VetScan -Säugetierleberprofil

VetScan -Säugetierleberprofil Nur für den veterinärmedizinischen Einsatz Kundenservice und technischer Support: 1-800-822-2947 Mai 2006 Art.-Nr.: 500-7128, Rev. B 2005, Abaxis, Inc., Union City, CA 94587 USA 1. Verwendungszweck Die VetScan -Säugetierleberprofil-Reagenzdisk für das VetScan-Analysesystem verwendet Trocken- und Flüssigreagenzien für die veterinärmedizinische quantitative In-vitro-Bestimmung von Alanin-Aminotransferase (ALT), Albumin (ALB), alkalischer Phosphatase (ALP), Gallensäuren (BA), Gesamtbilirubin (TBIL), Gesamtcholesterin (CHOL) Gamma-Glutamyl-Transferase (GGT) und Harnstoffstickstoff (BUN) in heparinisiertem Vollblut, heparinisiertem Plasma oder Serum. 2. Zusammenfassung und Erläuterung der Tests Die VetScan-Säugetierleberprofil-Reagenzdisk und das VetScan-Analysesystem ergeben ein In-vitro-Diagnostiksystem, das den Veterinär bei der Diagnose der folgenden Störungen unterstützt: Alanin-Aminotransferase (ALT) Albumin (ALB) Alkalische Phosphatase (ALP) Gallensäuren (BA) Shunt. Gesamtbilirubin (TBIL) Gesamtcholesterin (CHOL) Gamma-Glutamyl-Transferase (GGT) Harnstoffstickstoff (BUN) Leberkrankungen einschließlich Virushepatitis und Zirrhose; Herzkrankheiten. Leber- und Nierenerkrankungen. Leber-, Knochen-, Nebenschilddrüsen- und Darmerkrankungen. Leber-/Gallenerkrankungen; portokavale Gefäßanomalie (PSVA); extrahepatischer Leberfunktionsstörungen. Nachweis von Hyperlipidämie; Screening-Tests auf Hypothyroidismus und Hyperkortizismus. Lebererkrankungen, primäre und sekundäre Lebertumoren Leber- und Nierenerkrankungen. Wie bei allen diagnostischen Testverfahren sind vor der abschließenden Diagnose alle anderen Testverfahren, einschließlich des klinischen Status des Patienten, in Betracht zu ziehen. 3. Verfahrensprinzip Alanin-Aminotransferase Die für das VetScan-Analysesystem entwickelte Methode ist eine Abwandlung des Verfahrens nach Wróblewski und LaDue, das von der International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) empfohlen wird. 1, 2 Bei dieser Reaktion katalysiert ALT den Transfer einer Aminogruppe von L-Alanin zu α-ketoglutarat und damit die Bildung von L-Glutamat und Pyruvat. Lactat-Dehydrogenase katalysiert die Umwandlung von Pyruvat zu Lactat. Gleichzeitig wird NADH wie im folgenden Reaktionsschema dargestellt zu NAD + oxidiert. 11 of 51

L-Alanin + α-ketoglutarat ALT L-Glutamat + Pyruvat LDH Pyruvat + NADH + H + Lactat + NAD + Die Extinktionsänderungsgeschwindigkeit zwischen 340 nm und 405 nm hängt mit der Umwandlung von NADH zu NAD + zusammen und ist direkt proportional zur Menge des in der Probe vorhandenen ALT. Albumin Farbstoffbindungstechniken sind die am häufigsten gebrauchten Methoden zur Bestimmung von Albumin. Unter den Farbstoffbindungsmethoden ist Bromkresolgrün (BCG) die am häufigsten eingesetzte. 3 BCG + Albumin Tenside Säure-pH BCG-Albumin-Komplex Gebundenes Albumin verhält sich proportional zur Albuminkonzentration in der Probe. Es handelt sich hierbei um eine Endpunktreaktion mit bichromatischer Bestimmung bei 630 nm und 405 nm. Alkalische Phosphatase Das VetScan-Verfahren ist eine Abwandlung der von der American Association for Clinical Chemistry (AACC) und der IFCC verwendeten Methoden. 