Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 Clone EP17/EP30. English Code M3652. Intended use
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1 Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 Clone EP17/EP30 English Code M3652 Intended use For in vitro diagnostic use. Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, is intended for use in immunohistochemistry (IHC). This antibody cocktail labels cytokeratin 8/18-expressing cells in normal and neoplastic tissue (1, 2). Differential classification of tumors is aided by the results from a panel of antibodies. The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient's clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist. This antibody is intended to be used after the primary diagnosis of tumor has been made by conventional histopathology using nonimmunologic histochemical stains. Synonyms for antigen Keratin 8/18 (K8/18) (3), CK8/18 (4). Summary and explanation Reagent provided Immunogens Specificity Cytokeratin 8/18 (CK8/18) belong to the intermediate filament family, a diverse group of heteropolymeric proteins that are comprised of 54 different genes. Cytokeratins polypeptides (CKs) are classified into acidic (type I) and neutral-basic (type II) subfamilies. Type I and II polypeptides pair and form the mature tetrameric heteropolymer. CK18 is a 45 kda CK belonging to the acidic type I CK subfamily that typically associates with the 54 kda type II cytokeratin CK8. Together, CK8/18 make up one of the low molecular weight cytokeratins (LMW-CK). CK8/18 is expressed in simple, nonstratified epithelia, basal and superficial cells of transitional epithelium, the luminal/secretory cells of complex epithelia, mesothelium, and may be present in some types of mesenchymal cells (3). Multiple cytokeratins family members may be expressed in a given cell and are characteristic of the cell type and differentiation state (1). Nearly all carcinomas of epithelial origin and mesotheliomas may express CK8/18 (4). CK8/18 antibodies exhibit a cytoplasmic and/or membranous staining pattern. Focal weak expression may also be present in mesenchymal tumors including leiomyomatous tumor, rhabdomyosarcoma, malignant melanoma, schwannoma, Ewing's sarcoma, desmoplastic small round cell tumor, squamous cell carcinoma and lymphoma (5, 6). Antibodies to cytokeratin 8/18 have been shown to aid in classification of tumors of epithelial origin (3). Refer to Dako General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for: Principle of Procedure, Materials Required, Not Supplied, Storage, Specimen Preparation, Staining Procedure, Quality Control, Troubleshooting, Interpretation of Staining, General Limitations. A mixture of two monoclonal rabbit antibodies provided in liquid form as cell culture supernatant in 0.05 mol/l Tris-HCl, mol/l sodium azide, ph 7.2. This product contains stabilizing protein. Clone: EP17 (CK8) and EP30 (CK18). Isotype: Rabbit IgG. Rabbit lgg concentration: See label on vial. The protein concentration between lots may vary without influencing the optimal dilution. The titer of each individual lot is compared and adjusted to a reference lot to ensure a consistent immunohistochemical staining performance from lot-to-lot. CK8: A synthetic peptide corresponding to residues in the C-terminal part of human cytokeratin 8 protein. CK18: Human cytokeratin 18 protein isolated from HT-29 cells. CK8/18 is a cocktail of two monoclonal antibodies. In Western blotting of A431 cell lysates, anti-ck8, clone EP17 recognizes a major band of 52 kda corresponding to the expected molecular weight of CK8; and anti-ck18, clone EP30 recognizes a major band of 45 kda corresponding to the expected molecular weight of CK18. Precautions 1. For in vitro diagnostic use. 2. For professional users. 3. This product contains sodium azide (NaN 3 ), a highly toxic chemical in pure form. At product concentrations, though not classified as hazardous, sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build-ups of metal azides. Upon disposal, flush with large volumes of water to prevent metal azide build-up in plumbing. 4. As with any product derived from biological sources, proper handling procedures should be used. 5. Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin. 6. Unused solution should be disposed of according to local, State and Federal regulations. P02831EFG_03/M3652 p. 1/8
