NOVA Lite HEp-2 External EB Kits Nur für In-Vitro Diagnostik
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- Martin Stein
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1 NOVA Lite HEp-2 External EB Kits Nur für In-Vitro Diagnostik Bestell-Nr.: , CLIA Kompliziertheit: Hoch Verwendungszweck Die HEp-2-Zellen Kits bzw. Objektträger dienen dem Screening und der Titration von antinukleären Autoantikörpern wie sie z.b. bei systemischem Lupus erythematodes (SLE), Sjögren Syndrom, Rheumatischer Arthritis und anderen Erkrankungen des Bindegewebes auftreten. Informationen zum Test Als antinukleäre Antikörper (ANA) werden eine Vielzahl von Autoantikörpern gegen Bestandteile des Zellkerns, wie z. B. DNA, RNA und andere Kernproteine 1 bezeichnet. Diese ANAs werden sehr häufig bei Patienten mit Erkrankungen des Bindegewebes oder rheumatischen Erkrankungen, wie z. B SLE gefunden. Ein ANA-positiver Befund korreliert sehr gut mit SLE, während ein ANA-negativer Befund SLE ausschließt. 2 Aber auch Patienten mit anderen Bindegewebserkrankungen wie z.b. rheumatischer Arthritis, Sklerodermie und Dermatomyositis sind sehr häufig ANA-positiv. Auch bei anderen Erkrankungen oder bei gesunden, älteren Personen können niedrige ANA-Titer gefunden werden. Die indirekte Immunfluoreszenz ist die beste Screening-Methode zum Nachweis von zirkulierenden ANAs. Es wird empfohlen, dass alle ANA-positiven Patientenproben bis zum Endpunkt austitriert werden und speziell auf Autoantikörper gegen doppelsträngige DNA (dsdna) und extrahierbare nukleäre Antigene untersucht werden. In der Vergangenheit wurden am häufigsten Ratten-Leber-Gefrierschnitte als Substrat für den Nachweis von ANAs verwendet, aber sie wurden mittlerweile durch verschiedene Zell-Linien ersetzt. HEp-2-Zellen 3 stammen von einer Epithel-Zell-Linie ab und zeichnen sich im Vergleich zu anderen Zell-Linien durch einen extrem großen Zellkern aus. Der Vorteil der HEp-2-Zellen beim ANA-Screening ist: 1. Das Antigen- Substrat ist standardisiert und damit tritt eine geringere Variabilität von Charge zu Charge auf als bei dem Rattengewebe. 2. HEp-2-Zellen sind größer als Zellen im Rattengewebe. Damit ist die Zellmorphologie besser sichtbar, was eine konsquente Erhöhung der Sensitivität bedeutet. 3. Viele HEp- 2-Zellen teilen sich aktiv. Dadurch werden Antigene exponiert, die man normalerweise im Rattengewebe nicht sehen kann. 3 Testprinzip An indirect immunofluorescence technique 4 is utilised where patient samples and appropriate controls are incubated with the HEp-2 substrate. The unreacted antibodies are washed off and then an appropriate fluorescein labelled conjugate is applied. Unbound conjugate is washed off as before. Slides are viewed with a fluorescence microscope and positive samples give rise to apple-green fluorescence which corresponds to areas of the HEp-2 cell where autoantibody has bound. Inhalt der Testpackung 1. Objektträger mit 6, oder 12 Auftragsstellen mit HEp-2-Zellen als Substrat. 2. Positivkontrolle: zeigt ein homogenes Muster mit 3+ Färbungsintensität auf den HEp-2-Zellen. Die gebrauchsfertige Kontrolle liegt in stabilisierter Form vor und wird in einer Tropfflasche geliefert. Enthaltene Konservierungsmittel: 0,09% Natriumazid. 3. Positivkontrolle: zeigt das Zentromer-Muster mit 3+ Färbungsintensität auf den HEp-2-Zellen. Die gebrauchsfertige Kontrolle liegt in stabilisierter Form vor und wird in einer Tropfflasche geliefert. Enthaltene Konservierungsmittel: 0,09% Natriumazid. 