Mikrobiologische Ringversuche Tagung DBU Osnabrück. 5. März 2014 Dr. Ernst-August Heinemeyer

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1 Mikrobiologische Ringversuche Tagung 2014 Roesebeckstr Hannover Fon 0511/ Fax 0511/ DBU Osnabrück 5. März 2014 Dr. Ernst-August Heinemeyer Niedersächsisches Landesgesundheitsamt Standort Aurich Lüchtenburger Weg Aurich Tel / Fax 04941/

2 Was erwartet Sie Mikrobiologische RV 2013 (Teilnehmerzahlen, Bewertungen, Stämme u.a.) Fehlersuche / Kundenanfragen Koloniezahlen bei 22 C Beachtung der Inkubationsbedingungen beim Enterolert Colilert und Matrix der RV Proben EU Badegewässer und Werteanforderungen Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 2

3 Verwendete Mikroorganismen/Stämme im Jahr 2013 Parameter Spezies/Stämme RV 2013 NLGA Nr. Differenzierung Herkunft Escherichia coli E. coli 1-4 A 23 API-E: SCCRWA coliforme Bakterien Klebs. pneumoniae 1-4 B 2 API-E: PHLS: Newcastle u.t. Koloniezahlen E. coli Klebs. pneumoniae Serratia spec A 23 B 2 C 42 API-E: API-E: MPA Bremen SCCRWA PHLS: Newcastle u.t. Wildstamm Pseudomonas aeruginosa Enterokokken P. aeruginosa C 23 API-NE: ATCC Enterococcus faecalis Enterococcus mundtii D 1 D 11 API-Strep: API-Strep: MPA Bremen Wildstamm Wildstamm (neu) Legionella spec. L. pneumophila SG 1 L. pneumophila SG C 33 C 34 TU Dresden / NRZ TU Dresden / NRZ Wildstamm Wildstamm Clostridium perfringens C. perfringens C 28 API-A: Bundeswehr Kronshagen Badegewässer EU-Richtlinie E. coli Enterococcus hirae 2 2 A 23 D 8 SCCRWA CCM 2423 Bakteriophagen E. coli (Wirt) Phage ΦX A 25 API-E: DSMZ DSMZ 4497 Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 3

4 logistische Herausforderung Mikrobiologische Trinkwasserringversuche Jahrestagung 2014 Teilnahme an Trinkwasserringversuchen E. coli [n] Anzahl Teilnehmer Ringversuch ID E. coli [n] Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 4

5 Ursachenforschung bei fehlerhaften Nachweisraten Zu geringe Nachweisraten bei Koloniezahlen insbesondere bei 22 C (Norm - und TVO-Verfahren) Stark schwankende Nachweisraten beim Enterolert - Verfahren Von Teilnehmern geäußerte Kritik am Matrixmedium für Colilert - Verfahren. Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 5

6 Mikrobiologische Trinkwasserringversuche Jahrestagung 2014 Koloniezahlen nicht erfolgreiche Teilnahme Anzahl in [%] Ringversuch ID KBE_TVO 1990 [%] nbest. [%] KBE_DIN 6222 [%] nbest. [%] Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 6

7 Koloniezahl bei 36 C mit E. coli & Serratia spec. Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 7

8 Koloniezahlen bei 22 C mit E. coli und Serratia sp ec. Niveau-Gruppe A TrinkwV 2001 Anl.5 I d)bb) RV Häufigkeit des Messwerts Koloniezahl Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 8

9 Koloniezahl bei 22 C mit E. coli & Serratia spec. 2 0er Test Ungewöhnlich starke Streuung im RV Labor Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 9

10 Serratia spec. KBE 22 C Einfluss der Plattenaufstellung gestapelt nicht gestapelt 12 [n] KBE / ml Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 10

11 so oder so? Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 11

12 Temperatur von Gussagarplatten im Stapel von 10 Petrischalen 48,0 46,0 44,0 Temperatur [ C] 42,0 40,0 38,0 36,0 Obere Pl. Platte 6 Platte 5 Platte 2 Untere Pl. 34,0 32,0 30,0 0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min m in nach Ausgießen Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 12

13 Serratia spec. Temperaturempfindlichkeit (Stamm Nr. NLGA C42) KBE [ml] Zeit [min] MW 45 C MW 40 C MW 36 C Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 13

