Gaby Aced, Hermann J. Möckel Liquidchromatographie Apparative, theoretische und methodische Grundlagen der HPLC Weinheim New York Basel Cambridge VCH
Inhalt 1 Definition der Methode 1 1.1 Allgemeines über Chromatographie 1 1.2 Das Prinzip 2 1.3 Historische Entwicklung 3 2 Die Apparatur 5 2.1 Grundsätzlicher Aufbau 5 2.2 Trennsäulen 6 2.2.1 Allgemeines 6 2.2.2 Die Säulenfüllung 7 2.2.3 Säulendimensionen 8 2.2.4 Aufbau einer Trennsäule 9 2.3 Die gebräuchlichsten Pumpentypen 10 2.4 Pulsdämpfung 13 2.5 Injektoren 14 3 Aussehen und Informationsgehalt eines Chromatogramms 17 3.1 Allgemeines 17 3.2 Zeiten im Chromatogramm 17 3.3 Zustandekommen unterschiedlicher Retentionszeiten 19 3.4 Kapazitätsfaktor und Selektivität 20 4 Qualitätskriterien für Trennungen 21 4.1 Unterschiedlich gute Trennungen 21 4.2 Die Auflösung 23 4.3 Der Tailingfaktor 23 5 Peakform und Trennleistung der Säule 25 5.1 Das allgemeine Elutionsproblem 25 5.2 Die Gaußkurve 26 5.3 Trennstufenhöhe und Trennstufenzahl 27 5.3.1 Allgemeines 27 5.3.2 Allgemeinere Formulierung der Auflösung 29 5.4 Reale peakverbreiternde Prozesse 30 5.4.1 Mehrwegeffekt (eddy diffusion) 31
X Inhalt 5.4.2 Längsdiffusion 32 5.4.3 Behinderung des Stoffaustauschs in der mobilen Phase 33 5.4.4 Behinderung des Stoffaustauschs in der stationären Phase 33 5.4.5 Die Van-Deemter-Funktion 35 6 Wechselwirkungen der Probe mit den Phasen 37 6.1 Übersicht über Trennsysteme 37 6.2 Das Sorptionsgleichgewicht 38 6.3 Löslichkeit in der mobilen Phase 40 6.3.1 Die Cavity-Energie 40 6.3.2 Solut-Solvens-Wechselwirkung 41 6.3.3 Die Freie Enthalpie des Lösens 42 6.3.4 Solvophobie und Hydrophobie 43 6.4 Die Freie Enthalpie der Wechselwirkung mit der stationären Phase 44 6.5 Die Freie Enthalpie der Verteilung zwischen den Phasen 44 7 Liquid-Liquid-Verteilungschromatographie 47 8 Liquid-Solid-Adsorptionschromatographie 49 8.1 Trennsystem und Verwendung 49 8.2 Sorptionsisothermen 53 9 HPLC an chemisch gebundenen Umkehrphasen 55 9.1 Allgemeines 55 9.2 Herstellung und Charakterisierung von gebundenen Umkehrphasen 56 9.3 Das Trennsystem 59 9.4 Mechanismus der Retention an ODS-Phasen 60 9.5 Retention der «-Alkane 64 9.6 Bestimmung der Totzeit über homologe Reihen 66 9.7 Der Retentionsindex 66 9.8 Retention anderer homologer Reihen 68 9.9 Trennungen polarer Stoffe 70 9.9.1 Allgemeines 70 9.9.2 Trennung von Aminosäuren 71 9.10 Verwandte RP-Systeme 74 9.11 Hydrophobie interaction-chromatographie 76 10 Affinitätschromatographie und andere hochselektive Techniken 79 10.1 Affinitätschromatographie 79 10.2 Chirale Trennungen 80 10.3 Ligandenaustausch-Chromatographie 82
11 Anwendung von Gradienten in der HPLC 11.1 Bedeutung von Gradienten 83 11.2 Flußgradienten 83 11.3 Temperaturgradienten 84 11.4 Eluensgradienten 85 11.5 Möglichkeiten der Gradientbildung 86 12 Ionenaustausch-Chromatographie 89 12.1 Übersicht über die Technik 89 12.2 Anionenaustausch 90 12.3 Kationenaustausch 92 12.4 Weitere Anwendungen 94 13 Ionenausschluß-Chromatographie 95 14 Ionenpaar-Chromatographie 99 14.1 Modelle zur Funktion 99 14.2 Gegen-Ionen in der IPC 99 14.3 Eluentien in der IPC 101 15 Ausschluß-Chromatographie 103 15.1 Volumina in der Trennsäule 103 15.2 Die stationäre Phase" in der SEC 104 15.3 SEC-Trennungen 106 16 Detektoren in der HPLC 109 16.1 Allgemeine Charakterisierung 109 16.2 Der UV-VIS-Detektor 112 16.2.1 Schnelle Monochromatoren 115 16.2.2 Der Diodenarray-Detektor 115 16.3 Der Fluoreszenz-Detektor 117 16.4 Der Brechungsindex-Detektor 119 16.5 Das Differentialrefraktometer / Viskosimeter 16.6 Der Polarimeter-Detektor 124 16.7 Elektrochemische Detektoren 126 16.8 Der Leitfähigkeitsdetektor 128 17 Derivatisierungen 131 17.1 Zweck der Derivatisierung 131 17.2 Vorsäulenderivatisierung 131 17.3 Nachsäulenderivatisierung 132 17.3.1 Allgemeines 132 17.3.2 Einige Nachsäulenreaktionen 133
Xll 18 Allgemeines über Eluentien 135 19 Probenvorbereitung und Vorsäulen 137 20 Säulenschaltungen 139 21 Leitungen, Fittings, Spritzen 143 22 Integratoren, Systemsteuerung, Automatisierung 1 22.1 Übersicht 147 22.2 Die Integratorfunktion 147 22.3 Systemsteuerung und Automatisierung 149 23 Quantitative Auswertung 153 23.1 Allgemeines 153 23.2 Externer Standard 153 23.3 Interner Standard 154 24 Präparative HPLC 157 25 Literatur 159 Register 165