Auswertungs-Bericht Laborvergleichsuntersuchung. DLA 33/ Freie-Aminosäuren. Waldemar Bonsels Weg Ahrensburg Deutschland

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1 DLA Dienstleistung Lebensmittel Analytik GbR Auswertungs-Bericht Laborvergleichsuntersuchung DLA 33/214 Freie-Aminosäuren Dienstleistung Lebensmittel Analytik GbR Waldemar Bonsels Weg Ahrensburg Deutschland Koordinator der LVU: Dipl.Chem. Udo Kasel Seite 1 von 55

2 Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung Auswertung Bezugswert (zugewiesener Wert) Standardabweichung Ausreißer Zielstandardabweichung (für die Eignungsbeurteilung) Allgemeines Modell nach Horwitz Auswertung eines Versuchs zur Präzision z'-score Quotient Sx/σ Standardunsicherheit Durchführung Untersuchungsmaterial Homogenität Untersuchung Ergebnisübermittlung und statistische Auswertung Ergebnisse Alanin(e) in mg/kg Arginin(e) in mg/kg Asparaginsäure (Aspartic acid) in mg/kg Glutaminsäure (Glutamic acid) in mg/kg Glycin(e) in mg/kg Histidin(e) in mg/kg Isoleucin(e) in mg/kg Leucin(e) in mg/kg Lysin(e) in mg/kg Methionin(e) in mg/kg Phenylalanin(e) in mg/kg Prolin(e) in mg/kg Serin in mg/kg Threonin(e) in mg/kg Tryptophan in mg/kg Tyrosin in mg/kg Valin(e) in mg/kg Dokumentation Primärdaten Freie Aminosäuren in mg/kg Homogenität Wiederholstandardabweichungen Gegenüberstellung der Probennummern und Einzelmeßwerte Analytische Methoden Verzeichnis der Teilnehmer in alphabetischer Reihenfolge Verzeichnis relevanter Literatur...54 Seite 2 von 55

3 1 Einleitung Die Teilnahme an Laborvergleichsuntersuchungen (LVU) ist ein unverzichtbarer Baustein für das Qualitäts-Management-System eines jeden, mit der Untersuchung von Lebensmitteln, Futtermitteln, Kosmetik und Bedarfsgegenständen befassten Labors. Die Durchführung von Laborvergleichsuntersuchungen ermöglicht den teilnehmenden Instituten die eigene analytische Kompetenz unter realen Bedingungen nachzuweisen. Gleichzeitig erhalten sie wertvolle Daten zur Validität der durchgeführten Untersuchungsmethode. Das Ziel von DLA ist es, LVU für ausgesuchte Parameter in praxisrelevanten Konzentrationen anzubieten. Durchführung und Auswertung der vorliegenden Laborvergleichsuntersuchung erfolgten nach den technischen Anforderungen der DIN EN ISO/IEC und DIN ISO Auswertung 2.1 Bezugswert (zugewiesener Wert) Da es sich bei dem untersuchten Material nicht um zertifiziertes Referenzmaterial handelt wird als Bezugswert (X) für die Auswertung der robuste Mittelwert der eingesandten Ergebnisse verwendet. Eine Prüfung der Verteilung der eingesandten Ergebnisse gab keine Hinweise für unvorhergesehene Quellen von Variabilität, wie z.b. eine bimodale Verteilung der Ergebnisse. 2.2 Standardabweichung Zum Vergleich mit der Zielstandardabweichung wird ebenfalls die robuste Standardabweichung (S x ) berechnet. 2.3 Ausreißer Auf Ausreißer wird mittels Mandel s-h-statistik, Signifikanzniveau 95%, geprüft. Ermittelte Ausreißer werden informativ genannt sofern gleichzeitig der des Instituts < -2 oder > 2 ist. Seite 3 von 55