2 Storage Specimen preparation Staining procedure Staining interpretation Performance characteristics Store at 2-8 C. Do not use after expiration date stamped on vial. If reagents are stored under any conditions other than those specified, the conditions must be verified by the user. There are no obvious signs to indicate instability of this product. Therefore, positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens. If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected, contact Dako Technical Support. Paraffin sections: The antibody can be used for labeling paraffin-embedded tissue sections fixed in formalin. Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 µm. Pre-treatment: Pre-treatment of formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections with heat-induced epitope retrieval (HIER) is required. Optimal results are obtained by pretreating tissues with HIER using diluted EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Code K8004). Deparaffinization, rehydration and epitope retrieval can be performed in Dako PT Link. For details, please refer to PT Link User Guide. The following parameters should be used for PT Link: Pre-heat temperature: 65 C; epitope retrieval temperature and time: 97 C for 20 (±1) minutes; cool down to 65 C. Remove slide rack from PT tank and immediately dip slides in jar/tank (e.g., PT Link Rinse Station (Code PT109)) containing diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (Code K8007). Leave slides in Wash Buffer for 1-5 minutes. The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure. For greater adherence of tissue sections to glass slides, the use of FLEX IHC Microscope Slides (Code K8020) is recommended. After staining, the sections must be dehydrated, cleared and mounted using a permanent mounting method. These are guidelines only. Optimal conditions may vary depending on specimen type and preparation method, and should be validated individually by each laboratory. The performance of this antibody should be established by the user when utilized with other manual staining systems or automated platforms. Dilution: The recommended dilution of Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, Code M3652, is 1:50. Dilute the antibody in Dako Antibody Diluent (Code S0809). Incubate pretreated tissue sections for 20 minutes at room temperature. Negative control: The recommended negative control reagent is Dako Negative Control, Rabbit IgG (Code X0936), diluted to the same Ig concentration as the primary antibody. Unless the stability of the diluted antibody and negative control has been established in the actual staining procedure, dilute these reagents immediately prior to use. Visualization: The recommended visualization system is EnVision FLEX, High ph (Code K8000/K8010) using a 20 minute incubation at room temperature. Follow the procedure enclosed with the selected visualization system(s). Counterstaining: The recommended counterstain is EnVision FLEX Hematoxylin (Code K8008/K8018). Quality control: Positive and negative control tissues as well as negative control reagent should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens. The positive control tissue should include normal liver and the cells/structures should display reaction patterns as described for this tissue in the Performance characteristics section. The cellular staining pattern is cytoplasmic / membranous. Normal tissues: Epithelial cells exhibit a moderate to strong cytoplasmic and/or membranous staining reaction (1). It should be noted that staining of reticular cells may be observed within lymphoid tissues. Tissue Type (# tested) Labeled Tissue Elements Tissue Type (# tested) Labeled Tissue Elements Adrenal (3) 3/3 Pancreas (3) 3/3 Bone marrow (3) 0/3 Parathyroid (3) 3/3 Breast (3) 3/3 Pituitary (3) 1/3 Cerebellum (3) 0/3 Prostate (3) 3/3 Cerebrum (3) 0/3 Salivary gland (3) 3/3 Cervix (3) 1/3 Skeletal Muscle (3) 0/3 Colon (3) 3/3 Skin (3) 3/3 Esophagus (3) 3/3 Small intestine (3) 3/3 Heart (3) 0/3 Spleen (3) 3/3 Kidney (3) 3/3 Stomach (3) 3/3 Liver (3) 3/3 Testis (3) 2/3 Lung (3) 3/3 Thymus (3) 3/3 Mesothelial cells (3) 2/3 Thyroid (3) 3/3 Nerve, peripheral (3) 0/3 Tonsil (3) 3/3 Ovary (3) 3/3 Uterus (3) 1/3 Abnormal tissues: Epithelial cells exhibit a moderate to strong cytoplasmic and/or membranous staining reaction (41/56) (2). P02831EFG_03/M3652 p. 2/8
