Diagnosereagenz für die quantitative In-vitro-Bestimmung von Harnstoff / Blut-Harnstoff-Stickstoff in Serum, Plasma oder Urin mittels Kolorimetrie.
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- Benedikt Solberg
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1 2014/09/24 A93A00292MDE A11A ml 15 ml 400 Diagnosereagenz für die quantitative In-vitro-Bestimmung von Harnstoff / Blut-Harnstoff-Stickstoff in Serum, Plasma oder Urin mittels Kolorimetrie. Applikationsversion ab Serum, Plasma: Weltweit außer USA: Harnstoff: Urea4.xx BUN: BUN3.xx Nur für USA: Harnstoff: Urea2.xx BUN: BUN2.xx Urin: Weltweit außer USA: Harnstoff: Urea-U5.xx BUN: BUN-U2.xx Nur für USA: Harnstoff: Urea-U2.xx BUN: BUN-U2.xx Klinischer Hintergrund (1, 2) Harnstoff ist das stickstoffhaltige Endprodukt des Proteinabbaustoffwechsels. Das Auftreten erhöhter Harnstoffwerte im Blut wird daher als Hyperurämie oder Azothemie bezeichnet. Eine Parallelbestimmung von Harnstoff und Creatinin ermöglicht die Differenzierung zwischen prärenaler und postrenaler Azothemie. Prärenale Azothemie, die beispielsweise durch Dehydration, erhöhten Proteinabbaustoffwechsel, Behandlungen mit Kortisol oder eine mangelhafte Nierendurchblutung hervorgerufen wird, äußert sich in einer erhöhten Harnstoffkonzentration, während die Creatininwerte innerhalb des Referenzbereichs bleiben. Bei postrenaler Azothemie, die durch die Verstopfung der Harnwege hervorgerufen wird, steigen sowohl der Harnstoff- als auch der Creatiningehalt, letzterer jedoch in geringerem Maße. Bei Nierenerkrankungen sind die Harnstoffkonzentrationen erhöht, wenn die glomeruläre Filtrationsrate deutlich reduziert ist und wenn die Proteinzufuhr 200 g/tag übersteigt. Methode (3) QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.8 Verwendungszweck a Das Reagenz ist für die quantitative In-vitro-Bestimmung von Harnstoff/Harnstoff-Stickstoff (einem Endprodukt des Stickstoff-Stoffwechsels) in Humanserum, -plasma und -urin auf der Grundlage eines enzymatischen UV-Tests mit Urease und Glutamat- Dehydrogenase vorgesehen. Messungen mit diesem Test werden im Rahmen der Diagnose und Behandlung bestimmter Nieren- und Stoffwechselerkrankungen eingesetzt. a Änderung: Kapitel hinzugefügt. b Änderung: Änderung der Bestellnummer für Reagenzienbeilagen von A93A1216C zu A93A00292M. Urease - GLDH : enzymatischer UV-Test. Urease Harnstoff + 2H 2 O > 2NH HCO - 3 GLDH a-ketoglutarat + NH NADH > L-Glutamat + NAD + + H 2 O (GLDH = Glutamat-Dehydrogenase) 1 / 7
2 Reagenzien c ist gebrauchsfertig. Reagenz 1: TRIS ph 7,8 a-ketoglutarat ADP Urease GLDH (Glutamat-Dehydrogenase) Natriumazid Reagenz 2: NADH Natriumazid 150 mmol/l 9 mmol/l 0,75 mmol/l 7 ku/l 1 ku/l < 1 g/l 1,3 mmol/l < 1 g/l sollte gemäß diesen Anweisungen verwendet werden. Bei unsachgemäßer Verwendung kann der Hersteller eine einwandfreie Funktionsweise nicht gewährleisten. Verwendung 1. Beide Kassettenverschlüsse entfernen. 2. Evtl. vorhandenen Schaum mit einer Kunststoffpipette entfernen. 