Explanation of Symbols
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- Achim Krause
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1 RP Lateral Flow Immunoassay for semi quantitative measurement of human -reactive protein (RP) in whole blood and serum; interpretation by the Milenia POScan Reader English: Page 1-6 Lateralfluss-Immunoassay zur semiquantitativen Bestimmung von humanem -reaktivem Protein (RP) in Vollblut und Serum; Auswertung mit dem Milenia POScan Reader Deutsch: Seite 7-12 REF: MQLRP 1 30 Milenia Biotec GmbH Versailler Str. 1 D Gießen Germany el.: Fax: info@milenia-biotec.de MQLRP / B /
2 - 2 - Explanation of Symbols Symbols (E) Symbole (D) Explanation Erklärung Symbols (E) Symbole (D) Explanation Erklärung Use by Verwendbar bis ontains sufficient for Inhalt ausreichend für In vitro diagnostic medical device In-vitro Diagnostika Manufacturer Hersteller Batch code hargenbezeichnung For IVD performance evaluation only Nur zur IVD Leistungsbewertung REF atalogue number Katalognummer onsult Instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Storage conditions Lagerungsbedingungen onsult attended documents Begleitdokumente beachten
3 - 3 - Materials Provided,- Storage and Stability Preparation Storage at Shelf life omponents at.-no. ontent RP est Unit: MQSRP s 30 ready to use 2-8 membrane coated with Use monoclonal (mouse) anti-hrp immediately antibody; monoclonal (mouse) after opening anti-hrp antibody conjugated the foil pouch! to gold particles RP/ hsrp hase Buffer: PBS-Buffer, ph 7.4 his bag contains 30 ransfer pipettes 10 µl, disposables ertificate of Analysis MQB 1 vial with 3 ml (yellow cap) in the closed foil pouch until expiration date ready to use 2-8 until expiration date MQP see procedure p.5 until expiration date oa- MQLRP Material Safety Data Sheets are available on request (look as well Intended Use 1 For in vitro diagnostic use. Milenia QuickLine PR is designed for semi quantitative measurement of human RP in whole blood and serum Materials Required But Not Supplied Pipet and tips: 5 µl (serum samples) Specimen ollection and Preparation Whole blood: capillary blood, venous blood, or serum. Avoid hemolysis; separate serum from blood cells within two hours. Whole Blood: avoid blood from clotting e.g with anticoagulants like heparin, EDA; no citrate. Volume Required Whole blood: 10 µl Serum: 5 µl Warnings and Precautions Read these instructions and the Milenia POScan Reader Manual carefully before performing the test. Follow them step by step! Store reagents at 2-8! Do not use the kit after expiration date! Do not use test unit if foil pouche is damaged! Protect test units from moisture! ompare batch code of your kit and the given batch code in your reader; if necessary: change batch code and parameters. (s. Milenia POScan Reader Manual Enter est Parameters ) Do not interchange components of packages of different batch codes! All samples, used units, pipettes, tips, and other contaminated material should be handled carefully and as potentially infectious. For professional users.
4 - 4 - Summary and Explanation Being an acute phase protein, -reaktive protein (RP) is mainly synthesized in the liver. However, recent research has shown that the inflammatory protein is also produced in other tissues such as vascular smooth muscle cells and adipocytes. he expression of RP is particularly increased in pathologically altered vessels. he RP serum level was originally determined to detect and monitor acute inflammation. he value may increase up to 1000fold under acute inflammatory conditions. Method and est Principle he Milenia QuickLine RP test is a lateral flow immunoassay designed for semi quantitative measurement of human RP in capillary blood, venous blood, or serum. he sample is pipetted into the sample application port. he RP in patients sample binds first to a monoclonal anti-rp antibody that is conjugated to gold particles. he RP-loaded gold particles diffuse through the membrane and pass est line. here, a monoclonal RP specific antibody is coated on the membrane. At this place the RP-gold-particels were bound specifically and become visible as est line. he color intensity of the est line is directly proportional to the concentration of RP in the sample. he intensity increases during incubation time. Excess gold conjugate diffuses further over the test membran. onjugat-specific antibodies that applied onto the membrane are functioning as ontrol line (). Here the residual gold conjugate is captured and forms a well visible line during the incubation time. Increasing or decreasing colour s intensity of the ontrol line can not be used for any interpretation. he test unit must be evaluated colourimetrically with the Milenia POScan Reader. he result displayed on the reader is calculated according to a stored standard curve.
