Induktion von Resveratrol- Derivaten in Wein-Kallus, -Blüten und -Blättern durch Aureobasidium pullulans Stämme.
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- Martin Dunkle
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1 Induktion von Resveratrol- Derivaten in Wein-Kallus, -Blüten und -Blättern durch Aureobasidium pullulans Stämme. Susanne Rühmann Fachgebiet Obstbau der Technischen Universtität Weihenstephan (Prof. Dr. Treutter)
2 Induktion von Resveratrolderivaten in Weinblüten (Vitis vinifera) durch Aureobasidium pullulans Stämme. Rühmann Susanne, Dieter Treutter Fachgebiet für Obstbau, Weihenstephan, Alte Akademie 16, Freising, Germany In Versuchsansätzen zur Entwicklung von biologischen Pflanzenschutzmaßnahmen im Obstbau spielt der Einsatz von nicht-pathogenen, epiphytischen Mikroorgansimen eine zunehmende Rolle. In diesem Rahmen wurden Pflanzenstärkungsmittel auf der Basis des hefeähnlichen Pilzes Aureobasidium pullulans entwickelt. Deren ist jedoch weitgehend unbekannt. In zahlreichen Untersuchungen konnten wir zeigen, dass Extrakte von Aureobasidium pullulans in Kalluskulturen von Wein (Vitis vinifera) die Phenylpropanoid- und Flavonoid-Biosynthese stimuleren sowie eine Neusynthese von Stiben-Phytoalexinen induzieren. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass der Wirkmechanismus der Hefepräparate auf Resistenzinduktion beruht. Um diese Ergebnisse auf praxisnahe Bedingungen zu übertragen, sollte das Induktionsverhalten von Weinblüten nach Anwendung des Extraktes sowohl unter Gewächshaus- als auch unter Freilandbedingungen untersucht werden. Dazu wurden die Gescheine der Sorten Müller Thurgau, Regent und Blauer Spätburgunder zum Zeitpunkt der Vollblüte zweimal im Abstand von 24 h in Extrakt getaucht und 0, 24, 48 und 72 Stunden nach der Behandlung (HNB) entnommen. Der Phenylpropanoidgehalt der Blüten wurde mittels HPLC-Analyse bestimmt. Durch die Behandlung der Blüten mit dem Kulturfiltrat von Aureobasidium pullulans wurde in verschiedenen Versuchsreihen eine deutliche Zunahme an Resveratrol-Derivaten festgestellt. Die Blüten zeigten schon 24 Stunden nach der Elicitation eine Akkumulation. Ferner zeigte sich durch die Elicitation eine beschleunigte Akkumulation von Flavanolen.
3 wissenschaftliche Erkenntnisse phenolischen Verbindungen sind an Abwehrstrategien gegen Pathogene beteiligt Nicht Pathogene Mikroorganismen können Pathogene hemmen
4 phenolischen Verbindungen sind an Abwehrstrategien gegen Pathogene beteiligt Nicht Pathogene Mikroorganismen können Pathogene hemmen Können nicht pathogene Mikroorganismen phenolische Verbindungen in Pflanzen induzieren um somit das Abwehrpotential der Pflanze zu steigern?
5 Untersuchungen auf Zellebene Kalluskulturen von Vitis vinifera Untersuchungen auf Pflanzenebene Blüten und Blätter von Vitis vinifera Pflanzen
6 Untersuchungen auf Zellebene Kalluskulturen von Vitis vinifera Untersuchungen auf Pflanzenebene Blüten und Blätter von Vitis vinifera Pflanzen Behandelt mit einem Kulturfiltrat von Aureobasidium pullulans (hefeähnlicher Pilz)
7 Weinkallus Versuchsmaterial: Weinkalli der Sorten Regent und Nero Kulturmedium: (K2) ein MS-Medium (Murashige und Skoog) mit 5 ppm Indolessigsäure (IES) und 0,2 ppm BAP
8 Weinkallus nicht pathogener Mikroorganismus Reich: Pilze Stamm: Ascomycota Unterstamm: Pezizomycotina Ordnung: Eurotiomycetes Familie: Dothioraceae Gattung: Aureobasidium Art: pullulans Versuchsmaterial: Weinkalli der Sorten Regent und Nero Kulturmedium: (K2) ein MS-Medium (Murashige und Skoog) mit 5 ppm Indolessigsäure (IES) und 0,2 ppm BAP Anzucht: Schüttelkultur in Plate Count (PC)- Medium oder K2-Medium Extrakterstellung: autoklavieren der Hefesuspension 10 min. bei 121 C; Nach dem Abzentrifugieren wird der Überstand als Extrakt verwendet.