3 Tissue Type (# tested) Labeled Tissue Elements Tissue Type (# tested) Labeled Tissue Elements Hepatocellular carcinoma (3) 3/3 Melanoma (3) 0/3 Renal clear cell carcinoma (3) 3/3 Undifferentiated carcinoma (3) 1/3 Renal papillary carcinoma (3) 3/3 Leiomyosarcoma (1) 0/1 Lung adenocarcinoma (2) 2/2 Rhabdomyosarcoma (1) 0/1 Lung squamous carcinoma (1) 1/1 Intestinal carcinoid (2) 2/2 Small cell lung carcinoma (3) 3/3 Ovarian carcinoma (2) 2/2 Gastric adenocarcinoma (3) 3/3 Fibrotic tissue (2) 0/2 Pancreatic adenocarcinoma 3/3 Teratoma - mature (1) 0/1 (3) Thyroid papillary carcinoma 3/3 Teratoma - immature (1) 0/1 (3) Breast ductal carcinoma (3) 3/3 Leiomyoma (2) 1/2 Breast lobular carcinoma (3) 3/3 Diffuse large B-cell lymphoma 0/2 (2) Prostate adenocarcinoma (3) 2/3 T-cell lymphoma (2) 0/2 Colon adenocarcinoma (3) 3/3 Follicular lymphoma (2) 0/2 Français Réf. M3652 Utilisation prévue Synonymes de l'antigène Résumé et explication Réactif fourni Pour utilisation diagnostique in vitro. L'anticorps Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, est destiné à une utilisation en immunohistochimie (IHC). Ce cocktail d'anticorps marque les cellules exprimant la cytokératine 8/18 dans les tissus sains et néoplasiques (1, 2). La classification différentielle des tumeurs est facilitée par les résultats provenant d'un panel d'anticorps. L'interprétation clinique de toute coloration ou son absence doit être complétée par des études morphologiques en utilisant des contrôles appropriés et doit être évaluée en fonction des antécédents cliniques du patient et d'autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifié. Cet anticorps est destiné à être utilisé après un diagnostic primaire de tumeur par histopathologie traditionnelle utilisant des colorations histochimiques non immunologiques. Kératine 8/18 (K8/18) (3), CK8/18 (4). La cytokératine 8/18 (CK8/18) appartient à la famille des filaments intermédiaires, un groupe hétérogène de protéines hétéropolymériques constituées de 54 gènes différents. Les polypeptides de la famille des cytokératines (CK) sont classés en deux sous-familles : acide (type I) et neutre-basique (type II). Les polypeptides de type I et II se lient pour former l'hétéropolymère tétramérique mature. La CK18 est une cytokératine de 45 kda appartenant à la sous-famille acide de type I qui se lie généralement à la cytokératine CK8 de type II de 54 kda. Ensemble, elles constituent la CK8/18, l'une des cytokératines de faible poids moléculaire (LMW-CK). La CK8/18 est exprimée dans les épithéliums simples non stratifiés, dans les cellules basales et superficielles de l'épithélium transitionnel, dans les cellules luminales/sécrétoires des épithéliums complexes, dans le mésothélium et parfois dans certains types de cellules mésenchymateuses (3). Plusieurs membres de la famille des cytokératines peuvent être exprimés dans une cellule donnée et sont caractéristiques du type cellulaire et du stade de différenciation (1). Presque tous les carcinomes d'origine épithéliale et les mésothéliomes expriment la CK8/18 (4). Les anticorps anti-ck8/18 présentent un motif de coloration cytoplasmique et/ou membranaire. Une faible expression focale peut également se produire dans les tumeurs mésenchymateuses, notamment dans le léiomyome, le rhabdomyosarcome, le mélanome malin, le schwannome, le sarcome d'ewing, la tumeur desmoplastique à petites cellules rondes, le carcinome épidermoïde et le lymphome (5, 6). Il a été démontré que les anticorps dirigés contre la cytokératine 8/18 facilitent la classification des tumeurs d'origine épithéliale (3). Consulter le document General Instructions for Immunohistochemical Staining (Instructions générales de coloration immunohistochimique) de Dako ou les instructions du système de détection pour les procédures IHC : Principe de la procédure, Matériel requis mais non fourni, Conservation, Préparation des échantillons, Procédure de coloration, Contrôle de qualité, Dépannage, Interprétation de la coloration, Limites générales. Mélange de deux anticorps monoclonaux de lapin fourni sous forme liquide comme surnageant de culture cellulaire dans un tampon Tris-HCl à 0,05 mol/l, de ph 7,2, contenant de l'azide de sodium à 0,015 mol/l. Ce produit contient une protéine stabilisante. Clone : EP17 (CK8) et EP30 (CK18). Isotype : IgG de lapin. Concentration en IgG de lapin : voir l'étiquette sur le flacon. La concentration en protéines peut varier d'un lot à l'autre sans que cela influence la dilution optimale. Le titre de chaque lot est comparé et ajusté par rapport à un lot de référence pour assurer des performances de coloration immunohistochimiques cohérentes d'un lot à l'autre. Immunogènes CK8 : Peptide synthétique correspondant à des résidus au niveau de l'extrémité C-terminale de la cytokératine 8 humaine. P02831EFG_03/M3652 p. 3/8
