10 Anhang Geräteliste
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- Gabriel Mathias Schmid
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1 Anhang 11 1 Anhang 1.1 Geräteliste CE/ICP-MS Interface CEI 1 CETAC Omaha, USA CE-Vials 1-1µL Agilent Waldbronn, Deutschland Cryoröhrchen 1-2 ml Roth Karlsruhe, Deutschland Dampfreinigung für PFA Gefäße Trabold Bern, Schweiz Diverse PFA Gefäße VitLab, Seeheim-Jugenheim, Deutschland Diverse Pipetten Eppendorf Hamburg, Deutschland Potter-Eveljhem-Homogenisator Fa. B. Braun Biotech. International Melsungen, Deutschland Fraktionssammler Foxy jr. ISCO Lincoln, USA Glove Beutel Roth Karlsruhe, Deutschland HPLC Anlage 626/66 S Waters Eschborn, Deutschland Induktiv gekoppeltes Plasma Sektorfeld Thermo-Finnigan Bremen Massenspektrometer Element 1 Deutschland KPG-Rührer Fa. IKA Labortechnik Staufen, Deutschland Kapillarelektrophoerese 3 D CE Agilent Waldbronn, Deutschland Konzentrator Vivaspin 2 PES Satorius Göttingen, Deutschland Konzentrator Vivaspin 6 PES Satorius Göttingen, Deutschland Kühler CETAC Omaha, USA Küvette, 1cm Schichtdicke mit Deckel Fa. Hellma Jena, Deutschland Meinhard Zerstäuber (2,7ml/min) Spetec Erdingen, Deutschland ph Meter inolab level 2 WTW Weilheim, Deutschland Pumpe Perimax 12 Spetec Erdingen, Deutschland Quarzskalpelle Kürner Rosenheim, Deutschland Reinstwasseranlage Milli-Q-Element Millpore Eschborn, Deutschland SEC Säule Hi Load 16/6 Superdex 75 Pharmacia Biotech, Uppsala, prep grade Schweden Spektralphotometer CADAS 1 Dr. Lange Düsseldorf, Deutschland
2 Anhang 12 Titrator TitroLine 96 Schott Mainz, Deutschland TXRF 83 C Atomika Waldbronn, Deutschland Ultraschallbad Sonorex RK 12 H Bandelin Berlin, Deutschand Ultraschalldesintegrator Sonfier 45 Branson Carouge/Geneva, Schweiz Ultra Turax T 8 IKA Staufen, Deutschland UV Detektor 11 Serie Agilent Waldbronn, Deutschland Vorreinigung zur Q-Element Elix 3 Millipore Eschborn, Deutschland Zentrifuge 5417 R Eppendorf Hamburg, Deutschland Zentrifuge 584 R Eppendorf Hamburg, Deutschland 1.2 Verwendete Chemikalien α-chymotrypsinogen A Sigma, Steinheim, Deutschland Acetonitril Uvasol Merck, Darmstadt, Deutschland Albumin Rinderserum Acros Organica, Geel, Belgien Albumin vom Ei Acros Organica, Geel, Belgien Ammoniaklösung 25% suprapur Merck, Darmstadt, Deutschland Aprotinin Sigma, Steinheim, Deutschland Arsenobetain Standard 1g/L Sigma, Steinheim, Deutschland Blue Dextran Sigma, Steinheim, Deutschland Chelex 1 Na + -Form Fluka, Buchs, Schweiz Cyanocobalamin 96% Acros Organica, Geel, Belgien DL-Dithiotreitol sigmaultra