5 - 5 - est Procedure Preparation: Allow test unit and chase buffer to come to room temperature (18 28 ) before opening! Never store test units at room temperature! Use test units immediately after opening! ompare batch code on the outerbox label and given batch code at Milenia POScan Reader if necessary enter new batch code and parameters. (see Milenia POScan Reader Manual, p. 12/13) onsult attended documents: ertificat of Analysis (oa-mqlrp) - batch code specific. apillary blood collection: a) Hold transfer pipet horizontally into the blood drop without pushing the bulb. he blood is filled in automatically by capillarity-up to the black mark, equivalent to 10 µl. b) o apply the sample into the sample application port of the test unit squeeze pipet s bulb to empty it. Do this in a timely manner but not too fast. Avoid blood clotting or air bubbles. (Risk of false results) Steps 1. Pipet 10 µl whole blood or 5 µl serum into the sample application port of the test unit. 2. Add 2 drops chase buffer Note: Do not contaminat the vial with sample material! Incubation 10 minutes at room temperature (18-28 ) Put test unit in the drawer. lose drawer! Start SAN - Mode, SAN IN PROGRESS: Scan Result calculation 5. Result is displayed. Scan Mode RP: mg/l Next test Delete Print If result is INVAL check described items on flyer: Notice INVAL/ A / For enquiries or error messages, please contact your local distributor or ustomer Service at Milenia Biotec GmbH. E mail: cwillsch@milenia-biotec.de he Milenia POScan Reader manual can be downloaded from the website
6 - 6 - Function ontrol In any case, the ontrol line () has to appear! It is only used as functional control and can not be used for the interpretation of the test line. If the control line is not detectable after 10 minutes incubation time, the result is invalid! he analysis has to be repeated with a new test unit! Valid results Invalid results Expected Values During measurement the firmware controls validity of the results. If the test is not valid, no test result will be shown (see above Functional ontrol ). Results should be verified concerning the entire clinical status of the patient. Additionally every decision for therapy should be taken individually. Performance haracteristics Sample material: Whole blood like capillary blood, venous blood (heparin, EDA, no citrate), or serum Incubation time: Normal range: Measurement ranges: Sensitivity: Specificity: alibration 10 minutes at room temperature (18-28 ) <10 mg/l <10 mg/l mg/l mg/l mg/l >100 mg/l 8 mg/l highly specific for human -reactive protein calibrated against human RP (Fa. Lee Biosolutions Inc.) Limitation / Interferences Lipemia, bilirubin, and hemolysis will not have any interference influence on the results. High-Dose-Hook-Effect: not detectable for samples 640 mg/l
7 - 7 - RP Lateral Flow Immunoassay for semi quantitative measurement of human -reactive protein (RP) in whole blood and serum; interpretation by the Milenia POScan Reader English: Page 1-6 Lateralfluss-Immunoassay zur semiquantitativen Bestimmung von humanem -reaktivem Protein (RP) in Vollblut und Serum; Auswertung mit dem Milenia POScan Reader Deutsch: Seite 7-12 REF: MQLRP 1 30 Milenia Biotec GmbH Versailler Str. 1 D Gießen Germany el.: Fax: info@milenia-biotec.de MQLRP / B /
8 - 8 - Erklärung der Symbole Symbols (E) Symbole (D) Explanation Erklärung Symbols (E) Symbole (D) Explanation Erklärung Use by Verwendbar bis ontains sufficient for Inhalt ausreichend für In vitro diagnostic medical device In-vitro Diagnostika Manufacturer Hersteller Batch code hargenbezeichnung For IVD performance evaluation only Nur zur IVD Leistungsbewertung REF atalogue number Katalognummer onsult Instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Storage conditions Lagerungsbedingungen onsult attended documents Begleitdokumente beachten