9 Probename nach 5h, 10h, 24h, 48h Gefriergetrocknete Kalli wurden methanolisch extrahiert Extrakte wurden charakterisiert mittels: HPLC (Hochdruckflüssigkeitschro matographie) UV-Spektroskopie Dünnschichtchromatogrphie
10 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Phenylpropanoid-Stoffwechsel im Weinkallus Shikimatweg Phenylalanin Shikimatweg Phenylalanin PAL PAL [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA Protocatechusäure Gallussäure-Derivat P-Cumaroyl-Glucose oligomere Hydroxyzimtsäuren CHS STS CHS STS [Flavonol] [Chalcon] [Catechine] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase [Stilben] [Anthocyane] 2 Quercetin-Derivate [Chalcon] Catechin Epicatechin Epicatechingallat Procyanidin B1 Procyanidin B3 trans-resveratrol cis/trans-piceid div. Resveratrol-Derivate Pallidol Viniferine [2 Anthocyane]
11 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Weinkallus ist also in der Lage, alle beschriebenen Stoffklassen zu synthetisieren. Weinkallus ist als Modelsystem für Induktionsversuche geeignet
12 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Weinkallus ist also in der Lage, alle beschriebenen Stoffklassen zu synthetisieren. Weinkallus ist als Modelsystem für Induktionsversuche geeignet Weinkallus synthetisiert sowohl monomere als auch oligomere Resveratrol-Derivate (die Phytoalexine der Weinpflanzen) Weinkallus ist als Modelsystem für Induktionsversuche geeignet
13 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Weinkallus ist also in der Lage, alle beschriebenen Stoffklassen zu synthetisieren. Weinkallus ist als Modelsystem für Induktionsversuche geeignet Weinkallus synthetisiert sowohl monomere als auch oligomere Resveratrol-Derivate (die Phytoalexine der Weinpflanzen) Weinkallus ist als Modelsystem für Induktionsversuche geeignet Weinkallus synthetisiert jedoch keine Tatrate (Weinsäure- Hydroxyzimtsäure-Verbindungen) wie Blätter, Blüten und Trauben es tun. Weinpflanzen als reelles Modelsystem werden für reelle Untersuchungen benötigt
14 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Elicitation mit Aureobasidium pullulans-extrakt unbehandelt 5% Hefeextrakt 50% Hefeextrakt
15 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Phenylalanin µg/g Trockengewicht Gesamtphenole unbehandelt 5% Hefeextrakt 50% Hefeextrakt PAL: phenylalaninammonia-lyase CHS: chalconsynthase STS: stilbensynthase
16 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt µg/g Trockengewicht µg/g Trockengewicht Phenylalanin PAL Zimtsäure p-cumaroyl-coa + 3 malonyl-coa Gesamtphenole p-cumarsäure unbehandelt 5% Hefeextrakt 50% Hefeextrakt PAL: phenylalaninammonia-lyase CHS: chalconsynthase STS: stilbensynthase
17 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt µg/g Trockengewicht µg/g Trockengewicht Gesamtphenole Catechine CHS Phenylalanin PAL Zimtsäure p-cumaroyl-coa + 3 malonyl-coa [Chalcone] [Leucocyanidin] Resveratrolderivate p-cumarsäure Resveratrolderivate STS Catechin Epicatechin unbehandelt 5% Hefeextrakt 50% Hefeextrakt PAL: phenylalaninammonia-lyase CHS: chalconsynthase STS: stilbensynthase
18 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt µg/g Trockengewicht µg/g Trockengewicht Gesamtphenole Catechine CHS Phenylalanin PAL Zimtsäure p-cumaroyl-coa + 3 malonyl-coa [Chalcone] [Leucocyanidin] Resveratrolderivate p-cumarsäure Resveratrolderivate STS Catechin Epicatechin unbehandelt 5% Hefeextrakt 50% Hefeextrakt PAL: phenylalaninammonia-lyase CHS: chalconsynthase STS: stilbensynthase
