SCHLUSS-ENTWURF FprCEN/TS 17062
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- Calvin Sommer
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1 TECHNISCHE SPEZIFIKATION TECHNICAL SPECIFICATION SPÉCIFICATION TECHNIQUE SCHLUSS-ENTWURF FprCEN/TS Januar 2017 ICS Deutsche Fassung Pflanzliche Lebensmittel - Multiverfahren zur Bestimmung von Pestizidrückständen in pflanzlichen Ölen mit LC-MS/MS Foods of plant origin - Multimethod for the determination of pesticide residues in vegetable oils by LC-MS/MS Aliments d'origine végétale - Multiméthode de détermination des résidus de pesticides dans les huiles végétales par CL-SM/SM Dieser Technische Spezifikation-Entwurf wird den CEN-Mitgliedern zur Abstimmung vorgelegt. Er wurde vom Technischen Komitee CEN/TC 275 erstellt. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Bulgarien, Dänemark, Deutschland, der ehemaligen jugoslawischen Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, Österreich, Polen, Portugal, Rumänien, Schweden, der Schweiz, Serbien, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, der Türkei, Ungarn, dem Vereinigten Königreich und Zypern. Die Empfänger dieses Norm-Entwurfs werden gebeten, mit ihren Kommentaren jegliche relevante Patentrechte, die sie kennen, mitzuteilen und unterstützende Dokumentationen zur Verfügung zu stellen. Warnvermerk : Dieses Schriftstück hat noch nicht den Status einer Technischen Spezifikation. Es wird zur Prüfung und Stellungnahme vorgelegt. Es kann sich noch ohne Ankündigung ändern und darf nicht als Technischen Spezifikation in Bezug genommen werden. EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION CEN-CENELEC Management-Zentrum: Avenue Marnix 17, B-1000 Brüssel 2017 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten. Ref. Nr. FprCEN/TS 17062:2017 D
2 Inhalt Seite Europäisches Vorwort Anwendungsbereich Normative Verweisungen Kurzbeschreibung Chemikalien Geräte Durchführung Auswertung der Ergebnisse Zuverlässigkeit Untersuchungsbericht Anhang A (informativ) Beispiele für Untersuchungsbedingungen A.1 HPLC-System A.2 HPLC-System A.3 HPLC-System A.4 HPLC-System Anhang B (informativ) Validierungsdaten und Wiederfindung Anhang C (informativ) Schema der Aufarbeitung (für eine Probe von 2-g) Anhang D (informativ) Ergänzende Informationen D.1 Wiederfindungsversuche Literaturhinweise
3 Europäisches Vorwort Dieses Dokument (FprCEN/TS 17062:2017) wurde vom Technischen Komitee CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren erarbeitet, dessen Sekretariat vom DIN gehalten wird. Dieses Dokument ist derzeit zur Schlussabstimmung als TS vorgelegt. WARNUNG Bei der Anwendung dieser Norm ist es möglich, dass gefährliche Substanzen, Arbeitsgänge und Geräte angewendet werden. Diese Norm erhebt nicht den Anspruch, dass alle mit ihrer Anwendung verbundenen Sicherheitsprobleme angesprochen werden. Es liegt in der Verantwortung des Anwenders dieser Norm, geeignete Vorkehrungen für den Arbeits- und Gesundheitsschutz zu treffen und vor der Anwendung festzulegen, welche einschränkenden Vorschriften gelten. 3
