BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood BD Wilkins-Chalgren Agar

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1 GEBRAUCHSANWEISUNG GEBRAUCHSFERTIGE PLATTENMEDIEN PA Rev.: Juni 2003 with 5% Horse Blood VERWENDUNGSZWECK with 5% Horse Blood (BD Wilkins-Chalgren-Agar mit 5 % Pferdeblut) wird zur Isolierung und Kultivierung, sowie zur Empfindlichkeitsprüfung von obligaten Anaerobiern verwendet. (Wilkins-Chalgren-Agar) wird zur Empfindlichkeitsprüfung von obligaten Anaerobiern verwendet. GRUNDLAGEN UND ERLÄUTERUNG DES VERFAHRENS Mikrobiologische Methode. Das Wilkins-Chalgren-Medium wurde zur Empfindlichkeitsprüfung von anaeroben Bakterien beschrieben. 1-3 Während die Empfindlichkeit von anaeroben Bakterien nicht mit dem Agar- (Blättchen)-Diffusionsverfahren bestimmt werden sollte, haben sich Wilkins-Chalgren-Agar und mit Blut ergänzter Wilkins-Chalgren-Agar als geeignete Medien erwiesen, die Empfindlichkeit mit dem E-Testverfahren zu bestimmen. 4-8 Außerdem wurde eine Modifikation der Blättchen- Diffusionsmethode für schnell wachsenden Anaerobier beschrieben. 6 Da es sich bei dem Wilkins-Chalgren-Medium um ein halbsynthetisches Medium mit Supplementen, wie z.b. Arginin, Pyruvat, Hämin und Vitamin K1, handelt, ist es für das von vielen obligaten Anaerobiern verschiedener Stoffwechselarten geeignet, einschließlich Bacteroides, Prevotella, Eubacterium, Clostridium, Veillonella und andere, und wird deshalb zur Isolierung und Kultivierung von obligaten Anaerobiern empfohlen Es wurde beobachtet, dass dieses Medium, wenn es ohne Blut verwendet wird, das von Prophyromonas und Peptostreptococcus nicht besonders gut unterstützt. Aus diesem Grund wird nicht zur Erstisolierung von obligaten Anaerobiern aus klinischen Proben empfohlen. with 5% Horse Blood ist ein universelles s- und Isolierungsmedium für an menschlichen Infektionen beteiligten obligat anaeroben Bakterien. 12,13 Die Peptone und andere im Basismedium enthaltene Verbindungen liefern die notwendigen Nährstoffe und Vitamine für obligate Anaerobier. Das Pferdeblut in with 5% Horse Blood liefert zusätzlich Nährstoffe zur Unterstützung des s von anspruchsvollen Anaerobiern, wie z.b. Porphyromonas und Peptostreptococcus. REAGENZIEN Zusammensetzungen* pro Liter destilliertem Wasser Pankreatisch abgebautes Casein 10,0 g Pankreatisch abgebaute Gelatine 10,0 Hefeextrakt 5,0 Glucose 1,0 Natriumchlorid 5,0 L-Arginin 1,0 Natriumpyruvat 1,0 Hämin 0,005 Agar 15,0 Vitamin K1 0,5 mg ph 7,1 ± 0,2 *Nach Bedarf abgestimmt und/oder ergänzt auf die geforderten Testkriterien. Zusätzlich zu den oben aufgeführten Bestandteilen enthält with 5% Horse Blood 5 % defibriniertes Pferdeblut. PA