Sigma, Steinheim, Deutschland Ethanol absolut p.a. Merck, Darmstadt, Deutschland Ethylendiamintetraacetic Acid Trispotassium Salt Dihydrat Sigma, Steinheim, Deutschland Germanium Standard 1g/L Merck, Darmstadt, Deutschland Kaliumhydoxid-Monohydrat suprapur Merck, Darmstadt, Deutschland Kupfer 1g/L Standardlösung Merck, Darmstadt, Deutschland MT-Mix Standard Cd Form Sigma, Steinheim, Deutschland Myoglobin 9% Sigma, Steinheim, Deutschland Natriumchlorid, p.a. Merck, Darmstadt, Deutschland Natriumdibenzyldithiocarbamat Fluka, Buchs, Schweiz
3 Anhang 13 Nickel Standard 1g/L Merck, Darmstadt, Deutschland Nickel Chlorid Hexahydrat Merck, Darmstadt, Deutschland Protein-Bestimmungs-Kit Sigma, Steinheim, Deutschland Salpetersäure konz. suprapur Merck, Darmstadt, Deutschland Transferrin 98 % Sigma, Steinheim, Deutschland Tris(hydroxymethyl)-aminomethan p.a. Merck, Darmstadt, Deutschland Tune-up Lösung für die ICP-MS Merck, Darmstadt, Deutschland Zink 1g/L Standardlösung Merck, Darmstadt, Deutschland 1.3 Verwendete Abkürzungen ICP Induktiv gekoppeltes Plasma ICP-MS Kopplung induktiv gekoppeltes Plasma / Massenspektrometer CE Kapillarelektrophorese CE / ICP-MS online-kopplung von CE u. ICP-MS EOF Elektroosmotischer Fluss HPLC Hochdruckflüssigkeitschromatographie SEC Größenausschlusschromatographie SEC / ICP-MS online-kopplung von SEC und ICP- MS RPLC Reversed-Phase Liquid Chromatographie IPC Ionenpaarchromatographie IEC Ionenaustauschchromatographie TXRF Total-Refections X-Ray Fluorescence Tris HNO 3 Puffer eine Lösung aus Tris(hydroxymethyl) Aminomethan und Salpetersäure DMA Dimethylarsensäure NWG Nachweisgrenze NG normales Gewebe
4 Anhang 14 Entz.G entzündetes Gewebe TG malignes Gewebe (Tumorgewebe) L Liter mmol Milli-Mol nl Nano-Liter ml Milli-Liter µl Mikro-Liter nm Nano-Meter ma Milli-Ampere kv Kilo-Volt mbar Milli-Bar min Minute s Sekunde W Watt UV Detektion Detektion mit ultraviolettem Licht Da Dalton kda Kilo Dalton PFA Perfluor-alkoxy MT-MIX Gemisch aus Metallothionein I und II MM Molmasse
5 Anhang Experimetelles Das Vorfiltersystem für die SEC-Chromatographie Vorfilter an SEC-Säule Filtersystem auseinandergeschraubt Das Spiltsystem Der Splitter für die SEC / ICP-MS Kopplung Aufbau der Pufferreinigung Reinigungssäulen für den Tis-HNO 3 -Puffer
6 Anhang Optimierung Cytosolherstellung mit dem Potter Eveljhem Homogenisator Ultra Turrax Probe Probe geschnitten Probe im Homogenisator Probe + Puffer Ultra Turrax Probe nach Zentrifuge Cytosolherstellung mit dem Ultraschalldesintegrator Probe zerkleinern Probe + Puffer unter Argon Proben vor Ultraschalldes.
