Dunkelfeld Mikroskop Beschreibung und Bedienungsanleitung

Transkript

1 Dunkelfeld Mikroskop Beschreibung und Bedienungsanleitung Nachfolgend eine Zusammenfassung der Ausrüstung zur Dunkelfeldmikroskopie sowie eine Beschreibung zur Bedienung des Mikroskops. Sie können bei uns im Haus auch einen auf Ihrem Mikroskop und individuell auf Sie abgestimmten Einführungskurs buchen. 1von15

2 Stellplatz: 1. das Mikroskop sollte auf einem festen und massiven Tisch aufgestellt werden 2. der Fototubus ist in Richtung Präparatetisch zu montieren (Okulare) Bei dem Mikroskop handelt es sich um ein Trinokulares Gerät mit Kameraanschluss Digitalkamera Kameraadapter Kameraausgang Tubus mit je nach Ausstattung bis zu vier Planachromat Objektiven mit den Vergrößerungen, 4x, 10x, 40x und 100x, wobei das 100er Objektiv ein Ölimmersionsobjektiv mit Irisblende ist. Einstellen der Irisblende am Objektiv: Irisblende 2von15

3 1. Blende so weit schließen, bis der Bilduntergrund dunkel erscheint 2. Durch die Irisblende wird das Objektiv an den Kondensor angepasst und die Auflösung im mikroskopischen Bild gleichzeitig optimal eingestellt 3. Die Beleuchtung besteht aus LED Dunkelfeld Öl-Kondensor. LED Kondensor Justierschraube Justierschraube 3von15

4 Der Kameraausgang kann mit dem Schieber an der rechten Seite am Tubus ein und ausgeschaltet werden. Schieber für Kameraausgang Für jede Untersuchung im Dunkelfeld benötigt man: Immersions-Öl PB 255 Objektträger und Deckgläser. 4von15

5 Vorbereitung des Mikroskops : Es kommt gut verpackt in einem Karton mit einer Styroporschachtel in der sich das Mikroskop mit Zubehör befindet. Auf die Styroporverpackung sollte man achten, da man sie immer wieder zum Transport brauchen kann. Präparat erstellen: 1. Mit einer kleinen Lanzette (zu beziehen z.b. bei wie sie auch zur Blutentnahme bei Diabetiker verwendet entnehmen Sie einen Blutstropfen und legen diesen behutsam auf den Objektträger. 2. Danach noch vorsichtig ein Deckglas darüber gelegt und fertig ist die erste Blutprobe. Jetzt wird der Kondensor justiert: 1. Schalteten Sie das Mikroskops ein und drehte den Revolver auf die kleinste Vergrößerung 2. Fahren Sie den Kondensor auf die untere Endposition 3. Geben Sie einen größeren Tropfen auf den Kondensor.(der Kondensor sollte leicht mit Öl bedeckt sein) 4. Die Okulare sind auf den jeweiligen Augenabstand des Bedieners einzustellen. 5. Jetzt den Objektträger auf den Kreuztisch legen und den Kondensor nach oben drehen bis sich ein Lichtfleck auf dem Objektträger abzeichnet. 5von15

6 6. Auf Vergrößerungsfaktor 4x durch die Okulare schauen. 7. Auf das Präparat scharfstellen 8. Den Lichtkreis mit den Justierschrauben am Kondensor mittig zum Blickfeld justieren Dunkelfeld Justage: 1. Dies ist der wichtigste Teil zur Vorbereitung eines guten Bildes. Meistens zeigt sich zuerst ein inhomogenes Bild. Mit Hilfe der Einstellung für die Höhe des Kondensors wird das Öl unter dem Objektträger fokussiert. 2. Zuerst kann man den Kondensor etwas höher einstellen und dann wieder leicht absenken. Dadurch zentriert sich der Fleck und wird heller. 6von15