4 Alkalische Phosphatase hydrolysiert p-npp in einem Metallionenpuffer und bildet p-nitrophenol und Phosphat. Die Verwendung von p-nitrophenylphosphat (p-npp) erhöht die Reaktionsgeschwindigkeit. 5,6 Die Zuverlässigkeit dieses Verfahrens verbessert sich durch die Verwendung eines Metallionenpuffers zur Aufrechterhaltung der Konzentration der Magnesium- und Zinkionen in der Reaktion erheblich. 7 Die Referenzmethode der AACC verwendet p-npp als Substrat und als Metallionenpuffer. 8 p-nitrophenylphosphat + H 2 O ALP Zn 2+, Mg 2+ p-nitrophenol + Phosphat Die Menge an ALP in der Probe verhält sich proportional zur Anstiegsgeschwindigkeit der Extinktionsdifferenz zwischen 405 nm und 500 nm. Gallensäuren Bei Vorliegen des Thio-Derivats von Nicotinamid-adenin-dinucleotid (Thio-NAD+) bewirkt das Enzym 3-α-Hydroxysteroid- Dehydrogenase (3-α-HSD) eine reversible Oxidation von Gallensäuren zu oxidierten Gallensäuren (3-α-keto-Formen), wobei gleichzeitig Thio-NAD+ in seine reduzierte Form (Thio-NADH) umgewandelt wird. Bei Vorliegen von überschüssigem NADH werden die oxidierten Gallensäuren in einem Reaktionszyklus wieder in ihre reduzierte Form umgewandelt. NADH wird in NAD+ umgewandelt. Beim Abaxis-System werden Thio-NAD+, NADH und 3-α-HSD in Form von trockenen Reagenzien-Beads bereitgestellt. Der Reaktionszyklus verstärkt die Gallensäuren-Konzentrationen der Probe. Es wird die Anstiegsgeschwindigkeit der Extinktion bei 405 nm bestimmt (Thio-NADH), die sich proportional zur Gallensäuren-Konzentration der Probe verhält. Die Geschwindigkeit wird bichromatisch bei 405 nm und 500 nm bestimmt. Thio-NAD + Thio-NADH (405 nm) Reduzierte Gallensäuren 3-α-HSD Oxidierte Gallensäuren NAD + NADH 12 of 51

Gesamtbilirubin Zur Bestimmung der Gesamtbilirubin-Spiegel wurden bisher meistens Tests eingesetzt, die diazotierte Sulfanilsäure verwendeten. 9,10 Eine neuere und spezifischere Methode verwendet das Enzym Bilirubinoxidase. 11-13 Neben dem Vorteil einer spezifischeren Gesamtbilirubin-Testmethode wird am Analysesystem auch der fotochemische Abbau des Analyten minimiert, da die Probe sofort nach der Entnahme getestet werden kann. In dem enzymbasierten Verfahren wird Bilirubin durch Bilirubinoxidase zu Biliverdin oxidiert. Bilirubin wird als Extinktionsdifferenz zwischen 467 nm und 550 nm quantitativ bestimmt. Die anfängliche Extinktion dieser Endpunktreaktion wird aus der Bilirubin-Blindprobenküvette, die endgültige Extinktion aus der Bilirubin-Testküvette ermittelt. Die Bilirubinmenge in der Probe ist proportional zur Differenz der anfängliche und endgültigen Extinktionsmesswerte. Bilirubin + O 2 Bilirubinoxidase Biliverdin + H 2 O Gesamtcholesterin Der Piccolo CHOL-Assay von Abaxis ist eine enzymatische Endpunktmethode mit Cholesterin-Esterase (CE) und Cholesterin- Dehydrogenase (CHDH). 