4. Negativkontrolle: ist für alle Autoantikörper negativ. Die gebrauchsfertige Kontrolle liegt in stabilisierter Form vor und wird in einer Tropfflasche geliefert. Enthaltene Konservierungsmittel: 0,099% Natriumazid. 5. FITC-IgG-(H+L)-Konjugat ist optimal mit Fluorescein markiert: Das gebrauchsfertige, stabilisierte Konjugat wird in einer Tropfflasche geliefert. Enthaltene Konservierungsmittel: 0,09% Natriumazid. 6. 1%ige Evans-Blue-Lösung: zur optionalen Gegenfärbung. 7. PBS II-Puffer: liegt als 40-fach Konzentrat vor und muss vor Gebrauch entsprechend verdünnt werden. 8. Eindeckmedium (Mounting Medium): ist speziell für die Immunfluoreszenz und enthält ein Anti- Fading Reagenz 9. Deckgläschen 1
2 Hinweise/ Vorsichtsmaßnahmen Dieser Test (kit) ist für In-Vitro Diagnostik.Dieses Produkt sollte nur von entsprechend geschultem Laborpersonal für den angegebenen Verwendungszweck verwendet werden. Die Einhaltung der Arbeitsvorschrift wird emfpfohlen. Das Ausgangsmaterial zur Erstellung der Kontrollen stammt aus menschlichem Blut. Jede Einzelspende wurde mit Tests untersucht und bezüglich Antikörpern gegen Human-Immunschwäche-Virus (HIV 1 & 2), Hepatitis-C-Virus und Hepatitis-B-Oberflächenantigen (HBsAG) als negativ befunden. Es gibt aber zur Zeit keine absolut sicheren Testmethoden zum Auschluss von HIV, Hepatitis-C-Virus, Hepatitis-B-Virus und anderen Infektionsträgern. Deshalb sollten die Reagenzien als potentiell infektiös behandelt werden. Umgangs- und Entsorgungsmethoden sollten denen für potentiell infektiösem Material entsprechen und der Test nur von entsprechend geschultem Personal durchgeführt werden. Einige Kitkomponenten enthalten 0,09% Natriumazid als Konservierungsstoff. Deshalb sollten die entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen beachtet werden. Verschlucken sowie Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Nach Kontakt Hautstelle mit viel Wasser abspülen und ärztlichen Rat einholen. Natriumazid kann mit Blei- oder Kupferrohren explosive Metallazide bilden. Nach der Entsorgung mit ausreichender Menge Wasser nachspülen um Azidablagerungen zu vermeiden. Lagerung Die ungeöffneten Kits oder Objektträger sind bei 2-8 C bis zum angegebenen Verfallsdatum haltbar. NICHT EINFRIEREN! Nach dem Öffnen der Folienbeutel sollten die Objektträger sofort verwendet werden. Verdünnter PBS II-Puffer kann bis zu einem Monat bei 2-8 C gelagert werden. Das Fluoresceinkonjugat nach Möglichkeit nicht im Sonnenlicht, Fluoreszenz- oder UV-Licht stehenlassen. Alle Reagenzien bei 2-8 C lagern. Proben Das Blut steril durch Venenpunktur entnehmen und bei Raumtemperatur gerinnen lassen. Das Serum so schnell wie möglich abtrennen um eine Hämolyse zu vermeiden. Die Seren können bei 2-8 C bis zu 7 Tage vor dem Test gelagert werden. 11 Für eine längere Lagerung sollten die Proben aliquotiert und bei mindestens -20 C eingefroren werden. Mehrfaches Einfrieren und Auftauen schadet der Probe. Es können dadurch falsch positive oder falsch negative Ergebnisse erhalten werden. Keine stark lipämischen, hämolytischen oder mikrobiell verunreinigte Seren verwenden, da dadurch ein erniedrigter Titer oder ein unspezifisches Muster auftreten kann. Testdurchführung Gelieferte Materialien HEp-2 ANA Substrate Slide (6-well) (6 Felder HEp-2-ANA-Objektträger) 1 1mL Homo. Ptn. (use w/conj or ) (vorverdünnte Positivkontrolle - Homo. Ptn. (Verwendung w/ Konj oder ) 1 1mL