7 Anhang 17 Probe über dem Ultraschalldes. im Ultraschalldes. Proben in der Zentrifuge Umfüllen des Cytosols unter Argon
8 Anhang Optimierung der Cytosolherstellung,7,6 mech. Zellaufschluss Zellaufschluss mit Ultraschall,5,4,3,2, Abbildung 1.6-1: Elektropherogramme von Kupferspezies in Abhängigkeit von der Cytosolherstellung 1,9,8 meach. Zellaufschluss Zellaufschluss mit Ultraschall cps Zn 64 / cps Ge 74,7,6,5,4,3,2, Abbildung 1.6-2: Elektropherogramme von Zinkspezies in Abhängigkeit von der Cytosolherstellung,7,6 mech. Zellaufschluss Zellaufschluß mit Ultraschall cps Pb 28 / cps Ge 74,5,4,3,2, Abbildung 1.6-3: Elektropherogramme von Bleispezies in Abhängigkeit von der Cytosolherstellung
9 Anhang TXRF Messungen Tabelle 1.7-1: Ergebisse der TXRF-Messung für die Cytosolproben vor der Acetonitrilfällung Probe a Nickelkonzentration / [µg/l] Varianz /± [µg/l] Kupferkonzentration / [µg/l] Varianz /± [µg/l] Zink konzentration / [µg/l] Varianz /± [µg/l] NG 1 12,7 6,9 12,2 6,9 15,2 2,3 TG 1 24,7 4,4 34,7 3,3 433,2 1,8 NG 2 35,9 6,7 334,2 3,5 2146,6 3,3 TG 2 14,3 3,2 271,2 2,7 2195,9 2,5 NG 3 42,8 6,6 333,5 3,6 3963,1 3,5 TG 3 18,6 4,38 428,1 3,6 3449,8 3,5 NG 4 43,2 6,6 284,7 4,2 2884,7 4 entz.g 4 b 92,4 5, 273,7 4,2 367,8 4 NG 5 186,4 3,1 268,8 2,9 2561,2 2,8 TG 5 146,7 6,5 678,3 5,9 3426,9 5,8 NG 1 17,6 1,1 877, 37,34 521,7 25 TG 1 117,4 5,9 261,6 8,4 2227,2 5,1 TG 1 Ultra c 25,1 3,8 282,2 8,9 1957, 45,4 NG 11 72,9 5,9 199,2 8,8 3837,8 11,6 TG ,8 8,6 173,7 6,4 2115,3 46,7 NG 12 94, 4,1 132,3 4,4 127,9 22,81 TG ,2 9,3 136,6 4,6 377,9 59,9 NG 13 92, 2,9 48,2 2,1 474,9 6,9 TG ,6 9 29,6 11,3 3357,9 121,76 NG 14 44, ,7 12,8 3176,8 96,4 TG 14 54,7 6,1 511,9 18,5 472,1 145,63 NG 15 33,1 4,4 29,2 7,7 286,2 51,9 TG 15 31,9 6,2 28,9 12,7 316,2 16,7 a TG= Tumorgewebe; a NG= Normalgewebe; b entz.g.= entzündetes Gewebe; c Ultra= Cytosolherstellung mit dem Ultraschalldesintegrator;
10 Anhang 11 Tabelle 1.7-2: Ergebisse der TXRF-Messung für die Cytosolproben nach der Acetonitrilfällung Probe a Nickelkonzentration / [µg/l] Varianz /± [µg/l] Kupferkonzentration / [µg/l] Varianz /± [µg/l] Zink konzentration / [µg/l] Varianz /± [µg/l] NG 1 12,4 7,4 13,5 7,4 12,8 2,4 TG 1 17,4 4,3 18,6 3,6 17,5 7,84 NG 2 11,7 7,1 46,6 3,4 62,1 2,9 TG 2 46,9 2,6 96,6 1,9 318,5 1,6 NG 3 19,3 4,2 18,2 1,9 368,6 1,6 TG 3 24,1 3,4 62,3 2,1 38,7 1,5 NG 4 19,6 5,2 55,6 2,9 11,5 2,4 entz.g 4 b 35, 3,3 81,8 2,3 47,1 1,85 NG 5 9,7 2,1 55,8 2,4 197,8 1,7 TG 5 54,5 3,3 145,3 2,5 164,6 2,4 NG 1 29, 1,9 29, 1,8 217,6 3,8 TG 1 36,4 1,2 49,9 1,3 325,9 3,4 TG 1 Ultra c 6,4 1,3 55,4 1,8 152,9 2,8 NG 11 17,4 1 25,4 1,4 172,2 2,3 TG 11 94,1 2,9 27,6 1,8 141, 3,9 NG 12 36,3 1,1 28, 1 122, 1,7 TG ,1 4,3 77,8 2,3 1776,7 19,3 NG 13 41,6 1,1 9,8,7 16,9 1,8 TG 13 34,9 2,1 52,3 2,3 836,5 11,79 NG 14 15,5 1,5 227,6 3,9 1178,5 13,5 TG 14 17,4 1,5 271, 4,3 1425,7 15,6 NG 15 13,7 1,3 11,8 2,2 677,5 7,3 TG 15 9,6 1,8 63,3 2,5 23,8 4,5 a TG= Tumorgewebe; a NG= Normalgewebe; b entz.g.