14 Cholesterinester + H 2 O CE Cholesterin + Fettsäuren CHDH Cholesterin + NAD+ 4-Cholesten-3-on + NADH + H + CE hydrolysiert die Cholesterinester zu Cholesterin und Fettsäuren. Durch die CHDH-Reaktion wird Cholesterin in 4-Cholesten-3- on umgewandelt. Die NADH-Messgröße wird bichromatisch bei 340 nm und 405 nm bestimmt. Die NADH-Produktion ist direkt proportional zur Menge des vorhandenen Cholesterins. Außerdem wird eine testspezifische Blindprobe überwacht, um sicherzustellen, dass keine anderweitigen Reaktionen die Berechnung der CHOL-Spiegel stören. Gamma-Glutamyl-Transferase Die ersten zur Bestimmung von Gamma-Glutamyl-Transferase (GGT) entwickelten quantitativen Methoden umfassten eine zweite Reaktion zur Bildung eines mit einem Chromphor kombinierten Azofarbstoffs. 15,16 Der Wechsel zu L-γ-Glutamyl-p-nitroanilid als Substrat bei der Reaktion machte den Farbstoffbildungsschritt überflüssig. 17 Auf Grund der schlechten Löslichkeit und Stabilität von L-γ-Glutamyl-p-nitroanilid wurde dieses Verfahren abgewandelt, so dass L-γ-Glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilid als Substrat verwendet wird. 18 Die von der International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) empfohlene GGT-Methode basiert auf letzterem Substrat, wobei Glycylglycin das andere Substrat darstellt. 19 Abaxis hat die IFCC-Methode so abgewandelt, dass die Reaktion bei 37 ºC erfolgt. Die Zugabe einer Probe mit Gamma-Glutamyl- Transferase-Gehalt zu den Substraten L-γ-Glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilid und Glycylglycin (Gly-gly) führt zur Bildung von L-γ-Glutamyl-glycylglycin (Glu-gly-gly) und 3-Carboxy-4-nitroanilin. L-γ-Glutamyl-3-carboxy 4-nitroanilid + Gly-gly GGT Glu-gly-gly + 3-Carboxy-4-nitroanilin Die Extinktion dieser kinetischen Reaktion wird bei 405 nm gemessen. Die Produktion von 3-Carboxy-4-nitroanilin ist direkt proportional zur GGT-Aktivität in der Probe. Harnstoffstickstoff Das Abaxis-System verwendet eine gekoppelte Enzymreaktion. Bei dieser Reaktion wird Harnstoff durch Urease zu Ammoniak und Kohlendioxid hydrolysiert. 20 Nach der Kopplung von Ammoniak mit 2-Oxoglutarat und reduziertem Nicotinamid-adenindinucleotid (NADH) oxidiert das Enzym Glutamat-Dehydrogenase (GLDH) NADH zu NAD +. Urease Harnstoff + H 2 O NH 3 + CO 2 GLDH NH 3 + NADH + H + + 2-Oxoglutarat L-Glutamat + H 2 O + NAD + Die Änderungsgeschwindigkeit der Extinktionsdifferenz zwischen 340 nm und 405 nm hängt mit der Umwandlung von NADH zu NAD + zusammen und ist direkt proportional zur Menge des in der Probe vorhandenen Harnstoffs. 13 of 51

4. Funktionsprinzip Grundsätze und Grenzen des Verfahrens sind im Bedienungshandbuch für das VetScan-Analysesystem aufgeführt. 5. Beschreibung der Reagenzien Reagenzien Jede VetScan-Säugetierleberprofil-Reagenzdisk enthält trockene testspezifische Reagenzien-Beads. Jede Reagenzdisk enthält ein trockenes Blindprobenreagenz (bestehend aus Puffer, Tensiden, Hilfsstoffen und Konservierungsmitteln) für die Berechnung der Konzentrationen an Alanin-Aminotransferase, Albumin, alkalischer Phosphatase, Gallensäuren, Gesamtbilirubin, Gesamtcholesterin, Gamma-Glutamyl-Transferase und Harnstoffstickstoff. Die Disk enthält spezifische Blindproben für die Berechnung der Gesamtbilirubin- und Gesamtcholesterin-Spiegel. Jede Reagenzdisk enthält außerdem ein aus Tensiden und Konservierungsmitteln bestehendes Verdünnungsmittel. Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen Für die veterinärmedizinische In-vitro-Diagnostik. Der Verdünnungsmittelbehälter in der Reagenzdisk wird beim Schließen des Schubfachs des Analysesystems automatisch geöffnet. Disks mit geöffneten Verdünnungsmittelbehältern können nicht wieder verwendet werden. Vor dem Schließen des Schubfachs prüfen, ob die Probe bzw. Kontrolle in die Disk eingesetzt wurde. Reagenzien-Beads können Säuren oder Basen enthalten. Bei Einhaltung der empfohlenen Verfahrensweisen kommt der Bediener nicht mit den Reagenzien-Beads in Berührung. Beim Umgang mit Beads (z. B. bei Reinigungsmaßnahmen nach dem Fallenlassen und Zerbrechen einer Reagenzdisk) Verschlucken, Hautkontakt oder Einatmen der Reagenzien-Beads vermeiden. Manche Reagenzien-Beads enthalten Natriumazid, das mit Abflussleitungen aus Blei und Kupfer reagieren und hochexplosive Metallazide bilden kann. Bei Einhaltung der empfohlenen Verfahrensweisen kommen die Reagenzien nicht mit Abflussleitungen aus Blei und Kupfer in Kontakt. Sollten die Reagenzien jedoch mit derartigen Abflussleitungen in Kontakt kommen, mit reichlich Wasser nachspülen, um Azidansammlungen zu vermeiden. Anweisungen zum Umgang mit Reagenzien Reagenzdisks sind ohne Erwärmen sofort aus dem Kühlschrank heraus verwendbar. Den verschweißten Folienbeutel öffnen und die Disk herausnehmen. Dabei darauf achten, den Barcode-Ring auf der Oberseite der Reagenzdisk nicht zu berühren. Gemäß den Anweisungen des Bedienungshandbuchs für das VetScan-System verwenden. Nicht innerhalb von 20 Minuten nach Öffnen des Beutels verwendete Disks sind zu entsorgen. Disks in geöffneten Beuteln dürfen nicht zur späteren Verwendung wieder in den Kühlschrank gelegt werden. Lagerung Die Reagenzdisks in ihren verschlossenen Beuteln bei 2 8 C (36 46 F) lagern. Geöffnete oder ungeöffnete Disks vor direkter Sonneneinstrahlung oder Temperaturen über 32 C (90 F) schützen. Die in ihren Folienbeuteln verschlossenen Disks vor Gebrauch maximal 48 Stunden bei Raumtemperatur aufbewahren. Erst unmittelbar vor Gebrauch den Beutel öffnen und die Disk entnehmen. Anzeichen für instabile oder zerfallene Reagenzdisks Alle in der Reagenzdisk enthaltenen Reagenzien bleiben bei den oben beschriebenen Lagerbedingungen bis zu dem auf dem Diskbeutel aufgedruckten Verfallsdatum stabil. Die Disks nach dem Verfallsdatum nicht mehr verwenden. Das Verfallsdatum ist auch in dem auf dem Barcode-Ring aufgedruckten Barcode enthalten. Bei Überschreitung des Verfallsdatums der Reagenzien erscheint auf der Anzeige des VetScan-Analysesystems eine Fehlermeldung. Anzeichen für instabile oder zerfallene Reagenzdisks (Fortsetzung) Bei einem aufgerissenen oder anderweitig beschädigten Folienbeutel kann Feuchtigkeit zur unbenutzten Disk vordringen und die Leistung der Reagenzien beeinträchtigen. Niemals Disks aus beschädigten Beuteln verwenden. 6. Gerät Vollständige Angaben zum Gebrauch des Analysesystems enthält das Bedienungshandbuch für das VetScan-System. 14 of 51

