Simplexa Spectral Calibration Panel
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- Alexander Lenz
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1 Simplexa Spectral Calibration Panel REF SC1100 Rev. B Spektral-Templates zur Bestimmung der Spektralmatrix mittels Echtzeit-PCR In-vitro-Diagnostikum ANWENDUNGSBEREICH Das Simplexa Spectral Calibration Panel (Simplexa -Spektralkalibrierungspanel) von Focus Diagnostics ist zur Abschätzung der Spektralreaktion von vier Farbstoffen (FAM, JOE, CFR610 und Q670) in den vier Kanälen des 3M Integrated Cycler und zur Bestimmung der Spektralmatrix bestimmt. Dieses Produkt ist nicht für die Anwendung in der Diagnostik zum Nachweis von Krankheiten oder Krankheitszuständen bestimmt. ZUSAMMENFASSUNG UND ERLÄUTERUNG Das Simplexa Spectral Calibration Panel besteht aus vier individuellen und kompletten Reaktionsgemischen (Spectral Templates), die doppelsträngige Nukleinsäuremoleküle, Primer und Enzyme zur Erzeugung definierter Fluoreszenzsignale zur Analyse mit der Integrated Cycler Studio-Software enthalten. Nach Analyse des Spectralkalibrierungspanels auf dem 3M Integrated Cycler wird vom technischen Kundendienst von Focus Diagnostics eine neue Spektralmatrix berechnet und zur Verfügung gestellt. Dies ermöglicht die fortlaufende Verwendung von Simplexa -Assays auf dem 3M Integrated Cycler. Bei Geräten, die mehrere Farbstofffarben mit dicht beieinander liegenden Emissionswellenlängen erkennen, sind Korrekturmethoden erforderlich, um eine individuelle Auflösung eines jeden Farbstoffsignals in allen Kanälen zu erreichen, damit die Rohdaten für den jeweiligen Kanal in Farbstoffdaten umgerechnet werden können. Bei den meisten Geräten kommt zur Unterscheidung der einzelnen Farbstoffsignale eine Kombination aus Hardware (optische Filter) und Software (chemische und Kalibrierungsroutinen) zum Einsatz. Da es sich bei jedem Spectral Template um einen Komplettreaktionsansatz für jeweils nur ein spezifisches Zielmolekül handelt, wird mit dem Simplexa Spectral Calibration Panel für jeden der vier Farbstoffe ein individuelles und reines Fluoreszenzsignal erzeugt. Die Integrated Cycler Studio-Software misst die Spektraleigenschaften eines jeden Farbstoffes und berechnet Werte zur Unterscheidung des Anteils eines jeden Farbstoffsignals in seinem Hauptkanal und in den benachbarten Kanälen. GRUNDLAGEN DES VERFAHRENS Bei dem Simplexa Spectral Calibration Panel (SC1100) handelt es sich um ein Set mit gebrauchsfertigen Spectral Template- Reaktionsgemischen für das Universal Disc-Format zur Berechnung der Spektralmatrix mit dem 3M Integrated Cycler, die zur Anwendung lediglich aufgetaut werden müssen. Das Simplexa Spectral Calibration Panel besteht aus Röhrchen für den Einmalgebrauch mit fertigen und ladebereiten Reaktionsgemischen (Spectral Templates), die für jeden der 4 Farbstoffkanäle spezifisch sind: SC0520 FAM, SC0560 JOE, SC0610 CFR610, und SC0682 Q670 des 3M Integrated Cycler. Die Spectral Templates werden bestimmungsgemäß weder miteinander noch mit einer zusätzlichen Patienten- oder Umgebungsprobe gemischt. Sie liegen als gebrauchsbereites Komplettgemisch vor. MITGELIEFERTES MATERIAL Das Simplexa Spectral Calibration Panel von Focus Diagnostics enthält ausreichend Material für 2 Reaktionsreihen. Nach Erhalt sind alle Templates bei -10 bis -30 ºC aufzubewahren (keine Gefriergeräte mit Abtauautomatik verwenden). Bei Lagerung zwischen -10 und -30 ºC sind die Templates bis zum Ende des auf der Kit-Verpackung angegebenen Verfallmonats stabil. Bezeichnung der Komponente REF Beschreibung des Kits EG-SYMBOL AUF ETIKETT Deckelfarbe Anzahl Fläschchen Reaktionen pro Kit/Gefäß Volumen pro Fläschchen Simplexa Spectral Template 520 SC0520 CONTROL A Grün 2 16/8 100 µl Simplexa Spectral Template 560 SC0560 CONTROL B Blau 2 16/8 100 µl Simplexa Spectral Template 610 SC0610 CONTROL C Rot 2 16/8 100 µl Simplexa Spectral Template 682 SC0682 CONTROL D Violett 2 16/8 100 µl