4 2.4 Zielstandardabweichung (für die Eignungsbeurteilung) Die Zielstandardabweichung des Bezugswertes wird nach unten dargestellten, unterschiedlichen Verfahren bestimmt Allgemeines Modell nach Horwitz Die relative Zielstandardabweichung in % des Bezugswertes wird i.d.r. nach folgender Gleichung (Horwitz) berechnet σ (%) = 2 (1-,5logX) hieraus wird die Zielstandardabweichung berechnet σ = X *σ (%) / 1. Für Analyten mit einem Gehalt unter 12 µg/kg wurde nach Auswertung diverser Mycotoxin-LVU nach 1997 für die relative Zielstandardabweichung von Thompson ein konstanter Wert von 22 % vorgeschlagen, entsprechend σ =,22 C / mr; mit σ = Zielstandardabweichung für Messwerte < 12 ppb C = Meßwert, ausgedrückt als dimensionslose, relative Größe (1µg/kg = 1ppb = 1-9 kg/kg) mr = dimensionslose, relative Größe entsprechend der Einheit des Meßwertes Auswertung eines Versuchs zur Präzision Aus der Vergleichstandardabweichung σ R und der Wiederholstandardabweichung σ r eines Versuchs zur Präzision einer Methode (Ringversuch oder LVU) wird die Standardabweichung zwischen Laboratorien σ L berechnet: L = R 2 r 2. Aus den obigen Größen und der Anzahl der Wiederholmessungen n der laufenden Vergleichsuntersuchung wird nun die Zielstandardabweichung berechnet: σ= (σ L 2 +(σ r 2 /n)). Aus den Präzisionsdaten des jeweils relevanten Amtlichen Untersuchungsverfahrens wird die Zielstandardabweichung für den betreffenden Parameter berechnet und zur Beurteilung herangezogen. Seite 4 von 55

5 2.5 Der wird herangezogen zur Beurteilung der Ergebnisse der teilnehmenden Institute. Er besagt um welches Vielfache der Zielstandardabweichung (σ) das Ergebnis (x) des betreffenden teilnehmenden Instituts vom Bezugswert (X) abweicht. Die Berechnung erfolgt nach z = (x X) /σ ; die Anforderungen an die Analytik gelten im Allgemeinen als erfüllt, wenn 2 z z'-score Der z'-score kann zur Beurteilung der Ergebnisse der teilnehmenden Institute herangezogen werden, wenn die Standardunsicherheit berücksichtigt werden muss (s. 2.8). Der z'-score drückt das Verhältnis der Abweichung des Ergebnisses (x) des betreffenden teilnehmenden Instituts vom Bezugswert (X) zur Wurzel aus der Quadratsumme von Zielstandardabweichung ( σ ) und Standardunsicherheit (Ux) aus. Die Berechnung erfolgt nach als Zielstandardab- Im Folgenden haben wir den Ausdruck im Nenner weichung σ ' definiert. Die Anforderungen an die Analytik gelten dann als erfüllt, wenn -2 z' Quotient S x /σ In Anlehnung an den Horrat-Wert kann die Bewertung einer Laborvergleichsuntersuchung als aussagekräftig gelten, wenn der Quotient von robuster Standardabweichung und Zielstandardabweichung nicht über 2 liegt. Ein über 2 liegender Wert bedeutet, dass die Präzision nicht zufriedenstellend ist, d.h., dass die Präzision aus analytischen Gründen zu variabel ist oder die festgestellte Variation höher ist als für die angewandte Methode geschätzt wurde. Somit ist eine Vergleichbarkeit der Messergebnisse nicht gewährleistet. Seite 5 von 55

6 2.8 Standardunsicherheit Jeder Bezugswert ist mit einer Standardunsicherheit behaftet, die von der Analysenmethode, Unterschieden der eingesetzten Analysenmethoden, dem Probenmaterial und der Anzahl der Teilnehmer (P) einer LVU beeinflußt wird. Die Standardunsicherheit (U x ) wird für die vorliegende LVU wie folgt berechnet. u X =1,25 S x / p Ist U x,3*σ muß die Standardunsicherheit des Bezugswertes nicht bei der Bewertung der Ergebnisse berücksichtigt werden. Der Quotient U x /σ ist in den Kenndaten angegeben. Seite 6 von 55