2 VORSICHTSMASSNAHMEN. Nur für den professionellen Gebrauch. Agarplatten bei Anzeichen von mikrobieller Kontamination, Verfärbung, Austrocknung, Rissen oder sonstigen Anzeichen von Produktverfall nicht verwenden. Hinweise zur aseptischen Arbeitsweise, Biogefährdung und Entsorgung des Produkts sind der ALLGEMEINEN GEBRAUCHSANLEITUNG zu entnehmen. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Nach Erhalt Platten bis unmittelbar vor dem Gebrauch im Dunkeln bei 2 8 C in der Originalverpackung lagern. Einfrieren und Überhitzen vermeiden. Die Platten können bis zum Verfallsdatum (s. Kennzeichnung auf der Verpackung) inokuliert und entsprechend den empfohlenen Inkubationszeiten inkubiert werden. Platten aus bereits geöffneten Stapeln mit jeweils 10 Platten können bei Lagerung in einem sauberen Bereich bei 2 8 C bis zu einer Woche verwendet werden. QUALITÄTSSICHERUNG DURCH DEN ANWENDER Repräsentative Proben mit den nachfolgend aufgeführten Stämmen inokulieren (detaillierte Informationen siehe ALLGEMEINE GEBRAUCHSANLEITUNG). Platten h bei C anaerob inkubieren (z.b. BD GasPak Anaerobic System). Stämme BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood Porphyromonas levii Schwaches bis gutes ATCC Bacteroides fragilis ATCC Clostridium perfringens ATCC Fusobacterium nucleatum ATCC Peptostreptococcus Mittleres bis gutes anaerobius ATCC Nicht inokuliert Bernsteinfarben Rot (blutfarben) VERFAHREN Mitgeliefertes Arbeitsmaterial oder with 5% Horse Blood, beide als 90 mm Stacker-Platten erhältlich. Mikrobiologisch kontrolliert. Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial Zusätzliche Kulturmedien, Reagenzien und Laborgeräte nach Bedarf. Probenarten with 5% Horse Blood ist ein Universalmedium zur Isolierung und Kultivierung von obligaten Anaerobiern aus allen Probenarten. Anerkannte Verfahren zur Probenentnahme und zum Transport von anaeroben Proben sind zu befolgen. 13 Geeignete Transportmedien, z.b. BD Port-A-Cul, müssen verwendet werden. wurde hauptsächlich für die Empfindlichkeitsprüfung von obligaten Anaerobiern mit Hilfe des E-Tests verwendet. Dieses Medium wird nicht zur Erstisolierung von obligaten Anaerobiern aus klinischen Probenarten empfohlen (siehe auch LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN). Empfindlichkeitsprüfungen dürfen nur mit Reinkulturen durchgeführt werden. Zum Zweck der Empfindlichkeitsprüfung dürfen diese Medien nicht direkt mit der klinischen Probe inokuliert werden. PA

3 Testverfahren Probe sofort nach Eingang mit einer anerkannten Ausstrichmethode auf BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood ausstreichen. Platten sofort nach dem Ausstreichen in anaerobe Gefäße mit anaerober Atmosphäre geben. Es wird empfohlen, BD GasPak-Gläser und BD GasPak-H 2 /CO 2 -Hüllen zusammen mit einem Katalysator zu verwenden. Platten 2 3 Tage oder länger, wenn nötig, bei C inkubieren. Ungeachtet des verwendeten anaeroben Systems ist es wichtig, einen Indikator der Anaerobiose einzuschließen, wie z.b. den anaeroben BD GasPak Einmalindikator. Werden Proben mit gemischter Flora auf diesem Medium ausgestrichen, wird empfohlen, ebenfalls ein selektives Medium, wie z.b. BD Schaedler Kanamycin-Vancomycin Agar with 5% Sheep Blood und/oder with Amikacin and 7% Sheep Blood, mit einzubeziehen. Es können auch fakultative Anaerobier in der Probe vorhanden sein. Es wird deshalb empfohlen, grundsätzlich ein aerobes Medium mit einzubeziehen (z.b. BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood), wenn die Erstkulturen angelegt worden sind. Diese Platte wird zusammen mit den anaeroben Kulturen aerob in einer mit Kohlendioxid angereicherten Atmosphäre inkubiert. 13 Dies erlaubt den Nachweis von in der Probe vorhandenen fakultativen Organismen. Für die Verwendung von und with 5% Horse Blood in anaeroben Empfindlichkeitsprüfungen mit Hilfe des E-Tests sind die Literaturhinweise oder die Anweisungen des Herstellers zu beachten. 4-8,14 Ergebnisse Platten nach der Inkubation auf überprüfen. Kolonien, welche auf diesem Medium erscheinen, sind vermutlich obligate Anaerobier, wenn sie auf aerob inkubierten Blutagar-Platten kein zeigen. Weitere mikroskopische und biochemische Untersuchungen sind zur Identifizierung der Genera und Spezies der obligaten Anaerobier notwendig. Für das Ablesen der auf diesen Medien erhaltenen E-Testergebnisse sind die Literaturhinweise oder die Anweisungen des Herstellers zu beachten. 4-8,14 LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN with 5% Horse Blood wird zur nicht selektiven Isolierung von obligaten Anaerobiern aus klinischen Proben verwendet Dieses Medium und BD Wilkins- Chalgren Agar wurden ebenfalls zur Empfindlichkeitsprüfung von obligaten Anaerobiern mit Hilfe des E-Tests verwendet. 4-8,14 Leistungsergebnisse 15 with 5% Horse Blood wurde internen Untersuchungen mit klinischen Isolaten und Sammelstämmen der in der folgenden Tabelle aufgeführten obligat anaeroben Spezies unterzogen und mit BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood (=Referenzmedium) verglichen. Bacteroides fragilis, B. distasonis, Prevotella bivia, Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas levii, Porphyromonas gingivalis, Campylobacter (Bacteroides) gracilis, Peptostreptococcus anaerobius, Clostridium perfringens, Mobiluncus mulieris, Eggerthella lenta (Eubacterium lentum). Beide Medien wurden mit 10 3 bis 10 4 KBE pro Platte inokuliert und 3,5 Tage anaerob inkubiert. Die Anzahl der Kolonien auf dem Testmedium war bei allen getesteten Stämmen gleich oder höher als auf dem für den Test verwendeten Referenzmedium. Verfahrensbeschränkungen Da und with 5% Horse Blood für obligate Anaerobier nicht selektiv sind, werden fakultative Organismen ebenfalls wachsen. Deshalb ist es wichtig, die Ergebnisse der anaeroben Kultur mit jenen einer aerob inkubierten Platte zu vergleichen. Obwohl viele obligate Anaerobier, wie z.b. Klostridien und die Bacteroides fragilis-gruppe, auf gutes zeigen, sollte dieses Medium nicht zu deren Erstisolierung aus klinischen Proben verwendet werden. PA

