Plasmaprotein-Diagnostik Plasmaproteine: Proteine des Blutplasmas und der interstitiellen Flüssigkeit, die unter physiologischen Bedingungen eine konstante Verteilung in beiden Flüssigkeitsräumen haben. Interstitielle Flüssigkeit: Flüssigkeit die sich ausserhalb von Zellen befindet (ohne Blut und Liquor)
Plasmaprotein-Diagnostik Plasmaproteine: Funktionelle Gruppen: Akut-Phase-Proteine Anti-Akut-Phase-Proteine Transportproteine Apolipoproteine Proteinase Inhibitoren Komplement-Proteine Immunglobuline
Plasmaprotein-Diagnostik Verteilung von Plasmaproteinen zwischen intravaskulärem und interstitiellem Raum Protein MG(kD) Intravaskulär (%) Albumin 66 42 Transferin 80 32 Haptoglobin 1-1 85 50 IgG 144 44 Haptoglobin 2-2 160 75 IgA 160 41 a 2 -Makroglobulin 720 92
Plasmaprotein-Diagnostik Gesamtproteinbestimmung - Hypoproteinämie - Hyperproteinämie Elektrophorese - Dysproteinämie - Paraproteinämie
Plasmaprotein-Diagnostik Gesamteiweiß Vermehrung oder Verminderung durch Änderungen der Proteinregulation oder durch Störung des Wasserhaushalts. Lezteres ist am synchronen Verhalten de Hämatokritwertes zu erkennen. Indikation Chronische Leber- und Nierenerkrankungen Chronische Durchfälle und Malabsorptionssyndrome Verbrennungen, Infektanfälligkeit, eiweißmangelernährung Monoklonale Gammapathien Hämatokritwert:
Plasmaprotein-Diagnostik Gesamteiweiß Untersuchungsmaterial Serum, Plasma, Urin, Liquor, Aszites, Pleuraerguß Bestimmungsmethoden Biuret-Methode Lowry oder BCA Farbstoffbindung Indikatorfehler Photometrie
Plasmaprotein-Diagnostik Gesamteiweiß im Serum (Referenz) Erwachsene 6,5-8,5 g/dl Kinder ab 1 Jahr 6,0-8,0 g/dl Kinder bis 1 Jahr 4,8-7,6 g/dl Neugeborene 4,6-6,8 g/dl Andere Körperflüssigkeiten Urin <150 mg/24h Liquor < 50 mg/dl Aszites < 3 g/dl (Transsudat) > 3g/dl (Exsudat) Pleuraerguß < 3 g/dl (Transsudat) > 3g/dl (Exsudat)
Plasmaprotein-Diagnostik
Plasmaprotein-Diagnostik Proteinbestimmung nach Lowry ist eine Weiterentwicklung der Biuretreaktion: 1.wie bei Biuretreaktion wird ein Cu-Komplex gebildet, das Cu(II) wird zu Cu(I) reduziert. 2.Cu(I) reduziert Folin-Ciocalteu-Reagenz (gelb) (Molybdatophosphorsäure und Wolframatophosphorsäure/Heteropolysäuren) zu Molybdänblau (Absorption bei 750nm/650nm/540nm) Sensitivität: ca. 0,1 1 µg/ml Vorsicht!!: falsche Werte mit EDTA, Triton X-100 oder Ammoniumsulfat
Plasmaprotein-Diagnostik Proteinbestimmung BCA-Reaktion: Reaktion von 2,2 -Bichinolin- 4,4 -dicarbonsäure mit Cu(I) zu violettem Farbkomplex; Absorbtion bei 562 nm Meßbereich: ca. 0,5µg 1,5 mg/ml Keine Störung durch niedere Konzentrationen (EDTA, Triton X-100, (NH 4 ) 2 SO 4
Plasmaprotein-Diagnostik (Bradford Assay) Sensitivität: 1-20 µg/ml
Hyperproteinämie
Hypoproteinämie
Serumprotein Elektrophorese: Normalbefund
Proteine in den (Serum- )Elektrophoresefraktionen
Proteine in den (Serum- )Elektrophoresefraktionen
Dysproteinämie Dysproteinämie: Plasmaproteinstörung primäre -Proteinsynthese-Anomalie -Fehlsteuerung der Proteinsynthese sekundäre -verminderte Synthese - Verlust
