HIV-1 NAT-Testversager durch Mutationen
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- Sofia Melsbach
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1 HIV-1 NAT-Testversager durch Mutationen Dr. B. Müller, NAT-Labor, Hagen
2 Aktueller Fall in Österreich vom Diagnostische Fensterspende Folie 2
3 Überblick Prävalenz bei Neuspendern Untersuchungen: 11,1 (m) bzw. 2,3 (w) Sicherheitsgewinn durch NAT: Verkleinerung der diagn. Fensterphase (ca. 10 Tage) Dokumentation von 23 HIV-1 NAT-only Fällen (NAT positiv, anti-hiv negativ) zwischen 2004 und 2010 (insges. 31 Mio. NAT-getestete Spenden) Bislang 3 HIV-1 Übertragungsfälle trotz NAT dokumentiert: a) 1998 (HIV-1 M, Subtyp A) (in-house-pcr, Primer-Mismatch) b) 2007 (Roche CAPCTM, anti-sense Primer, gag) c) 2009 (Roche CTSMPX, Primer, LTR) Geschätztes Restrisiko für transfusionsassoziierte HIV-1 Infektionen 1:4,3 Mio. Folie 3 Bundesgesundheitsbl. 2012, 55: Nübling et al., Transfusion 2009 Schmidt et al., Transfusion, 2009 Chudy et al., Transfusion, 2012
4 Falsch negative NAT-Resultate - Ursachenanalyse ~3 Mio. untersuchte Spenden zwischen Januar 2010 und Februar Spenden mit falsch-negativen NAT-Ergebnissen (Routine-NAT: GFE-Blut, Virus Screening PCR Kit, VSPK) Sequenzierung und detaillierte Untersuchung mit weiteren 11 CE-zertifizierten Testsystemen Folie 4
5 Spenderinformationen - Überblick Fall Spender Geschlecht Alter Spendezeitpunkt NAT- Assay Screening Resultate LIA HIV-1-Konz. (IUml) 1 RD F 57 Aug Juli 2004 In-House Ab pos RNA neg Ab neg RNA neg pos n.d. n.d. 2 RD M 30 Sep Mai 2011 Feb Ab pos RNA pos Ab neg RNA neg Ab neg RNA neg a <33 n.d. 3 FTD F 31 Juli 2012 Ab pos RNA neg pos b 4 FTD M 18 Okt VSPK v1.1 Ab pos RNA neg pos a RD = Mehrfachspender FTD = Erstspender n.d. = nicht detektierbar = nicht untersucht Ab = anti-hiv-12 Assay LIA = Line Immunoassay a = Roche CAPCTM v2.0 b = Abbott RT HIV Folie 5
6 Spenderinformationen (low viral load) Fall Spender Geschlecht Alter Spendezeitpunkt NAT- Assay Screening Resultate LIA HIV-1-Konz. (IUml) 1 RD F 57 Aug Juli 2004 In-House Ab pos RNA neg Ab neg RNA neg pos n.d. n.d. 2 RD M 30 Sep Mai 2011 Feb Ab pos RNA pos Ab neg RNA neg Ab neg RNA neg a <33 n.d. 3 FTD F 31 Juli 2012 Ab pos RNA neg pos b 4 FTD M 18 Okt VSPK v1.1 Ab pos RNA neg pos a RD = Mehrfachspender FTD = Erstspender n.d. = nicht detektierbar = nicht untersucht Ab = anti-hiv-12 Assay LIA = Line Immunoassay a = Roche CAPCTM v2.0 b = Abbott RT HIV Folie 6
7 Ergebnisse der Screening NAT-Teste (low viral load) Screening NAT Fall (GFE Blut) CTSMPX CAS v1.5 Ultrio (Novartis) Ultrio Plus (Novartis) Ultrio Elite (Novartis) 1 neg neg neg (s) neg +* neg 2 neg + neg + + *positiv in 2 von 6 Replikaten anti-retrovirale Therapie Diagnostische Fensterspende Folie 7
8 Ergebnisse der quantitativen NAT-Teste (low viral load) Bestätigungstestquantitative NAT Fall CAPCTM v2 HPSCTM v2 AM v1.5 CAM v1.5 RT HIV (Abbott) artus HIV (Qiagen) 1 neg neg neg (s) neg (us) neg neg 2 23 cpml <34 cpml neg (s) <400 cpml <70 IUml 240 IUml anti-retrovirale Therapie Diagnostische Fensterspende s = Standard us = Ultrasensitive neg = negativ Folie 8