19 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt µg/g Trockengewicht µg/g Trockengewicht Gesamtphenole Catechine CHS Phenylalanin PAL Zimtsäure p-cumaroyl-coa + 3 malonyl-coa [Chalcone] [Leucocyanidin] Resveratrolderivate p-cumarsäure Resveratrolderivate STS Catechin Epicatechin unbehandelt 5% Hefeextrakt 50% Hefeextrakt PAL: phenylalaninammonia-lyase CHS: chalconsynthase STS: stilbensynthase
20 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Was bewirkt das A.p. Extrakt im Weinkallus? Gesamtgehalt Phenylpropanoide und p-cumarsäure werden induziert
21 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Was bewirkt das A.p. Extrakt im Weinkallus? Gesamtgehalt Phenylpropanoide und p-cumarsäure werden induziert Judith Pfeiffer (Lehrstuhl für Zierpflanzenbau und Gartenbauliche Pflanzenzüchtung WZW)
22 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Was bewirkt das A.p. Extrakt im Weinkallus? Gesamtgehalt Phenylpropanoide und p-cumarsäure werden induziert Aktivierung der Genexpression von PAL (Phenylalanin-Ammonium-Lyase) erhöhte Enzymaktivität von PAL Judith Pfeiffer (Lehrstuhl für Zierpflanzenbau und Gartenbauliche Pflanzenzüchtung WZW)
23 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Was bewirkt das A.p. Extrakt im Weinkallus? Gesamtgehalt Phenylpropanoide und p-cumarsäure werden induziert Aktivierung der Genexpression von PAL (Phenylalanin-Ammonium-Lyase) erhöhte Enzymaktivität von PAL Catechine werden induziert Judith Pfeiffer (Lehrstuhl für Zierpflanzenbau und Gartenbauliche Pflanzenzüchtung WZW)
24 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Was bewirkt das A.p. Extrakt im Weinkallus? Gesamtgehalt Phenylpropanoide und p-cumarsäure werden induziert Aktivierung der Genexpression von PAL (Phenylalanin-Ammonium-Lyase) erhöhte Enzymaktivität von PAL Catechine werden induziert Hemmung der Genexpression von CHS (Chalkonsynthase), LAR(Leukoanthocyanidinreduktase) und ANR (Anthocyanidinreduktase) unveränderte Enzymaktivität der CHS Judith Pfeiffer (Lehrstuhl für Zierpflanzenbau und Gartenbauliche Pflanzenzüchtung WZW)
25 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Was bewirkt das A.p. Extrakt im Weinkallus? Gesamtgehalt Phenylpropanoide und p-cumarsäure werden induziert Aktivierung der Genexpression von PAL (Phenylalanin-Ammonium-Lyase) erhöhte Enzymaktivität von PAL Catechine werden induziert Hemmung der Genexpression von CHS (Chalkonsynthase), LAR(Leukoanthocyanidinreduktase) und ANR (Anthocyanidinreduktase) unveränderte Enzymaktivität der CHS Resveratrol-Derivate werden induziert Judith Pfeiffer (Lehrstuhl für Zierpflanzenbau und Gartenbauliche Pflanzenzüchtung WZW)
26 Elicitation von Weinkallus mit Aureobasidium pullulans Extrakt Was bewirkt das A.p. Extrakt im Weinkallus? Gesamtgehalt Phenylpropanoide und p-cumarsäure werden induziert Aktivierung der Genexpression von PAL (Phenylalanin-Ammonium-Lyase) erhöhte Enzymaktivität von PAL Catechine werden induziert Hemmung der Genexpression von CHS (Chalkonsynthase), LAR(Leukoanthocyanidinreduktase) und ANR (Anthocyanidinreduktase) unveränderte Enzymaktivität der CHS Resveratrol-Derivate werden induziert Aktivierung der Genexpression von STS (Stilbensynthase) erhöhte Enzymaktivität der STS Judith Pfeiffer (Lehrstuhl für Zierpflanzenbau und Gartenbauliche Pflanzenzüchtung WZW)
27 Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe Können auch andere Hefeextrakte elicitieren?