7 3 Durchführung 3.1 Untersuchungsmaterial Bei dem Untersuchungsmaterial handelt es sich um einen italienischen Hartkäse, laut Kennzeichnung mindestens 18 Monate gereift. Ca. 5g Käse wurden gerieben, mit ca.,5% Sorbinsäure versetzt gemischt und in Portionen zu ca. 1 Gramm abgepackt. Die Portionen wurden chronologisch nummeriert Homogenität Zur Überprüfung der Homogenität der Proben wurde die Wiederholstandardabweichung der übermittelten Ergebnisse für Alanin und Histidin berechnet. Sie liegt bei 4,3 % bzw. 3,5 % und entspricht damit der erzielbaren Präzision gemäß den Angaben der Amtlichen Untersuchungsverfahren. Die Wiederholstandardabweichungen sind in der Dokumentation angegeben. In der Dokumentation sind außerdem die Portionsnummern graphisch den Meßwerten für Alanin und für Histidin gegenübergestellt. Es ist keinerlei Instituts unabhängige Tendenz in den Meßergebnissen erkennbar, die Inhomogenitäten nahelegen könnte. 3.2 Untersuchung An jedes teilnehmende Institut wurden in der 4. Woche 214 zwei Portionen Untersuchungsmaterial verschickt. Das Untersuchungsverfahren wurde freigestellt. Die Untersuchungen waren durchzuführen bis spätestens Ergebnisübermittlung und statistische Auswertung Die Ergebnisabgabe erfolgte einheitlich auf, an die teilnehmenden Institute übergebenen, Übermittlungsbögen, bzw. mittels vorgegebener Tabellendatei per mail. Zur statistischen Auswertung kamen die Ergebnisse, wenn mindestens 7 Werte übermittelt wurden. Die Zielstandardabweichungen,σ, für die einzelnen Aminosäuren wurden grundsätzlich gemäß berechnet aus ASU L Zur Information ist die Zielstandardabweichung nach 2.4.1, Horwitz, ebenfalls angegeben. Für Tyrosin wurden die statistischen Daten der ASU L herangezogen, der Zielbereich wurde entsprechend 2.6 erweitert. Zwei Teilnehmer haben Ergebnisse um ca. den Faktor 1 abweichend eingereicht. Eine Prüfung ergab z.t. starke Verfälschung der Kenndaten, deshalb wurden die betreffenden Ergebnisse als Ausreisser eliminiert. Einzelergebnisse für Asparagin, Citrullin und Glutamin sind der Dokumentation zu entnehmen. Abgefragt und dokumentiert wurden Einzelergebnisse, und Primärdaten zu den Bestimmungen. Von 12 Teilnehmern haben 12 mindestens ein Ergebnis eingereicht. Seite 7 von 55

8 4 Ergebnisse Alle folgenden Tabellen sind anonymisiert. Den teilnehmenden Instituten wird mit dem Versand dieser Auswertung ihre individuelle Auswertenummer mitgeteilt. In der oberen Tabelle sind die Kenndaten ohne die Teilnehmer 1 und 4 aufgeführt (vergleiche 3.3): Anzahl der Meßergebnisse Anzahl Ausreißer Mittelwert Median robuster Mittelwert (X) robuste Standardabweichung(S x ) Zielstandardabweichung (σ) Zielstandardabweichung (Horwitz) zur Information untere Grenze des Zielbereichs (X - 2σ) obere Grenze des Zielbereichs (X + 2σ) Quotient S x /σ Standardunsicherheit U x Quotient U x /σ Ergebnisse im Zielbereich. In der unteren Tabelle sind die Einzelergebnisse der teilnehmenden Institute aufgeführt : Auswerte nummer Meßwert Abweichung vom Bezugswert Z-Score (σ) Z-Score (Horwitz) zur Information Hinweis Seite 8 von 55

9 Seite 9 von 55

10 4.1 Alanin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 1435 Median 1533 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 135 Obere Grenze des Zielbereichs 1889 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x 1, 81,4 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 9 Prozent im Zielbereich 9 Meßwerte / Results L-Alanin(e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 1 von 55

11 2 1,5 1,5 -,5-1 -1,5-2 -2, Auswerte nummer / Evaluation number Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info L-Alanin(e) 1, ,69,3, ,69,6 1,8 4, ,25-18,6 -,1 -, ,5 115,19,5 1, ,31 -,4-1, ,31-2, -5, ,69,8 2, ,69,7 2, ,69,4 1, ,31-2,1-5,9 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 11 von 55

