Implementierung der Bouillon-Mikrodilution im Routinelabor am Beispiel von Colistin. Lucia Berning, MSc

Größe: px

Ab Seite anzeigen:

Download "Implementierung der Bouillon-Mikrodilution im Routinelabor am Beispiel von Colistin. Lucia Berning, MSc"

Nele Schmid
vor 6 Jahren
Abrufe

1 Implementierung der Bouillon-Mikrodilution im Routinelabor am Beispiel von Colistin analyse BioLab GmbH, Linz Lucia Berning, MSc

2 Überblick Hintergrund Methoden zur Bestimmung der MHK im Detail: MHK-Bestimmung mit Einzelteststreifen

3 Hintergrund EUCAST-Warnung betreffend MHK-Bestimmung für Colistin Disk diffusion cannot be used at present for susceptibility testing of colistin. Currently available gradient tests underestimate colistin MIC values and undercall resistance and should be avoided. [ ] Quelle: EUCAST-Vorgabe für S. aureus Glycopeptide MICs are method dependent and should be determined by broth microdilution (reference ISO 20776). [ ] Quelle:

aeruginosa Acinetobacter baumannii Komplex allen 3- und 4-MRGN sowie

4 Wann erfolgt Bestimmung der Colistin MHK? Colistin-MHK bei: Enterobacteriaceae (exkl. intrinsisch R) P. aeruginosa Acinetobacter baumannii Komplex allen 3- und 4-MRGN sowie ESBL-Isolaten, inkl. CarbaNet- Einsendungen molekularbiologische Abklärung bei Colistin R Erster mcr-1-fall Österreichs in der Humanmedizin:

5 Goldstandard

Goldstandard gemäß ISO 20776-1 hoher Arbeitsaufwand Reinsubstanzen der Antibiotika Herstellung Lösungen: Kationen-adjustierte Müller Hinton Bouillon

6 Goldstandard gemäß ISO hoher Arbeitsaufwand Reinsubstanzen der Antibiotika Herstellung Lösungen: Kationen-adjustierte Müller Hinton Bouillon Lösungs- und Verdünnungsmittel für Herstellung der Stammlösungen und der Verdünnungen Verdünnungsreihen für die Antibiotikalösungen engmaschige Qualitätskontrollen

7 Kommerzielle Methoden Automatisierte Systeme Micronaut, Merlin Sensititre ThermoFisher /Oxoid Manuelle Systeme UMIC, Biocentric MIC-Strips, Merlin

8 Eckdaten Colistin-MHK-Teststreifen 40 Teststreifen pro Packung Kationen-adjustierte Müller Hinton Bouillon Anordnung am Teststreifen Wachstumskontrolle Range: 0,06 64 mg/l

9 Testablauf Vorbereitung des Arbeitsplatzes in der Sicherheitswerkbank

10 Testablauf Vorbereitung des Arbeitsplatzes in der Sicherheitswerkbank Keimsuspension mit McFarland 0,5

11 Testablauf Vorbereitung des Arbeitsplatzes in der Sicherheitswerkbank Keimsuspension mit McFarland 0,5 Beimpfen der Müller Hinton Bouillon

12 Testablauf Vorbereitung des Arbeitsplatzes in der Sicherheitswerkbank Keimsuspension mit McFarland 0,5 Beimpfen der Müller Hinton Bouillon Beimpfen der Teststreifen mit Mehrkanalpipette

13 Testablauf Vorbereitung des Arbeitsplatzes in der Sicherheitswerkbank Keimsuspension mit McFarland 0,5 Beimpfen der Müller Hinton Bouillon Beimpfen der Teststreifen mit Mehrkanalpipette

14 Testablauf Vorbereitung des Arbeitsplatzes in der Sicherheitswerkbank Keimsuspension mit McFarland 0,5 Beimpfen der Müller Hinton Bouillon Beimpfen der Teststreifen mit Mehrkanalpipette

15 Testablauf Vorbereitung des Arbeitsplatzes in der Sicherheitswerkbank Keimsuspension mit McFarland 0,5 Beimpfen der Müller Hinton Bouillon Beimpfen der Teststreifen mit Mehrkanalpipette

16 Testablauf Vorbereitung des Arbeitsplatzes in der Sicherheitswerkbank Keimsuspension mit McFarland 0,5 Beimpfen der Müller Hinton Bouillon Beimpfen der Teststreifen mit Mehrkanalpipette Beimpfen der Kontrollplatte

Müller Hinton Bouillon Beimpfen der Teststreifen mit

17 Testablauf Vorbereitung des Arbeitsplatzes in der Sicherheitswerkbank Keimsuspension mit McFarland 0,5 Beimpfen der Müller Hinton Bouillon Beimpfen der Teststreifen mit Mehrkanalpipette Beimpfen der Kontrollplatte Inkubation in feuchter Kammer (16-20 h, bei 36 C)

18 Auswertung Ablesen der MHK mit einem Vergrößerungsspiegel

19 Auswertung Ablesen der MHK mit einem Vergrößerungsspiegel MHK = Antibiotikakonzentration im ersten Näpfchen mit vollständiger Hemmung des Keimwachstums

20 Auswertung Ablesen der MHK mit einem Vergrößerungsspiegel MHK = Antibiotikakonzentration im ersten Näpfchen mit vollständiger Hemmung des Keimwachstums Validierungskriterien: Reinkultur auf der Kontrollplatte

21 Auswertung Ablesen der MHK mit einem Vergrößerungsspiegel MHK = Antibiotikakonzentration im ersten Näpfchen mit vollständiger Hemmung des Keimwachstums Validierungskriterien: Reinkultur auf der Kontrollplatte Keimwachstum in der Wachstumskontrolle

22 Auswertung Ablesen der MHK mit einem Vergrößerungsspiegel MHK = Antibiotikakonzentration im ersten Näpfchen mit vollständiger Hemmung des Keimwachstums Validierungskriterien: Reinkultur auf der Kontrollplatte Keimwachstum in der Wachstumskontrolle QC-Stämme im Range ,5 0,25 0, E. coli ATCC E. coli - NRZ 14408

23 Qualitätskontrolle gemäß EUCAST 2017 Colistin Stamm Target Range Sensibel E. coli ATCC P. aeruginosa ATCC ,5 1 mg/l 1 2 mg/l 0,25 2 mg/l 0,5 4 mg/l Resistent E. coli NCTC mg/l 2 8 mg/l

24 Tipps Frische Übernachtkultur verwenden 16 E. coli - NRZ

25 Tipps Frische Übernachtkultur verwenden Kontamination

26 Tipps Frische Übernachtkultur verwenden Kontamination Skip

27 Tipps Frische Übernachtkultur verwenden Kontamination Skip Mischkultur

28 Tipps Frische Übernachtkultur verwenden Kontamination Skip Mischkultur intrinsisch R

29 Fazit Für unser Probenkollektiv ist die MHK-Bestimmung mittels Bouillon-Mikrodilution im Einzelteststreifen- Format gut geeignet und bereits in der Routinediagnostik integriert.

Ähnliche Dokumente

Enterobacteriaceae und konventionelle Methoden zu ihrer Detektion

Epidemiologie von Carbapenemasebildenden Enterobacteriaceae und konventionelle Methoden zu ihrer Detektion Dr. Martin Kaase NRZ für gramnegative Krankenhauserreger Ruhr-Universität Bochum martin.kaase@rub.de