3. Kassette in den gekühlten Bereich auf dem Reagenzienteller des 400 stellen. Kalibrator Verwendung für Kalibration: Multical, Ref. A11A01652 (nicht enthalten) 10 x 3 ml (Lyophilisat) Kontrolle Verwenden Sie für die interne Qualitätskontrolle: N Control, Ref. A11A01653 (nicht enthalten) 10 x 5 ml (Lyophilisat) P Control, Ref. A11A01654 (nicht enthalten) 10 x 5 ml (Lyophilisat) Urine Control L/H, Ref. A11A01674 (nicht enthalten) 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Jede Kontrolle sollte täglich und/oder nach einer Kalibration getestet werden. Die Häufigkeit der Kontrollen und die Konfidenzintervalle müssen den Laborrichtlinien und den länderspezifischen Richtlinien entsprechen. Beim Testen von Qualitätskontrollmaterial müssen die nationalen bzw. örtlichen Richtlinien eingehalten werden. Die Ergebnisse müssen innerhalb des definierten Sollbereichs liegen. Jedes Labor muss definieren, wie bei Ergebnissen außerhalb dieses Sollbereichs vorgegangen werden soll. Zusätzlich benötigtes Material d Automatisches Analysegerät für klinische Chemie: ABX Pentra 400 Kalibrator: Multical, Ref. A11A01652 Kontrollen: N Control, Ref. A11A01653 und P Control, Ref. A11A01654 Urine Control L/H, Ref. A11A01674 Standard-Laborausrüstung. Probenmaterial e f Serum. Plasma in Lithiumheparin. Frischer Urin Andere Antikoagulantien als die aufgeführten wurden von HORIBA Medical nicht getestet und werden deshalb nicht für den Einsatz mit diesem Test empfohlen. Haltbarkeit in Serum/Plasma (1): 2 Tage bei Raumtemperatur 1 Woche bei 4-8 C Haltbarkeit in Urin (4): 4 Wochen bei - 20 C wenn ph < 7,0 4 Tage bei 4-8 C wenn ph < 7,0 2 Tage bei C wenn ph < 7,0 c Änderung: Reagenzien : Änderung. d Änderung: Änderung des benötigten Materials. e Änderung: Empfehlung hinzugefügt. f Änderung: Änderung der Probenhaltbarkeit. 2 / 7
3 Referenzbereich g Jedes Labor muss seine eigenen Referenzbereiche einrichten. Die hier angegebenen Werte sind nur Richtlinien. Serum, Plasma (1): Harnstoff BUN Erwachsene: [mg/dl] [mmol/l] [mg/dl] Allgemein ,8-7,2 7,9-20,2 Frauen < 50 Jahre ,6-6,7 7,3-18,8 Frauen > 50 Jahre ,5-7,2 9,8-20,2 Männer < 50 Jahre ,2-7,3 9,0-20,5 Männer > 50 Jahre ,0-9,2 8,4-25,8 Harnstoff BUN Kinder: [mg/dl] [mmol/l] [mg/dl] 1-3 Jahre ,8-6,0 5,1-16, Jahre ,5-6,0 7,0-16, Jahre ,9-7,5 8,1-21,1 Urin (5): Harnstoff [mmol/24h] BUN [mg/24h] Lagerung und Haltbarkeit h Reagenzien sind in ungeöffneten Kassetten bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Datum haltbar, wenn sie bei 2-8 C aufbewahrt werden. Haltbarkeit nach dem Öffnen: Informationen hierzu finden Sie im Abschnitt Leistungsmerkmale des 400. Reagenzien nicht einfrieren. Beschädigung der Verpackung i Entsorgung j Die Entsorgung muss gemäß den örtlichen Vorschriften erfolgen. Dieses Reagenz enthält weniger als 0,1% Natriumazid als Konservierungsmittel. Natriumazid kann mit Blei und Kupfer unter Bildung hochexplosiver Metallazide reagieren. Allgemeine Vorsichtsmaßnahmen Dieses Reagenz ist nur für die professionelle In-vitro- Diagnostik bestimmt. Produkt nicht einnehmen. Kontakt mit Haut und Schleimhäuten vermeiden. Es müssen die standardmäßigen Vorsichtsmaßnahmen für die Verwendung von Laborreagenzien beachtet werden. Es handelt sich um Einweg-Reagenzkassetten, deren Entsorgung gemäß den örtlichen Vorschriften erfolgen muss. Weitere Informationen enthält das Sicherheitsdatenblatt des Reagenzes. Verwenden Sie das Produkt nicht, wenn deutliche Anzeichen für biologische, chemische oder physikalische Defekte vorliegen. Leistungsmerkmale des 400 