2 Seite 2 Beschreibung der Kit-Komponenten Kit-Komponente Simplexa Spectral Calibration Panel QR-Code Card (Simplexa -Spektralkalibrierungspanel QR-Code-Karte) Beschreibung der Komponente Assayspezifische Parameter ERFORDERLICHES, JEDOCH NICHT MITGELIEFERTES MATERIAL 1. Integrated Cycler mit Integrated Cycler Studio-Software, Version 3.0 oder höher 2. Universal Discs zur Verwendung auf dem Integrated Cycler 3. Universal Disc-Abdeckfolie 4. Ein- oder Multikanal-Mikropipette(n) bzw. Repetiermikropipette(n) zur präzisen Abgabe von 10 µl 5. Gefrierschrank, -10 C bis -30 C (mit manueller Abtaufunktion), für die Lagerung der gefrorenen Kit-Komponenten 6. Mikrozentrifuge 7. Sterile RNase/DNase-freie Einmalpipettenspitzen mit Aerosolbarriere 8. Einweg-Schutzhandschuhe (ungepudert) 9. Universal Disc-Ladeblock HALTBARKEITSDAUER UND HANDHABUNG 1. Die Templates bei -10 C bis -30 C lagern (keine Gefriergeräte mit Abtauautomatik verwenden). 2. Nach der Entnahme der Spectral Templates aus der Gefrierlagerung den Test innerhalb von 30 Minuten starten. 3. Die Templates dürfen nach Ablauf des Verfallsdatums nicht mehr verwendet werden. 4. Nicht auf dem Vortex mischen. 5. Keine Templates aus verschiedenen Chargen kombinieren. 6. Keine Templates miteinander oder mit anderen Materialien kombinieren. 7. Die Templates nicht für längere Zeit hellem Licht aussetzen. WARNUNGEN UND SICHERHEITSVORKEHRUNGEN 1. In-vitro-Diagnostikum. 2. Befolgen Sie die allgemein anerkannten Vorsichtsmaßahmen. 3. Beim Umgang mit den Templates Personenschutzausrüstung, wie zum Beispiel (aber nicht beschränkt auf) Handschuhe und Laborkittel, tragen. Hände nach der Durchführung des Tests gründlich waschen. 4. Nicht mit dem Mund pipettieren. 5. In Bereichen, in denen mit Templates gearbeitet wird, darf nicht geraucht, gegessen und getrunken werden. In diesen Bereichen ist auch das Berühren von Kontaktlinsen oder das Auftragen von Make-up nicht erlaubt. 6. Nicht verwendete Templates in Übereinstimmung mit den nationalen und regionalen Vorschriften entsorgen. 7. Kontamination von Templates kann zu einer Verfälschung der Ergebnisse führen. Unter aseptischen Bedingungen arbeiten. 8. Die Templates vorsichtig pipettieren und handhaben, um eine Kontamination mit Material aus benachbarten Vertiefungen (engl. wells) zu verhindern. 9. Geeignete Pipettiertechniken anwenden und für die Dauer des Tests das gleiche Pipettierschema einhalten, um optimale und reproduzierbare Werte zu erhalten. 10. Die Templates nicht gegen Templates anderer Chargen oder anderer Hersteller austauschen bzw. mit diesen mischen. 11. Nur das in dieser Packungsbeilage beschriebene Protokoll verwenden. Bei Nichteinhaltung des Protokolls oder der angegebenen Zeiten oder Temperaturen kann es zu fehlerhaften Testergebnissen kommen. 12. Die Zusammenstellung des Assays kann bei Raumtemperatur (ca. 18 bis 25 C) erfolgen. Die Templates können entweder bei Raumtemperatur gehalten oder in einem Kühlblock gekühlt werden, und die Universal Disc kann während des Ladens der Templates auf einen vorgekühlten Universal Disc-Ladeblock gestellt werden. 13. Den Lauf innerhalb von 30 Minuten nach der Entnahme der Spectral Templates aus der Gefrierlagerung starten. 14. Universal Discs, die bereits in Kontakt mit Templates gekommen sind, nicht wieder verwenden. 15. Gebrauchte Discs ohne Abnehmen oder Entfernen der Abdeckfolie entsorgen. 16. Das Reaktionsgemisch enthält max. 5 % Glycerin, das bei Einatmen oder Hautkontakt zu Reizungen führen kann. Nach Einatmen oder Berührung mit der Haut sollten Erste-Hilfe-Maßnahmen eingeleitet werden. 