9 - 9 - Kitbestandteile, Lagerung und Stabilität Komponenten Art.-Nr. Inhalt Vorbereitung Lagerung bei Haltbarkeit RP est-einheit (RP est Unit): Membran-beschichtet mit monoklonalem (Maus) antihrp Antikörper; monoklonaler (Maus) anti-hrp Antikörper im Goldkonjugat Laufpuffer (RP/ hsrp hase Buffer): PBS-Puffer, ph 7,4 ransferpipetten (his bag contains 30 ransfer pipettes 10 µl), Einweg MQSRP 30 Stück MQB 1 Fl. mit 3 ml (gelber Deckel) MQP Stück gebrauchsfertig 2-8 im verschlossenen Plastikbeutel im verschlossenen Plastikbeutel bis zum Verfallsdatum gebrauchsfertig 2-8 bis zum Verfallsdatum Bedienung siehe estdurchführung Seite 11 bis zum Verfallsdatum Analysen-Zertifikat oa- 1 (ertificate of Analysis) MQLRP Sicherheitsdatenblätter sind auf Anfrage erhältlich (siehe auch unter Zweckbestimmung Für den in-vitro Diagnostik Gebrauch. Milenia QuickLine RP ist für die semiquantitative Messung von humanem RP in Vollblut oder Serum entwickelt. Nicht im Lieferumfang enthaltenes Material Pipette und Pipettenspitzen: 5 µl (Serum). Probenentnahme und -vorbereitung Vollblut: Kapillarblut, venösem Blut oder Serum Hämolyse vermeiden; Serum innerhalb von 2 Stunden von den Blutzellen trennen. Vollblut: Blutgerinnung vermeiden, z.b. durch Zugabe von Antikoagulantien wie Heparin, EDA; kein itrat. Benötigtes Probenvolumen Vollblut: 10 µl Serum: 5 µl Hinweise und Vorsichtsmaßnahmen Diese Gebrauchsanweisung und das Milenia POScan Handbuch vor der estdurchführung aufmerksam lesen. Arbeitsschritte beachten! Reagenzien bei 2-8 lagern! Kit nicht nach dem Verfallsdatum verwenden! Die esteinheiten nicht verwenden, falls der Folienbeutel beschädigt ist! Die esteinheit vor Feuchtigkeit schützen! Vergleichen der hargenbezeichnung und der eingegebenen hargenbezeichnung im Reader, falls nötig: Ändern der hargenbezeichnung und der Parameter. (Milenia POScan Handbuch, Eingabe der estparameter ) Keine Komponenten aus estpackungen verschiedener hargen verwenden. Alle Proben, esteinheiten, Pipetten, Pipettenspitzen und anderes kontaminiertes Material sollten vorsichtig und als potenziell inkektiös behandelt werden. Für Fachpersonal.
10 Zusammenfassung / Anwendungsbereich Als Akute-Phase-Protein wird -reaktiven Protein (RP) hauptsächlich in der Leber synthetisiert. Neuere Forschungsergebnisse konnten aber auch in anderen Geweben zum Beispiel in den glatten Gefäßmuskelzellen der Koronararterien und in den Adipozyten eine Produktion des Entzündungsproteins feststellen. Insbesondere in pathologisch veränderten Gefäßen ist die Expression von RP erhöht. Ursprünglich wurde der RP-Serumspiegel bestimmt, um eine akute Entzündung nachzuweisen und zu überwachen. Methode und estprinzip Der Milenia QuickLine RP est ist ein Lateralfluss-Immunoassay zur semiquantitativen Bestimmung von humanem RP in Kapillarblut, venösem Blut oder Serum. Die Probe wird in den Probenauftrag der esteinheit pipettiert. Das RP der Patientenprobe bindet zuerst an einen monoklonalen anti-rp Antikörper, der an Goldpartikel konjugiert ist. Die mit RP beladenen Goldpartikel diffundieren über die Membran und passieren die estlinie (). Dort ist ein monoklonaler RP-spezifischer Antikörper an die Membran gebunden. An dieser Stelle werden die RP-Goldpartikel spezifisch gebunden und als estlinie sichtbar. Die Farbintensität der estlinie ist direkt proportional zur RP-Konzentration der Probe. Die Intensität nimmt während der Inkubationszeit zu. Überschüssiges Goldkonjugat diffundiert weiter über die estmembran. Die Konjugat-spezifischen Antikörper, aufgebracht auf der Membran, dienen als Kontrolllinie (). Sie fangen das restliche Gold-Konjugat ab und bilden innerhalb der Inkubationszeit eine gut sichtbare Linie. Anstieg oder Abfall der Farbintensität der Kontrolllinie kann nicht für eine Interpretation herangezogen werden. Die esteinheit wird mit dem Milenia POScan Reader kolorimetrisch ausgewertet. Die angezeigten Messwerte wurden in Übereinstimmung mit einer gespeicherten Standardkurve berechnet.