28 Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe Regent Nero
29 Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe Regent Nero Lebende Bäckerhefe-Zellen Bäckerhefe-Zellen Extrakt Lebende Bäckerhefe-Zellen Bäckerhefe-Zellen Extrakt
30 Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe Regent Nero Lebende Bäckerhefe-Zellen Bäckerhefe-Zellen Extrakt Lebende Bäckerhefe-Zellen Bäckerhefe-Zellen Extrakt 1% 1% 1% 1% 5% 5% 5% 5% 10% 10% 10% 25% 25% 25% 20% 30% 30% 40% 50% 50% 50% 50%
31 Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe Kulturmedium (K2) behandelter Kallus Regent K0 unbehandelt K0 unbehandelt Nero Kulturmedium (K2) behandelter Kallus Lebende Bäckerhefe-Zellen Bäckerhefe-Zellen Extrakt Lebende Bäckerhefe-Zellen Bäckerhefe-Zellen Extrakt 1% 1% 1% 1% 5% 5% 5% 5% 10% 10% 10% 25% 25% 25% 20% 30% 30% 40% 50% 50% 50% 50%
32 Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe µg/g Frischgewicht µg/g Frischgewicht Summe der gesamten Phenylpropanoide Hefezellen Hefeextrakt 1200 "Regent" 1200 "Nero" K0 K K0 K % Behandlung % Behandlung
33 Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe µg/g Frischgewicht µg/g Frischgewicht p-cumarsäure Hefezellen Hefeextrakt 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 "Regent" "Nero" K0 K ,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 K0 K % Behandlung % Behandlung
34 Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe Flavanole (Catechine) Hefezellen Hefeextrakt "Regent" 250 "Nero" 250 µg/g Frischgewicht µg/g Frischgewicht K0 K K0 K % Behandlung % Behandlung
35 Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe µg/g Frischgewicht µg/g Frischgewicht Resveratrol-Derivate Regent Hefezellen Hefeextrakt monomere K0 K oligomere K0 K % Behandlung
36 Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe µg/g Frischgewicht µg/g Frischgewicht µg/g Frischgewicht µg/g Frischgewicht Resveratrol-Derivate Regent Hefezellen Hefeextrakt Nero monomere monomere K0 K K0 K oligomere oligomere K0 K K0 K % Behandlung % Behandlung
37 Zusammenfassung Elicitation von Weinkallus mit Bäckerhefe Elicitation mit Bäckerhefe-Extrakt Gesamtgehalt an Phenylpropanoiden und der p-cumarsäure werden induziert Der Grad der Induktion nimmt mit zunehmender Elicitorkonzentration zu Catechine werden durch eine Elicitation mit Bäcker-Hefekulturfiltrat induziert Der Grad der Induktion nimmt mit zunehmender Elicitorkonzentration zu Resveratrol-Derivate werden durch eine Elicitation mit Bäckerhefekulturfiltrat induziert schon eine geringe Elizitorkonzentration führt zu einer maximalen Induktion
38 Vergleich Aureobasidium pullulans und Bäckerhefe Aureobasidium pullulans Extrakt Bäckerhefe Extrakt Phenylalanin PAL Zimtsäure Phenylalanin PAL Zimtsäure p-cumaroyl-coa + 3 malonyl-coa p-cumaroyl-coa + 3 malonyl-coa CHS STS CHS STS [Chalcone] [Leucocyanidin] [Chalcone] [Leucocyanidin] Resveratrolderivate Resveratrolderivate Catechin Epicatechin Catechin Epicatechin PAL: phenylalaninammonia-lyase CHS: chalconsynthase STS: stilbensynthase
39 Vergleich Aureobasidium pullulans und Bäckerhefe Hypothesen: das Extrakt von Aureobasidium pullulans elizitiert den Sekundärstoffwechsel selektiver als das Bäckerhefe-Extrakt
40 Vergleich Aureobasidium pullulans und Bäckerhefe Hypothesen: das Extrakt von Aureobasidium pullulans elizitiert den Sekundärstoffwechsel selektiver als das Bäckerhefe-Extrakt das Bäckerhefe-Extrakt elicitiert die Resveratrol- Synthese schon bei 1%iger Lösung maximal, sodass sich Catechine weiter anreichern. Bei 50% Aureobasidium pullulans Extrakt ist dieser Punkt noch nicht erreicht.