Centromere positive Control (vorverdünnte Positivkontrolle - Zentromer) 1 1mL IFA System Negative Control (vorverdünnte Negativkontrolle) 1 7mL FITC IgG (H+L) HEp Conjugate (fluorescein), (FITC-IgG-(H+L)-Fluoresceinkonjugat) 1 3mL 1% Evans Blue Counterstain (1%iges Evans Blue) 2 25mL PBS II concentrate (x40) (PBS II-Konzentrat) (40 fach) 1 3mL PVA Mounting Medium (Eindeckmedium) 1 10 Coverslips (Deckgläschen) HEp-2 ANA Substrate Slide (12-well) (12 Felder HEp-2-Objektträger) 1 1mL Homo. Ptn. (use w/conj or ) (vorverdünnte Positivkontrolle - Homo. Ptn. (Verwendung w/ Konj oder ) 1 1mL Centromere positive Control (vorverdünnte Positivkontrolle - Zentromer) 1 1mL IFA System Negative Control (vorverdünnte Negativkontrolle) 1 15mL FITC IgG (H+L) HEp Conjugate (fluorescein), (FITC-IgG-(H+L)-Fluoresceinkonjugat) 1 3mL 1% Evans Blue Counterstain (1%iges Evans Blue) 2 25mL PBS II concentrate (x40) (PBS II-Konzentrat) (40 fach) 1 10mL PVA Mounting Medium (Eindeckmedium) 1 20 Coverslips (Deckgläschen) Zusätzliches benötigtes Material 1. Destilliertes oder deionisiertes Wasser zum Verdünnen des PBS II-Pufferkonzentrats. 2. Behälter und Spritzflasche für PBS II-Puffer. 3. Mikropipetten zum Pipettieren von Patientenproben und Konjugat. 4. Feuchte Kammer für die Inkubation 5. Fluoreszenzmikroskop mit einem 495nm Anregungsfilter und 515nm Barrierefilter. 2
3 Bei Verwendung von Einzelobjektträger können bei INOVA Diagnostics bestellt werden: geeignete Positivkontrollen (Homo. Ptn.(Verwendung w/konj oder ) (504090), Bestell-Nr , zentromer, Bestell-Nr ), Negativkontrolle (Bestell-Nr ), anti-human-igg-(h+l)- Fluoresceinkonjugat (gebrauchsfertig, Bestell-Nr , oder Konzentrat, Bestell-Nr , das vor Gebrauch (1/50 1/200 verdünnt werden muss), PBS II (Bestell-Nr ), Evans Blue ( wenn gewünscht), Eindeckmedium (Bestell-Nr , ), und Deckgläschen. Testdurchführung Qualitätskontrolle Die Negativ- und Positivkontrollen sollten bei jedem Testansatz mitgeführt werden. 1. Eindeckmedium: Das Eindeckmedium aus dem Kühlschrank nehmen und vor Gebrauch auf Raumtemperatur (18-28 C) erwärmen lassen. 2. PBS II-Konzentrat verdünnen. PBS II-Konzentrat mit destilliertem oder deionisiertes Wasser 1/40 verdünnen und mischen. Hinweis: Nur das gesamte Pufferkonzentrat verdünnen, wenn der Kit innershalb von einem Monat verbraucht wird. Der gebrauchsfertige PBS II-Puffer wird zum Verdünnen der Patientenproben und als Waschpuffer verwendet. 3. Patientenproben verdünnen. Screening: Patientenseren im Verhältnis 1/40 verdünnen (z.b. 25µL Serum + 975µL PBS II- Puffer). Titration: Von im Screening positiven Proben eine Verdünnungsreihe erstellen (z.b. 1/40; 1/80; 1/160; 1/320; 1/640 usw.) z. B. 500µL eines 1/40 verdünnten Patientenserums mit 500µL PBS II- Puffer versetzen - ergibt eine 1/80 Verdünnung. 4. Objektträger vorbereiten. Die Objektträger ca. 30 min vor Gebrauch aus dem Kühlschrank nehmen und auf Raumtemperatur (18-28 C) bringen. Folientasche erst direkt vor dem Gebrauch öffnen! Die Objekträger aus dem Folienbeutel nehmen, entsprechend beschriften und in eine feuchte Kammer geben. Je 25µL der Kontrollen und Patientenseren auf die jeweiligen Felder pipettieren. 5. Inkubation der Objektträger. Die Objektträger 30 min. bei Raumtemperatur (18-28 C) in der feuchten Kammer inkubieren. (Angefeuchtete Papierhandtücher auf dem Kammerboden sorgen für ausreichende Feuchtigkeit.) 