12 4.2 Arginin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 5 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert nicht ausgewertet / not evaluated Median nicht ausgewertet / not evaluated Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Zielstandardabweichung zur Information Untere Grenze des Zielbereichs Obere Grenze des Zielbereichs Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich Prozent im Zielbereich nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated Meßwerte / Results L-Arginin(e) Seite 12 von 55

13 Auswerte nummer / Evaluation number L-Arginin(e) 1, , < , < Seite 13 von 55

14 4.3 Asparaginsäure (Aspartic acid) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 9 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 1465 Median 1513 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 1178 Obere Grenze des Zielbereichs 1766 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x 2, 121,8 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 6 Prozent im Zielbereich 67 Meßwerte / Results L-Asparaginsäure / Aspartic acid rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 14 von 55

15 Auswerte nummer / Evaluation number L- Asparaginsäure / Aspartic acid 1, ,77 -,3 -, ,23,9 1,6 4,15 nicht auswertbar / Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info 5 6 not evaluable ,23 2,2 4, ,23,9 1, ,77-2,6-4, ,23 1,5 2, ,23,2, ,23,3, ,77-3,4-6,4 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 15 von 55

16 4.4 Glutaminsäure (Glutamic acid) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 9988 Median 1413 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 7619 Obere Grenze des Zielbereichs 1257 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x 1,3 624,5 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 9 Prozent im Zielbereich 9 Meßwerte / Results L-Glutaminsäure / Glutamic acid rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 16 von 55

17 2 1,5 1,5 -,5-1 -1,5-2 -2, Auswerte nummer / Evaluation number L- Glutaminsäure / Glutamic Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info acid 1 1, ,75 -,8-2, ,25,4 1,3 4 1, ,75 -,3-1, ,5 592,75,5 1, ,25,8 2, ,75-1,5-4, ,25 1,5 4, ,25 1,3 4, ,25,1, ,75-2,8-8,5 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 17 von 55

18 4.5 Glycin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 16 Median 161 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 1268 Obere Grenze des Zielbereichs 1992 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x,7 48,3 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 9 Prozent im Zielbereich 9 Meßwerte / Results Glycin(e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 18 von 55

19 1,5 1,5 -,5-1 -1,5-2 -2, Auswerte nummer / Evaluation number Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info Glycin(e) 1, ,78,9 1, ,78,4,8 4, ,5-127,72 -,7-1, ,5-37,72 -,2 -, ,22 -,1 -, ,22 -,2 -, ,78,5 1, ,78,6 1, ,22 -,2 -, ,22-2,7-5,7 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 19 von 55

20 4.6 Histidin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 2 Mittelwert 1789 Median 1775 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 1394 Obere Grenze des Zielbereichs 2183 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x 1, 77,4 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 8 Prozent im Zielbereich 8 Meßwerte / Results L-Histidin (e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 2 von 55

21 Auswerte nummer / Evaluation number Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info L-Histidin (e) 1, ,66 -,2 -, ,34,6 1,2 4, ,75-14,91 -,1 -, ,5-61,16 -,3 -, ,34,7 1, ,66-1,1-2, ,34,5 1, ,34 5,2 11, ,66 -,1 -, ,66-5,2-11, Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Ausreisser / Outlier Seite 21 von 55

22 4.7 Isoleucin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 345 Median 3544 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 271 Obere Grenze des Zielbereichs 4291 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x,6 98,2 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 9 Prozent im Zielbereich 9 Meßwerte / Results L-Isoleucin (e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 22 von 55

23 Auswerte nummer / Evaluation number L-Isoleucin Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info (e) 1, ,72,2, ,28,, 4, ,75-267,53 -,7-1, ,5-172,78 -,4-1, ,72,3, ,72 1,8 4, ,72,4 1, ,72,, ,72,2, ,28-3,1-7,4 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 23 von 55

24 4.8 Leucin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 5779 Median 6145 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 533 Obere Grenze des Zielbereichs 6999 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x,9 182,4 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 9 Prozent im Zielbereich 9 Meßwerte / Results L-Leucin (e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 24 von 55