4 CK18 : Cytokératine 18 humaine isolée à partir des cellules HT-29. Spécificité La CK8/18 est un mélange de deux anticorps monoclonaux. Dans les analyses par Western blot de lysats de cellules A431, les anticorps anti-ck8, clone EP17, reconnaissent une bande principale de 52 kda correspondant au poids moléculaire attendu de la CK8 et les anticorps anti-ck18, clone EP30, reconnaissent une bande principale de 45 kda correspondant au poids moléculaire attendu de la CK18. Précautions d'emploi 1. Pour utilisation diagnostique in vitro. 2. Pour utilisateurs professionnels. 3. Ce produit contient de l'azide de sodium (NaN 3 ), produit chimique hautement toxique dans sa forme pure. Aux concentrations du produit, bien que non classé comme dangereux, l'azide de sodium peut réagir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d'azides métalliques hautement explosives. Lors de l'élimination, rincer abondamment à l'eau pour éviter toute accumulation d'azide métallique dans les canalisations. 4. Comme avec tout produit d'origine biologique, des procédures de manipulation appropriées doivent être respectées. 5. Porter un équipement de protection individuelle approprié pour éviter tout contact avec les yeux et la peau. 6. Les solutions non utilisées doivent être éliminées conformément aux réglementations locales, nationales et européennes. Conservation Préparation des échantillons Procédure de coloration Interprétation de la coloration Conserver entre 2 et 8 C. Ne pas utiliser après la date de péremption imprimée sur le flacon. Si les réactifs sont conservés dans des conditions autres que celles indiquées, celles-ci doivent être validées par l'utilisateur. Il n'existe pas de signe particulier pour indiquer l'instabilité de ce produit. Par conséquent, des contrôles positifs et négatifs doivent être testés en même temps que les échantillons de patient. Si une coloration inattendue est observée, qui ne peut être expliquée par des différences dans les procédures du laboratoire et qu'un problème lié à l'anticorps est suspecté, contacter l'assistance technique de Dako. Coupes en paraffine : L'anticorps peut être utilisé pour le marquage des coupes de tissus incluses en paraffine et fixées au formol. L'épaisseur des coupes d'échantillons tissulaires doit être d'environ 4 µm. Prétraitement : Le prétraitement des coupes de tissus fixées au formol et incluses en paraffine par restauration d'épitope induite par la chaleur (HIER) est nécessaire. Des résultats optimaux sont obtenus en prétraitant les tissus par la méthode HIER, à l'aide de la solution diluée EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (réf. K8004). Le déparaffinage, la réhydratation et la restauration de l'épitope peuvent être réalisés dans l'appareil PT Link de Dako. Pour plus de détails, se reporter au Guide d'utilisation du PT Link. Les paramètres suivants doivent être utilisés pour le PT Link : température de préchauffage : 65 C ; température et durée de restauration de l'épitope : 97 C pendant 20 minutes (±1 minute) ; laisser refroidir jusqu'à 65 C. Retirer le portoir à lames de la cuve du PT et plonger immédiatement les lames dans un récipient/une cuve (par ex., PT Link Rinse Station (réf. PT109)) contenant du tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (réf. K8007), dilué et à température ambiante. Laisser les lames dans le tampon de lavage pendant 1 à 5 minutes. Les coupes de tissus ne doivent pas sécher lors du traitement ni lors de la procédure de coloration immunohistochimique suivante. Pour une meilleure adhérence des coupes de tissu sur les lames de verre, il est recommandé d'utiliser les lames FLEX IHC Microscope Slides (réf. K8020). Une fois la procédure de coloration terminée, les coupes