6. Waschen mit PBS II-Puffer. Die Objektträger aus der feuchten Kammer nehmen und rasch mit PBS II-Puffer (Spritzflasche) waschen, dabei nicht direkt in die Auftragsfelder spritzen. Die Objektträger in eine Halterung geben und in ein PBS II-Pufferbad eintauchen. Legen Sie die Objektträger bis zu 5 Minuten in ein Coplin-Gefäß mit verdünnter PBS II oder ein in PBS II eingetauchtes Rack. 7. Zugabe von Fluoreszenz-Konjugat. Überschüssigen PBS II-Puffer abschütteln. Die objektträger wieder in die feuchte Kammer legen und sofort, D. H. INNERHALB VON 15 SEC, AUF JEDE AUFTRAGSSTELLE EINEN TROPFEN FLUORESZENZ-KONJUGAT GEBEN. DAS AUSTROCKNEN DES SUBSTRATS KANN DAS ERGEBNIS ERHEBLICH BEEINTRÄCHTIGEN. 8. Inkubation der Objektträger. Die Objektträger 30 min. bei Raumtemperatur (18-28 C) in der feuchten Kammer im Dunkeln inkubieren. 9. Waschen mit PBS II-Puffer. Erneut waschen wie unter Punkt 6 beschrieben. Wenn eine Gegenfärbung gewünscht wird, können bei diesem Waschschritt 2-3 Tropfen 1%iges Evans Blue pro 100mL PBS II-Puffer zugegeben werden. 10. Deckgläschen aufsetzen. Jeweils nur einen Objektträger aus dem PBS II-Pufferbad nehmen. Um die Auftragsstellen herum rasch abtrocknen und jeweils 1 Tropfen Eindeckmedium auf die Auftragsstelle geben. Das Deckgläschen sorgfältig auf den Objektträger legen, wobei Luftbläschen zu vemeiden sind. Überschüssiges Eindeckmedium mit Filterpapier entfernen. 11. Objektträger unter dem Fluoreszenzmikroskop auswerten. Fertiggestellte Objektträger so schnell wie möglich auswerten. Sie können im Dunkeln bei 2-8 C bis zu einer Woche ohne signifikaten Fluoreszenzverlust aufbewahrt werden. Qualitätskontrolle Bei jedem Testansatz eine positve und negative Kontrolle mitführen. Die homogene Positivkontrolle sollte eine kräftige (3+) apfelgrüne, homogene Anfärbung im Zellkern erzeugen. Die Zentromer- Positivkontrolle sollte ein (3+) diskret gesprenkeltes Muster erzeugen. Die Negativkontrolle sollte eine schwache grüne Färbung in allen HEp-2-Zellen ohne erkennbare Fluoreszenz zeigen. Erscheinen die Kontrollen nicht wie beschrieben, sollte der Test verworfen und wiederholt werden. Bei Verwendung von Evans Blue zur Gegenfärbung erscheint die Negativkontrolle schwach orange-rot. Bei der Positivkontrolle sind die Zellkerne apfelgrün und die nichtgefärbten Zellareale erscheinen schwach rot. Interpretation der Ergebnisse Negativ Eine Probe wird als negativ betrachtet, wenn die Anfärbung des Kerns gleich oder schwächer als die der Negativkontrolle ist. 3
4 Positiv Eine Probe wird als positiv betrachtet, wenn die Anfärbung der Zellkerne stärker als bei der Negativkontrolle und ein deutlich erkennbares Muster sichtbar ist. Die Kit-Kontrollen haben in der Regel eine Stärke von 3+. Eine Vielzahl von verschiedenen Mustern können in Abhängigkeit von Menge und Art der Autoantikörper gefunden werden. Die nachfolgend beschriebenen Muster können identifiziert werden. FLUORESZENZ- MUSTER Homogen Gesprenkelt Nukleolär Zentromer Mitochondrien MUSTERBESCHREIBUNG Kräftige Färbung des Zellkerns (Scl-70 kann als gesprenkeltes Muster erscheinen) Zellkern fein- oder grobgesprenkelt, die Nukleoli sind in der Regel nicht angefärbt. Große, grobe Sprenkelung, normalerweise weniger als 6 Flecken pro Zelle, mit oder ohne feingesprenkeltem Muster Diskretes gesprenkeltes Muster, die nukleären Punkte sind häufig ein Vielfaches von 46. Grobe cytoplasmatische filamentöse gesprenkelte Färbung um den Kern und im gesamten Cytoplasma NUKLEÄRE ANTIGENE dsdna, ssdna, Histone Scl-70 SS-A SS-B Sm RNP