ONR CEN/TS ENTWURF ICS ;

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Ewald Winkler
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1 ICS ; ENTWURF ONR CEN/TS Lebensmittel HPLC-Verfahren zur Bestimmung von Xanthophyllen in Fischfleisch Teil 2: Bestimmung des Enantiomerenverhältnisses von Astaxanthin Foodstuffs HPLC method for the determination of xanthophylls in fish flesh Part 2: Identification of the enantiomer ratio of astaxanthin Hinweis: Aufgrund von Stellungnahmen kann die endgültige Fassung dieser ONR vom vorliegenden Entwurf abweichen. Stellungnahmen (schriftlich) bis an Austrian Standards Institute. Produits alimentaires Méthode de dosage des xanthophylles dans la chair de poisson par CLHP Partie 2: Identification de la distribution énantiomérique de l'astaxanthine Ausgabedatum:

2 ENTWURF ONR CEN/TS :2011 Erläuterungen zum Entwurf Der in den Aufgabenbereich des Komitee 205 Lebensmitteluntersuchungsverfahren fallende Entwurf einer Europäischen Technischen Spezifikation CEN/TS wurde den CEN-Mitgliedern zur Abstimmung vorgelegt. Im Falle eines positiven Abstimmungsergebnisses im Sinne der CEN/CENELEC-Regeln wird dieser Entwurf zu einer CEN/TS führen. Wie alle Mitgliedsorganisationen des CEN ist Austrian Standards Institute grundsätzlich verpflichtet, Europäische Technische Spezifikationen in geeigneter Weise verfügbar zu machen. Bis zu einer möglichen späteren Umwandlung einer CEN/TS in eine EN dürfen entgegenstehende nationale Normen in Gültigkeit bleiben. Austrian Standards Institute legt hiermit diesen Entwurf eines europäischen Normungsdokumentes der Öffentlichkeit zur Information und Stellungnahme als ONR-Entwurf vor. Stellungnahmen zu diesem Entwurf Hier einige praktische Hinweise, die Ihnen und dem zuständigen Komitee die Behandlung von Stellungnahmen und Änderungsvorschlägen erleichtern: Vorlage Gliederung Sprache Schrift/Formatierung Zusendung Patentrechtliche Aspekte Verwenden Sie für Ihre Stellungnahmen/Änderungsvorschläge bitte das entsprechende Formular im Internet. Download unter oder verwenden Sie das Normen-Entwurf-Portal unter Kommentare zu einzelnen Abschnitten oder Punkten des Entwurfs bitte in getrennten Zeilen anführen. Dies erleichtert die Zuordnung der eingelangten Stellungnahmen zu den einzelnen Abschnitten. Fachliche Stellungnahmen zu Europäischen Normen fassen Sie bitte möglichst in englischer Sprache ab. Englisch ist in den meisten europäischen Normungsgremien die gemeinsame Arbeitssprache. Redaktionelle bzw. sprachliche Änderungs-/Verbesserungsvorschläge zu deutschsprachigen Fassungen Europäischer Normen bitte (selbstverständlich) in deutscher Sprache. Verwenden Sie bitte die Schriftart Arial mit 9 pt Schriftgrad. Formate bitte nicht ändern. Die Stellungnahme senden Sie bitte per an den zuständigen Komitee- Manager (monika.hartl@as-institute.at) Empfänger dieses ÖNORM-Entwurfes werden gebeten, mit ihren Kommentaren jegliche relevante Patentrechte, die Sie kennen, mitzuteilen und unterstützende Dokumentationen zur Verfügung zu stellen. 2

3 TECHNISCHE SPEZIFIKATION TECHNICAL SPECIFICATION SPÉCIFICATION TECHNIQUE SCHLUSS-ENTWURF FprCEN/TS Januar 2011 ICS Deutsche Fassung Lebensmittel - HPLC-Verfahren zur Bestimmung von Xanthophyllen in Fischfleisch - Teil 2: Bestimmung des Enantiomerenverhältnisses von Astaxanthin Foodstuffs - HPLC method for the determination of xanthophylls in fish flesh - Part 2: Identification of the enantiomer ratio of astaxanthin Produits alimentaires - Méthode de dosage des xanthophylles dans la chair de poisson par CLHP - Partie 2: Identification de la distribution énantiomérique de l'astaxanthine Dieser Technische Spezifikation-Entwurf wird den CEN-Mitgliedern zur formellen Abstimmung vorgelegt. Er wurde vom Technischen Komitee CEN/TC 275 erstellt. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Bulgarien, Dänemark, Deutschland, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, Österreich, Polen, Portugal, Rumänien, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, Ungarn, dem Vereinigten Königreich und Zypern. Die Empfänger dieses Norm-Entwurfs werden gebeten, mit ihren Kommentaren jegliche relevante Patentrechte, die sie kennen, mitzuteilen und unterstützende Dokumentationen zur Verfügung zu stellen. Warnvermerk : Dieses Schriftstück hat noch nicht den Status einer Technischen Spezifikation. Es wird zur Prüfung und Stellungnahme vorgelegt. Es kann sich noch ohne Ankündigung ändern und darf nicht als Technischen Spezifikation in Bezug genommen werden. EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION Management-Zentrum: Avenue Marnix 17, B-1000 Brüssel 2011 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten. Ref. Nr. FprCEN/TS :2011 D

