Screening auf bakterielle Kontaminationen in Thrombozytenkonzentraten im BSD Ergebnisse aus der Routine
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- Inken Daniela Fromm
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1 Screening auf bakterielle Kontaminationen in Thrombozytenkonzentraten im BSD Ergebnisse aus der Routine
2 Transfusion transmitted infections
3 Transfusionsbedingte bakterielle Infektionen in Abhängigkeit vom TK-Alter - Votum 38 AK Blut: Verkürzung der Laufzeit von TKs auf 4 Tage (4 x 24 Stunden, gerechnet ab Mitternacht des Entnahmetages) - seit 01/2009 A. Eder et al., Transfusion 47,2007
4 Anforderungen an ein Screeningverfahren 1. hohe diagnostische Sensitivität und Spezifität 2. Schnell und einfach durchführbar 3. Preisgünstig 4. Soll den Transport über die etablierten Transportwege bzw. -zeiten und mit den qualifizierten Transportmitteln erlauben 5. Soll die Testung möglichst aller Thrombozytenpräparate erlauben 6. Vermeidung TBBI 7. Verbesserung der Versorgung
5 Produkt positiv Einflussfaktoren-Testverfahren Probenziehfehler Produkt positiv Testvolumen ohne Bakterien Testvolumen mit Bakterien 24 h 48 h Test negativ BactAlert: Probenziehung nach 24h; Probenmenge 4 10 ml Wahrscheinlichkeit Probennahmefehler bei 1: bis 1: Test positiv Müller und Schottstedt; Hämotherapie 24/2005
6 BactiFlow - Schnelltest zum direkten Bakteriennachweis - FACS - Basiert auf Esterase-Aktivität lebender Zellen Transportvalidierung - Substrat (Fluoreszenzfarbstoff) umgewandelt - Sensitivität 500 CFU/ml - Testung ab 72h nach Entnahme J.Dreier,T.Vollmer,K.Kleesiek Am.Association for Clinical Chemistry 2009
7 Bakterien-PCR im BSD-Nord-Ost (Betriebsteil Ost) - 16s DNA NAT - Durchführung im Institut Plauen - Testung von Montag bis Samstag - Produkte der Institute Plauen, Dresden; Chemnitz; Berlin und Cottbus werden getestet Chemnitz Plauen
8 Bakterien-PCR im BSD-Nord-Ost (Betriebsteil Ost) Präanalytik: Probentransport innerhalb von 24h bei RT; danach Lagerung bei 2-8 C bis zur Testung Probenziehung: Probenziehung erfolgt IT-kontrolliert; eine Probenziehung nach frühestens 48 h ist garantiert Testdurchsatz: max. 100 TKs pro Testlauf; bis zu 60 TKs getestet Entnahme Mo Die Mi Do Frei Sa IT gestützte Probenziehung Testung/ Freigabe Laufzeitverlängerung bis Tage Restlaufzeit nach Testung Mi Do Frei Sa Mo Mo Do Frei Sa Mo Die Die Sa So Mo Die Mi Do 2,5 2,5 2,5 1,5 1,5 2,5
9 Bakterien-PCR im BSD-Nord-Ost (Betriebsteil Ost) 1. Probennahme bei Probennahme (48h alte Präparate) wird automatisch ein Präparateetikett gedruckt, welches ein um 5ml verringertes Volumen anzeigt Bestätigung der ordnungsgemäßen Herstellung nach 13 AMWHV-je Institutsstandort Registerfreigabe durch QP nach 16AMWHV-je Institutsstandort die betroffenen Präparate sind frei zum Verkauf (4 Tage Laufzeit) bis zum Eintreffen im Testlabor Plauen 2. Probeneingang und Testung die Probenröhrchen werden in der BAS400 eingescannt und damit die Befundanforderung BAK-PCR erzeugt eine Differenzliste derjenigen Präparate wird erzeugt, die zwischen Probennahme und Probeneingang im Labor verkauft wurden. Die betroffenen Proben werden nicht getestet. Die Präparate sind während der Testung gesperrt. Ein Verkauf ist nicht möglich. Die Präparate werden physisch getrennt von jenen Präparaten gelagert, die frei sind. Nur im Notfall darf ein TK ohne BAK-PCR während der Testung wieder zum Verkauf gebracht werden (dann ohne Laufzeitverlängerung!). Dies erfolgt in Abstimmung mit der Leitung QK, die die Löschung der angelegten Produktionslinie vornimmt. Tochterpräparate wie z.b. Erythrozytenkonzentrate sind während der Testung frei zum Verkauf. 3. Befunderstellung Die BAK-PCR Befunde werden im Labor Plauen elektronisch in die BAS400 überführt Bestätigung der Prüfung nach 14 AMWHV-je Institutsstandort Etikettierung Bestätigung der ordnungsgemäßen Herstellung nach 13 AMWHV-je Institutsstandort Registerfreigabe durch QP nach 16AMWHV-je Institutsstandort 4. Laufzeitverlängerung Die BAK-PCR negativ getesteten Präparate haben dann eine verlängerte Laufzeit von 5 Tagen zuzüglich Entnahmetag.
10 Testlogistik Screening Wiederholungstestung Ergebnis Status TK Ergebnis Status TK Pool negativ TKs frei - 2 X negativ TKs und verwandte Präparate frei Pool reaktiv TKs und verwandte Präparate gesperrt Mind. 1 x positiv TKs und verwandte Präparate gesperrt, Rückruf Reaktiver Pool Doppelte Wiederholung der Einzelprobe Keimdifferenzierung
11 Ablauf PCR-Testung - Pooling 5 bis 10 Proben werden in einem Pool vereinigt; Probenmenge 600µl; Poolvolumen max. 6 ml
12 Ablauf PCR-Testung -Extraktion
13 Ablauf PCR-Testung -Amplifikation DRK BAK-PCR Kit (CE)
14 Ergebnisse nach 1 Jahr Testung 2801 Bisher wurde in keinem Präparat eine bakterielle Kontamination bestätigt. Dies spricht für eine außerordentlich hohe Qualität im Bereich der Entnahme und Produktion.
15 Zusammenfassung 1. Am Tag 1 und 2 nach Herstellung werden die TKs ohne Testung abgegeben. Am Tag 3 werden die noch verfügbaren TKs einer Testung unterzogen. 2. Im Jahr 2014 wurden im Gesamten 4256 Präparate getestet. Bisher wurde in keinem Präparat eine Kontamination nachgewiesen. 3. Aufgrund der unkomplizierten Transportbedingungen können Präparate aus allen Haupt-Standorten im BSD Ost getestet werden. 4. Eine 100% Testung aller Präparate ist mit der aktuellen Logistik nicht möglich. 5. Mit Einführung der Bakterien-PCR konnte die Sicherheit der Thrombozytenpräparate verbessert werden.
16 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit!
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