7. Probennahme und -vorbereitung Das erforderliche Mindestprobenvolumen ist ~100 µl heparinisiertes Vollblut, heparinisiertes Plasma, Serum oder Kontrollmaterial. Die Probenkammer der Reagenzdisk kann eine Probenmenge von bis zu 120 µl aufnehmen. In heparinisierten Mikropipetten gesammelte Proben sind nach der Probennahme sofort in die Reagenzdisk einzubringen. Für Vollblut- oder Plasmaproben nur evakuierte Probensammelröhrchen mit Lithiumheparin (grüner Stopfen) verwenden. Für Serumproben nur evakuierte Probensammelröhrchen ohne Zusatz (roter Stopfen) oder Serumtrennröhrchen (roter oder rot/schwarzer Stopfen) verwenden. Durch Venenpunktion erhaltene Vollblutproben müssen homogen sein, bevor die Probe in die Reagenzdisk transferiert wird. Die Sammelröhrchen vor dem Probentransfer mehrmals vorsichtig überkopfdrehen. Das Sammelröhrchen nicht schütteln. Schütteln kann zu Hämolyse führen. Der Test muss innerhalb von 10 Minuten nach dem Probentransfer in die Reagenzdisk beginnen. Durch Venenpunktion erhaltene Vollblutproben sind innerhalb von 60 Minuten nach der Entnahme zu analysieren. Sollte dies nicht möglich sein, die Probe trennen und in ein sauberes Teströhrchen transferieren. 21 Die getrennte Plasma- oder Serumprobe innerhalb von 5 Stunden nach der Zentrifugation analysieren. Sollte dies nicht möglich sein, die Probe in einem verschlossenen Teströhrchen maximal 48 Stunden lang bei 2 8 C (36 46 F) im Kühlschrank lagern. In Gefrierschränken ohne Selbstabtauungsfunktion können Plasma- oder Serumproben bei -10 C (14 F) bis zu 5 Wochen lang gelagert werden. Gesamtbilirubin-Ergebnisse können durch fotochemischen Abbau negativ beeinflusst werden. 22 Nicht sofort analysierte Vollblutproben maximal 60 Minuten lang im Dunkeln lagern. Kann die Probe innerhalb dieses Zeitraums nicht analysiert werden, ist sie in Plasma oder Serum aufzutrennen und in einem verschlossenen Probenröhrchen bei niedrigen Temperaturen im Dunkeln aufzubewahren. 23 Bekannte Störsubstanzen Das einzige zur Verwendung mit dem VetScan-Vollblut-Analysesystem empfohlene Antikoagulans ist Lithium-Heparin. Bei der Entnahme von Blutproben für den Gebrauch mit diesem Profil darf kein Natriumheparin verwendet werden. Abaxis hat in Studien demonstriert, dass EDTA, Fluorid, Oxalat und Ammoniumionen enthaltende Antikoagulantien mindestens eine der Methoden der VetScan-Säugetierleberprofil-Reagenzdisk stören. Physiologische Störungen (Hämolyse, Ikterus und Lipämie) können zu Veränderungen der berichteten Konzentrationen einiger Analyten führen. Die Probenindizes werden unten auf jeder Ergebniskarte ausgedruckt, damit der Bediener weiß, welche Konzentration an Störsubstanzen in den einzelnen Proben vorliegen. Das VetScan-Analysesystem unterdrückt alle Ergebnisse, die auf Grund von Hämolyse, Lipämie oder Ikterus Störungen von mehr als 10 % aufweisen. In solchen Fällen wird auf der Ergebniskarte an Stelle des Ergebnisses HEM (Hämolyse), LIP (Lipämie) oder ICT (Ikterus) ausgedruckt. 8. Verfahren Lieferumfang Eine Säugetierleberprofil-Reagenzdisk, Art.