= entzündetes Gewebe; c Ultra= Cytosolherstellung mit dem Ultraschalldesintegrator;
11 Anhang Gesamtproteinbestimmung Tabelle 1.8-1: Ergebnisse der Kalibrierung für die Gesamtproteinbestimmung (n=3) Protein-Standard- Konz. / [µg/ ml] mittlere Extinktion Varianz Variationskoeffizient / [%] 125,155 ±,31 9, ,78 25,277 ±,35 1, ,27 375,413 ±,31 9,61 1-6,74 5,585 ±,61 3, ,5,6,5 y =,11x +,4 R 2 =,9968 Extinktion,4,3,2, Proteinkonz./[µg/mL] Abbildung 1.8-1: Kalibriergerade zur Bestimmung des Gesamtproteingehaltes der Cytosolproben
12 Anhang 112 Tabelle 1.8-2: Ermittelte Extinktionen und die berechneten Gesamtproteingehalte (n=3) Probe mittlere Extinktion Proteinkonz. / [mg/ ml] Varianz / [mg 2 / ml 2 ] V / [%] TG1,141 2,55 ±,8 6, ,19 NG1,165 1,49 ±,4 1, ,48 TG2,168 3,5 ±,2 3, ,46 NG2,81,29 ±,2 4, ,21 TG3,14 2,54 ±,6 3, ,32 NG3,353 6,41 ±,22 4, ,42 entz.g4,312 5,67 ±,64,41 11,25 NG4,361 6,55 ±,24,6 3,69 TG5,272 4,94 ±,27,7 5,38 NG5,149 1,35 ±,9 7, ,62 V = Variationskoeffizient 1.9 Berechnung statistischer Größen für die CE / ICP-MS Kopplung Tabelle 1.9-1: Wiederholpräzision eines Cytosols für die CE / ICP-MS Kopplung (n=1) Messungen Zeit Peak 1/ [s] Zeit Peak 2 / [s] Fläche Peak 1 Fläche Peak 2 Verhältnis Peakfläche 1 zu Peakfläche ,26786, , ,27492, , ,1977, , ,2433,2166 1, ,2285, , ,2177,1777 1, ,2389,1933 1, ,2543,299 1, ,2789,2235 1, ,2346,1899 1,24 arith. Mittel 421,7 439,4,24367, ,22 Varianz 5,1 2,95,259,213,16 Varianz (%) 1,21,67 1,63 1,12 1,35
13 Anhang 113 Tabelle 1.9-2: Abschätzung der Nachweisgrenze und Bestimmungsgrenze der CE / ICP-MS Kopplung Gehaltsgröße Meßwert Produkt Quadrat Abw-Quadrate xi/ µg/l yi xi*yi x1^2 (xi-xm)^2 y^i (y^i-yi)^2 yi-ym (Fläche) , ,2 2128, , , , , , , ,56 Steigung y- Achsena bsch Arithm. Mittel Arithm. Mittel Sum Abw- Qu 4393, , , ,75 1 Rest Stab Verf- Meß Stabw b a xm ym Qx S y,x S xo 292, ,877 21, , ,75 292,75,9996 NWG* BG* µg/l µg/l 3,7 14,8 * NWG = Nachweisgrenze; BG = Bestimmungsgrenze (NWG 4 = BG) -667, , Nickelspeziesanalyse mithilfe der CE / ICP-MS (Probe 1-2 und 1-15),5,45,4 cps Ni 6 / cps Ge 74,35,3,25,2,15 Ni 2+ NG TG,1, Abbildung 1.1-1: Elektropherogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe 1