41 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans-extrakt Sorten: Müller Thurgau (sehr anfällig) Blauer Spätburgunder Regent (resistent gegen div. Pilze) Behandlung mit Hefeextrakt bzw. Plate Count Medium (Kontrolle) in die Blüte Probenahme nach 24, 48 und 72 h HPLC-Analyse (Frischextraktion) Untersuchungen von Enzymaktivitäten
42 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Gesamtphenole Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA CHS STS [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
43 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Gesamtphenole Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA CHS STS [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
44 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Hydroxyzimtsäure-Derivate Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 2,5 2,0 1,5 CHS STS 1,0 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] 0,5 0, Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
45 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Hydroxyzimtsäure-Derivate Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 2,5 2,0 1,5 CHS STS 1,0 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] 0,5 0, Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
46 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Gallussäure-Derivate Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 1,2 1,0 0,8 CHS STS 0,6 0,4 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] 0,2 0, Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
47 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Gallussäure-Derivate Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 1,2 1,0 0,8 CHS STS 0,6 0,4 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] 0,2 0, Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
48 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Flavonole (Isoqueritrin) Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA CHS STS 6 4 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
49 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Flavonole (Isoqueritrin) Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA CHS STS 6 4 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
50 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL 10 Flavanole (Catechin) Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 8 6 CHS STS 4 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
51 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL 10 Flavanole (Catechin) Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 8 6 CHS STS 4 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
52 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt Naringinin dpm Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 4000 Chalkonsynthase-Aktivität CHS STS [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] K0 K24 K48 K72 H24 H48 H72 [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
53 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt Naringinin dpm Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 4000 Chalkonsynthase-Aktivität CHS STS [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] K0 K24 K48 K72 H24 H48 H72 [Catechine] [Anthocyane] Das Kulturmedium hat eine induzierende Wirkung PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
54 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt Naringinin dpm Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 4000 Chalkonsynthase-Aktivität CHS STS [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] K0 K24 K48 K72 H24 H48 H72 [Catechine] [Anthocyane] Das Kulturmedium hat eine induzierende Wirkung PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase Die Chalkonsynthase-Aktivität nimmt mit zunehmender Blütenentwicklung zu
55 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL oligomere Resveratrol-Derivate Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 3,0 2,5 2,0 CHS STS 1,5 1,0 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] 0,5 0, Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
56 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL oligomere Resveratrol-Derivate Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 3,0 2,5 2,0 CHS STS 1,5 1,0 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] 0,5 0, Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
57 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL oligomere Resveratrol-Derivate Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 3,0 2,5 2,0 CHS STS 1,5 1,0 [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] 0,5 0, Stunden nach Behandlung [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
58 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt Resveratrol dpm Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 200 Stilbensynthase-Aktivität 160 CHS STS [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] 40 0 K0 K24 K48 K72 H24 H48 H72 [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
59 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt Resveratrol dpm Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 200 Stilbensynthase-Aktivität 160 CHS STS [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] 40 0 K0 K24 K48 K72 H24 H48 H72 [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
60 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt Resveratrol dpm Blauer Spätburgunder Shikimatweg Phenylalanin PAL Kontrolle Hefe [Benzoesäuren] p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA 200 Stilbensynthase-Aktivität 160 CHS STS [Flavonol] [Chalcon] [Stilben] 40 0 K0 K24 K48 K72 H24 H48 H72 [Catechine] [Anthocyane] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
61 Elicitation von Weinblüten mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Frischgewicht mg/g Frischgewicht mg/g Frischgewicht Elicitation von oligomeren Resveratrol-Derivaten 3,0 Blauer Spätburgunder Kontrolle Hefe 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 Regent 0, Müller Thurgau 1,2 1,0 Stunden nach Behandlung 1,6 1,4 1,2 0,8 1,0 0,6 0,4 0,2 0,8 0,6 0,4 0,2 0, , Stunden nach Behandlung Stunden nach Behandlung
62 Elicitation von Weinblättern mit Aureobasidium pullulans Extrakt Elicitation von Weinblättern mit Aureobasidium pullulans-extrakt Sorten: Müller Thurgau (sehr anfällig) Blauer Spätburgunder Regent (resistent gegen div. Pilze) Blätter werden in Hefeextrakt bzw. Plate Count Medium (Kontrolle) getaucht Probenahme nach 12, 24 und 48 h HPLC-Analyse
63 Elicitation von Weinblättern mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Trockengewicht Regent (Blatt 5) Kontrolle Hefe Phenylpropanoide gesamt Stunden nach Behandlung
64 Elicitation von Weinblättern mit Aureobasidium pullulans Extrakt mg/g Trockengewicht mg/g Trockengewicht mg/g Trockengewicht mg/g Trockengewicht mg/g Trockengewicht Regent (Blatt 5) Tatrate Kontrolle Hefe 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 einfache Phenole Stunden nach Behandlung Flavanole (Catechine) Phenylpropanoide gesamt Stunden nach Behandlung 0, Stunden nach Behandlung Flavonole Stunden nach Behandlung Stunden nach Behandlung
65 Elicitation von Weinblättern mit Aureobasidium pullulans Extrakt Durch Hefeextrakt elicitierte Stilbene konnten in Weinblättern (Blatt 5) noch nicht identifiziert werden!