doivent être déshydratées, éclaircies et montées selon une méthode de montage permanent. Il ne s'agit là que de conseils. Les conditions optimales peuvent varier en fonction du type de prélèvement et de la méthode de préparation, et doivent être validées individuellement par chaque laboratoire. Les performances de cet anticorps doivent être établies par l'utilisateur lorsqu'il est utilisé avec d'autres systèmes de coloration manuelle ou plates-formes automatisées. Dilution : La dilution recommandée pour l'anticorps Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, réf. M3652, est de 1:50. Diluer l'anticorps dans le diluant Dako Antibody Diluent (réf. S0809). Incuber les coupes de tissu prétraitées pendant 20 minutes à température ambiante. Contrôle négatif : Le réactif de contrôle négatif recommandé est le Dako Negative Control, Rabbit IgG (réf. X0936), dilué à la même concentration en IgG que l'anticorps primaire. À moins que la stabilité de l'anticorps dilué et du contrôle négatif n'ait été établie lors de la procédure de coloration en cours, diluer ces réactifs immédiatement avant utilisation. Visualisation : Le système de visualisation recommandé est le système EnVision FLEX, High ph (réf. K8000/K8010) avec une durée d'incubation de 20 minutes à température ambiante. Suivre la procédure incluse dans le(s) système(s) de révélation sélectionné(s). Contre-coloration : Le contre-colorant recommandé est le produit EnVision FLEX Hematoxylin (réf. K8008/K8018). Contrôle de qualité : Les tissus de contrôle positifs et négatifs, ainsi que le réactif de contrôle négatif, doivent être testés en parallèle selon le même protocole que pour les échantillons de patients. Le tissu de contrôle positif doit comprendre le foie normal et les cellules/structures doivent présenter des schémas de réaction tels que ceux décrits pour ce tissu à la section "Performances". Le motif de coloration cellulaire est cytoplasmique/membranaire. Performances Tissus sains : Les cellules épithéliales présentent une coloration cytoplasmique et/ou membranaire modérée à forte (1). Il convient de noter qu'une coloration des cellules réticulaires peut être observée dans les tissus lymphoïdes. P02831EFG_03/M3652 p. 4/8
5 Type de tissu (nb. testés) Éléments tissulaires marqués Type de tissu (nb. testés) Éléments tissulaires marqués Amygdale (3) 3/3 Œsophage (3) 3/3 Cellules mésothéliales (3) 2/3 Ovaire (3) 3/3 Cerveau (3) 0/3 Pancréas (3) 3/3 Cervelet (3) 0/3 Parathyroïde (3) 3/3 Cœur (3) 0/3 Peau (3) 3/3 Col de l'utérus (3) 1/3 Poumon (3) 3/3 Côlon (3) 3/3 Prostate (3) 3/3 Estomac (3) 3/3 Rate (3) 3/3 Foie (3) 3/3 Rein (3) 3/3 Glande salivaire (3) 3/3 Sein (3) 3/3 Hypophyse (3) 1/3 Surrénale (3) 3/3 Intestin grêle (3) 3/3 Testicule (3) 2/3 Moelle osseuse (3) 0/3 Thymus (3) 3/3 Muscle squelettique (3) 0/3 Thyroïde (3) 3/3 Nerf périphérique (3) 0/3 Utérus (3) 1/3 Tissus anormaux : Les cellules épithéliales présentent une coloration cytoplasmique et/ou membranaire modérée à forte (41/56) (2). Type de tissu (nb. testés) Éléments tissulaires marqués Type de tissu (nb. testés) Carcinome hépatocellulaire (3) 3/3 Mélanome (3) 0/3 Carcinome rénal à cellules 3/3 Carcinome indifférencié (3) 1/3 claires (3) Carcinome rénal papillaire (3) 3/3 Léiomyosarcome (1) 0/1 Adénocarcinome 2/2 Rhabdomyosarcome (1) 0/1 pulmonaire (2) Carcinome pulmonaire 1/1 Carcinoïde intestinal (2) 2/2 squameux (1) Carcinome pulmonaire à 3/3 Carcinome ovarien (2) 2/2 petites cellules (3) Adénocarcinome de 3/3 Tissu fibreux (2) 0/2 l'estomac (3) Adénocarcinome 3/3 Tératome - mature (1) 0/1 pancréatique (3) Carcinome papillaire de la 3/3 Tératome - immature (1) 0/1 thyroïde (3) Carcinome canalaire du 3/3 Léiomyome (2) 1/2 sein (3) Carcinome lobulaire du 3/3 Lymphome diffus à grandes 0/2 sein (3) cellules B (2) Adénocarcinome de la 2/3 Lymphome à cellules T (2) 0/2 prostate (3) Adénocarcinome du côlon (3) 3/3 Lymphome folliculaire (2) 0/2 Éléments tissulaires marqués Deutsch Code-Nr. M3652 Verwendungszweck Zur In-vitro-Diagnostik. Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, ist für die Verwendung in der Immunhistochemie (IHC) bestimmt. Dieser Antikörper-Cocktail markiert Cytokeratin 8/18-exprimierende Zellen in normalen und neoplastischen Geweben (1, 2). Die Differenzialklassifikation von Tumoren wird durch die Ergebnisse eines Antikörper-Panels unterstützt. Die klinische Auswertung einer eintretenden oder ausbleibenden Färbung sollte durch morphologische Studien mit geeigneten Kontrollen ergänzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Berücksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten vorgenommen werden. Dieser Antikörper kommt nach der Primärdiagnose des Tumors durch konventionelle Histopathologie unter Verwendung von nicht immunologischen histochemischen Färbungen zum Einsatz. P02831EFG_03/M3652 p. 5/8