Serumelektrophorese: Leberzirrhose
Serumelektrophorese: Nephrotisches Syndrom 2
Serumelektrophorese: Antikörpermangel Syndrom
Serumelektrophorese: Akute Entzündung
Serumelektrophorese: Maligne Monoklonale Gammopathien Vermehrung eines einzelnen Klons antikörperbildender Zellen (Plasmazelle; B-Zellen). http://de.wikipedia.org/wiki/monoklonale_gammopathie
Maligne Monoklonale Gammopathien Multiples Myelom und Non-Hodgkin-Lymphom Sind Neoplasien (Tumore) von myeloischen Zellen (Plasmazelltumor) bzw. Lymphozyten
Nachweis von Proteinen Gesamtproteinbestimmung Zusammensetzung der Proteine: - (Serum-)Elektrophorese - Chromatographie - enzymatische Aktivität - immunologische Nachweisverfahren - Westernblot - Diffusion und Präzipitation - Präzipitation - RIA - ELISA - Massenspektrometrie
Nachweis von Proteinen Immunologische Nachweisverfahren
Nachweis von Proteinen Antigen-Antikörper-Präzipitat
Nachweis von Proteinen Radiale Immundiffusion
Nachweis von Proteinen Kompetitiver Immunassay
Nachweis von Proteinen Nicht-kompetitiver Immunassay
Nachweis von Proteinen Westernblot M elektrophoretischer Transfer M Detektion spez. Proteine durch Inkubation mit Antikörpern Proteinbindende Membranen: Nitrocellulose Nylon PVDF (Polyvinylidene difluoride) M: farbig markierter Größenstandard
Diagnostisch bedeutsame Plasmaproteine a1-antitrypsin
Diagnostisch bedeutsame Plasmaproteine Coeruloplasmin (a2-globulin-fraktion) enthält pro Molekül 8 Kupferionen (Transportprotein für Kupfer), Akut-Phase-Protein Erniedrigte Werte: M.Wilson: (in Serum, aber Kupferausscheidung in Urin und Kupfer in Leber erhöht) Normale oder erhöhte Werte im Serum können z.b. Bei gleichzeitigen Entzündungsprozessen (Akut- Phase-Protein) vorkommen. Menkes Syndrom (neurologische Symptomatik): (auch Kupfer in Leber erniedrigt) Erhöhte Werte: Lebererkrankung (akute Hepatitis, Cholestase); Akute Entzündung (Akut-Phase Protein); Chronisch-aktive Entzündung (rheumatoide Arthritis); Sonstiges (maligne Tumore, M. Hodgkin, Herzinfarkt>) Falsch hohe Werte: hormonelle Antikonzeptiva, Schwangerschaft
Diagnostisch bedeutsame Plasmaproteine Haptoglobin (a2-globulin-fraktion) Transportprotein für freies Hämoglobin, Akut-Phase-Protein
Diagnostisch bedeutsame Plasmaproteine a1-mikroglobulin
Diagnostisch bedeutsame Plasmaproteine b2-mikroglobulin
Diagnostisch bedeutsame Plasmaproteine Akut-Phase-Proteine Akut-Phase-Proteine sind Plasmaproteine deren Konzentration im Rahmen entzündlicher Reaktionen ansteigen. Akut-Phase-Proteine werden in der Leber u.a. nach Stimulation durch IL-6 gebildet und haben physiologisch sehr unterschiedliche Funktionene. Die Synthese der Akut-Phase- Proteine ist begleitet durch einen Abfall der ebenfalls in den Hepatozyten gebildeten Anti-Akut-Phase-Proteine, wie Präalbumin, Albumin. Transferrin
Akut-Phase-Proteine
Akut-Phase-Proteine (Reaktionszeit/Anstieg)
Akut-Phase-Antwort
BSG: Blut Sedimentations Geschwindigkeit Einflußgrößen auf BSG:
Diagnostische Wertigkeit von Untersuchungen zur Erkennung einer Entzündung Parameter Diagnostische Diagnostische Brauchbarkeit Brauchbarkeit Sensitivität Spezifität akute Entzündung chronische Entzündung CRP/SAA GUT GUT SEHR GUT mäßig Serumelektrophorese mäßig gering mäßig GUT BSG GUT gering GUT GUT Leukozytenzahl GUT GUT GUT mäßig Temperaturmessung GUT schlecht GUT mäßig
Diagnostisch bedeutsame Plasmaproteine CRP C-reaktives Protein
Diagnostisch bedeutsame Plasmaproteine CRP Bewertung:
Diagnostisch bedeutsame Plasmaproteine CRP Bewertung: Zu beachten:
Liste von Nachweisreaktionen eines vollautomatischen Analysesystems für die Klinische Chemie (z.b. Siemens ADVIA 2400) Routine Alanin- Aminotransferase Alanin- Aminotransferase_c Albumin, BCG Albumin_c, BCG Albumin, BCP* Alkalische Phosphatase AMP Alkalische Phosphatase AMP_c Alkalische Phosphatase DEA Amylase Anorganisches Phosphat Anorganisches Phosphat_c Aspartate- Aminotransferase Aspartate- Aminotransferase_c Bilirubin, direkt Bilirubin, total Calcium CPC Calcium CPC_c Calcium Arsenazo Calcium Arsenazo_c Chlorid Cholesterin_2 C holesterin_2_c Direkt HDL Cholesterin Direkt LDL Cholesterin Eisen_2 Gamma- Glutamyltransferase Routine (fort.) Gesamtprotein_2 Gesamtprot ein Urin/CSF_2 Glucose-Hexokinase 3 Glucose-Hexokinase 3_c Glucose- Oxidase Glucose- Oxidase_c Harnsäure Harnsäure_c Harnstoff Harnstoff_c Kalium Kohlen dioxid C02 Kreatinkinase, CK Kreatinin (enzymatisch)_2 Kreatinin (Jaffe) Kreatinin (Jaffe)_c Laktat Laktatdehydrogenas e L-P Laktatdehydrogenase P- L Lipase Magnesium Magnesium_c Natrium Saure Phosphatase Triglyceride Spezifische Proteine a1-antitrypsin a1-saures Glycoprotein Anti-Streptolysin O_2 Apolipoprotein A1 Apolipoprotein B b2-mirkoglobulin Complement 3 (C3) Complement 4 (C4) C-Reactive Protein (CRP 2) Cardio Phase hs CRP Cystatin C Wide Range CRP (wr-crp) Ferritin Haptoglobin Immunoglobulin A_2 Immunoglobulin G_2 Immunoglobulin M_2 Lp(a) Myoglobin Rheumafaktor (RF) Transferrin http://www.healthcare.siemens.de/clinicalchemistry/systems/advia-2400-chemistry-system/assays
Liste von Nachweisreaktionen eines vollautomatischen Analysesystems für die Klinische Chemie (z.b. Siemens ADVIA 2400) Drogen/Toxikologie Acetaminophen Amphetamine_2 Barbiturate (Serum) Barbiturate_2 (Urin) Benzodiazepine (Serum) Benzodiazepine_2 (Urin) Cannabinoide_2 (THC) Ecstasy Ethanol_2 Kokain Metabolit_2 Methadon_2 Methadon Metabolit Opiate_2 Phencyclidin_2 Propoxyphen_2 Salicylat Trizyklische Antidepressiva Kreatinin Validitätstest Nitrit Validitätstest Oxidant Validitätstest ph Validitätstest Spezifisches Gewicht Validitätstest Spezielle Chemie Ammoniak Cholinesterase, ChE Fruktosamine Hämoglobin A1c (HbA1c) Mikroalbumin Pankreas-Amylase Präalbumin Totale Eisenbindungskapazität (TIBC) Medikamente (TDM) Carbamazepin_2 Digoxin Gentamicin_2 Lithium Phenobarbital_2 Phenytoin_2 Theophyllin_2 Tobramycin_2 Valproinsäure_2 Vancomycin_2 http://www.healthcare.siemens.de/clinicalchemistry/systems/advia-2400-chemistry-system/assays