u.a. PM-Sc1 Nukleolin Ku und andere unbekannte nukleoläre Antigene Zentromere Chromosomal M2 (Gruppe von Proteinen der inneren Membran) 9,10 ASSOZIIERTE ERKRANKUNGEN Hohe Titer : SLE; Niedrige Titer: SLE oder andere Bindegewebserkrankungen 5 Hohe Titer: SLE, gemischte Bindegewebserkrankungen, Sklerodermie oder Sjögren s Syndrom - Sicca Komplex Niedrige Titer: Hinweis auf andere Bindegewebserkrankungen Hohe Titer: Sklerodermie Sjögren s Syndrom 6 Hinweis auf CREST- Syndrom 7 Primäre-biliäre Zirrhose, Sklerodermie (ca. 40%) und gelegentlich bei Overlap- Syndromen. Jo-1 Feingesprenkelte Färbung, mit einer Konzentration um den Kern. Jo-1 (histyl-trna Synthase) Polymyositis, Dermatomyositis assoziiert mit interstitiellen pulmonalen Erkrankungen Grenzen des Verfahrens 1. Hohe ANA-Titer sind ein starker Hinweis auf Bindegewebserkrankungen, aber die klinische Vorgeschichte des Patienten und andere serologische Befunde müssen bei der Diagnosestellung berücksichtigt werden. 2. Ein geringer Prozentsatz der SLE-Patienten können in der indirekten Immunfluoreszenz ANAnegativ und mit anderen Methoden positiv sein Patienten mit medikamenteninduziertem SLE können in der indirekten Immunfluoreszenz ANApositiv und mit anderen Methoden negativ sein Es können auch mehrere Autoantikörper in einem Patientenserum enthalten sein. Durch Verdünnen der Probe können die verschiedenen Muster besser unterscheidbar gemacht werden. Ebenso kann bei hochtitrigen Proben ein Prozoen-Effekt auftreten, der den wahren Titer maskiert. Bei allen zweifelhaft erscheinenden, oder niedrigtitrigen Proben sollte mindestens mit einer weiteren Verdünnung getestet werden. 5. Die im Fluoreszenzmikroskop verwendete Lichtquelle, Filter und Optik beeinflussen die Sensitivität des Tests. Die Qualität des Mikroskops wird maßgeblich durch die korrekte Wartung, speziell durch Zentrieren der Quecksilberlampe und deren Austausch nach der empfohlenen Brenndauer, beeinflusst. 6. Niederige ANA-Titer können auch bei Patienten, die nicht an rheumatischen Erkrankungen oder Bindegewebserkrankungen leiden, auftreten. Die Häufigkeit eines positiven ANA-Befunds nimmt bei normalen Personen mit dem Alter zu. 7. Bei der Interpretation des Fluoreszenzmusters sollte immer berücksichtigt werden, dass mehr als ein Autoantikörper vorliegen kann. Die Kombination von mehreren Autoantikörpern kann das homogene oder gesprenkelte Muster beeinflussen. Daher wird empfohlen, dass alle Proben mit homogenem Fluoreszenzmuster auf dsdna und ENAs untersucht werden. 8. Obwohl eine 1/40-Probenverdünnung routinemäßig zum Screenen verwendet wird, kann es bei einigen Proben zu einer geringfügigen unspezifischen Anfärbung des Kerns bei niedrigen Probenverdünnungen kommen. 9. Der ANA-Test ist nur als diagnostisches Hilfsmittel zu betrachten. Das Ergebnis muss immer im Zusammenhang mit dem gesamten klinischen Bild betrachtet werden. 4
5 Separat verkaufte Objektträger sind als Analytspezifische Reagenzien klassifiziert. Die analytischen und leistungsbezogenen Eigenschaften wurden lediglich als Bestandteil des Kits untersucht. Leistungsdaten Während der Qualitätskontrolle werden mehrere Objektträger jeder Charge mit einem bekannten Kontrollserum getestet. Dieses Kontrollserum wird bis zum Endpunkt austitriert. Jede Charge muss einen vorgegebenen Endpunkttiter aufweisen. Dies zeigt, dass es keine signifikanten Qualitätsunterschiede innerhalb einer Charge oder zwischen unterschiedlichen Chargen