6 Synonyme Bezeichnungen des Antigens Zusammenfassung und Erklärung Geliefertes Reagenz Immunogene Spezifität Keratin 8/18 (K8/18) (3), CK8/18 (4). Cytokeratin 8/18 (CK8/18) gehört zur Familie der Intermediärfilamente, einer facettenreichen Gruppe von heteropolymeren Proteinen, die aus 54 verschiedenen Genen bestehen. Cytokeratin-Polypeptide (ZK) lassen sich in einen sauren Typ A (Klasse I) und einen neutral-basischen Typ B (Klasse II) unterteilen. Polypeptide der Klasse I und der Klasse II paaren und bilden das reife tetramerische Heteropolymer. CK18 ist ein Cytoprotein des sauren Typs (Klasse I) mit 45 kda, dass sich typischerweise mit dem Cytokeratin CK8 der Klasse II mit 54 kda verbindet. Zusammen bilden CK8/18 eines der Cytokeratine mit niedrigem Molekulargewicht (LMW-CK). CK8/18 wird in einfachen nichtgeschichteten Epithelzellen, basalen und oberflächlichen Zellen des Übergangsepithels, in den Luminal-/Sekretzellen komplexer Epithelien, im Mesothel sowie in einigen mesenchymalen Zellen (3) exprimiert. Mehrere Vertreter der Familie der Cytokeratine können in einer Zelle exprimiert werden und sind bezeichnend für den Zelltyp und den Differenzierungsstatus (1). Nahezu alle Karzinome epithelialen Ursprungs sowie Mesotheliome können CK8/18 exprimieren (4). Antikörper gegen CK8/18 weisen ein zytoplasmatisches und/oder membranöses Färbemuster auf. Eine fokale, schwache Expression kann auch bei mesenchymalen Tumoren vorhanden sein, u. a. bei leiomyomatösem Tumor, Rhabdomyosarkom, malignen Melanom, Schwannom, Ewing-Sarkom, desmoplastischem kleinrundzelligem Tumor, Plattenepithelkarzinom und Lymphom (5, 6). Antikörper gegen Cytokeratin 8/18 unterstützen nachweislich die Klassifikation von Tumoren epithelialen Ursprungs (3). Folgende Angaben bitte den General Instructions for Immunohistochemical Staining (Allgemeine Richtlinien zur immunhistochemischen Färbung) von Dako bzw. den Anweisungen des Detektionssystems für IHC-Verfahren entnehmen: Verfahrensprinzipien; Erforderliche, aber nicht mitgelieferte Materialien; Lagerung; Gewebevorbereitung; Färbeverfahren; Qualitätskontrolle; Fehlerbehandlung; Auswertung der Färbung; Allgemeine Beschränkungen. Eine Mischung aus zwei monoklonalen Kaninchen-Antikörpern in flüssiger Form als Zellkulturüberstand in 0.05 mol/l Tris-HCI-Puffer, ph 7.2 und mol/l Natriumazid. Dieses Produkt enthält stabilisierendes Protein. Klon: EP17 (CK8) und EP30 (CK18). Isotyp: Kaninchen IgG. Konzentration von Kaninchen-IgG: Siehe Behälteretikett. Die Proteinkonzentration kann zwischen Chargen abweichen, ohne die optimale Verdünnung zu beeinflussen. Der Titer jeder Charge wird mit dem einer Referenzcharge verglichen und dieser angeglichen, um konstante immunhistochemische Färbeergebnisse zwischen den Chargen zu gewährleisten. CK8: Ein synthetisches Peptid, das Rückständen im C-terminalen Abschnitt des humanen Cytokeratin 8-Proteins entspricht. CK18: Humanes Cytokeratin 18-Protein, isoliert aus HT-29-Zellen. CK8/18 ist ein Cocktail aus zwei monoklonalen Antikörpern. Beim Western-Blotting von A431-Zelllysaten erkennt Anti-CK8, Klon EP17 eine starke Bande von 52 kda, was mit dem erwarteten Molekulargewicht von CK8 übereinstimmt. Anti-CK18, Klon EP30 erkennt eine starke Bande von 45 kda, was mit dem erwarteten Molekulargewicht von CK18 übereinstimmt. Vorsichtsmaßnahmen 1. Zur In-vitro-Diagnostik. 2. Für Fachpersonal. 3. Dieses Produkt enthält Natriumazid (NaN 3 ), eine in reiner Form äußerst giftige Chemikalie. Bei den in diesem Produkt verwendeten Konzentrationen kann Natriumazid, obwohl nicht als gefährlich klassifiziert, mit in Wasserleitungen vorhandenem Blei oder Kupfer reagieren und zur Bildung von hochexplosiven Metallazid- Anreicherungen führen. Nach der Entsorgung muss mit reichlich Wasser nachgespült werden, um Metallazid- Anreicherung zu vermeiden. 