25 Auswerte nummer / Evaluation number Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info L-Leucin (e) 1 1, ,64,4, ,64,2,3 4, ,36 -,8-1, ,5-153,86 -,3 -, ,64,7 1, ,36 -,9-1, ,64 1,2 2, ,64,4, ,64,6 1, ,36-6,2-11,8 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 25 von 55

26 4.9 Lysin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 7942 Median 7734 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 5241 Obere Grenze des Zielbereichs 193 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x,9 411,3 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 8 Prozent im Zielbereich 8 Meßwerte / Results L-Lysin (e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 26 von 55

27 Auswerte nummer / Evaluation number L-Lysin (e) 1 1,64 Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info ,12 4,7 17, ,12,4 1,4 4, ,5-646,38 -,5-2, ,5 2,62,, ,88 -,9-3, ,12,7 2, ,12,1, ,12,4 1, ,88 -,1 -, ,88-2,4-9,2 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 27 von 55

28 4.1 Methionin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 8 Anzahl der Ausreißer Mittelwert 1512 Median 1633 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 76 Obere Grenze des Zielbereichs 2345 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x,7 116,3 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 8 Prozent im Zielbereich 1 Meßwerte / Results L-Methionin (e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 28 von 55

29 2 1,5 1,5 -,5-1 -1,5-2 -2, Auswerte nummer / Evaluation number L-Methionin Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info (e) 1, ,4,4 2,2 3 4, ,96 -,5-2, ,5 24,54,1, ,96 -,4-1, ,4,3 1, ,4,7 3, ,4,4 1, ,96-1,8-8,8 Hinweis / Remark Seite 29 von 55

30 4.11 Phenylalanin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 3575 Median 3779 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 391 Obere Grenze des Zielbereichs 4368 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x 1, 123,4 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 9 Prozent im Zielbereich 9 Meßwerte / Results L-Phenylalanin (e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 3 von 55

31 Auswerte nummer / Evaluation number L-Phenylalanin Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info (e) 1, ,95 33,39 1, 1, ,56 -,1 -,2 4, ,56 -,8-1, ,5-88,6 -,3 -, ,44,5 1, ,56 -,9-1, ,44,9 1, ,44,8 1, ,44,4, ,56-6,3-11,6 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 31 von 55

32 4.12 Prolin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 713 Median 5681 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 34 Obere Grenze des Zielbereichs 7685 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x 1,1 519,4 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 8 Prozent im Zielbereich 8 Meßwerte / Results L-Prolin (e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 32 von 55

33 Auswerte nummer / Evaluation number Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info L-Prolin (e) 1 1, ,78,4 2, ,78 16,7 82,5 4, ,75 44,53,, ,5-2934,72-2,5-12, ,78,2 1, ,78,3 1, ,78,3 1, ,78,3 1, ,22 -,1 -, ,22-1,6-8, Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 33 von 55

34 4.13 Serin in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 2264 Median 1867 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 1288 Obere Grenze des Zielbereichs 2876 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x 1,7 273,7 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 8 Prozent im Zielbereich 8 Meßwerte / Results L-Serin (e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 34 von 55

35 Auswerte nummer / Evaluation number Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info L-Serin (e) 1, ,56 3,6 13, ,56,8 3, 4, ,44-1, -3, ,44-1, -3, ,44 -,7-2, ,44 -,3-1, ,44 -,4-1, ,56 6,2 23, ,44 -,7-2, ,44-1,9-7,2 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 35 von 55

36 4.14 Threonin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 1335 Median 1415 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 91 Obere Grenze des Zielbereichs 1895 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x,8 81,3 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 9 Prozent im Zielbereich 9 Meßwerte / Results L-Threonin (e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 36 von 55

37 Auswerte nummer / Evaluation number L-Threonin (e) 1,421 Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info ,83-3,3-1, ,83,, 4, ,75-1,8,, ,5 24,67,1, ,17,4 1, ,83 -,1 -, ,17,9 3, ,17,7 2, ,17,4 1, ,83-2, -6,5 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 37 von 55