11 estdurchführung Vorbereitung esteinheit und Laufpuffer vor dem Öffnen auf Raumtemperatur (18 28 ) bringen! esteinheit niemals bei Raumtemperatur lagern! esteinheit unmittelbar nach dem Öffnen verwenden! hargenbezeichnung auf dem Außenettiket und eingegebene hargenbezeichnung im Milenia POScan Reader vergleichen falls nötig, neue harge und Paramenter eingeben. (Milenia POScan Reader Handbuch, S ) Begleitdokumente beachten: Analysenzertifikat (oa-mqlrp) hargenspezifisch! Kapillarblutentnahme a. ransferpipette horizontal in den Bluttropfen halten, ohne auf den Kolben zu drücken. Das Blut fließt durch Kapillarkräfte bis zur schwarzen Markierung, Äquivalent für 10 µl. b. Um die Probe in den Probenauftrag aufzubringen, muss der Kolben gedrückt werden, bis die Pipette vollständig entleert ist. Dies ist zügig, aber nicht zu schnell durchzuführen. Blutgerinnsel und Luftblasen sind zu vermeiden (Gefahr falscher Ergebnisse). 1. Schritte 10 µl Patientenblut oder 5 µl Serum in den Probenauftrag der esteinheit pipettieren ropfen Laufpuffer zugeben. Hinweis: Eine Kontamination der Flasche mit Probenmaterial vermeiden Inkubation 10 Minuten bei Raumtemperatur (18-28 ) esteinheit in die Schublade legen. Schublade schließen. SAN Modus starten Scan Messwert Berechnung 5. Messwert wird angezeigt. Scan Mode Liegt ein INVAL Messwert vor, überprüfen Sie die beschriebenen Punkte auf dem Flyer: RP: mg/l Hinweis INVAL/A/ Für Anfragen oder Fehlermeldungen wenden Sie sich bitte an den ustomer Service der Milenia Biotec GmbH. cwillsch@milenia-biotec.de Next test Delete Print Das Handbuch kann von der Website heruntergeladen werden.
12 Funktionskontrolle Die Kontroll-Linie () muss immer sichtbar werden! Sie dient nur als Funktionskontrolle und kann nicht zur Beurteilung der Farbintensität der estbande herangezogen werden. Wenn die Kontroll-Linie nach 10 Minuten Inkubationszeit nicht sichtbar ist, ist das Ergebnis ungültig! Der est muss mit einer neuen esteinheit wiederholt werden! Gültige Ergebnisse Ungültige Ergebnisse Erwartete Ergebnisse Während der Messung wird von der Firmware überprüft, ob der est gültig ist. Wenn der est ungültig ist, wird kein Messwert angegeben (siehe Funktionskontrolle ). Resultate sollten anhand der gesamten Klinik des Patienten verifiziert werden. Darüber hinaus sollte jede herapie-entscheidung individuell getroffen werden. estcharakteristika Probenmaterial: Inkubationszeit: Normalbereich: Messbereich: Sensitivität: Spezifität: Kalibration: Vollblut wie z.b. Kapillarblut, venöses Blut (Heparin, EDA, kein itrat) oder Serum 10 Minuten bei Raumtemperatur (18 28 ) <10 mg/l <10 mg/l mg/l mg/l mg/l >100 mg/l 8 mg/l hochspezifische Reaktion mit humanem -reaktiven Protein kalibriert gegen human-rp (Fa. Lee Biosolutions Inc.) estlimitation / Störeinflüsse Lipämie, Bilirubin und Hämolyse haben keinen Einfluss auf die Ergebnisse. High-Dose-Hook nicht nachweisbar für Proben 640 mg/l
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