14 Anhang 114,14,12 NG TG cps Ni 6 / cps Ge 74,1,8,6,4 Ni 2+ Peak 1 Peak 2, Abbildung 1.1-2: Elektropherogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe 2,12,1 cps Ni 6 / cps Ge 74,8,6,4 TG NG, Abbildung 1.1-3: Elektropherogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe 1,3,25 cps Ni 6 / cps Ge 74,2,15,1 Ni 2+ TG NG, Abbildung 1.1-4: Elektropherogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe 11
15 Anhang 115,8,7 TG NG,6 cps Ni 6 / cps Ge 74,5,4,3 Ni 2+ NI-Spezies II,2, Abbildung 1.1-5: Elektropherogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe 12,7,6 NG TG cps Ni 6 / cps Ge 74,5,4,3,2 Ni 2+, Abbildung 1.1-6: Elektropherogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe 13,35,3 TG NG cps Ni 6 / cps Ge 74,25,2,15,1 Ni 2+, Abbildung 1.1-7: Elektropherogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe 14
16 Anhang 116,4 cps Ni 6 / cps Ge 74,35,3,25,2,15 Ni 2+ TG NG,1, Abbildung 1.1-8: Elektropherogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe 15 Tabelle 1.1-1: berechnete Flächen der Nickelspezies I und II für die CE / ICP-MS und Flächenverhältnisse für die Proben 1-5 und 1-15 Probe Fläche Spezies I Fläche Spezies II Flächenverhältnis Spezies I zu II NG 1,1371,1386 1, TG 1 nv,8637 NG 2,15149,48,38 TG 2,3616,37785,1 NG 3,7169,1559,46 TG3,4542,5149,9 NG 4,4448,11868,37 entz.g 4,4273,1172,37 NG 5,54261, ,14 TG 5,16283,87444,19 NG 1,47941,48335,99 TG 1, ,9351,1 NG 11,18375,1771 1,4 TG 11,12444,3753,4 NG 12,26737,4381,61 TG 12 1, ,8857,48 NG 13 keine klare Auftrennung nv TG 13,9875,34881,28
17 Anhang 117 NG 14,256,1961,23 TG 14,3368,13954,24 NG 15,856,13677,62 TG 15,6763,24257,28 Tabelle 1.1-2: Wertetabelle zur Durchführung des t-test (auf der Ebene von,1) für die Peakflächenverhältnisse (CE / ICP-MS) Probe NG TG signifikant ,1 1,,99 1,3,98,38,37,41,36,4,46,42,48,45,49,37,38,39,36,38 1,15 1,14 1,16 1,14 1,13,99 1,,99,97,98 1,3 1,5 1,4 1,6 1,4,6,61,63,59,64,3,29,27,28,27,1,9,11,8,11,9,8,1,7,11,38,39,36,35,37,18,17,2,21,19,9,1,11,11,9,39,42,4,41,39,52,48,46,47,48 unterschiedlich ja ja ja nein ja ja ja ja ja
18 Anhang ,22,23,24,26,22,6,64,63,62,61,23,25,26,24,24,27,28,29,3,26 nein ja Tabelle 1.1-3: Ergbenisse des t-test der Peakflächen Probe 1 A 1,2 3,7E-4 5 B 5 t = -116,4813 p = 3,29823E-14 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 2 A,384 4,3E-4 5 B,98 1,7E-4 5 t = -26,1811 p = 4,97474E-9 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 3 A,46 7,5E-4 5 B,9 2,5E-4 5 t = -26,16295 p = 4,89278E-9 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 4 A,376 1,3E-4 5 B,37 2,5E-4 5 t = -,68825 p =,5176 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte NICHT signifikant unterschiedlich.
