BD Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar)

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1 GEBRAUCHSANWEISUNG GEBRAUCHSFERTIGE PLATTENMEDIEN PA Rev.: Juni 2003 BD Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar) VERWENDUNGSZWECK BD Triple Sugar Iron Agar (Eisen-Schrägagar mit verdreifachtem Zucker) als Plattenmedium wird zur Differenzierung von Enterobacteriaceae, insbesondere zur Differenzierung von Salmonella von anderen Darmerregern verwendet. GRUNDLAGEN UND ERLÄUTERUNG DES VERFAHRENS Mikrobiologische Methode. Hajna hat die Rezeptur für TSI-Agar konzipiert, indem er der Zusammensetzung von Kligler- Eisen-Schrägagar Saccharose und den verdoppelten Zucker (Glucose und Lactose) zugegeben hat. 1,2 Eisen-Schrägagar mit verdreifachtem Zucker enthält drei Kohlenhydrate (Glucose, Lactose und Saccharose). Wenn diese Kohlenhydrate fermentiert werden, weist der Phenolrot- Indikator die daraus resultierende Säureproduktion nach. Die daraus resultierenden Farbveränderungen sind gelb für Säureproduktion und rot für Alkalisierung. Da Lactose und Saccharose in viel höherer Konzentration als Glucose vorhanden sind, findet die Säureproduktion im Kolben auf Grund dieser Zuckerarten statt, während die Säureproduktion aus Glucose durch die schnelle Oxidation der kleinen Säuremenge im abgeschrägten Bereich des Röhrchens unterdrückt wird, was zu einer neutralen oder alkalischen ph-reaktion führt, wenn nur Glucose fermentiert wird. In einer Inkubationszeit von h erlaubt die beigefügte Saccharose den Ausschluss von bestimmten coliformen und Proteus-Organismen, welche Saccharose, jedoch nicht Lactose, angreifen können. Bei einem neutralen oder alkalischen ph- Wert, reagiert Schwefelwasserstoff (produziert aus Natriumthiosulfat) mit Eisen(II)- Ammoniumsalz und bringt schwarzes Eisensulfid hervor. Natriumchlorid erhält das osmotische Gleichgewicht des Mediums aufrecht. Die ursprüngliche Anwendung der TSI-Rezeptur ist ihre Verwendung als Röhrchen-Medium mit einem Kolben und einem abgeschrägten Bereich. Es erlaubt die Differenzierung von Glucose-, Lactose-, und/oder Saccharose-fermentierenden Organismen, sowie den Nachweis einer Schwefelwasserstoff-Produktion. Wird das Medium als Plattenmedium verwendet, beschränken sich die auf der Agaroberfläche zu beobachtenden Reaktionen auf die Bildung von alkalischen Produkten (produziert von den Peptonen im Medium, wenn weder Glucose noch Lactose und/oder Saccharose fermentiert werden), oder Säureprodukten aus Lactose und/oder Saccharose, welche die Hauptzuckerarten des Mediums darstellen. Außerdem findet eine Schwefelwasserstoffproduktion statt, wenn keine der Zuckerarten zu Säureprodukten fermentiert wird, da die Bildung von Schwefelwasserstoff einen neutralen bis alkalischen ph-wert benötigt. Die meisten Proteus-Stämme, welche dafür bekannt sind bei neutralem oder alkalischen ph-wert Schwefelwasserstoff zu produzieren, säuern das Medium, da sie Saccharose fermentieren, und erscheinen auf diesem Medium nicht schwarz, während die nicht Saccharose-fermentierenden und nicht Lactose-fermentierenden Salmonella-Stämme schwarze Kolonien bilden. REAGENZIEN BD Triple Sugar Iron Agar Zusammensetzung* pro 1 Liter destilliertem Wasser Pankreatisch abgebautes Casein 10,0 g Glucose 1,0 g Peptisch abgebautes Tiergewebe 10,0 Ammoniumeisen (II)-sulfat 0,2 Natriumchlorid 5,0 Natriumthiosulfat 0,2 Lactose 10,0 Phenolrot 0,025 Saccharose 10,0 Agar 13,0 ph 7,3 ± 0,2 *Nach Bedarf abgestimmt und/oder ergänzt auf die geforderten Testkriterien. PA