4 FprCEN/TS :2011 (D) ÖNORM ENTWURF Inhalt Seite Vorwort...3 Einleitung Anwendungsbereich Normative Verweisungen Kurzbeschreibung Chemikalien Geräte Probenvorbereitung und Extraktion Extraktion im großen Maßstab Extraktion im kleinen Maßstab HPLC Identifizierung Bedingungen Retentionszeiten Berechnung Untersuchungsbericht...10 Literaturhinweise

5 ÖNORM ENTWURF FprCEN/TS :2011 (D) Vorwort Dieses Dokument (FprCEN/TS :2011) wurde vom Technischen Komitee CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren erarbeitet, dessen Sekretariat vom DIN gehalten wird. Dieses Dokument ist derzeit zur formellen Abstimmung vorgelegt. 3

6 FprCEN/TS :2011 (D) ÖNORM ENTWURF Einleitung Von (all-e)-astaxanthin gibt es drei Stereoisomere (zwei Enantiomere und eine meso-form), die als (3R,3'R)-, (3S,3'S)- und (3R,3'S,meso)-(all-E)-Astaxanthin bezeichnet werden, siehe Bild 1. Diese Isomere können durch Chromatographie an einer chiralen HPLC-Säule bestimmt werden. Lachsfische nehmen ihr Astaxanthin über die Nahrung auf und die Isomerenzusammensetzung des Fleisches entspricht derjenigen des mit der Nahrung aufgenommenen Astaxanthins. Synthetisch hergestelltes (racemisches) Astaxanthin und alternative organische Formen von Astaxanthin (hergestellt von Mikroorganismen wie z. B. Xanthophyllomyces dendrorhous früher Phaffia rhodozyma und Haematococcus pluvialis) weisen unterschiedliche Stereoisomerenprofile auf, siehe Bild 2. Auch wenn die Unterschiede in der Bioverfügbarkeit dieser Formen bei Fischen geringfügig sind [1], [2], kann das sich ergebende Isomerenprofil für das Fleisch verwendet werden, um Wildlachs von Zuchtlachs zu unterscheiden und um zu bestimmen, mit welcher Form von Astaxanthin das Futter von Zuchtarten angereichert wurde [3], [4], [5]. Die Ergebnisse sollten kritisch betrachtet werden, da gelegentlich die Gruppen von Zuchtlachs, die während der Dauer des Produktionszyklus mit Futter mit gemischten Astaxanthinquellen oder Futter unterschiedlicher Herkunft gefüttert wurden, mit dem Verfahren nicht unterschieden werden können [6]. Außerdem wurden in der Garnelenart Penaeus und auch in einigen anderen Ordnungen höherer Krebse racemische Astaxanthin-Gemische beobachtet. Deshalb kann Fisch, der ausschließlich mit Garnelenmehl gefüttert wurde, auch racemisches Astaxanthin enthalten [7], [8] und fälschlich für Fisch gehalten werden, der mit synthetischem Astaxanthin gefüttert wurde. 1 Anwendungsbereich Das vorliegende Dokument beschreibt ein Verfahren zur Bestimmung des Enatiomerenverhältnisses von Astaxanthin in Fischfleisch mit Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC). 2 Normative Verweisungen Die folgenden zitierten Dokumente sind für die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschließlich aller Änderungen). EN ISO 3696:1995, Wasser für analytische Laborzwecke Spezifikation und Prüfverfahren (ISO 3696:1987) 3 Kurzbeschreibung Das Fischfleisch wird durch Homogenisieren des Gewebes in Aceton extrahiert. Der Extrakt wird filtriert und unter vermindertem Druck mit einem Rotationsverdampfer oder unter einem Stickstoffstrom bei 50 C verdampft. Abschließend wird der Rückstand in der mobilen Phase, einer Mischung aus n-heptan, Dichlormethan und Ethanol, gelöst. Das Verhältnis von (3R,3'R)-, (3R,3'S,meso)- und (3S,3'S)-(all-E)-Astaxanthin wird durch Chromatographie an einer chiralen HPLC-Säule bestimmt. 4

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