7 3. Sollte man damit kein Glück haben, dann kann man auch nochmals einen Tropfen Öl auf den Kondensor geben. 4. Manchmal ist auch zuviel Öl auf dem Kondensor. Dann muss das alte Öl entfernt ( Kleenex ) und nochmals von vorne begonnen werden. 5. Des Weiteren sollte man das Öl nicht schütteln, da sich dann Luftblasen bilden und es einige Zeit dauert bis sich diese wieder auflösen. 6. Wenn der Lichfleck nicht in der Mitte des Blickfeldes ist, dann kann man mit Hilfe der beiden Stellschrauben, die den Kondensorhalter fixieren, die Position des Lichtflecks wieder justieren. 7. Wichtig ist, ein heller Lichtfleck der vor allem in der Mitte homogen ausgeleuchtet ist. 8. Im nächsten Schritt wechseln Sie zu der Objektiv-Vergrößerung 10x 9. Dieser Punkt entfällt wenn kein 10x Objektiv vorhanden ist. Objektiv-Vergrößerung 10x 10. Danach den Lichtkegel mittig justieren 11. Dann wechseln Sie in die Objektiv-Vergrößerung 40x wenn vorhanden um sich nochmals eine Gesamtübersicht über das Blut zu verschaffen. 7von15

8 12. Zu guter letzt drehen Sie den Revolver zur Seite, gebe einen Tropfen Immersionsöl auf das Deckglas und schwenke das 100x Objektiv ein. 13. Dabei achten Sie bitte darauf, dass die anderen Objektive kein Öl abbekommen. Falls dies dennoch einmal geschieht, muss es sofort wieder entfernt werden. 14. Jetzt kann ich mir in aller Ruhe das Blutbild im Dunkelfeld betrachten. 8von15

9 15. Dieses Bild ist von der Helligkeit leicht übersteuert. Um dem entgegen zu wirken befindet sich im 100x Objektiv eine Irisblende. 16. Mit dieser kann die Schärfe und die Helligkeit der Bilder einstellt werden. 9von15

10 Reinigung und Pflege des Mikroskops: 1. Das Mikroskop sollte sorgsam behandelt werden. 2. Zum Reinigen der Okulare und der Linsen außerhalb des Mikroskops verwenden Sie bitte ein sauberes Mikrofaser Brillenreinigungstuch. 3. Nach dem täglichen Gebrauch verwahren Sie bitte das Mikroskop unter der mitgelieferten Staubschutzhülle. 4. Gelegentlich kann es vorkommen, dass in den Trinokular- Ausgang Staub fällt. Dieser kann ebenfalls mit dem Mikrofasertuch beseitigt werden. 5. Die Objektive sollten besonders behutsam behandelt werden. Sie müssen in der Regel auch nicht gereinigt werden. 10von15

11 6. Nur bei den 100x Öl-Immersion Objektiv sollten Sie einmal täglich das Öl mit einem Optikpapier entfernen. Das Optikpapier kann auch sonst zum Reinigen von Linsen verwendet werden. Zum Beispiel auch zum Entfernen von Öl auf dem Dunkelfeld-Kondensor. Sollte sich in den Okularen einmal Staub angesammelt haben, dann kann dieser mit einem Klistierball wie man ihn in einer Apotheke bekommt ausgeblasen werden. Mit chemischen Mitteln wie Benzin oder Alkohol sollte man dem Mikroskop nicht zu Leibe rücken. Diese können unter Umständen die Fixierung zwischen Linsen und Halterungen beschädigen. Die Auflösung des Mikroskops ergibt sich aus Wellenlänge des Lichts ( Lambda): Aperthur 11von15

12 Die meisten Objektive sind auf den Bereich von 550nm korrigiert. Das Mikroskop mit dem 100x Objektiv besitzt eine Aperthur von 1,25. Damit ergibt sich eine Auflösung von 0,44µm. Im Dunkelfelde bei schräger Beleuchtung erhöht sich die Auflösung um ca. das doppelte. Zum Vergleich. Die Erythrozyten haben einen Durchmesser von rund 7,5 µm und einer Dicke von ca. 2 µm. Man braucht generell etwas Übung um die ersten Untersuchungen im Dunkelfeld zu machen. Probleme mit der Bildqualität Nach einem Präparatwechsel lässt sich kein Dunkelfeld mehr einstellen. Mit jedem Wechsel des Objektträgers geht ein Teil des Immersionsöls auf dem Kondensor verloren und muss deshalb ergänzt werden. Meist wird soviel Immersionsöl auf dem Kondensor aufgebracht, dass nach einem Tausch des Objektträgers noch genügend Immersionsöl auf dem Kondensor verbleibt. Spätestens nach dem dritten 12von15