4 1 Anwendungsbereich Diese europäische Technische Spezifikation beschreibt ein Verfahren zur Bestimmung von Pflanzenschutzmittel-Rückständen in pflanzlichen Ölen (Fettgehalt > 90 %, Wassergehalt < 5 %). Das Verfahren wurde in einem Ringversuch mit Olivenöl validiert. Laborerfahrungen sind jedoch auch bei anderen Ölsorten wie Sonnenblumenöl, Sesamöl, Leinöl, Rapsöl, Traubenkernöl, Distelöl und Kürbiskernöl vorhanden. 2 Normative Verweisungen Die folgenden Dokumente, die in diesem Dokument teilweise oder als Ganzes zitiert werden, sind für die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschließlich aller Änderungen). FprCEN/TR 17061:2017, Lebensmittel Anleitung zur Kalibrierung und quantitativen Auswertung chromatographischer Methoden für die Bestimmung von Pflanzenschutzmittelrückständen und organischen Kontaminanten 3 Kurzbeschreibung Das homogenisierte Untersuchungsmaterial wird mit Acetonitril extrahiert. Nach Zentrifugieren wird ein Aliquot der organischen Phase durch dispersive SPE-Sorbentien (PSA und C18) gereinigt. Um mitextrahiertes Fett abzutrennen, kann ein Ausfrieren der Acetonitrilphase erfolgen. Nach der Reinigung erfolgt eine weitere Zentrifugation. Die in diesem Extrakt enthaltenen PSM-Rückstände lassen sich nach Stabilisierung von basenempfindlichen Verbindungen durch leichtes Ansäuern mit Ameisensäure direkt flüssigchromatographisch bestimmen. Das Endextrakt kann direkt zur LC-MS(/MS) genutzt werden. ANMERKUNG Im Gegensatz zu der in EN 15662:2008 beschriebenen Methode, beinhaltet dieses Verfahren keine Zugabe von Wasser. 4 Chemikalien Soweit nicht anders angegeben, werden analysereine Chemikalien verwendet. Um mögliche Kontamination von Wasser, Lösemittel, Sorbens, anorganischen Salzen, etc. zu vermeiden, wird jede Vorsichtmaßnahme getroffen. 4.1 Wasser, HPLC Reinheitsgrad. 4.2 Acetonitril, HPLC Reinheitsgrad. 4.3 Methanol, HPLC Reinheitsgrad. 4.4 Essigsäure. 4.5 Ammoniumformiat. 4.6 Ameisensäure-Lösung in Acetonitril, Volumenanteil φ = 5 ml Ameisensäure/100 ml: 5 ml konzentrierte Ameisensäure (Massenanteil w 95 %) werden mit Acetonitril (4.2) gemischt und auf 100 ml aufgefüllt. 4
5 4.7 Amino-Phase mit primären und sekundären Aminogruppen (PSA): z. B. Bondesil-PSA 40 µm Agilent No ) Andere Aminosorbentien dürfen verwendet werden, aber es können Untersuchungen erforderlich sein, um die Gleichwertigkeit insbesondere bezüglich Analytverluste und des ph-wertes der Endextrakte nachzuweisen. 4.8 C18-Festphase (Octadecyl-silyl modifiziertes Kieselgel), frei fließend, 50 µm. 4.9 Interne Standard- und Qualitätskontroll-Standardlösungen in Acetonitril, Massenkonzentration ρ = 10 µg/ml bis 100 µg/ml. Tabelle 1 zeigt eine Liste von geeigneten Internen Standards (ISTDs) und Qualitätskontrollstandards (QC), die in dieser Methode verwendet werden dürfen. Tabelle 1 Geeignete Interne Standards (ISTD) und Qualitätskontrollstandards (OC) Verbindung Log P (Octanol- Wasser- Verteilungscoeffizient) Vorgeschlagene Konzentration C ISTD [µg/ml] MS/MS ESI (+) MS/MS ESI ( ) Tris-(1,3-dichlorisopropyl)-phosphat 3, Linuron-D Carbofuran-D3 1, Chlorpyrifos-D10 4, Bis-nitrophenylharnstoff (Nicarbazin) 4.10 Primäre Pestizidstandards Es werden ausschließlich Standards bekannter Reinheit verwendet. 3, ) Bondesil PSA ist ein Produkt, das von Aglient geliefert wird. Diese Angabe dient nur zur Unterrichtung der Anwender dieser Europäischen TS und bedeutet keine Anerkennung der genannten Produkte durch CEN. Gleichwertige Produkte dürfen verwendet werden, wenn sie nachweisbar zu identischen Ergebnissen führen. 5
