Herausforderungen in der Lipidmessung
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- Willi Hofer
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1 Herausforderungen in der Lipidmessung Hubert Scharnagl Klinisches Institut für Medizinische und Chemische Labordiagnostik Medizinische Universität Graz BRENNPUNKT LIPIDE, Salzburg, 28./29. September 2018
2 Herausforderungen in der Lipidmessung Wie bestimmen wir LDL-Cholesterin? Bestimmung von Lp(a) Hohes Lp(a) bei niedrigem LDL-Cholesterin Lipidstatus: nüchtern oder nicht-nüchtern?
3 Lipoproteine - Struktur Apolipoproteine Triacylglyceride Cholesterinester Phospholipide unverestertes Cholesterin
4 Lipoproteine - Struktur
5 0.95 Dichte (g/l) Chylomikronen VLDL IDL Chylomikronen Remnants LDL HDL 3 HDL 2 Lp(a) Durchmesser (nm)
6 Methoden zur Bestimmung des LDL-Cholesterins Friedewald-Formel Lipoproteinelektrophorese homogene LDL-Assays Nuclear Magnetic Resonance (NMR) Kombinierte Ultrazentrifugation/Präzipitation ( -Quantifizierung ) Ultrazentrifugation
7 LDL-Cholesterin nach Friedewald LDL-C [mg/dl] = Cholesterin - HDL-C - Triglyceride / 5 LDL-C [mmol/l] = Cholesterin - HDL-C - Triglyceride / 2.2
8 LDL-Cholesterin nach Friedewald Friedewald-Formel nicht anwendbar: Hypertriglyzeridämie (Tg > 400 mg/dl) Typ-III-Hypercholesterinämie post-prandial Friedewald-Formel ungenau: nephrotisches Syndrom Diabetes mellitus Lebererkrankungen niedriges LDL-C
9 Friedewald-Formel unterschätzt LDL-Cholesterin bei niedrigen Konzentrationen Vergleich Friedewald-Formel vs. beta-quantifizierung (PWS-Fällung/Ultrazentrifugation) n = 176 Scharnagl, Nauck, Wieland, März. Clin Chem Lab Med, 2001; 39(5),
10 Friedewald-Formel vs. direct LDL-C Vertical Auto Profile (VAP, Atherotech Diagnostics Lab, Birmingham, Alabama) bei LDL-C (FDW) < 70 mg/dl: Differenz (median): + 9 mg/dl S.S. Martin et al, J Am Coll Cardiol 2013, 62:732-9
11 Lipoproteinelektrophorese Quantifizierung von VLDL (prä-beta) LDL (beta) HDL (alpha) Vorteile direktes und richtiges LDL-C und VLDL-C Triglyzeride und Chylomikronen stören nicht Screening auf Typ III HLP möglich hohes Lipoprotein (a) fällt auf Nachteil höherer Aufwand, höhere Kosten (im Vergleich zu FDW)
12 Lipoprotein-Electrophorese unterschiedlich schnelle Wanderung von geladenen Teilchen in einem elektrischen Feld (Kathode Anode); abhängig von Ladung, Partikelgröße (mm )
13 Methoden zur Bestimmung des LDL-Cholesterins Methode IDL/Remnants Lp(a) Friedewald-Formel (LDL) (LDL) Lipoproteinelektrophorese VLDL / (LDL) - homogene Assays LDL? LDL? UZ/PWS LDL LDL NMR - LDL? non-hdl-c / apob + +
14 Was ist Lipoprotein (a)? LDL plus Apo (a) Apo (a) und Apo B-100 sind verknüpft durch Disulfidbindung Apo (a) ist homolog zu Plasminogen Apo (a) hat keine fibrinolytische Aktivität
15 Lipoprotein (a): Struktur Disulfidbindung zwischen Cys4326 des ApoB-100 und Cys4057 of KIV-9 nicht-kovalente Interaktion von KIV-7 und KIV8 mit apob-100 S S NH 2 HOOC LDL cluster B cluster A IV 1 IV 2 IV 2 IV 3 IV 4 IV 5 LBS IV 6 LBS IV 7 LBS IV 8 LBS IV 9 IV 10 LBS V P Bindung an Fibrin und Zellmembrane Bindung an Lysin-enthaltende Koagulationsfaktoren (z.b: TFPI) Protease-Domäne hat keine enzymatische Aktivität
16 Lipoprotein (a): Messung keine empfohlene Referenzmethode und kein allgemein konsentierter Referenzstandard molare Masse und hydratisierte Dichte variiert über einen weiten Bereich Antikörper reagieren mit einer variablen Anzahl von Epitopen, abhängig von der apo(a)-isoform Stabiler Primärstandard ist nicht verfügbar Messung der Masse oder der molaren Konzentration?
17 Lipoprotein (a): Methodenvergleich Vergleichsproben: Proben: mg/dl Einzelbestimmungen an 6 aufeinanderfolgenden Arbeitstagen - 2 eigene Kontrollseren (high, low), 6-fach Bestimmung - IFCC-Standard (48 mg/dl), Doppelbestimmung
18 Lp(a) - IFCC-Standard IFCC-Standard: 48 mg/dl x 2.4 = nmol/l ,7 Lp(a)-Assays in mg/dl 52,7 51,5 48,5 45,6 43,7 IFCC: 48 mg/dl Mittelwerte aus Doppelbestimmungen an unterschiedlichen Tagen
19 Fallbericht: Patientin JR, w, Verdacht auf Familiäre Hypercholesterinämie Komplexe pavk Stadium Iib Stentimplantation rechts 2009 und 11/2014 Atherosklerose der supraaortalen Gefäße Lipidsenkende Therapie: Simvastatin 80 mg/d und Ezetimib 10 mg/d, PCSK9-I seit 11/2016 Vor PCSK9-I Graz Vor PCSK9 Homburg Cholesterin Triglyzeride HDL-C LDL-C UZ/PWS LDL-C FDW Lp(a) mg/dl Lp(a) nmol/l 4 Wochen Graz 4 Wochen Homburg
20 Fallbericht: Patientin JR, w, Verdacht auf Familiäre Hypercholesterinämie Komplexe pavk Stadium Iib Stentimplantation rechts 2009 und 11/2014 Atherosklerose der supraaortalen Gefäße Lipidsenkende Therapie: Simvastatin 80 mg/d und Ezetimib 10 mg/d, PCSK9-I seit 11/2016 Vor PCSK9-I Graz Vor PCSK9 Homburg 4 Wochen Graz Cholesterin Triglyzeride HDL-C LDL-C UZ/PWS LDL-C FDW Lp(a) mg/dl Lp(a) nmol/l Wochen Homburg
21 Fallbericht: Patientin JR, w, vor Therapie Bande Fläche % Konz. mg/dl HDL Lp(a) VLDL LDL Gesamt Wochen Bande Fläche % Konz. mg/dl HDL Lp(a) VLDL LDL Gesamt 150.0
22
23 Postprandiale Triglyzeridkinetik cases: n = 61 severe CAD controls: n = 40 Patsch et al, Arterioscler Thromb 1992
24 Lipidkonzentrationen Canadian General Population n = Nordestgaard et al, Eur Heart J & Clin Chem, 2016
25 Lipidstatus: nüchtern oder nicht-nüchtern?
26 Danke für Ihre Aufmerksamkeit
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