38 4.15 Tryptophan in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 6 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert nicht ausgewertet / not evaluated Median nicht ausgewertet / not evaluated Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Zielstandardabweichung zur Information Untere Grenze des Zielbereichs Obere Grenze des Zielbereichs Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich Prozent im Zielbereich nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated nicht ausgewertet / not evaluated Meßwerte / Results L-Tryptophan(e) Seite 38 von 55

39 Auswerte nummer / Evaluation number L- Tryptophan(e) Nicht analysiert / 1 Not tested 2 1,5 3 4 nicht kalibriert / 5 not calibrated Seite 39 von 55

40 4.16 Tyrosin in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 1685 Median 1772 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 1118 Obere Grenze des Zielbereichs 2291 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x 6, ,4 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 7 Prozent im Zielbereich 7 Meßwerte / Results L-Tyrosin(e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 4 von 55

41 z -Score Auswerte nummer / Evaluation number Abweichung / (Horwitz) L-Tyrosin(e) Deviation z -Score zur info 1,41,, ,69 2,5 8, ,31 -,4-1,2 4, ,25-58,6-1,7-5, ,69 1, 3, ,69 1,3 4, ,31-1,9-6, ,69,8 2, ,31-1, -3, ,69 3, 9, ,31-4,2-13,8 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 41 von 55

42 4.17 Valin(e) in mg/kg Kenndaten Anzahl der Meßergebnisse 1 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 4593 Median 4749 Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielstandardabweichung (sigma) Untere Grenze des Zielbereichs 3394 Obere Grenze des Zielbereichs 651 Quotient S x /sigma Standardunsicherheit U x,5 12,2 Quotient U x /sigma Ergebnisse im Zielbereich 9 Prozent im Zielbereich 9 Meßwerte / Results L-Valin (e) rob. Mittelwert / robust mean untere Grenze / lower limit obere Grenze / upper limit Seite 42 von 55

43 2 1,5 1,5 -,5-1 -1,5-2 -2, Auswerte nummer / Evaluation number Abweichung / Deviation (Horwitz) zur info L-Valin (e) 1, ,59, -, ,41,1,4 4, ,75-42,84 -,6-1, ,5-25,9, -, ,41,2, ,41,4 1, ,41,5 1, ,41,3 1, ,59 -,2 -, ,59-2,6-8,3 Hinweis / Remark Ausreisser / Outlier Seite 43 von 55

44 5 Dokumentation 5.1 Primärdaten Freie Aminosäuren in mg/kg Teilnehmer / Participant DLA-Nr Probe A / DLA-Nr Probe B / Alanin(e) Ergebnis / Result Ergebnis / Result Arginin(e) Ergebnis / Result Ergebnis / Result Sample A Sample B A B A B ,314,36,322,22,2, * 14 47,16,16, ,16,156, , , <1 <1 < , , <2 <2 < < * Einheit / Unit: g/1g Seite 44 von 55

45 Teilnehmer / Participant Asparagins äure / Aspartic Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B Cystein(e) Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B Cystin(e) Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B Acid 1,34,297,311 N/A N/A N/A,61,56, ND ND ND ND ND ND 3 *,16,16,16,4,4,4 4,15,148,15 nicht nicht nicht nicht nicht nicht 5 auswertbar auswertbar auswertbar kalibriert kalibriert kalibriert / not / not / not / not / not / not <1 <1 <1 evaluable evaluable evaluable calibrated calibrated calibrated <2 <2 <2 <2 <2 < < 2 < 2 < 2 < 5 < 5 < * Einheit / Unit: g/1g Seite 45 von 55

46 Teilnehmer / Participant Glutamins äure / Glutamic Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B Glycin(e) Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B Histidin(e) Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B Acid 1 1,95 1,91 1,98,323,314,331,531,519, * 1,6 1,6 1,6,17,17,17,19,19,19 4 1,5 1,45 1,65,17,163,167,17,168, , , , * Einheit / Unit: g/1g Seite 46 von 55

47 Teilnehmer / Participant Isoleucin(e) Ergebnis Ergebnis Leucin(e) Ergebnis Ergebnis Lysin(e) Ergebnis / Result / Result / Result / Result / Result A B A B A Ergebnis / Result B 1,658,649,667 1,11 1,9 1,13 1,64 1,62 1, *,35,36,34,61,62,6,81,81,81 4,35,343,363,62,65,626,75,746, , , , * Einheit / Unit: g/1g Seite 47 von 55