13 oder vierten Wechsel reicht das Immersionsöl nicht mehr aus, um einen Kontakt mit dem Objektträger zu erreichen. Durch das mikroskopische Bild treiben helle Blasen oder Schlieren - teilweise wandern diese auch beim Durchmustern des Präparates mit durch das Gesichtsfeld. Im Immersionsöl zwischen Objektiv und Deckglas können sich leicht Luftblasen bilden. Diese stören natürlich bei der Bildentstehung und bedingen die beschriebenen Probleme. Manchmal hilft es dann schon, wenn man durch geringes, aber ruckhaftes Drehen am Objektivrevolver das Immersionsobjektiv rasch mehrmals hin und her bewegt. Diese Verfahrensweise ist jedoch bei druckempfindlichen Präparaten nicht geeignet. Bei hartnäckigeren Fällen und empfindlichen Präparaten senkt man den Objekttisch ab und reinigt die Objektivfrontlinse. Danach bringt man erneut einen Tropfen Immersionsöl auf das Deckglas auf und kann mit dem Mikroskopieren fortfahren. Im Dunkelfeld ergibt sich mit dem Objektiv 100-fach ein extrem unscharfes Bild. Wenn nicht genügend Immersionsöl auf dem Objektträger aufgebracht ist, bzw. vergessen wurde Immersionsöl aufzubringen, so kann kein Kontakt mit der Frontlinse des Immersionsobjektivs entstehen. Das Bild ist dann völlig unscharf und nicht zu gebrauchen. Das mikroskopische Bild erscheint sehr dunkel, oder der Bilduntergrund erscheint sehr hell und nicht wie im Dunkelfeld üblich. Besonders beim Präparatwechsel kann man mitunter unabsichtlich den Rändelring der Objektiv-Irisblende berühren und auch verstellen. Ist die Blende dann zu weit geschlossen wird das Bild dunkel und die Details im Präparat wirken vergröbert. Wenn die Blende jedoch versehentlich geöffnet wird, so dringt direktes Mikroskopierlicht in das Objektiv ein und es kommt kein korrektes Dunkelfeld mehr zustande. Das mikroskopische Bild wirkt insgesamt zu dunkel. Hier sollte die Höhenstellung des Kondensors kontrolliert werden. Steht der Kondensor zu hoch oder zu nieder, so wird das mikroskopische Bild, insbesondere auch im Zentrum, zu dunkel. Möglicherweise ist auch die Leuchtfeldblende im Stativfuß nicht ganz geöffnet. Das mikroskopische Bild wirkt einseitig abgedunkelt. Diese Bildstörung deutet auf einen nicht richtig zentrierten Kondensor hin. Durch eine Nachzentrierung des Kondensors (Zentrierschrauben des Kondensors oder des Kondensorträgers benutzen!) kann diese Bildstörung behoben werden. 13von15