-Nr.: 500-1040 (ein Karton mit 10 Disks, Art.-Nr.: 500-0040) Benötigte Materialien, die nicht zum Lieferumfang gehören VetScan-Analysesystem Testparameter Für den Betrieb des VetScan-Systems sind Umgebungstemperaturen zwischen 15 und 32 C (59 und 90 F) erforderlich. Die Analysedauer für jede VetScan-Säugetierleberprofil-Reagenzdisk beträgt weniger als 14 Minuten. Das Analysesystem hält die Reagenzdisk während des Messintervalls auf einer Temperatur von 37 C (98,6 F). Testverfahren Das komplette Probennahmeverfahren sowie schrittweise Bedienungsanweisungen sind im Bedienungshandbuch für das VetScan- System ausführlich beschrieben. Kalibrierung Das VetScan-Analysesystem wird vor dem Versand vom Hersteller kalibriert. Der auf dem Barcode-Ring aufgedruckte Barcode enthält die diskspezifischen Kalibrierungsdaten für das Analysesystem. Hierzu bitte das Bedienungshandbuch für das VetScan- System einsehen. 15 of 51

Qualitätskontrolle Zur Überprüfung der Genauigkeit des Analysesystems können am VetScan-Analysesystem in regelmäßigen Abständen Kontrollen analysiert werden. Abaxis empfiehlt die Analyse einer handelsüblichen Kontrolle auf Serumbasis. Die Kontrollen in der gleichen Weise auf der Reagenzdisk analysieren wie Patientenproben. Angaben zur Analyse von Kontrollen enthält das Bedienungshandbuch für das VetScan-System. 9. Ergebnisse Das VetScan-Analysesystem berechnet und druckt die Analytkonzentrationen der Probe automatisch aus. Einzelheiten zu den Endpunkt- und Reaktionsgeschwindigkeitsberechnungen sind im Bedienungshandbuch für das VetScan-Analysesystem enthalten. 10. Verfahrensgrenzen Die allgemeinen Verfahrensgrenzen werden im Bedienungshandbuch für das VetScan-System behandelt. Ein den Assaybereich überschreitendes Ergebnis für einen bestimmten Test sollte mit einem anderen zugelassenen Testverfahren analysiert oder an ein Referenzlabor geschickt werden. Proben, deren Hämatokrit ein Erythrozytenkonzentratvolumen von über 60 % umfasst, können ungenaue Ergebnisse erbringen. Solche Proben mit hohen Hämatokritwerten können als hämolysiert berichtet werden. Diese Proben können dann zum Erhalt von Plasma zentrifugiert und in einer neuen Reagenzdisk erneut getestet werden. Achtung: Umfassende Prüfungen des VetScan-Analysesystems haben ergeben, dass in sehr seltenen Fällen eine in die Reagenzdisk gegebene Probe nicht problemlos in die Probenkammer rinnt. Infolge des ungleichmäßigen Flusses kann eine unzureichende Probenmenge analysiert werden, und mehrere Ergebnisse können außerhalb des jeweils ermittelten Referenzbereichs liegen. Die Probe kann mit einer neuen Reagenzdisk erneut analysiert werden. 11. Erwartete Werte Diese Normalbereiche werden lediglich als Richtlinie bereitgestellt. Am definitivsten sind die für die jeweilige Patientenpopulation ermittelten Referenzbereiche. Die Testergebnisse sind in Verbindung mit den klinischen Anzeichen des Patienten zu interpretieren. Angaben zum Anpassen spezifischer Normalbereiche der als Other (andere) bezeichneten Methoden des VetScan-Analysegeräts enthält das Bedienungshandbuch für das VetScan-System (unter den Funktionen der Taste Menu [Menü]). 16 of 51