14 Oberflächentemperatur von Koloniezahlagar auf verschiedenen Arbeitsfächen 54,0 52,0 50,0 48,0 46,0 Temperatur [ C] 44,0 42,0 40,0 38,0 36,0 34,0 32,0 30, Abkühlzeit [Sek.] Edelstahltisch Kunststoffbeschichtete Arbeitsplatte Fliesentisch Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 14

15 Abkühlung einer Gussagarplatte auf verschiedenen Unterlagen 45,0 40,0 Raumtemperatur: 21 C Gießtemperatur Nähragar: 45 C Oberflächentemperatur der Agarplatte [ C] 35,0 30,0 25,0 Kunststoff beschichtete Spanplatte (Arbeitsplatte): 18,3 C Fliesentisch: 17,8 C Edelstahltisch: 16,8 C 20,0 15,0 50 Min. 48 Min. 46 Min. 44 Min. 42 Min. 40 Min. 38 Min. 36 Min. 34 Min. 32 Min. 30 Min. 28 Min. 26 Min. 24 Min. 22 Min. 20 Min. 18 Min. 16 Min. 14 Min. 12 Min. 10 Min. 8 Min. 6 Min. 4 Min. 3 Min. 2 Min. 1 Min. Minuten nach Gießen der Platte Arbeitsplatte [ C] Fliesentisch [ C] Edelstahltisch [ C] Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 15

16 Schon auf der Jahrestagung 2004 bei der AQS in Stuttgart Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 16

17 Temperaturschichtungen im Brutschrank Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 17

18 Ein Brutschrank mindestens 3 Temperaturen Unten Mitte Oben Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 18

19 Enterolert: Einfluss minimaler Abweichung bei der Bebrütungstemperatur Enterolert Bebrütungstemperatur (Vortest RV ) Exakte Einhaltung der Vorgabetemperatur Fehlerhafte Einhaltung der Vorgabetemperatur 60 Enterokokken / 100 ml % C ± 0,5 42,5 C ± 0,5 Mittelwert Minimum Maximum Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 19

20 Enterolert nach 24h und 48h (20er Test RV ) MPN / 100 ml MPN 24h MPN 48h Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 20

21 Matrixvergleich - Auswirkungen auf Colilert 3 E. coli / coliformen Stämme Mittelwerte aus jeweils 10 parallelen Ansätzen Wiederfindung [%] gegenüber MSM E. coli - A23 E. coli - A2 K. pneumoniae - B MSM Oldenburg Norden Aurich Trinkwasser aus: Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 21

22 Aus 100 ml Testansatz = 27 E. coli / 100 ml Entspr. 21 positiven Vertiefungen Aus 10 ml (RV Probe ) + 90 ml (Trinkwasser) 3 pos. Näpfchen = 3,1 (*10) = 31 E. coli / 100 ml (15%) 4 pos. Näpfchen = 4,2 (*10) = 42 E. coli / 100 ml (55%) Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 22

23 Badegewässer - Information zur Dotierung der Proben Anforderungswerte nach EU Richtlinien sind: E. coli: < 10 nach oben offene Scala ISO , MPN > 4564 bei einer 1:2 Verdünnung Ländergrenzwert / 100 ml Enterokokken: < 10 - nach oben offene Scala ISO , MPN > 4564 bei einer 1:2 Verdünnung Enterokokken: / 100 ml (!) ISO , Membranfiltration Aber: Ländergrenzwert 700 / 100 ml Das muss sich in den Messergebnissen widerspiegeln lassen Ergebnisangabe: Nach ISO 8199 eine zwar korrekte Angabe wie z.b.: EK > 200 / 100 ml reicht dann nicht (ISO Membranfiltration, Verdünnungen einplanen) Wir haben eine Begrenzung der Dotierungen vorgesehen Enterokokken: 0 (<10) bis ~ 2000 / 100 ml E. coli 0 (<10) bis ~ 4564 / 100 ml Damit sind beim Parameter: - Enterokokken: mit ISO und ISO sowie - E. coli: mit ISO alle Proben, die im Ringversuch verschickt werden, auswertbar. Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 23

24 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit! Dr. Ernst-August Heinemeyer, NLGA 24