9 Spenderinformationen (Mutationen) Fall Spender Geschlecht Alter Spendezeitpunkt 1 RD F 57 Aug Juli RD M 30 Sep Mai 2011 Feb NAT- Assay In-House Screening Resultate Ab pos RNA neg Ab neg RNA neg Ab pos RNA pos Ab neg RNA neg Ab neg RNA neg LIA pos HIV-1-Konz. (IUml) n.d. n.d <33 n.d. 3 FTD F 31 Juli 2012 Ab pos RNA neg pos FTD M 18 Okt VSPK v1.1 Ab pos RNA neg pos RD = Mehrfachspender Ab FTD = Erstspender LIA n.d. = nicht detektierbar = nicht untersucht Folie 9 = anti-hiv-12 Assay = Line Immunoassay
10 NAT-Assay Target-Regionen (Mono Target) (GFE Blut) CTSMPX artus HIV (Qiagen) RT HIV (Abbott) CAS v1.5 AM v1.5 CAM v1.5 Folie 10
11 NAT-Assay Target-Regionen (Dual Target) LTR LTR gag pol Ultrio (Novartis) Ultrio Plus (Novartis) Ultrio Elite (Novartis) CAPCTM v2 HPSCTM v2 Folie 11
12 Ergebnisse der Screening NAT-Teste (Mutationen) Screening NAT Fall (GFE Blut) LTR CTSMPX LTR CAS v1.5 gag Ultrio (Novartis) LTR + pol Ultrio Plus (Novartis) LTR + pol Ultrio Elite (Novartis) LTR + pol 1 neg neg neg (s) neg +* neg 2 neg + neg neg neg + (+) (+) (+) (+) (+) = Verringerte Detektion + = Konsistente Detektion neg = negativ s = Standard = nicht untersucht Vorversion VSPK v1.1 negativ Folie 12
13 Ergebnisse der quantitativen NAT-Teste (Mutationen) Bestätigungstestquantitative NAT Fall CAPCTM v2 LTR + gag HPSCTM v2 LTR + gag AM v1.5 gag CAM v1.5 gag RT HIV (Abbott) pol artus HIV (Qiagen) LTR 1 neg 1 neg (s) neg (us) neg neg 2 23 cpml <34 cpml neg (s) <400 cpml <70 IUml 240 IUml cpml cpml cpml 19,387 IUml neg cpml cpml (s) IUml 70 IUml s = Standard = nicht untersucht us = Ultrasensitive neg = negativ Folie 13
14 Sequenzanalyse LTR-Bereich (Fall Nr. 3) Primer 1 Primer 2 56 bp Deletion Folie 14 Müller et al., submitted
15 Sequenzanalyse LTR-Bereich (Fall Nr. 3) 52 bp Insertion Folie 15 Müller et al., submitted
16 Sequenzanalyse LTR-Bereich (Fall Nr. 4) Folie 16 modifiziert nach Chudy et al., Transfusion, 2012
17 Bekanntmachung über die Zulassung von Arzneimitteln - Abwehr von Arzneimittelrisiken - Vom 15. Juni 2012 Folie 17 Anordnung von Maßnahmen zur Risikominimierung beim Einsatz von HIV-1 NAT-Testsystemen Bescheid Bei der Herstellung von zellulären Blutkomponenten, therapeutischen Einzelplasmen und Stammzellzubereitungen zur hämatopoetischen Rekonstitution, die nach dem für den Verkehr freigegeben werden, müssen bei dem Spender-Screening HIV-1 NAT (Nukleinsäure-Amplifikationstechnik) Testsysteme eingesetzt werden, die geeignet sind, die mögliche Unterbestimmung bzw. die Nichterkennung einer Zielregion auszugleichen oder auszuschließen. Ein möglicher Ansatz ist die Verwendung eines sogenannten Dual-Target NAT-Tests, bei dem zwei (oder mehrere) verschiedene Abschnitte des HIV-Genoms amplifiziert und nachgewiesen werden. Die Methode muss so ausgelegt sein, dass sie die Anforderung des PEI an die Mindestsensitivität für alle amplifizierten Genregionen erfüllt. Diese ist derzeit der verlässliche Nachweis einer HIV-1-RNA-Konzentration von mindestens IUmL, bezogen auf die Einzelspende. BAnz AT B6
18 Vielen Dank! Folie 18
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