gibt. Sensitivität Die Sensitivität des Tests ist durch die Qualität des verwendeten Mikroskops limitiert. Es steht kein internationaler Kalibrator für eine Standardisierung zur Verfügung. Spezifität Mit unterschiedlichen Spezifitäten und mindestens 10 negativen Seren, werden mit dem hier beschriebenen Kit und einem alternativen kommerziellen Kit getestet. Mit dem Kit von The Binding Site und einem alternativen Kit wurden für die Spezifität und Intensität vergleichbare Ergebnisse erhalten. Kurzarbeitsanleitung 1. Eindeckmedium auf Raumtemperatur erwärmen lassen. 2. PBS II-Pufferkonzentrat 1/40 mit destilliertem oder deionisiertes Wasser verdünnen. 3. Patientenseren 1/40 mit PBS II-Puffer verdünnen. 4. Objektträger aus dem Kühlschrank nehmen und auf Raumtemperatur (18-28 C) erwärmen lassen. 5. Objektträger aus der Folientasche nehmen und in eine feuchte Kammer legen. Je 25µL Kontrollen und Patientenseren auftragen. 30 Minuten bei Raumtemperatur (18-28 C) inkubieren. 6. Objektträger mit PBS II-Puffer waschen: Erst mit der Spritzflasche kurz spülen, dann 5 Minuten in einem PBS II-Pufferbad eintauchen oder Coplin-Gefäß. 7. Objektträger aus dem PBS II-Bad nehmen, wieder in die feuchte Kammer legen und sofort Fluoresceinkonjugat auftropfen Minuten bei Raumtemperatur (abdunkeln) inkubieren. 9. Wie unter Punkt 6 beschrieben waschen. 10. Objektträger aus dem PBS II-Bad nehmen, auf jede Auftragsstelle Eindeckmedium (Mounting Medium) auftropfen und ein Deckgläschen aufsetzen. 11. Objektträger unter dem Fluoreszenzmikroskop auswerten. 5
6 Referenzen 1. Tan, E.M. (1982): Autoantibodies to nuclear antigens: Their immunobiology and medicine. Advances in Immunology. 33: Tan, E.M. et al (1982): The 1982 revised criteria for classification of systemic lupus erythematosus. Arth and rheum. 25: Miyachi, K., Fritzler, M.J., Tan, E.M. (1978): Autoantibody to nuclear antigen in proliferating cells. J. Immunol. 121: Weller, T.H., Coons, A.H. (1954): Fluorescent antibody studies with agent of Varicella and Herpes Zoster propagated in vitro: Prov. Soc. Exp. Biol. Med. 86: Notman, D.D., Kurata, N., Tan, E.M. (1975): Profiles of antinuclear antibodies in systemic rheumatic diseases. Ann. Int. Med. 83: Ritchie, R.F. (1970): Antinuclear antibodies. Their frequency and diagnostic application. N. Enr. J. Med. 282: Tan, E.M., Rodman, G.P., Garcia, I. (1980) et al: Diversity of antinuclear antibodies in progressive systemic sclerosis. Arthritis Rheum. 23: Gladman, D.D., Chalmers, A., Urowitz, M.B. (1978): Systemic lupus erythematosus with negative LE cells and anitnuclear factors. J. Rheum.: MacKay, I.R., Gershwin, M.E. (1989): Molecular basis of mitochondrial autoreactivity in primary biliary cirrhosis. Immunol.Today: 10: 9: Laung, P.S.C., MacKay, I., Gershwin, M.E. (1994): Mitochondrial autoantigens. Man Biol. Mark; B8.1,1-14. Eds W.J.Van Venrooij and R.N. Maini. Kluwer Academic Pubs. Netherlands. 11. Protein Refence Unit Handbook of Autoimmunity (3 rd Edition) Ed A Milford Ward. J Sheldon, GD Wild. Publ. PRU Publications, Sheffield. 14. Hersteller: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : Technical Service (Outside the U.S.) : support@inovadx.com Autorisierter Repräsentant: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: DEU Rev. 5 January 2014 NOVA Lite und INOVA Diagnostics, Inc. sind eingetragene Markenzeichen. Copyright 2013 Alle Rechte vorbehalten 6
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