2 VORSICHTSMASSNAHMEN. Nur für den professionellen Gebrauch. Agarplatten bei Anzeichen von mikrobieller Kontamination, Verfärbung, Austrocknung, Rissen oder sonstigen Anzeichen von Produktverfall nicht verwenden. Hinweise zur aseptischen Arbeitsweise, Biogefährdung und Entsorgung des Produkts sind der ALLGEMEINEN GEBRAUCHSANLEITUNG zu entnehmen. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Nach Erhalt Platten bis unmittelbar vor dem Gebrauch im Dunkeln bei 2 8 C in der Originalverpackung lagern. Einfrieren und Überhitzen vermeiden. Die Platten können bis zum Verfallsdatum (s. Kennzeichnung auf der Verpackung) inokuliert und entsprechend den empfohlenen Inkubationszeiten inkubiert werden. Platten aus bereits geöffneten Stapeln mit jeweils 10 Platten können bei Lagerung in einem sauberen Bereich bei 2 8 C bis zu einer Woche verwendet werden. QUALITÄTSSICHERUNG DURCH DEN ANWENDER Repräsentative Proben mit den nachfolgend aufgeführten Stämmen inokulieren (detaillierte Informationen siehe ALLGEMEINE GEBRAUCHSANLEITUNG). Platten bei C h aerob inkubieren. Ein nicht selektives Medium, wie z.b. Columbia Agar mit 5 % Schafblut, sollte als Wachstumsreferenz mit einbezogen werden. Stämme Wachstum Escherichia coli ATCC Gutes bis sehr gutes Wachstum; gelbe Kolonien, gelbes Medium um die Kolonien Salmonella Typhimurium Gutes bis sehr gutes Wachstum; rosafarbene Kolonien mit ATCC schwarzen Zentren; rotes Medium Salmonella Abony DSM 4224 Gutes bis sehr gutes Wachstum; rosafarbene Kolonien mit schwarzen Zentren; rotes Medium Shigella flexneri ATCC Gutes bis sehr gutes Wachstum; rosafarbene Kolonien; rotes Medium VERFAHREN Mitgeliefertes Arbeitsmaterial BD Triple Sugar Iron Agar (90 mm Stacker-Platten). Mikrobiologisch kontrolliert. Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial Zusätzliche Kulturmedien, Reagenzien und Laborgeräte nach Bedarf. Probenarten Dies ist ein Differenzierungsmedium und darf nicht für die Erstisolierung von Erregern aus klinischen Proben verwendet werden. Es wird zur Differenzierung von auf Isolierungsmedien erhaltenen Reinkulturen verwendet und kann ebenfalls als Medium zur Subkultivierung von Salmonella-Anreicherungsbouillon verwendet werden (siehe auch LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN). Testverfahren BD Triple Sugar Iron Agar mit einer verdächtigen Kolonie von einer Erstisolierungsplatte oder einer Öse voll Medium von einer Salmonella-Anreicherungsbouillon (z.b. Selenit-Bouillon) inokulieren. Platten h bei C aerob inkubieren. Nicht in einer mit Kohlendioxid angereicherten Atmosphäre und nicht länger als 24 h inkubieren, da dies zu falschen Resultaten führen kann. Ergebnisse Die typischen Reaktionen auf BD Triple Sugar Iron Agar-Platten sind wie folgt: PA

