Nachweis von Eiweiß- und Fettspaltern

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1 C Nachweis von Eiweiß- und Fettspaltern 0 Nachweis von Eiweiß- und Fettspaltern. Welche Mikroorganismen sind Eiweißspalter und welche sind Fettspalter? Eiweißspalter aerobe Sporenbildner (Bacillen) anaerobe Sporenbildner (einige Arten der Clostridien) Pseudomonaden Proteus Klebsiella Schimmelpilze. Mit welchen Nährmedien werden in Milch und Milchprodukten Eiweiß- und Fettspalter nachgewiesen? Eiweißspalter: Calcium-Caseinat-Agar Fettspalter: Tributyrinagar. Welcher Nährmedienart kann man den Calcium-Caseinat-Agar und den Tribuyrinagar zuordnen? Komplex-Nährmedien mit elektiver Wirkung.. Wie sind die Bebrütungsbedingungen für Calcium-Caseinat-Agar und Tributyrinagar? +/ C, +/ h Fettspalter aerobe Sporenbildner (Bacillen) Pseudomonaden Serratia Schimmelpilze Hefen. Wie wird der Calcium-Caseinat-Agar ausgewertet? Das Nährmedium enthält Casein, das von den Eiweißspaltern abgebaut wird. Es entstehen dabei um die gewachsenen Kolonien Aufhellungszonen im sonst trüben Nährboden. Ausgezählt werden nur die hofbildenden Kolonien. 0

2 C. Wie wird der Tributyrinagar ausgewertet? Das Nährmedium enthält Glycerintributyrat, das von den Fettspaltern abgebaut wird. Es entstehen dabei um die gewachsenen Kolonien Aufhellungszonen im sonst trüben Nährboden. Ausgezählt werden nur hofbildende Kolonien.. Welche Besonderheiten gelten bei der Auswertung des Calcium-Caseinat-Agars und des Tributyrinagars? Es werden nur Nährbodenplatten ausgewertet, die zwischen 0 und 0 hofbildende Kolonien zeigen. Die hofbildenden Kolonien sollten einzeln zählbar sein und sich nicht zu sehr überschneiden. Platten mit großen unregelmäßigen Aufhellungshöfen (Überschneidungszonen) sind zu verwerfen.. Wie kann man eine Aufhellung des gesamten Tributyrinagars nach der Bebrütung erklären? Wird ein Produkt untersucht, das bereits freie fettspaltende Enzyme enthält, kann es zur Aufhellung des getrübten Nährmediums kommen. Das kann bei kühlgelagerten Produkten am Ende der Haltbarkeit auftreten.. Welche Sporenbildner werden unterschieden? aerobe Sporenbildner = Bacillen anaerobe Sporenbildner = Clostridien. Nennen Sie Nährmedien und Methoden für den Nachweis der Sporen der aeroben Sporenbildnern. Nährmedien sind: Glucose-Caseinpepton-Agar (Dextrose-Tryptone-Agar) Mannit-Eigelb-Agar (Cereus-Selektivagar nach HOLBROOK und ANDERSEN) 0 0

3 C 0 PEMBA: Polymyxin-Pyruvat-Eigelb-Mannit-Bromthymolblau Agar Plate Count Agar (Oberflächenausstrich) Vor dem Ansatz muss das Produkt oder die Anschüttlung auf 0 C, min erhitzt werden, um vegetative Keime abzutöten.. Wie sehen typische Kolonien von aeroben Sporenbildnern auf festen Nährmedien aus? Schwärmen der Kolonien Kolonien gelappt oder mit wurzelartigen Ausläufern. Nennen Sie Nährmedien und Methoden für den Nachweis der Sporen von anaeroben Sporenbildnern. Weinzirlprobe Je ml Milch in Reagenzgläser, die ml Paraffin enthalten pipettieren; Wärmebehandlung: 0 C, min; Bebrütung: C, 0 Tage; Beurteilung: Gasbildung. Gasbildung in nur einem Röhrchen deutet auf eine hohe Kontamination der Milch mit Sporen hin. NIZO-Methode Methode zum Nachweis von käsereischädlichen Clostridien (Cl. tyrobutyricum) Rohmilch wird mit einer Glucose-Milchsäurelösung auf möglichst genau ph, eingestellt. In je drei Reagenzgläser mit Paraffin werden je,0 ml, 0, ml und 0,0 ml Rohmilch pipettiert, Wärmebehandlung 0 C, min, Bebrütung: Tage, C. Beurteilung: Gasbildung; Auswertung nach der MPN-Methode. Verfahren mit RCM-Agar (RCM = Reinforced Clostridial Medium) Je ml der Anschüttelung bzw. Verdünnung in Reagenzgläser je Verdünnungsstufe (MPN-Verfahren), die ml Paraffin enthalten pipettieren mit RCM-Agar (0 ml) überschichten; Erhitzung: C, 0 min; Bebrütung: C, Tage; Beurteilung: Gasbildung. Verfahren mit ph-modifiziertem RCM-Agar Bei diesem Verfahren zum Nachweis der käsereischädlichen Sporenbildner wird der ph-wert des RCM-Agars auf, eingestellt. Das Verfahren entspricht dem des RCM- Verfahrens. Verfahren mit DRCM-Agar (DRCM = Differential Reinforced Clostridial Medium) 0