Tabelle 1: Referenzbereiche ALT ALB ALP 10 118 E/l 20 100 E/l 5 20 E/l (10 118 E/l) (20 100 E/l) (5 20 E/l) 2,5 4,4 g/dl 2,2 4,4 g/dl 2,2 3,7 g/dl (25 44 g/l) (22 44 g/l) (22 37 g/l) 20 150 E/l 10 90 E/l 50 170 E/l (20 150 E/l) (10 90 E/l) (SI = 50 170 E/l) Nüchtern: 1 4 µmol/l Nüchtern: 1 3 µmol/l Nüchtern: N/V (1 4 µmol/l) (1 3 µmol/l) BA 24 2 Std. postprandial: 2 15 µmol/l (2 15 µmol/l) 2 Std. postprandial: 7 9 µmol/l (7 9 µmol/l) Postprandial: N/V TBIL CHOL GGT BUN Schwellenwert: 25 µmol/l (25 µmol/l) 0,1 0,6 mg/dl (2 10 µmol/l) 125 270 mg/dl (3,2 7,0 mmol/l) 0 7 E/l (0 7 E/l) 7 25 mg/dl (2,5 8,9 mmol/l) Schwellenwert: 25 µmol/l (25 µmol/l) 0,1 0,6 mg/dl (2 10 µmol/l) 90 205 mg/dl (2,3 5,3 mmol/l) 0 2 E/l (0 2 E/l) 10 30 mg/dl (3,6 10,7 mmol/l) Schwellenwert: 25 µmol/l (25 µmol/l) 0,5 2,3 mg/dl (9 39 µmol/l) 50 140 mg/dl (1,3 3,6 mmol/l) 5 24 E/l (5 24 E/l) 7 25 mg/dl (2,5 8,9 mmol/l) (SI-Einheiten) Schwellenwerte für Gallensäuren (BA), festgelegt auf 100 % Spezifität bei einer Empfindlichkeit von 74 % für und. Siehe Ettinger u. Feldman, Literaturverzeichnis Nr. 24, Seiten 1288 1290. 12. Leistungsmerkmale Linearität Die Methodenkurve der einzelnen Analyten verläuft in dem hier präsentierten dynamischen Bereich linear, wenn das VetScan- System empfehlungsgemäß betrieben wird (siehe das Bedienungshandbuch für das VetScan-System). Die folgende Tabelle der dynamischen Bereiche repräsentiert das Nachweisspektrum des VetScan-Systems. Die im Folgenden aufgeführten Bereiche stellen keine Normalbereiche dar. Tabelle 2: Dynamische Bereiche des VetScan-Systems Analyt Dynamische Bereiche Gebräuchliche Einheiten SI-Einheiten ALT 5 2000 E/l 5 2000 E/l ALB 1 6,5 g/dl 10 65 g/l ALP 5 2400 E/l 5 2400 E/l BA 1 140 µmol/l 1 140 µmol/l TBIL 0,1 30 mg/dl 1,7 513 µmol/l CHOL 20 520 mg/dl 0,52 13,5 mmol/l GGT 5 3000 E/l 5 3000 E/l BUN 2 180 mg/dl 0,7 64,3 mmol Harnstoff/l Präzision Es wurden Präzisionsstudien durchgeführt, die den NCCLS-Richtlinien EP5-A 25 entsprachen (mit Änderungen gemäß NCCLS EP18-A 26 für am Behandlungsort eingesetzte Geräte). Die Ergebnisse für die Präzision innerhalb eines Laufs und die Gesamtpräzision wurden durch Testen von Kontrollmaterialien in 2 Konzentrationsstufen ermittelt. 17 of 51

Tabelle 3: Präzision Analyt Probenumfang Innerhalb eines Laufs Gesamt Alanin- Aminotransferase (E/l) n=80 Mittelwert 21 21 SA 2,76 2,79 % VK 13,1 13,3 Mittelwert 52 52 SA 2,70 3,25 % VK 5,2 6,3 Albumin (g/dl) n=80 Mittelwert 3,9 3,9 SA 0,13 0,14 % VK 3,3 3,6 Mittelwert 2,3 2,3 SA 0,09 0,10 % VK 3,9 4,3 Alkalische Phosphatase (E/l) n=80 Mittelwert 39 39 SA 1,81 2,29 % VK 4,6 5,9 Mittelwert 281 281 SA 4,08 8,75 % VK 1,5 3,1 Gallensäuren (µmol/l) n=40 Mittelwert 24 24 SA 0,33 0,33 % VK 1,4 1,4 Mittelwert 75 75 SA 1,03 1,33 % VK 1,4 1,8 Gesamtbilirubin (mg/dl) n=80 Mittelwert 0,8 0,8 SA 0,06 0,07 % VK 7,5 8,8 Mittelwert 5,2 5,2 SA 0,09 0,15 % VK 1,7 2,9 18 of 51