3 Organismen Wachstum Escherichia coli Gelbe Kolonien, gelbes Medium Klebsiella/Enterobacter Gelbe mukoide Kolonien, gelbes Medium Proteus Rötliche bis gräuliche, schwärmende Kolonien; rotes Medium; Saccharose-positive Stämme können gelbe, von gelben Aureolen umgebenen Kolonien produzieren Salmonella (H 2 S-positive Stämme) Rosafarbene Kolonien mit schwarzen Zentren; rotes Medium Shigella und H 2 S-negative Rosafarbene Kolonien; rotes Medium Salmonella Enterococcus Kleine gelbe Kolonien; rotes Medium um die Kolonien Das auf diesem Medium erzielte Wachstum muss durch biochemische und/oder serologische Tests weiter differenziert werden, um eine vollständige Identifizierung der isolierten Stämme zu erhalten. LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN BD Triple Sugar Iron Agar ist ein nicht selektives Medium zur Differenzierung von auf Isolierungsmedien erhaltenen Kolonien mit Verdacht auf Salmonella von anderen Enterobacteriaceae, oder als Medium zur Subkultivierung von Salmonella- Anreicherungsbouillon. Die meisten Salmonella-Stämme produzieren auf diesem Medium rosafarbene Kolonien mit schwarzem Zentrum, während die Kolonien anderer Organismen entweder rot oder gelb sind und keine schwarzen Zentren aufweisen. Einige Salmonella- Stämme weisen jedoch auch keine schwarzen Zentren auf und könnten übersehen werden, wenn keine weitere Differenzierung durchgeführt wird. Das Medium erlaubt ebenfalls keine Differenzierung von Shigella von bestimmten anderen Enterobacteriaceae. Deshalb sollten auch alle rosafarbenen Kolonien ohne schwarze Zentren auf Salmonella und Shigella überprüft werden, z.b. durch Plättchenagglutinationstests mit geeigneten Antiseren. Die auf diesem Medium erhaltenen Resultate müssen durch zusätzliche biochemische oder serologische Tests bestätigt werden. 3 Reaktionen auf dem als Plattenmedium verwendeten BD Triple Sugar Iron Agar können sich von jenen mit Eisen-Schrägagar mit verdreifachtem Zucker in Röhrchen erzielten unterscheiden. 4 BD Triple Sugar Iron Agar ist kein Erstisolierungsmedium für Salmonella oder andere Erreger. Leistungsbewertung In einer internen Untersuchung (siehe Tabelle 1) wurden dreißig Enterobacteriaceae-, Enterococcus spp.- und Staphylolococcus aureus-stämme, einschließlich zehn Salmonella- Stämme verschiedener Serotypen auf BD Triple Sugar Iron Agar getestet. 5 Die Platten wurden in Umgebungsluft 20 h bei C inkubiert. Von den zehn Salmonella-Stämmen bildeten neun rote Kolonien mit schwarzen Zentren, während die Kolonien eines Stammes keine schwarzen Zentren aufwiesen. Alle anderen getesteten Spezies zeigten die erwarteten Reaktionen. Daraus resultiert eine Empfindlichkeit von 96,8 % für alle getesteten Stämme und von 91 % für die Salmonella-Stämme. LITERATUR 1. Hajna, A. A Triple-sugar iron agar medium for the identification of the intestinal group of bacteria. J. Bacteriol. 49: Kligler, I. J Modifications of culture media used in the isolation and differentiation of typhoid, dysentery, and allied bacilli. J. Exp. Med. 28: Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F Media for the isolation cultivation maintenance of medical bacteria. Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London PA

4 5. Data on file. BD Diagnostic Systems Europe. Heidelberg, Germany. VERPACKUNG/LIEFERBARE PRODUKTE BD Triple Sugar Iron Agar Best.-Nr Gebrauchsfertige Plattenmedien, 20 Platten Tabelle 1: Funktionsergebnisse Spezies (Anz. der Stämme) Wachstum auf BD Triple Sugar Iron Agar Enterococcus faecalis (1) Enterococcus faecium (1) Kleine gelbe Kolonien, gelbes Medium Escherichia coli, Lactose-positiv Mittelgroße bis große gelbe Kolonien, gelbes Medium (4) Escherichia coli, Lactosenegativ (1) Morganella morganii (1) Proteus mirabilis (2) Mittelgroße bis große rosafarbene Kolonien mit Proteus penneri (1) schwärmenden Zonen, rotes bis Proteus vulgaris (1) Mittelgroße bis große gelbe Kolonien mit schwärmenden Zonen, gelbes Medium Providencia alcalifaciens (1) Providencia rettgeri (1) Providencia stuartii (1) Salmonella Abony (1) Salmonella Augustenborg (1) Salmonella Bovismorbificans (1) Salmonella Enteritidis (1) Salmonella Gallinarum (1) Salmonella Hadar (1) Salmonella Saintpaul (1) Salmonella Senftenberg (1) Salmonella Typhimurium (1) Salmonella Typhimurium (1) Shigella boydii (1)Shigella boydii (1) Shigella flexneri (1) Shigella sonnei (1) Staphylococcus aureus (2) Mittelgroße bis große rosafarbene Kolonien mit schwarzen Zentren, rotes bis Kleine bis mittelgroße gelbe Kolonien, gelbes Medium WEITERE INFORMATIONEN Weitere Informationen erhalten Sie bei Ihrer örtlichen BD-Vertretung. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès Le Pont de Claix/France Tel: Fax: PA

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