48 Teilnehmer / Participant Methionin(e) Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B Phenyl alanin(e) Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B Prolin(e) Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B 1,332,324,339,78,75,71 1,11 1,8 1, *,37,37,37 2,48 2,49 2,47 4,16,156,165,39,382,393,52,516, , , * Einheit / Unit: g/1g Seite 48 von 55

49 Teilnehmer / Participant Serin(e) Ergebnis Ergebnis Threonin(e) Ergebnis Ergebnis Tryptophan / Result / Result / Result / Result A B A B Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B 1,838,827,848,421,412,429 Not tested Not tested *,24,24,24,14,14,14 4,18,178,18,15,148, , , Nicht analysiert / nicht kalibriert / not calibrated Nicht analysiert / nicht kalibriert / not calibrated Nicht analysiert / Not tested nicht kalibriert / not calibrated * Einheit / Unit: g/1g Seite 49 von 55

50 Teilnehmer / Participant Tyrosin(e) Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B Valin(e) Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B Teilnehmer / Participant Verbindung / Compound Ergebnis / Result A Ergebnis / Result B 1,41,451,351,96,893,918 2 L-Asparagin *,16,16,16,48,47,47 9 L-Asparagin ,21,196,222,48,476,488 9 L-Citrullin ,25 125, , , L-Glutamin Citrullin L-Glutamin Ornithin * Einheit / Unit: g/1g Seite 5 von 55

51 5.2 Homogenität Wiederholstandardabweichungen Die Wiederholstandardabweichung wurde aus den Daten wie unter 5.1 dokumentiert berechnet. Sie beträgt 4,3% von X (Alanin) gegenüber 4,2 %, die in ASU L dokumentiert sind. Und sie beträgt 3,5 % von X (Histidin) gegenüber 5,8 %, die in ASU L dokumentiert sind Gegenüberstellung der Probennummern und Einzelmeßwerte Probennummer / Sample No Alanin(e) /5 Probennummer / Sample No Histidin(e) /1 Seite 51 von 55

52 5.3 Analytische Methoden Teil nehmer Methodenbeschreibung, wie in einem regulären Prüfbericht angegeben Homogeni sierung Aufschlußmethode Einwaage Derivatisierung Referenzmaterial Kalibrierverfahren Methode ist Sonstige Hinweise akkreditiert 1 Freie Aminosäuren Ja Nein 1g Ja Nein Ja Nein 2 Ja Ja Nein.2 g Ja Nein Ja Nein Bestimmung des Gehaltes freier keine Extraktion mit,1 1-3 g Nachsäulenderivatisierung intern Interner Standard ja Aminosäuren in Lebensmitteln M HCl Mehrpunkt- 3 mittels Aminosäureanalysator mit mit Ninhydrin kalibrierung Ninhydrin analog ASU 64 LFGB L freie Aminosäuren (analog VO(EG) Futtermittel interner Std., 1- ca. 5 g 152/29) (internes RM) Pkt.-Kalibrierung ja 5 6 Ionenaustauschchromatographie mit Nachsäulenderivatisierung Ninhydrin intern ja Gesamtaminosäuren nach sauerer 7 Hydrolyse mittels Proteinfällung mit,5 g - 1 externer Standard, Mörser Ninhydrin Milcheiweiß Aminosäurenanalysator (mit Sulfosalicylsäure g lineare Regression ja Nachsäulenderivatisierung) 8 EZ:faast-Kit Phenomenex, LC-MS/MS ohne saure Extraktion,5g Interner Standard Chloroformatehauseigener LST Mehrpunktkalibrier Derivate ung ja Bestimmung der freien Aminosäuren gut interne 9 mit Aminosäureanalysator nach ohne 1-3 g Ninhydrin nein ja gemischt Kalibrierung Proteinfällung Externe 1 HPLC/FLD nach Derivatisierung 1mg JA mit AQC Nein Kalibrierung mit ja Internen Standard 11 amino acid Die Bestimmung der freien standard AAS18, Einpunktkalibrieru Aminosäuren erfolgte mit einem Mörsern keine ca.1g Ninhydrin Einzelreferenzsu ng Aminosäureanalysator (SOP AS 2). bstanzen ja 12 Phenomenex EZ:faast 1g/1ml Phenomenex EZ faast DLA Material 4-Punkt ja ja / nein Ser = Ser+Asp; His= His+Glu; Arg=Arg+Taurin; oben genannte Verbindungen wurden nicht getrennt. Proteinfällung mit Trichloressigsäure (1 %ig) Die Probe wurde zusätzlich mit Petrolether entfettet Seite 52 von 55