4. Wie alle Produkte biologischen Ursprungs müssen auch diese entsprechend gehandhabt werden. 5. Geeignete persönliche Schutzausrüstung (PSA) tragen, um Augen- und Hautkontakt zu vermeiden. 6. Nicht verwendete Lösung ist entsprechend örtlichen, staatlichen und EU-rechtlichen Richtlinien zu entsorgen. Lagerung Bei 2-8 C aufbewahren. Nach Ablauf des auf dem Behälter aufgedruckten Verfallsdatums nicht mehr verwenden. Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt, müssen diese Bedingungen vom Benutzer überprüft werden. Es gibt keine offensichtlichen Anhaltspunkte für die mögliche Instabilität dieses Produkts. Es sollten daher die Positiv- und Negativkontrollen gleichzeitig mit den Patientengewebeproben mitgeführt werden. Wenn eine unerwartete Anfärbung beobachtet wird, welche durch Änderungen in den Labormethoden nicht erklärt werden kann, und falls Verdacht auf ein Problem mit dem Antikörper besteht, ist Kontakt mit dem technischen Kundendienst von Dako aufzunehmen. Gewebevorbereitung Paraffinschnitte: Der Antikörper kann für die Markierung von formalinfixierten, paraffineingebetteten Gewebeschnitten verwendet werden. Gewebeproben sollten in Schnitte von ca. 4 µm Stärke geschnitten werden. Vorbehandlung: Es ist eine Vorbehandlung der formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitte durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung (HIER) erforderlich. Optimale Ergebnisse können durch HIER-Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Code-Nr. K8004) erzielt werden. Entparaffinierung, Rehydrierung und Epitopdemaskierung können im Dako PT Link durchgeführt werden. Weitere Informationen hierzu siehe PT Link-Benutzerhandbuch. Für PT Link sind die folgenden Parameter zu verwenden: Temperatur auf 65 C vorwärmen; Epitopdemaskierungstemperatur und -zeit: 97 C für 20 (±1) Minuten; auf 65 C abkühlen. Den Objektträgerhalter aus dem PT Link-Tank nehmen und die Objektträger sofort in einen P02831EFG_03/M3652 p. 6/8
7 Behälter/Tank (z. B. PT Link Rinse Station (Code-Nr. PT109)) mit verdünntem, auf Raumtemperatur gebrachtem EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (Code-Nr. K8007) tauchen. Die Objektträger 1-5 Minuten im Waschpuffer belassen. Während der Gewebevorbehandlung oder während des anschließenden immunhistochemischen Färbeverfahrens dürfen die Gewebeschnitte nicht austrocknen. Für eine bessere Haftung der Gewebeschnitte an den Glas- Objektträgern werden FLEX IHC Microscope Slides (Code-Nr. K8020) empfohlen. Nach dem Färben müssen die Schnitte dehydriert, geklärt und unter Verwendung eines permanenten Eindeckmediums auf Objektträger eingedeckt werden. Färbeverfahren Diese Angaben sind nur Richtlinien. Optimale Bedingungen können je nach Gewebetyp und Vorbereitungsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden. Die Leistung dieses Antikörpers sollte vom Benutzer bei einem Einsatz mit anderen manuellen Färbesystemen oder automatisierten Systemen ermittelt werden. Verdünnung: Die empfohlene Verdünnung für Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, Code-Nr. M3652, ist 1:50. Den Antikörper in Dako Antibody Diluent (Code-Nr. S0809) verdünnen. Die vorbehandelten Gewebeschnitte 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Negativkontrolle: Als Negativkontrollreagenz wird Dako Negative Control, Rabbit IgG1 (Code-Nr. X0936) empfohlen, das auf dieselbe Ig-Konzentration wie der primäre Antikörper verdünnt wurde. Es wird empfohlen, Antikörper und Negativkontrolle unmittelbar vor deren Verwendung zu verdünnen, außer wenn deren Stabilität im aktuellen Färbeverfahren festgelegt ist. Detektionssystem: Beim empfohlenen Detektionssystem handelt es sich um EnVision FLEX, High ph (Code-Nr. K8000/K8010), das bei einer Inkubation von 20 Minuten bei Raumtemperatur eingesetzt wird. Das dem gewählten Detektionssystem beiliegende Verfahren befolgen. Gegenfärbung: Die empfohlene Gegenfärbung ist EnVision FLEX Hematoxylin (Code-Nr. K8008/K8018). Qualitätskontrolle: Positiv- und Negativkontrollgewebe sowie Negativkontrollreagenz sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientengewebe getestet werden. Das Positivkontrollgewebe sollte normales Lebergewebe enthalten, und die Zellen/Strukturen sollten die für dieses Gewebe im Abschnitt Leistungseigenschaften beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen. Auswertung der