Tabelle 3: Präzision (Fortsetzung) Analyt Probenumfang Innerhalb eines Laufs Gesamt Gesamtcholesterin (mg/dl) n=80 Mittelwert 204 204 SA 6,64 6,84 % VK 3,3 3,4 Mittelwert 275 275 SA 6,46 8,00 % VK 2,3 2,9 Gamma- Glutamyl-Transferase (E/l) n=80 Mittelwert 25 25 SA 0,59 0,74 % VK 2,3 2,9 Mittelwert 106 106 SA 1,52 2,29 % VK 1,4 2,2 Harnstoffstickstoff (mg/dl) n=120 Mittelwert 19 19 SA 0,35 0,40 % VK 1,8 2,1 Mittelwert 65 65 SA 1,06 1,18 % VK 1,6 1,8 Korrelation Es wurden Vor-Ort-Studien in einem veterinärmedizinischen Ausbildungskrankenhaus durchgeführt. Dabei wurden mit dem VetScan-Analysesystem und einer Vergleichsmethode Serumproben analysiert. Eine repräsentative Korrelationsstatistik ist in Tabelle 4 aufgeführt. 19 of 51

Tabelle 4: Korrelation des VetScan-Analysesystems mit Vergleichsmethode(n) Alanin- Aminotransferase (E/l) Albumin (g/dl) Alkalische Phosphatase (E/l) Gallensäuren (µmol/l) Gesamtbilirubin (mg/dl) Gesamtcholesterin (mg/dl) Probenbereich 10 1549 27 99 11 30 1,3 4,6 2,1 4,8 1,2 3,2 15 1722 6 54 119 1476 0 125 0 137 0,1 3,2 0,4 15,0 0,6 26,1 103 450 63 257 5 65 5 317 4 117 14 165 3 64 Gamma-Glutamyl- Transferase (E/l) Harnstoffstickstoff (mg/dl) Steigung 0,95 0,92 0,94 1,02 0,89 0,81 0,90 0,96 1,09 0,84 0,92 0,90 1,06 0,96 1,11 0,98 1,07 0,95 Schnittpunkt 0 0 6 0,1 0-0,6-5 1-4 1-1 0,1-0,3 0,1 6-3 2 0-2 -5-1 Korrelationskoeffizient 0,98 0,97 0,96 0,75 0,89 0,97 0,87 Nicht verfügbar Hinweis: Korrelationsstudien für umfassten n = 22 180 Proben, Korrelationsstudien für umfassten n = 21 55 Proben und Korrelationsstudien für umfassten n = 7 101 Proben. 13. Literaturverzeichnis 1. Wróbleski F, LaDue. Serum glutamic-pyruvic transaminase in cardiac and hepatic disease. Proc Soc Exp Biol Med 1956; 91: 569-71. 2. Bergmeyer HU, Horder M. IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 3. IFCC method for alanine aminotransferase. J Clin Chem Clin Biochem 1980;18: 521-34. 3. Webster D, et al. An assessment on the suitability of bromocresol green for the determination of serum albumin. Clin Chim Acta 1974; 53: 101-8. 4. Bowers GN, et al. IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 1. General considerations concerning the determination of the catalytic concentration of an enzyme in the blood serum or plasma of man. Clin Chim Acta 1979; 98: 163F-74F. 5. Ohmori Y. Uber die Phosphomomesterase. Enzymologia 1937; 4: 217-31. 6. Fujita H. Uber die Mikrobestimmung der Blutphosphatase. J Biochem, Japan 1937; 30: 69-87. 7. Petitclerc C, et al. Mechanism of action of Mg 2+ and Zn 2+ on rat placental alkaline phosphatase. I. Studies on the soluble Zn 2+ and Mg 2+ alkaline phosphatase. Can J Biochem 1975; 53: 1089-1100. 8. Tietz NW, et al. A reference method for measurement of alkaline phosphatase activity in human serum. Clin Chem 1983; 29: 751-61. 9. Malloy HT, Evelyn KA. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter. J Biol Chem 1937; 119: 481-90. 10. Meites S. Bilirubin, directing reacting and total, modified Mally-Evelyn method. In: Selected Methods of Clinical Chemistry. Faulkner WR, Meites S, eds. Washington, DC: American Association for Clinical Chemistry. 1982: 119-24. 20 of 51

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