53 6 Verzeichnis der Teilnehmer in alphabetischer Reihenfolge Ort Land ENGLAND GERMANY GERMANY GERMANY GERMANY GERMANY GERMANY TAIWAN GERMANY GERMANY GERMANY GERMANY [Die Adressdaten der Teilnehmer wurden für die allgemeine Veröffentlichung des Auswerte-Berichts nicht angegeben.] Seite 53 von 55

54 7 Verzeichnis relevanter Literatur 1. DIN EN ISO/IEC 1743:21; Konformitätsbewertung Allgemeine Anforderungen an Eignungsprüfungen / Conformity assessment General requirements for proficiency testing 2. Verordnung / Regulation 882/24/EU; Verordnung über amtliche Kontrollen / Regulation on official controls 3. DIN EN ISO/IEC 1725:25; Allgemeine Anforderungen an die Kompetenz von Prüf- und Kalibrierlaboratorien / General requirements for the competence of testing and calibration laboratories 4. Richtlinie / Directive 1993/99/EU; über zusätzliche Maßnahmen im Bereich der amtlichen Lebensmittelüberwachung / on additional measures concerning the official control of foodstuffs 5. ASU 64 LFGB : Planung und statistische Auswertung von Ringversuchen zur Methodenvalidierung 6. DIN ISO 13528:29; Statistische Verfahren für Eignungsprüfungen durch Ringversuche 7. The International Harmonised Protocol for the Proficiency Testing of Ananlytical Laboratories ; J.AOAC Int., 76(4), (1993) 8. The International Harmonised Protocol for the Proficiency Testing of Ananlytical Chemistry Laboratories ; Pure Appl Chem, 78, (26) 9. Evaluation of analytical methods used for regulation of food and drugs;w. Horwitz; Analytical Chemistry, 54, (1982) 1.A Horwitz-like funktion describes precision in proficiency test; M. Thompson, P.J. Lowthian; Analyst, 12, (1995) 11.Recent trends in inter-laboratory precision at ppb and sub-ppb concentrations in relation to fitness for purpose criteria in proficiency testing; M. Thompson; Analyst, 125, (2) 12.Protocol for the design, conduct and interpretation of method performance studies; W. Horwitz; Pure & Applied Chemistry, 67, (1995) 13.ASU 64 LFGB : L7.-64 Bestimmung von frei vorliegenden Aminosäuren in Fleischerzeugnissen (August 214) 14.ASU 64 LFGB : L49.7-1; Bestimmung der Aminosäuren in Aminosäurengemischen. 15.ASU 64 LFGB : L49.7-2; Bestimmung der Aminosäuren in diätetischen Lebensmitteln auf Basis von Proteinhydrolysaten 16.ASU 64 LFGB : L49.7-3; Bestimmung des Tryptophangehaltes in diätetischen Lebensmitteln auf Basis von Proteinhydrolysaten 17.VERORDNUNG (EG) Nr. 152/29 zur Festlegung der Probenahmeverfahren und Analysemethoden für die amtliche Untersuchung von Futtermitteln. Seite 54 von 55

55 Von den 12 Teilnehmern haben 12 mindestens ein Ergebnis eingereicht. Die Auswertung erfolgte hinsichtlich der freien Aminosäuren. Details zu den einzelnen Parametern sind dem Auswertebericht zu entnehmen. 1 Teilnehmer hat seinen Sitz im Europäischen Ausland (England), 1 Teilnehmer hat seinen Sitz im Außereuropäischen Ausland (Taiwan). Gedruckt auf 1% Recycling-Papier Seite 55 von 55