66 Elicitation von Kallus, Blüten Blättern mit Aureobasidium pullulans Extrakt Vergleich: Induzierbarkeit von Polyphenolen in Vitis vinifera Kallus, Blüte und Blatt (Blatt 5) durch ein Hefeextrakt von Aureobasidium pullulans
67 Elicitation von Kallus, Blüten Blättern mit Aureobasidium pullulans Extrakt Kallus Shikimatweg Phenylalanin [Benzoesäuren] PAL p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA STS CHS [Stilben] [Chalcon] [Flavonol] [Anthocyane] [Catechine] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
68 Elicitation von Kallus, Blüten Blättern mit Aureobasidium pullulans Extrakt Kallus Blüte Shikimatweg Phenylalanin Shikimatweg Phenylalanin [Benzoesäuren] PAL [Benzoesäuren] PAL CHS p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA [Stilben] STS CHS p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA [Stilben] STS [Chalcon] [Flavonol] [Chalcon] [Flavonol] [Anthocyane] [Catechine] [Catechine] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
69 Elicitation von Kallus, Blüten Blättern mit Aureobasidium pullulans Extrakt Kallus Blüte Blatt 5 Shikimatweg Phenylalanin Shikimatweg Phenylalanin Shikimatweg Phenylalanin [Benzoesäuren] PAL [Benzoesäuren] PAL [Benzoesäuren] PAL p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA STS p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA STS p-cumaroyl-coa + 3 Malonyl-CoA Tatrate CHS [Stilben] CHS [Stilben] CHS [Chalcon] [Flavonol] [Chalcon] [Flavonol] [Chalcon] [Flavonol] [Anthocyane] [Catechine] [Catechine] [Catechine] PAL: Phenylalaninammonium-lyase CHS: Chalconsynthase STS: Stilbensynthase
70 Ausblicke Abmilderung der Variabilität innerhalb der Gescheine Probenahme von Einzelblüten sortiert nach Entwicklungsstadien
71 Ausblicke Abmilderung der Variabilität innerhalb der Gescheine Probenahme von Einzelblüten sortiert nach Entwicklungsstadien Erfassung von Stoffwechselvorgängen vor 12 Stunden nach Behandlung
72 Ausblicke Abmilderung der Variabilität innerhalb der Gescheine Probenahme von Einzelblüten sortiert nach Entwicklungsstadien Erfassung von Stoffwechselvorgängen vor 12 Stunden nach Behandlung Testen verschiedener Formulierungs-Hilfsstoffe für einen besseren Transfer des Elicitors durch die Kutikula bei Blättern
73 Ausblicke Abmilderung der Variabilität innerhalb der Gescheine Probenahme von Einzelblüten sortiert nach Entwicklungsstadien Erfassung von Stoffwechselvorgängen vor 12 Stunden nach Behandlung Testen verschiedener Formulierungs-Hilfsstoffe für einen besseren Transfer des Elicitors durch die Kutikula bei Blättern Auswirkungen der Induktion in Blüten und Blättern auf pilzliche Pathogene wie Botrytis und Mehltau
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