19 Anhang 119 Probe 5 A 1,144 1,3E-4 5 B,19 2,5E-4 5 t = -19,43131 p = 5,4332E-14 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 1 A,986 1,3E-4 5 B,1 1E-4 5 t = -13,63357 p = 1,3184E-14 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 11 A 1,44 1,3E-4 5 B,42 1,7E-4 5 t = -82,88184 p = 5,868E-13 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 12 A,614 4,3E-4 5 B,482 5,2E-4 5 t = -9,57629 p = 1,17161E-5 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 13 A,282 1,7E-4 5 B 5 t = -48,3626 p = 3,6966E-11 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich.
20 Anhang 12 Probe 14 A,234 2,8E-4 5 B,244 1,3E-4 5 t = 1,1432 p =,3156 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte NICHT signifikant unterschiedlich. Probe 15 A,62 2,5E-4 5 B,28 2,5E-4 5 t = -34 p = 6,11792E-1 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich Nickel/Kupfer Korrelation bei der CE / ICP-MS,5,4 cps Ni 6 / cps Ge 74,45,4,35,3,25,2,15,1 Ni- Spezies II Nickel 6,35,3,25,2,15,1,5, Abbildung 1.1-9: Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von NG 1
21 Anhang 121,5,45,4 Nickel 6,3,25 cps Ni 6 / cps Ge 74,35,3,25,2,15,2,15,1,1,5, Abbildung 1.1-1: Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von TG 1,16,14 Nickel 6,8,7,12,6 cps Ni 6 / cps Ge 74,1,8,6,5,4,3,4,2,2, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von NG2,2 1,18,16 Nickel 6,9,8 cps Ni 6 / cps Ge 74,14,12,1,8,6,7,6,5,4,3,4,2,2, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von TG2
22 Anhang 122,1,9 Nickel 6,2,18,8,16 cps Ni 6 / cps Ge 74,7,6,5,4,3,14,12,1,8,6,2,4,1, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von TG3,5,7 cps Ni 6 / cps Ge 74,45,4,35,3,25,2,15 Nickel 6,6,5,4,3,2,1,5, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von NG4,6,5 Nickel 6,5,45,4 cps Ni 6 / cps Ge 74,4,3,2,35,3,25,2,15,1,1, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von entz.g4
23 Anhang 123,8,7 Nickel 6,6,5 cps Ni 6 / cps Ge 74,6,5,4,3,2,1 I,4,3,2, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von NG 5,2 1,18 Nickel 6,9,16,8 cps Ni 6 / cps Ge 74,14,12,1,8,6 I,7,6,5,4,3,4,2,2, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von TG5,12,1 Nickel 6,7,6 cps Ni 6 / cps Ge 74,8,6,4,5,4,3,2,2, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von NG 1
24 Anhang 124,12,1 Nickel 6,6,5 cps Ni 6 / cps Ge 74,8,6,4,4,3,2,2, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von TG 1,3,45,25 Nickel 6,4,35 cps Ni 6 / cps Ge 74,2,15,1,5,3,25,2,15,1, Abbildung 1.1-2: Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von NG 11,25,2 Nickel 6,35,3 cps Ni 6 / cps Ge 74,15,1,25,2,15,1,5, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von TG11
25 Anhang 125,4,35,5,45 cps Ni 6 / cps Ge 74,3,25,2,15,1 Nickel 6,4,35,3,25,2,15,1,5, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von NG 12,8,7 Nickel 6,5,45 cps Ni 6 / cps Ge 74,6,5,4,3,2,4,35,3,25,2,15,1,1, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von TG 12,7,12,6 Nickel 6,1 cps Ni 6 / cps Ge 74,5,4,3,2,8,6,4 cps Cu 64 / Ge 74,1, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von NG 13
26 Anhang 126,4,35 Nickel 6,6,5,3 cps Ni 6 / cps Ge 74,25,2,15,1,4,3,2,5, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von TG 13,35,3 Nickel 6,25,2 cps Ni 6 / cps Ge 74,25,2,15,1,15,1,5, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von NG 14,35,3 Nickel 6,7,6 cps Ni 6 / cps Ge 74,25,2,15,1,5,4,3,2,5, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von TG 14