Färbung Leistungseigenschaften Das zelluläre Färbemuster ist zytoplasmatisch/membranös. Normalgewebe: Epithelzellen weisen eine mäßige bis starke zytoplasmatische und/oder membranöse Färbereaktion auf (1). Es sollte angemerkt werden, dass in Lymphgeweben eine Einfärbung von Retikulumzellen beobachtet werden kann. Gewebetyp (Anz. getestet) Markierte Gewebe- Elemente Gewebetyp (Anz. getestet) Markierte Gewebe- Elemente Brust (3) 3/3 Nebenniere (3) 3/3 Dickdarm (3) 3/3 Nerv, peripher (3) 0/3 Dünndarm (3) 3/3 Niere (3) 3/3 Großhirn (3) 0/3 Ösophagus (3) 3/3 Haut (3) 3/3 Ovar (3) 3/3 Herz (3) 0/3 Pankreas (3) 3/3 Hypophyse (3) 1/3 Parathyreoidea (3) 3/3 Kleinhirn (3) 0/3 Prostata (3) 3/3 Knochenmark (3) 0/3 Skelettmuskulatur (3) 0/3 Leber (3) 3/3 Speicheldrüse (3) 3/3 Lunge (3) 3/3 Testis (3) 2/3 Magen (3) 3/3 Thymus (3) 3/3 Mandeln (3) 3/3 Thyreoidea (3) 3/3 Mesothelzellen (3) 2/3 Uterus (3) 1/3 Milz (3) 3/3 Zervix (3) 1/3 Anormales Gewebe: Epithelzellen weisen eine mäßige bis starke zytoplasmatische und/oder membranöse Färbereaktion auf (41/56) (2). Gewebetyp (Anz. getestet) Markierte Gewebe- Elemente Gewebetyp (Anz. getestet) Hepatozelluläres Karzinom (3) 3/3 Melanom (3) 0/3 Klarzelliges 3/3 Undifferenziertes Karzinom (3) 1/3 Nierenkarzinom (3) Papilläres 3/3 Leiomyosarkom (1) 0/1 Nierenzellkarzinom (3) Lungen-Adenokarzinom (2) 2/2 Rhabdomyosarkom (1) 0/1 Markierte Gewebe- Elemente P02831EFG_03/M3652 p. 7/8
8 Lungen- 1/1 Intestinales Karzinoid (2) 2/2 Plattenepithelkarzinom (1) Kleinzelliges 3/3 Ovarialkarzinom (2) 2/2 Lungenkarzinom (3) Magen-Adenokarzinom (3) 3/3 Fibrotisches Gewebe (2) 0/2 Pankreas-Adenokarzinom (3) 3/3 Teratom - reif (1) 0/1 Papilläres 3/3 Teratom - unreif (1) 0/1 Schilddrüsenkarzinom (3) Duktales Brustkarzinom (3) 3/3 Leiomyom (2) 1/2 Lobuläres Brustkarzinom (3) 3/3 Diffus-großzelliges 0/2 B-Zelllymphom (2) Prostata-Adenokarzinom (3) 2/3 T-Zelllymphom (2) 0/2 Dickdarm-Adenokarzinom (3) 3/3 Follikuläres Lymphom (2) 0/2 References/ Bibliographie/ Literaturnachweise 1. Yu J. Report of Normal Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP Report on file, D Yu J. Report of Cancer Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP Report on file, D Dabbs DJ. Diagnostic Immunohistochemistry. Philadelphia,PA: Churchill Livingstone, Adams H, Schmid P, Dirnhofer S, Tzankov A.Cytokeratin expression in hematological neoplasms: A tissue microarray study on 866 lymphoma and leukemia cases. Pathol Res Pract 2008;204: Lane EB, Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol 2008;129: Alexander CM. Use of keratin antibodies in tumor diagnosis (review). Semin Cancer Biol 1990; 1: Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 (CK8/18), Clone EP17/EP30 has been created by Epitomics Inc., using Epitomics proprietary rabbit monoclonal antibody technology covered under Patent Nos 5,675,063 and 7,402,409. L'anticorps Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 (CK8/18), Clone EP17/EP30 a été créé par Epitomics Inc., en utilisant la technologie exclusive d'anticorps monoclonal de lapin d'epitomics couverte par les numéros de brevet suivants : 5,675,063 et 7,402,409. Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 (CK8/18), Clone EP17/EP30 wurde von Epitomics Inc. unter Verwendung proprietärer Technologie mit monoklonalen Kaninchen-Antikörpern entwickelt und ist durch die Patente Nr und geschützt. Explanation of symbols/ Explication des symbols/ Erläuterung der Symbole Catalogue number Référence catalogue Katalognummer Temperature limitation Limites de température Zulässiger Temperaturbereich In vitro diagnostic medical device Dispositif médical de diagnostic in vitro In-vitro-Diagnostikum Manufacturer Fabricant Hersteller Batch code Réf. du lot Chargenbezeichnung Consult instructions for use Consulter les instructions d'utilisation Gebrauchsanweisung beachten Use by Utiliser avant Verwendbar bis Authorized representative in the European Community Représentant agréé dans la Communauté européenne Autorisierte Vertretung in der Europäischen Gemeinschaft PT0039/Rev D Dako North America, Inc Via Real Carpinteria, California USA Tel Fax Technical Support Customer Service Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark Tel Fax Revision/ Révision/ Revision P02831EFG_03/M3652 p. 8/8
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