ; ) D $C, -D4C, 5 6; 3 Die Hauptkomponenten der Anlage sind ein Fermentationsbehälter im 12 l Maßstab sowie ein Druckbehälter zur Durchführung des hydrothermalen Aufschlusses im 1 l Maßstab. Die Anlage ist so konzipiert, das das im Druckbehälter erzeugte Hydrolysat direkt in den angeschlossenen Fermentationsbehälter überführt werden kann. Nach dem Abkühlen des Materials wird dieser aus dem Vorratsbehälter mit den Hefen beimpft. Die Prozesswärme für die TDH-Behandlung wird über einen angeschlossenen Dampferzeuger bereitgestellt. Die Anlehnung der Pilotanlage an die fermentative Alkoholherstellung soll im Hinblick auf einen +
13 Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Seite 13 großtechnischen Einsatz die Möglichkeit eröffnen, eine bewährte und kostengünstige Anlagentechnik einsetzten zu können. Für die Prozessschritte vor und nach der Fermentation wurden ebenfalls technische Lösungen gefunden. So werden notwendige Filtrationsschritte durch den Einsatz eines Laborgerätes zur Crossflow-Mikrofiltration getestet. Mit der Integration eines Aufschlussbehälters an die Fermentationsanlage kann die hydrothermale Vorbehandlung von feststoffreicher Biomasse, die sonst an der TDH- Pilotanlage der Kläranlage Blümeltal in Pirmasens durchgeführt werden sollte, in den meisten Fällen vor Ort realisiert werden. Dies verbessert die Prozesssicherheit (keine Kontaminationen) und senkt den Transport- und Arbeitsaufwand.
Berichtsverfasser: Dipl. Ing. (FH) Benjamin Pacan, Dr. Stefan Dröge
Abschlussbericht zum Forschungsprojekt: Stoffliche und energetische Nutzung von Stroh Datum: 2010-04-30 Geschäftszeichen: 8407-6536-08/1 Zuwendungsempfänger: Prüf- und Forschungsinstitut Pirmasens Marie-Curie-Str.
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