27 Anhang 127,25,25,2 Nickel 6,2 cps Ni 6 / cps Ge 74,15,1,15,1,5, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von NG 15,4,35 Nickel 6,45,4,3,35 cps Ni 6 / cps Ge 74,25,2,15,1,3,25,2,15,1,5, Abbildung : Übereinstimmung der Migrationszeiten der Nickelspezies I und der Kupferspezies im Cytosol von TG 15
28 Anhang Berechnung statistischer Größen für die SEC / ICP-MS Kopplung Tabelle : Wiederholpräzision (Rententionszeit) eines Cytosols für die SEC / ICP-MS Kopplung (n=5) Peak arith. Mittel der Zeit / [s] Varianz Variationskoeffizient / [%] 1 148,71 18,51 1, ,57 6,8, ,5 13,28, ,29 1,4, ,29 13,2,38 Tabelle : Wiederholpräzision (Peakflächen) eines Cytosols für die SEC / ICP-MS Kopplung (n=5) Messung Fläche Peak 1 Fläche Peak 2 Fläche Peak 3 Fläche Peak 4 Fläche Peak 5 Flächenverhältnisse 1 3,7E+7 1,22E+7 1,48E+7 1,34E+7 1,17E+8 1,1 2 4,72E+7 2,63E+7 2,11E+7 4,77E+7 1,36E+8 1,25 3 5,33E+7 2,9E+7 4,35E+7 2,28E+7 1,75E+8,92 4 3,E+7 1,23E+7 1,76E+7 1,44E+7 1,37E+8 1,22 5 3,55E+7 1,57E+7 1,63E+7 1,85E+7 1,33E+8,96 Summe 2,3E+8 8,74E+7 1,13E+8 1,17E+8 6,98E+8 5,45 arith. Mittel 4,6E+7 1,75E+7 2,27E+7 2,34E+7 1,4E+8 1,9 Varianz 9,44E+6 6,7E+6 1,19E+7 1,41E+7 2,14E+7,14866 Variationskoeffizient / [%] 23,25 34,68 52,42 6,25 15,5 13,64
29 Anhang Nickelspeziesanalyse mit Hilfe der SEC / ICP-MS Kopplung 16 Intensität (Ni 6) / cps kda 9 kda 6 kda 4 kda NG TG Abbildung : SE-Chromatogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe kda 6 kda 12 Intensität (Ni 6) / cps kda 3 kda 4 kda NG TG Abbildung : SE-Chromatogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe kda 9 kda 6 kda NG TG Intensität (Ni 6) / cps kda 28 kda 4 kda Abbildung : SE-Chromatogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe 11
30 Anhang Intensität (Ni 6) / cps kda 33 kda 9 kda 6 kda 4 kda NG TG 4 28 kda Abbildung : SE-Chromatogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe kda 4 kda Intensität (Ni 6) / cps kda 9 kda 3 kda 28 kda NG TG Abbildung : SE-Chromatogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe kda 6 kda Intensität (Ni 6) / cps kda 3 kda 28 kda 4 kda NG TG Abbildung : SE-Chromatogramme der Cytosole (NG/TG) der Probe 15
31 Anhang Nickel/Kupfer Korrelation bei der SEC / ICP-MS kda 6 kda Nickel Intensität (Ni 6) / cps kda Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe NG kda 6 kda 4 kda Nickel Intensität (Ni 6) / cps Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe TG kda Nickel Intensität (Ni 6) / cps kda Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe NG 4
32 Anhang kda Nickel Intensität (Ni 6) / cps kda Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe entzündetes G kda 6 kda Nickel Intensität (Ni 6) / cps Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe NG kda 6 kda Nickel Intensität (Ni 6) / cps kda Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe TG 5
33 Anhang Intensität (Ni 6) / cps kda 6 kda 4 kda Nickel Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe NG kda 6 kda 4 1 Nickel Intensität (Ni 6) / cps kda Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe TG kda 6 kda Nickel Intensität (Ni 6) / cps Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe NG 11