17. Das Kit bei offensichtlich angebrochener oder beschädigter Verpackung bzw. angebrochenem oder beschädigtem Inhalt nicht verwenden und Focus Diagnostics kontaktieren. Kontaktadressen befinden sich auf der letzten Seite dieses Dokuments. GEBRAUCHSANWEISUNG A. EINSTELLUNG DES GERÄTS FÜR DIE ECHTZEIT-PCR Einzelheiten darüber, wie die Integrated Cycler Studio Software zu konfigurieren ist, um eine Assaydefinition hinzuzufügen, einen Lauf einzustellen und die Läufe auf dem Integrated Cycler zu analysieren und zu exportieren, sind der Bedienungsanleitung des Integrated Cycler zu entnehmen. B. BEREICH FÜR DIE ECHTZEIT-PCR-AMPLIFIKATION In einem speziellen, der Vorbereitung der Universal Disc mit 96 Vertiefungen für das Simplexa Spectral Calibration Panel vorbehaltenen Arbeitsbereich arbeiten. Bei der Vorbereitung des Assays mit dem Simplexa Spectral Calibration Panel
3 einen gekühlten Universal Disc-Ladeblock verwenden. Die Röhrchen nicht im template-freien Reagenzienzubereitungsbereich vorbereiten. Simplexa System Calibration Panel Seite 3 1. Jedes Spectral Template bei Raumtemperatur (ca. 18 C bis 25 C) auftauen. Jedes Fläschchen des Kits enthält genügend Template-Volumen für 8 Reaktionen. Vor jedem Gebrauch jede einzelne Komponente vorsichtig durchmischen und kurz zentrifugieren, um die Inhaltsstoffe auf den Boden des Röhrchens zu ziehen. Spectral Template-Volumen Spectral Templates Volumen / 1 Reaktion Simplexa Spectral Template µl Simplexa Spectral Template µl Simplexa Spectral Template µl Simplexa Spectral Template µl 2. Die Spectral Templates innerhalb von 30 Minuten nach dem Auftauen verwenden. 3. Jeweils 10 µl der Spectral Templates direkt in jede Vertiefung geben, wie in der nachstehenden Tabelle beschrieben. 4. Die LEERWERT-Speiche (Speiche 5 unten) erhält keinerlei Material. 5. Die Platte mit Folie (Universal Disc Cover Tape) abdecken. 6. Die verschlossene Universal Disc in den Integrated Cycler einsetzen und den Lauf starten. Kavität Speiche 1 Speiche 2 Speiche 3 Speiche 4 Speiche 5 A SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 LEERWERT B SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 LEERWERT C SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 LEERWERT D SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 LEERWERT E SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 LEERWERT F SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 LEERWERT G SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 LEERWERT H SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 LEERWERT C. VERIFIZIERUNG DER ERGEBNISSE 1. Jeder Lauf ist auf Validität zu überprüfen. Dazu die in der nachstehenden Tabelle aufgeführten Werte verwenden. Kriterien für ein valides Spektral-Template Kontrolle Ergebnis Spectral Template 520 Spectral Template 560 Spectral Template 610 Spectral Template 682 Leerwert NUR im FAM-Kanal erkannt (0<Ct 45) (keine Erkennung in den JOE-, CFR610- oder Q670- NUR im JOE-Kanal erkannt (0<Ct 45) (keine Erkennung in den FAM-, CFR610- oder Q670- NUR im CFR610-Kanal erkannt (0<Ct 45) (keine Erkennung in den FAM-, JOE- oder Q670- NUR im Q670-Kanal erkannt (0<Ct 45) (keine Erkennung in den FAM-, JOE- oder CFR610- Nicht detektiert D. EXPORTIEREN DER ERGEBNISSE 1. Anleitungen zum Exportieren der Laufdatei finden Sie im Benutzerhandbuch des 3M Integrated Cycler. 2. Die Laufdatei per (calibration@focusdx.com) an den technischen Kundendienst von Focus Diagnostics schicken. E. HOCHLADEN DER NEUEN MATRIX Sobald die neuen Unterlagen zur Spektralkorrektur erhalten worden sind, die neue Spektralmatrix entsprechend den Anleitungen im Benutzerhandbuch des 3M Integrated Cycler hochladen. EINSCHRÄNKUNGEN Spektralkorrekturen sind gerätespezifisch. Dieser Assay muss alle 6 Monate auf jedem 3M Integrated Cycler durchgeführt werden oder nach Bedarf.