14 Nach dem Wechsel vom Objektiv 10-fach zum Immersions- Objektiv 100-fach finde ich die Schärfeebene nicht mehr. Man sollte beim Wechsel zwischen dem Objektiv 10-fach und dem Objektiv 100-fach nicht den Objekttisch absenken, sondern das Objektiv 100-fach langsam in den Strahlengang einschwenken. Diese Behutsamkeit ist angebracht, um das Präparat zu schonen und gleichzeitig die Bildung von Luftblasen im Immersionsöl zu vermeiden. Bei dieser Vorgehensweise muss man nur noch geringfügig mit dem Feintrieb nachfokussieren. Wichtiger Hinweis: Ist am Mikroskop noch ein längeres Trockenobjektiv angebracht (z.b. Objektiv 40-fach), so muss man darauf achten, dass nicht aus Versehen dieses Objektiv eingeschwenkt wird. Normalerweise montiert man die Objektive so am Mikroskop, dass sie in steigender Vergrößerung angeordnet sind. Das Objektiv 40-fach befindet sich somit gewöhnlich zwischen dem Objektiv 10-fach und dem Objektiv 100- fach. Schwenkt man bei dieser Anordnung, vom Objektiv 10-fach ausgehend, das Objektiv 100-fach in den Strahlengang ein, so kommt das Objektiv 40-fach dabei unweigerlich mit dem Immersionsöl in Kontakt und man handelt sich unnötigen Ärger mit der Reinigung der Objektivfrontlinse ein. Dieses Problem kann man vermeiden, indem man das Objektiv 10-fach unmittelbar neben dem Objektiv 100-fach montiert. Das Objektiv 4-fach befindet sich dann gegenüber des Immersionsobjektivs 100-fach Allgemeine Hinweise zum Umgang mit Immersionsöl: Der Umgang mit Immersionssystemen ist prinzipiell etwas gewöhnungsbedürftig. Drei wesentliche Dinge sind hierbei zu beachten: Das Immersionsöl muss nach Beendigung der Arbeit entfernt werden. Das heutzutage übliche synthetische Immersionsöl ist allerdings längst nicht mehr so kompliziert zu handhaben wie das früher gebräuchliche Zedernholzöl, welches an der Luft verharzte und dadurch sofort nach der Arbeit gründlichst zu entfernen war. Dennoch muss nach Beendigung der Arbeit das Immersionsöl von Objektiv und Kondensor entfernt werden. Hierzu verwende ich persönlich ein sehr feines Reinigungspapier für optische Gläser der Firma hama (z.b. aus Fachhandel für Fotografiezubehör). Dabei noch verbleibende Spuren von Immersionsöl sind tolerierbar und schaden nicht weiter. Noch schonender für die Linsenoberflächen ist die Verwendung eines weichen Leinenläppchens. Es ist nicht notwendig - und auch nicht ratsam - nach jeder einzelnen Untersuchung das Immersionsöl zu entfernen. Es genügt, wenn diese Reinigung am Ende des Arbeitstages durchgeführt wird. 14von15

15 Das Immersionsöl neigt während der mikroskopischen Arbeit sich auf geradezu wundersame Weise über den gesamten Arbeitsplatz auszubreiten. Besonders beim Entfernen des Objektträgers ist deshalb Achtsamkeit geboten. Bereits während der Durchmusterung des Präparates gelangt durch die Bewegung des Kreuztischs unweigerlich immer etwas Immersionsöl auf den Objekttisch. Weitere Achtsamkeit ist beim Entfernen des Objektträgers geboten. Auch hierbei gelangt leicht weiteres Immersionsöl auf den Objekttisch. Wird der Objektträger dann einfach neben das Mikroskop auf die Arbeitsplatte gelegt, so ist es nur eine Frage der Zeit, bis der gesamte Arbeitsplatz von einem mehr oder weniger dicken Ölfilm überzogen ist (der Objektträger ist beidseitig mit Öl verschmiert!). Deshalb sollten gebrauchte Objektträger am besten in eine separate Schale gelegt werden. Zudem sollte nach jedem Präparatwechsel der Objekttisch gereinigt werden. Hiezu verwendet man beispielsweise ein Leinenläppchen welches mit einer geringen Menge Medizinalbenzin (erhältlich in jeder Apotheke) getränkt ist. Das Immersionsöl darf nur für Immersionsobjektive verwendet werden und muss von der Frontlinse von Trockenobjektiven ferngehalten werden! Wird die Frontlinse eines Trockenobjektivs mit Immersionsöl benetzt, so muss dieses umgehend gründlich entfernt werden. Hierzu schraubt man das Objektiv zunächst aus seiner Fassung und reinigt die Linse dann beispielsweise mit einem Linsenreinigunspapier, welches in Medizinalbenzin getränkt wurde. Zweckmäßig ist die Kontrolle der Reinigung unter einer Lupe oder einem Stereomikroskop. Wer beim Umgang mit dem Dunkelfeld-Immersionsmikroskop diese wenigen Hinweise beachtet, erhält die Leistungsfähigkeit des eigenen Mikroskops. Im Vergleich zu früheren Zeiten, in denen tatsächlich noch Zedernholzöl verwendet wurde, gestaltet sich der Umgang mit aktuellen Mikroskopen geradezu komfortabel und unkompliziert. Etwaige Berührungsängste mit einem Immersionssystem sind jedenfalls nicht begründet. 15von15