Die unten aufgeführten Leistungsmerkmale wurden auf dem 400-Analysegerät ermittelt. Serum, Plasma Anzahl von Tests: 220 Tests k Wenn die Anzahl der angeforderten Tests niedrig ist und der 400-Benutzer die Kassette im Rahmen der Haltbarkeit der geladenen Reagenzien maximal ausnutzen möchte, empfiehlt HORIBA Medical den Einsatz der Kit-Membran mit der Verbrauchsmaterial- Nummer XEC084, um die Anzahl der in diesen Anweisungen angegebenen Tests zu erzielen. Verwenden Sie das Reagenz bei defekter Schutzverpackung nicht, wenn die Zuverlässigkeit des Reagenzes durch die Beschädigung beeinträchtigt sein kann. g Änderung: Änderung des Referenzbereichs. h Änderung: Änderung der Lagerung und Haltbarkeit. i Änderung: Beschädigung der Verpackung hinzugefügt. j Änderung: Änderung der Entsorgung. k Änderung: neue Empfehlung. 3 / 7
4 Haltbarkeit der geladenen Reagenzien: Nach dem Öffnen ist die im gekühlten Bereich auf dem Reagenzienteller des 400 aufbewahrte Reagenzkassette 70 Tage haltbar. Probenvolumen: 3,0 µl/test Nachweisgrenze: Die nach dem Valtec-Protokoll (6) bestimmte Nachweisgrenze liegt bei: Harnstoff: 0,31 mmol/l (1,86 mg/dl) BUN: 0,9 mg/dl Genauigkeit und Präzision: Wiederholbarkeit (Wiederholpräzision) 3 Proben mit niedriger, mittlerer und hoher Konzentration und 2 Kontrollen werden 20 Mal entsprechend den im Valtec-Protokoll (6) genannten Empfehlungen getestet. Mittelwert Harnstoff VK % mmol/l mg/dl Kontrollprobe 1 6,68 40,1 2,27 Kontrollprobe 2 25,93 155,6 1,66 Probe 1 2,15 12,9 2,76 Probe 2 7,43 44,6 1,58 Probe 3 30,45 182,7 1,80 Mittelwert BUN (mg/dl) VK % Kontrollprobe 1 18,73 2,27 Kontrollprobe 2 72,78 1,66 Probe 1 6,02 2,76 Probe 2 20,86 1,58 Probe 3 85,46 1,80 Reproduzierbarkeit (Gesamtpräzision) 2 Proben (niedrige und hohe Konzentrationen) und 2 Kontrollen werden gemäß den Empfehlungen des Protokolls EP5-A des CLSI (NCCLS) (7) in Doppelbestimmung 20 Tage lang getestet (2 Serien pro Tag). Mittelwert Harnstoff VK % mmol/l mg/dl Kontrollprobe 1 6,57 39,4 2,14 Kontrollprobe 2 25,54 153,2 1,93 Probe 1 6,86 41,1 2,14 Probe 2 24,98 149,9 1,97 Mittelwert BUN (mg/dl) VK % Kontrollprobe 1 18,45 2,14 Kontrollprobe 2 71,69 1,93 Probe 1 19,24 2,14 Probe 2 70,12 1,97 Messbereich l : Harnstoff: Der Test hat einen Messbereich von 0,37 bis 49,49 mmol/l (2,20 bis 297,22 mg/dl) bestätigt, mit einer automatischen Nachverdünnung von bis zu 250,00 mmol/l (1500,0 mg/dl). Die Reagenz-Linearität wurde gemäß den Empfehlungen des Protokolls EP6-A des CLSI (NCCLS) bis zu 50,00 mmol/l (300,00 mg/dl) bestimmt (8). BUN: Der Test hat einen Messbereich von 1,03 bis 138,89 mg/dl bestätigt, mit einer automatischen Nachverdünnung von bis zu 701,5 mg/dl. Die Reagenz-Linearität wurde gemäß den Empfehlungen des Protokolls EP6-A des CLSI (NCCLS) bis zu 140,3 mg/dl bestimmt (8). Korrelation m : 136 Patientenproben (Serum und Plasma) wurden gemäß den Empfehlungen des CLSI (NCCLS), EP9-A2-Protokolls mit einem kommerziellen Reagenz als Referenz korreliert (9). Die Werte für Harnstoff betrugen 0,37 bis 49,49 mmol/l (2,20 bis 297,22 mg/dl). Die Werte für BUN betrugen 1,03 bis 138,89 mg/dl. Die folgende Gleichung für die allometrische Gerade wurde unter Verwendung der Passing-Bablock- Regression (10) erhalten: Harnstoff: Y = 0,99 X - 0,02 (mmol/l) l Änderung: Änderung des Messbereichs. m Änderung: Änderung der Korrelation. 4 / 7