4 Das Blättchen-Diffusionsverfahren sollte für die Empfindlichkeitsprüfung von anaeroben Bakterien nicht angewendet werden. Ausnahmen hiervon sind der Fachliteratur zu entnehmen. 10 LITERATUR 1. Wilkins, T.D., and S. Chalgren Medium for use in antibiotic susceptibility testing of anaerobic bacteria. Antimicrob. Agents Chemother. 10: National Committee for Clinical Laboratory Standards Methods for antimicrobial susceptibility testing of anaerobic bacteria - 3 rd edition. Approved standard M11-A3. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, PA. 3. DIN : Methoden zur Empfindlichkeitsprüfung anaerober bakterieller Krankheitserreger gegen Chemotherapeutika - Agar-Dilutionsmethode und Mikro-Bouillon- Dilutionsmethode, Deutsches Institut für Normung (DIN), Berlin. 4. Appelbaum, P.C., et al Comparison of the E test and conventional agar dilution methods for susceptibility testing of Gram-negative anaerobic rods. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 18: Pierard, D., et al Use of the E test for determining antimicrobial susceptibility of anaerobic bacteria. Pathol. Biol. 44: Wüst, J., and U. Hardegger Comparison of the E test and a reference agar dilution method for susceptibility testing of anaerobic bacteria. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 11: Barbut, F., et al Antimicrobial susceptibilities and serogroups of clinical strains of Clostridium difficile isolated in France in 1991 and J. Clin. Microbiol. 43: Citron, D.M., et al Evaluation of the E test for susceptibility testing of anaerobic bacteria. J. Clin. Microbiol. 29: Spangler, S.K., et al E test for susceptibility testing of anaerobes to ß-lactams and ß- lactamase inhibitors. Proceedings from the 18 th Int. Congr. of Chemother., Recent Advances in Chemotherapy, Stockholm, Sweden, June 27 to July 2, Barry, A.L., et al Multilaboratory evaluation of an agar diffusion disk susceptibility test for rapidly growing anaerobic bacteria. Rev. Infect. Dis. 2: S210-S MacFaddin, J.F Media for the isolation cultivation maintenance of medical bacteria. Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London 12. Atlas, R.M Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Boca Raton, FL. USA. 13. Engelkirk, P.G. et al.: Principles and Practice of Clinical Anaerobic Bacteriology; Star Publishing Comp., Belmont, Wexler, H.M., and G.V. Doern Susceptibility testing of anaerobic bacteria. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 15. Data on File. BD Diagnostic Systems Europe. Heidelberg, Germany. VERPACKUNG/LIEFERBARE PRODUKTE with 5% Horse Blood Best.-Nr Gebrauchsfertige Plattenmedien, 20 Platten Best.-Nr Gebrauchsfertige Plattenmedien, 20 Platten WEITERE INFORMATIONEN Weitere Informationen erhalten Sie bei Ihrer örtlichen BD-Vertretung. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com PA

5 BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès Le Pont de Claix/France Tel: Fax: BD, BD logo, Stacker, GasPak and Port-A-Cul are trademarks of Becton, Dickinson and Company ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection E test is a registered trademark of AB Biodisk, Solna, Sweden 2003 Becton, Dickinson and Company PA