6 4.11 Pestizid-Stammlösungen Stammlösungen aller zu analysierenden Pestizide werden in einer Konzentration hergestellt, die ausreichend hoch ist, um die Herstellung komplexer Standardmischungen zu erlauben. Üblicherweise werden Stammlösungen bei 18 C aufbewahrt. Die Stabilität der Lösungen muss regelmäßig kontrolliert werden. In bestimmten Fällen kann der Zusatz von Säuren oder Basen hilfreich sein, um die Stabilität zu erhöhen und eine akzeptable Lagerdauer der Lösungen zu verlängern. Bevor Anteile der Lösung abgenommen werden, müssen eventuell auftretende Niederschläge wieder aufgelöst werden Pestizid-Arbeitslösungen Aufgrund der breiten Anwendbarkeit der Methode und der teilweise gegensätzlichen ph-stabilität von bestimmten Pestiziden kann es sein, dass mehr als eine Arbeitslösung benötigt wird, um das gesamte Pestizidspektrum abzudecken, wobei jede Lösung ein oder mehr Pestizide enthält. Diese werden durch das Mischen verschiedener Volumina der benötigten Pestizid-Stammlösungen (4.11) und eine angemessene Verdünnung mit Acetonitril hergestellt. Die Pestizidkonzentration in diesen Mischungen sollte ausreichen, um die Vorbereitung der benötigten matrix-angepassten Standardlösungen (4.13.2) mit moderater Verdünnung des rückstandsfreien Probenextrakts (z. B. weniger als 20 %) zu ermöglichen. Üblicherweise sollten Pestizid-Arbeitslösungen bei geringen Temperaturen im Dunkeln aufbewahrt werden. Die Stabilität der Pestizide in diesen Mischungen wird während der Lagerung regelmäßig kontrolliert [1] und die Lagerungsbedingungen entsprechend angepasst. In bestimmten Fällen kann der Zusatz von Säuren oder Basen hilfreich sein, um die Stabilität zu verbessern und akzeptable Lagerdauern zu verlängern Standardlösungen (Kalibriermischungen) Lösemittelstandards Lösemittelstandards werden durch Mischung bekannter Volumen der Pestizid-Arbeitslösungen (4.12) hergestellt und mit Acetonitril bis zur Marke aufgefüllt. Die Herstellung von Lösemittel-Kalibriermischungen mit unterschiedlichen Analytkonzentrationen (ρ A ccc ) und identischen Konzentrationen an internem Standard (ρ IIII ccc ) ist für die Herstellung der Kalibriergerade notwendig. Die Konzentration des internen Standards in den Kalibrierstandards (ρ IIII ccc ) muss der Konzentration des internen Standards in den Probenextrakten entsprechen, da die Dotierung des internen Standards erst nach der Extraktion erfolgt. Deshalb muss der Quotient V IIII ccc /V SSS aus dem verwendeten Volumen (V IIII ccc ) der Lösung des internen Standards (4.9) und das Endvolumen des Kalibrierstandards (V SSS ) genau dem Quotienten V IIII /V AAAAAAA (siehe 6.1) entsprechen. Werden 60 µl ISTD-Lösung (4.9) zu 6 ml Aliqout des Zentrifugats gegeben, müssen 6 ml Standardlösung mit 60 µl ISTD-Lösung dotiert werden. Werden andere Volumina an Kalibrierstandards verwendet, müssen die Zusätze an ISTD-Lösung proportional angepasst werden. ANMERKUNG Eine Pestizidkonzentration von 1 µg/ml entspricht einem Rückstandsgehalt von 5 mg/kg, bei einer Einwaage von 2 g Matrix-angepasste Standards Matrix-angepasste Standards werden auf die gleiche Weise hergestellt wie Lösemittelstandards, allerdings wird hierbei statt Acetonitril der Extrakt von rückstandsfreien Matrices (Proben, in denen bei Verwendung dieser Methode keine Pestizide gefunden werden) verwendet. Dieser Extrakt wird wie in Abschnitt 5 beschrieben hergestellt (jedoch ohne die Zugabe eines internen Standards). Um Matrixeffekte während der Chromatographie möglichst weitgehend zu kompensieren, werden am besten ähnliche Lebensmittel ausgewählt (Olivenöl für Olivenölproben usw.). 6
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