5 Y = 0,99 X - 0,12 (mg/dl) mit einem Korrelationskoeffizienten r 2 = 0,996 BUN: Y = 0,99 X - 0,06 (mg/dl) mit einem Korrelationskoeffizienten r 2 = 0,996 Interferenzen: Hämoglobin: Kein signifikanter Einfluss feststellbar bis zu 267 µmol/l (460 mg/dl). Triglyzeride: Kein signifikanter Einfluss feststellbar bis zu einer Intralipid -Konzentration (bezeichnend für Lipämie) von 7 mmol/l (612,5 mg/dl). Gesamtbilirubin: Kein signifikanter Einfluss feststellbar bis zu 380 µmol/l (22,23 mg/dl). Direktbilirubin: Kein signifikanter Einfluss feststellbar bis zu 400 µmol/l (23,40 mg/dl). Andere Grenzen werden von Young in Form einer Liste mit Drogen und präanalytischen Variablen angegeben, die bekanntermaßen diese Methodik beeinflussen (11, 12). Haltbarkeit der Kalibration: Das Reagenz wird an Tag 0 kalibriert. Die Stabilität der Kalibration wird durch Testen von 2 Kontrollproben überprüft. Die Kalibration ist 8 Tage stabil. Hinweis: Eine Rekalibrierung wird empfohlen, wenn sich Reagenz-Chargen ändern oder die Qualitätskontrolle nicht das geforderte Ergebnis aufweist. Applikationsversion: Weltweit außer USA: Harnstoff: Urea4.xx BUN: BUN3.xx Nur für USA: Harnstoff: Urea2.xx BUN: BUN2.xx Urin Anzahl von Tests: 220 Tests k Wenn die Anzahl der angeforderten Tests niedrig ist und der 400-Benutzer die Kassette im Rahmen der Haltbarkeit der geladenen Reagenzien maximal ausnutzen möchte, empfiehlt HORIBA Medical den Einsatz der Kit-Membran mit der Verbrauchsmaterial- Nummer XEC084, um die Anzahl der in diesen Anweisungen angegebenen Tests zu erzielen. Haltbarkeit der geladenen Reagenzien: Nach dem Öffnen ist die im gekühlten Bereich auf dem Reagenzienteller des 400 aufbewahrte Reagenzkassette 70 Tage haltbar. Probenvolumen: 3,0 µl/test Nachweisgrenze n : Die nach dem Valtec-Protokoll (6) bestimmte Nachweisgrenze liegt bei: Harnstoff: 12,6 mmol/l (75,6 mg/dl) BUN: 35 mg/dl Genauigkeit und Präzision: Wiederholbarkeit (Wiederholpräzision) 3 Proben mit niedriger, mittlerer und hoher Konzentration und 2 Kontrollen werden 20 Mal entsprechend den im Valtec-Protokoll (6) genannten Empfehlungen getestet. Mittelwert Harnstoff VK % mmol/l mg/dl Kontrollprobe 1 129,13 774,8 1,24 Kontrollprobe 2 223, ,4 0,74 Probe 1 91,55 549,3 1,76 Probe 2 173, ,9 1,44 Probe 3 521, ,7 0,72 Mittelwert BUN (mg/dl) VK % Kontrollprobe ,24 Kontrollprobe ,74 Probe ,76 Probe ,44 Probe ,72 Reproduzierbarkeit (Gesamtpräzision) 2 Proben (mittlere und hohe Konzentration) und 2 Kontrollen werden gemäß den Empfehlungen des Protokolls EP5-A des CLSI (NCCLS) (7) in k Änderung: neue Empfehlung. n Änderung: Änderung der Nachweisgrenze. 5 / 7
6 Doppelbestimmung 20 Tage lang getestet (2 Serien pro Tag). Mittelwert Harnstoff VK % mmol/l mg/dl Kontrollprobe 1 128,58 771,5 3,80 Kontrollprobe 2 216, ,6 4,13 Probe 1 198, ,8 3,42 Probe 2 547, ,9 3,08 Mittelwert BUN (mg/dl) VK % Kontrollprobe ,80 Kontrollprobe ,13 Probe ,42 Probe ,08 Messbereich l : Harnstoff: Der Test hat einen Messbereich von 12,6 bis 750,0 mmol/l (75,6 bis 4500 mg/dl) bestätigt, mit einer automatischen Nachverdünnung von bis zu 3750 mmol/l (22500 mg/dl). Die Reagenz-Linearität wurde gemäß den Empfehlungen des Protokolls EP6-A des CLSI (NCCLS) bis zu 750,0 mmol/l (4500 mg/dl) bestimmt (8). BUN: Der Test hat einen Messbereich von 35 bis 2106 mg/dl bestätigt, mit einer automatischen Nachverdünnung von bis zu mg/dl. Die Reagenz-Linearität wurde gemäß den Empfehlungen des Protokolls EP6-A des CLSI (NCCLS) bis zu 2106 mg/dl bestimmt (8). Korrelation m : 108 Patientenproben (Urin) wurden gemäß den Empfehlungen des CLSI (NCCLS), EP9-A2-Protokolls (9) mit einem kommerziellen Reagenz als Referenz korreliert. Die Werte für Harnstoff betrugen 16,0 bis 722,5 mmol/l (96 bis 4340 mg/l). Die Werte für BUN betrugen 45 bis 2029 mg/dl. Die folgende Gleichung für die allometrische Gerade wurde unter Verwendung der Passing-Bablock- Regression (10) erhalten: Harnstoff: Y = 1,14 X - 1,77 (mmol/l) Y = 1,14 X - 10,63 (mg/dl) mit einem Korrelationskoeffizienten r 2 = 0,9946 BUN: Y = 1,14 X - 4,90 (mg/dl) mit einem Korrelationskoeffizienten r 2 = 0,9946 Interferenzen o : Hämoglobin: Kein signifikanter Einfluss feststellbar bis zu 290 µmol/l (500 mg/dl). Direktbilirubin: Kein signifikanter Einfluss feststellbar bis zu 650 µmol/l (38 mg/dl). Andere Grenzen werden von Young in Form einer Liste mit Drogen und präanalytischen Variablen angegeben, die bekanntermaßen diese Methodik beeinflussen (11, 12). Haltbarkeit der Kalibration: Das Reagenz wird an Tag 0 kalibriert. Die Stabilität der Kalibration wird durch Testen von 2 Kontrollproben überprüft. Die Kalibration ist 8 Tage stabil. Hinweis: Eine Rekalibrierung wird empfohlen, wenn sich Reagenz-Chargen ändern oder die Qualitätskontrolle nicht das geforderte Ergebnis aufweist. Applikationsversion: Weltweit außer USA: Harnstoff: Urea-U5.xx BUN: BUN-U2.xx Nur für USA: Harnstoff: Urea-U2.xx BUN: BUN-U2.xx Umrechnungsfaktor (1) Harnstoff (mmol/l) = Harnstoff (mg/dl) x 0,1665 BUN (mg/dl) = Harnstoff (mg/dl) / 2,14 BUN (mg/dl) = Harnstoff (mmol/l) / 0,3561 Warnung Der Benutzer hat sicherzustellen, dass dieses Dokument tatsächlich für das verwendete Reagenz gilt. l Änderung: Änderung des Messbereichs. m Änderung: Änderung der Korrelation. o Änderung: Daten hinzugefügt. 6 / 7
7 Bibliografie 1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: THBooks Verlagsgesellschaft (1998): Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3 rd ed. Philadelphia: W.B Saunders Company (1999): Talke H, Schubert GE. Enzymatische Harnstoffbestimmung in Blut und Serum im optischen Test nach Warburg (Enzymatic determination of urea in blood and serum with the optical test according to Warburg). Klin. Wochenschr (1965) 43: Guder WG, Zawta B. The Quality of Diagnostics Samples. Samples: From the Patient to the Laboratory. 1 st Ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B. (WHILEY-VCH, Darmstadt, Germany) (2001): Roberts WL, McMillin GA, Burtis CA, Bruns DE. Reference Information for the Clinical Laboratory, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 th Ed., Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, (Elsevier Saunders eds., St Louis, USA) (2006): Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 8. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 9. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 10. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: / 7
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