34 Anhang kda Nickel Intensität (Ni 6) / cps kda 4 kda Intensität (cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe TG kda 6 kda 8 Intensität (Ni 6) / cps kda Nickel Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe NG Nickel 6 25 Intensität (Ni 6) / cps Intensität (Zn 64) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe TG 13
35 Anhang 135 Intensität (Ni 6) / cps kda 6 kda 4 kda Nickel Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe NG kda 6 kda Nickel Intensität (Ni 6) / cps kda Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe TG kda 6 kda Nickel Intensität (Ni 6) / cps kda Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe NG 15
36 Anhang 136 Intensität (Ni 6) / cps kda 6 kda Nickel Intensität (Cu 63) / cps Abbildung : Zuordnung der Ni-Spezies über eine Cu-Spezies (6 kda) der Probe TG 15 Tabelle : berechnete Flächen der Nickelspezies I und II für die SEC / ICP-MS und Flächenverhältnisse für die Proben 1-5 und 1-15 Probe Fläche Peak I Fläche Peak II Flächenverhältnis Spezies I zu II NG 1 1,63E+6 1,2E+6,63 TG 1 1,1E+6 nv NG 3 4,62E+6 9,61E+6 2,8 TG 3 5,52E+7 5,11E+6,9 NG 4 8,15E+6 2,63E+6,32 entz.g 4 4,59E+7 1,32E+7,29 NG 5 5,89E+7 5,3E+7,9 TG 5 6,69E+7 3,24E+7,49 NG 1 3,12E+7 1,83E+7,59 TG 1 3,23E+7 1,59E+7,47 NG 11 1,56E+7 1,39E+7,89 TG 11 1,43E+7 8,63E+6,6 NG 13 1,24E+7 1,49E+7 1,2 TG 13 keine Auftrennung Nv NG 14 6,43E+6 2,96E+6,46 TG 14 6,2E+6 3,E+6,48 NG , ,57,86 TG , ,3,33
37 Anhang 137 Tabelle : Wertetabelle zur Durchführung des t-test (Ebene,1) Peakflächenverhältnisse (SEC / ICP-MS) für die Probe NG TG signifikant ,58,72,59 2,27 2,9 1,88,28,36,32 1,1,85,84,65,55,57,99,89,79 1,32 1,8 1,2,55,4,49,95,75,88 1 nur auf einer Ebene von,5 nicht auf,1,8,9,1,29,33,25,57,43,47,42,51,48,68,55,57,5,42,44,38,28,33 unterschiedlich? ja ja nein ja ja 1 ja 1 ja nein ja Tabelle : Ergebnisse des t-test der Peakflächen Probe 1 A,63,61 3 B 3 t = -13,97128 p = 1,52236E-4 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 3 A 2,8,381 3 B,9 1E-4 3 t = -17,63527 p = 6,7254E-5 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich.
38 Anhang 138 Probe 4 A,32,16 3 B,29,16 3 t = -,91856 p =,413 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte NICHT signifikant unterschiedlich. Probe 5 A,9,91 3 B,49,52 3 t = -5,9385 p =,43 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 1 A,59,28 3 B,47,21 3 t = -2,96923 p =,4118 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte NICHT signifikant unterschiedlich. A,59,28 3 B,47,21 3 t = -2,96923 p =,4118 Auf der,5 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 11 A,89,1 3 B,6,49 3 t = -4,11496 p =,1467 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte NICHT signifikant unterschiedlich.
39 Anhang 139 A,89,1 3 B,6,49 3 t = -4,11496 p =,1467 Auf der,5 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 13 A 1,2,139 3 B 3 t = -17,62928 p = 6,871E-5 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich. Probe 14 A,48,57 3 B,47,49 3 t = -,16823 p =,87456 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte NICHT signifikant unterschiedlich. Probe 15 A,86,13 3 B,33,25 3 t = -8,11393 p =,125 Auf der,1 Ebene sind beide Mittelwerte signifikant unterschiedlich.
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