4 C Bei diesem Verfahren werden die Sporen der sulfitreduzierenden Clostridien (z. B. Clostridium perfringens; Toxinbildner) nachgewiesen, die sich in ph-neutralen Lebensmitteln entwickeln können. Das Verfahren entspricht dem des RCM-Verfahrens. Die Erhitzung erfolgt bei 0 C, 0 min. Beurteilung: schwarze Kolonien = positiv.. Wie kann der Untersuchungsaufwand beim Nachweis der Sporen der käsereischädlichen Clostridien bei Routineuntersuchungen reduziert werden? Ein vereinfachtes Verfahren ist der Ansatz mit nur drei Röhrchen mit je 0 ml Milch. Eine Beurteilung kann wie folgt unter Berücksichtigung des % Vertrauensbereichs der MPN- Methode vorgenommen werden: Anzahl positiver Röhrchen Beurteilung 0 In Ordnung Warnung! oder Nicht in Ordnung. Welches Nährmedium ist für die Bestimmung der Sporen von käsereischädlichen Clostridien in der Kesselmilch zu empfehlen? Zu empfehlen ist das RCM-Medium, dessen ph-wert auf, eingestellt wurde. Damit wird die Selektivität des RCM-Mediums so verändert, dass nur noch käsereischädliche Clostridien (Lactatvergärer z. B. Clostridium tyrobutyricum, Clostridium sporogenes) in der Lage sind, sich zu vermehren. Zur Erfassung sehr geringer Sporenzahlen in der Kesselmilch, ist der Ansatz von 0 ml Kesselmilch zu empfehlen. In diesem Fall sind doppeltkonzentriertes Medium und geeignete Röhrchen ( ml) zu verwenden und eine ph-korrektur dahingehend vorzunehmen, dass nach Zugabe des Probenmaterials der ph-wert des Mediums einen Wert von, sicher erreicht. Geeignet ist auch die NIZO-Methode.. Wie kann der Entkeimungseffekt einer Bactofuge beurteilt werden? Bei der Beurteilung des Entkeimungseffektes von Bactofugen werden Röhrchen pro Verdünnungsstufe ( 0,, 0, ml) angesetzt, um die Präzision zu erhöhen. Prinzipiell werden die Röhrchen für Tage bei C bebrütet werden. 0 0

5 C Nachweis von Hefen und Schimmelpilzen 0 Der Entkeimungseffekt wird nach folgender Formel berechnet: Entkeimungseffekt (%) = ((MPNv MPNn) / MPNv) * 00 MPNv: Sporengehalt vor Bactofuge MPNn: Sporengehalt nach Bactofuge Nachweis von Hefen und Schimmelpilzen. Nennen Sie selektive Nährmedien für Hefen und Schimmelpilze. Nachweis mit Malzextrakt-Agar Bei einem ph-wert um, im Nährboden (Malzextrakt-Agar), der durch Zugabe von Milch- oder Weinsäure erreicht wird, können nur noch Hefen und Schimmelpilze wachsen ( C, Tage). Um sicher zu stellen, dass die Kolonien auf dem Malzextrakt-Agar tatsächlich Hefen oder Schimmelpilze sind, wird eine mikroskopische Kontrolle der Kolonien empfohlen. Nachweis mit Chloramphenicol-Agar (YGC) Durch das Antibiotikum Chloramphenicol kann das Wachstum von Bakterien unterdrückt werden. Hefen und Schimmelpilze können wachsen. Eine Unterscheidung zwischen Hefen und Schimmelpilzen erfolgt aufgrund des Aussehens der Kolonien.. Wie kann der YGC-Agar in seiner Elektivität verbessert werden? Dem YGC-Agar kann 0,0 g pro Liter Bromphenolblau zugesetzt werden (Zusatz von, ml einer 0,%igen wässrigen Lösung zu.000 ml YGC Agar vor Lösung des Agarmediums bei 00 C). Durch diesen Zusatz können Hefen bezüglich ihrer Koloniemorphologie besser unterschieden werden. Außerdem erlaubt der Zusatz eine bessere Unterscheidung von Geotrichum- Kolonien von Schimmelkolonien, sowie eine leichtere Unterscheidung der Hefekolonien von chloramphenicolresistenten Bakterien. Diese sind meist dunkelblau gefärbt und kleiner als Hefekolonien. Im Zweifelsfall ist durch eine mikroskopische Prüfung eine eindeutige Unterscheidung möglich. Bei Proben, bei denen eine Störung durch chloramphenicolresistente Bakterien wahrscheinlich ist (ungesäuerte Produkte, Rohmilchprodukte) sollte der ph Wert mit 0%iger Weinsäure auf ph, nach der Sterilisierung abgesenkt werden. 0