4 Seite 4 SPEZIFISCHE LEISTUNGSDATEN KLINISCHE STUDIEN Das Simplexa Spectral Calibration Panel ist nicht für den direkten klinischen Gebrauch bestimmt. Es wird zur Spektralkalibrierung des 3M Integrated Cycler verwendet. REPRODUZIERBARKEIT Es wurden Untersuchungen zur Reproduzierbarkeit des Simplexa Spectral Calibration Panels durchgeführt. Ein internes Prüfzentrum von Focus Diagnostics bestimmte die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse zwischen Geräten (Inter-Gerät- Reproduzierbarkeit) und zwischen verschiedenen Untersuchern (Inter-Untersucher), sowie die Reproduzierbarkeit zwischen und innerhalb von Tests (Inter-/Intra-Assay-Reproduzierbarkeit). Der Assay wurde von drei Untersuchern an 4 aufeinanderfolgenden Tagen durchgeführt. Damit ein Lauf als valide betrachtet werden konnte, mussten mindestens vier von acht Replikatvertiefungen je Spektral-Template fehlerfrei sein. Weder bei der Vorbereitung noch bei der Durchführung der Assays wurden praktische Probleme oder Fehler berichtet oder beobachtet. Alle evaluierten Ct-Wert-Varianzkomponenten erfüllten die jeweils festgelegten Akzeptanzkriterien, d. h. das Panel zeichnete sich durch niedrige Varianz sowohl der Ct-Werte als auch der Spektralkorrekturwerte aus, wie sich an der Inter-Gerät-, der Inter-Untersucher- und der Inter-/Intra-Assay-Reproduzierbarkeit zeigte. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle dargestellt. Abschätzung der Varianzkomponenten für Ct-Werte Farbstoff Mittlere Ct Variabilitätsursache Varianz SD % CV Inter-Instrument 0,08 0,28 0,9 Inter-Untersucher 0,03 0,17 0,6 CFR610 30,0 verschiedene Testreihen 0,00 0,00 0,0 Intra-Assay 0,21 0,46 1,5 Gesamt 0,32 0,57 1,9 Inter-Instrument 0,18 0,42 1,5 Inter-Untersucher 0,00 0,00 0,0 FAM 28,9 verschiedene Testreihen 0,01 0,08 0,3 Intra-Assay 0,02 0,14 0,5 Gesamt 0,21 0,46 1,6 Inter-Instrument 0,21 0,46 1,6 Inter-Untersucher 0,00 0,00 0,0 JOE 28,8 verschiedene Testreihen 0,02 0,16 0,5 Intra-Assay 0,03 0,16 0,6 Gesamt 0,26 0,51 1,8 Inter-Instrument 0,04 0,20 0,7 Inter-Untersucher 0,01 0,09 0,3 Q670 29,0 verschiedene Testreihen 0,05 0,22 0,8 Intra-Assay 0,13 0,36 1,3 Gesamt 0,23 0,48 1,7
5 Seite 5 Abschätzung der Varianzkomponenten für Spektralmatrixwerte Matrixkomponenten Variabilitätsursache Varianz (%) SD (%) CFR610 bis 682 FAM bis 560 JOE bis 520 Inter-Untersucher 0,0000 0,01 Inter-Assay 0,0005 0,02 Intra-Assay 0,0023 0,05 Gesamt 0,0028 0,05 Inter-Untersucher 0,0010 0,03 Inter-Assay 0,0108 0,10 Intra-Assay 0,0296 0,17 Gesamt 0,0414 0,20 Inter-Untersucher 0,0000 0,00 Inter-Assay 0,0004 0,02 Intra-Assay 0,0038 0,06 Gesamt 0,0042 0,06 LITERATUR 1. 3M Integrated Cycler Studio Operator Manual (PI.MOL1101.IVD, PI.MOL1101.OUS, PI.MOL1101.QQD, PI.MOL1101UD) Die Verwendung von Scorpions -Sonden für Zwecke der In-Vitro-Diagnostik beim Menschen ist durch eine Lizenz geschützt, die Focus Diagnostics, Inc. von DxS, Ltd. erhalten hat. Die Farbstoffe Black Hole Quencher, CAL Fluor und Quasar sind Marken der Biosearch Technologies, Inc. ( BTI ). Die Black Hole Quencher, CAL Fluor- und Quasar-Farbstofftechnologie ist im Rahmen eines Vertrags mit BTI lizenziert, und diese Produkte werden ausschließlich für klinische, diagnostische oder Forschungsund Entwicklungszwecke verkauft. HINWEIS FÜR KÄUFER UND ANWENDER: BESCHRÄNKTES NUTZUNGSRECHT: BITTE LESEN SIE DIESES DOKUMENT AUFMERKSAM DURCH. ES HANDELT SICH DABEI UM DEN VERTRAG ZWISCHEN IHNEN UND FOCUS DIAGNOSTICS, INC. BEZÜGLICH DER VERWENDUNG DIESES PRODUKTES UND PROZESSES IHRERSEITS. DIESE LIZENZVEREINBARUNG ENTHÄLT LIZENZBESCHRÄNKUNGEN. DIE VERWENDUNG DIESES PRODUKTES UND PROZESSES DURCH SIE UNTERLIEGT DEN IN DIESER LIZENZVEREINBARUNG FESTGELEGTEN BEDINGUNGEN UND SIE SIND ZUR EINHALTUNG DIESER BEDINGUNGEN VERPFLICHTET, WENN SIE DAS PRODUKT VERWENDEN. WENN SIE MIT DIESEN BEDINGUNGEN NICHT EINVERSTANDEN SIND, SOLLTEN SIE DIESES PRODUKT SOWIE SÄMTLICHE VERPACKUNGEN UMGEHEND AN FOCUS DIAGNOSTICS, INC. ZURÜCKSCHICKEN; DER KAUFPREIS WIRD IHNEN ERSTATTET. Dieses Produkt und dieser Prozess enthalten Geschäftsgeheimnisse von Focus Diagnostics, Inc., beispielsweise unter anderem in Bezug auf die Formulierung und Identität der Reagenzien und den Prozess der Verwendung des Produktes zur Anpassung der Spektralreaktion des Integrated Cycler. Ferner ist die Beschreibung des Prozesses in der Packungsbeilage urheberrechtlich geschützt. Im Kaufpreis dieses Produktes ist das begrenzte, nichtexklusive, nicht-übertragbare Recht zur Verwendung nur der erworbenen Produktmenge seitens des Käufers zur Durchführung des in dieser Packungsbeilage beschriebenen Prozesses auf dem Integrated Cycler des Käufers enthalten. Alle Eigentumsrechte, Schutz- und Urheberrechte an oder in Bezug auf das Produkt und den in dieser Packungsbeilage beschriebenen Prozess bleiben jederzeit bei Focus Diagnostics, Inc. und seinen Tochtergesellschaften, vorbehaltlich Ihres Rechts zum Verbrauchen der erworbenen Reagenzien. Focus Diagnostics, Inc. ist berechtigt, Ihnen diese Lizenz zu gewähren. Alle nicht speziell durch diese Lizenz gewährten Rechte sind Focus Diagnostics, Inc. und seinen Tochtergesellschaften vorbehalten. Einschränkungen 1. Sie dürfen das Produkt, den Prozess oder die Begleitunterlagen weder ganz noch in Teilen außer in der in dieser Vereinbarung ausdrücklich erlaubten Weise nicht verwenden, analysieren, evaluieren, modifizieren oder neu erstellen. 2. Sie dürfen die Reagenzformulierung oder den Prozess der Anpassung der Spektralreaktion weder einem Reverse-Engineering unterziehen noch das Produkt als Vergleichsprodukt zur Entwicklung oder Evaluierung eines ähnlichen Produktes oder Prozesses verwenden. 3. Sie dürfen keine Hinweise auf Eigentumsrechte, Schutz- und Urheberrechte, Geschäftsgeheimnisse oder Warnungen von dem Produkt oder einer Unterlage entfernen. 4. Sie dürfen diese Lizenz bzw. das Produkt oder den Prozess nicht modifizieren, verkaufen, vermieten, übertragen, weiterverkaufen, verleihen oder weitergeben und keine Derivate auf der Grundlage des Produkts oder Prozesses oder eines beliebigen Teiles davon oder eines Rechtes daran erstellen. 5. Sie erklären sich einverstanden, bei der Verwendung des Produktes alle geltenden Gesetze, Regeln und Bestimmungen zu befolgen.
6 Seite 6 VERTRIEB DURCH mdi Europa GmbH, Langenhagener Str. 71, Langenhagen-Hannover BESTELLINFORMATIONEN Telefon: (800) (nur USA) (562) (International)U.S.A. Fax: (562) PI.SC1100 Rev. B Erstellungsdatum:19 Mai 2016 TECHNISCHE HILFE Telefon: (800) (nur USA) (562) (International)U.S.A. Fax: (562) Besuchen Sie unsere Webseite auf Cypress, California 90630, USA
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