Mikrobiologie-Praktikum Mikrobiologische Wasseruntersuchungen. Versuche Nr. 13 Nr. 18

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1 Mikrobiologie-Praktikum Mikrobiologische Wasseruntersuchungen Versuche Nr. 13 Nr. 18

2 Gesetzliche Regelungen Anforderungen an Trinkwasser und Badegewässer Trinkwasser (Wasser für den menschlichen Gebrauch) (Praktikum: Versuche Nr , Nr. 18) Auf europäischer Ebene: Europäische Richtlinie über die Qualität von Wasser für den menschlichen Gebrauch (EG-Trinkwasserrichtlinie) vom 03. November 1998 Umsetzung der EG-Trinkwasserrichtlinie in nationales Recht: Trinkwasserverordnung 2001, in der Fassung der Bekanntmachung vom 25. November 2015 (Dritte Verordnung zur Änderung der Trinkwasserverordnung) Badegewässer (Praktikum: Versuch Nr. 17) Auf europäischer Ebene: Richtlinie über die Qualität der Badegewässer und deren Bewirtschaftung (Badegewässerrichtlinie) vom 15. Februar 2006 Auf Länderebene, z. B. NRW: Verordnung über die Qualität und die Bewirtschaftung der Badegewässer (Badegewässerverordnung) vom 11. Dezember 2007

3 Mikrobiologische Wasseruntersuchungen in der Praxis Probenahme an geeigneten Stellen Messungen vor Ort (Trübung, Geruch, Leitfähigkeit, Wassertemperatur, Gehalt an freiem und gebundenem Chlor) Transport der Wasserproben ins Labor (unter Kühlung) Beginn der Untersuchungen (möglichst sofort) mikrobiologische Untersuchungen (Dauer: ein Tag bis mehrere Tage) Auswertung der Ergebnisse und Bewertung der Befunde Befunde an Auftraggeber und ggf. an zuständige Behörde (z. B. Gesundheitsamt im Fall amtlicher Untersuchungen) Maßnahmen, wenn Beanstandungen der mikrobiologischen Wasserbeschaffenheit vorliegen

4 Probenahmestellen in der Trinkwasserverteilung Quelle: Trinkwasserverteilungssystem Trinkwasser-Installation Unterschiedlicher Zweck von Probenahmen: Feststellung der Wasserbeschaffenheit im Verteilungsnetz, Wasserbeschaffenheit in der Trinkwasser-Installation. Öffentliches Trinkwasserverteilungssystem Trinkwasser-Installation (Hausinstallation) von Gebäuden

5 Probenahme für mikrobiologische Untersuchungen Beispiel: Trinkwasser Probenahme an einer Entnahmearmatur für unterschiedliche Zwecke (nach DIN EN ISO 19458, 2006) Feststellung der Wasserbeschaffenheit Im Verteilungsnetz (Verantwortlichkeit des Wasserversorgers) An der Entnahmearmatur des Verbrauchers (Veränderungen durch die Trinkwasser-Installation) Während der Entnahme aus der (ggf. verschmutzten) Armatur Qualität des Wassers in der Hauptverteilung an der Entnahmearmatur wie es verbraucht wird Entfernen von angebrachten Vorrichtungen und Einsätzen Desinfektion Spülung Ja Ja Ja Ja Ja Nein (minimal) a) Nein Nein Nein a) Nur kurz spülen, um den Einfluss der Desinfektion der Entnahmearmatur auszugleichen. Desinfektion: z. B. Abflammen des Zapfhahns für zwei bis drei Minuten

6 Probenahmegefäße und Zubehör Kühltasche Chlor-Photometer Gaskartuschenbrenner Sterile Gefäße (z. B. 250 ml-glasflasche) Thermometer

7 Entnahme von Trinkwasser: Beispiel Zapfhahnproben Anforderungen an Zapfhähne für übliche mikrobiologische Probenahmen: aus Metall, abflammbar, ohne Schläuche oder Strahlregler (z. B. Perlatoren) Zapfhahn mit Strahlregler Zapfhahn ohne Strahlregler

8 Entnahme einer Trinkwasserprobe

9 Nachweis von Mikroorganismen in Wasser Quantitativer Nachweis Bestimmung der Gesamtzellzahl (alle vermehrungsfähigen und nicht vermehrungsfähigen Zellen; meist mikroskopische Methoden). Bestimmung der Lebendzellzahl (Koloniezahl, MPN [most probable number]; unter bestimmten Bebrütungsbedingungen kultivierbare Mikroorganismen; Kulturverfahren). Qualitativer Nachweis Nachweis von taxonomischen Gruppen. Identifizierung von einzelnen Arten von Mikroorganismen. Kulturverfahren und kultivierungsunabhängige, oft molekularbiologische Verfahren.

10 Im Praktikum verwendete Wasserproben zum quantitativen Nachweis und zur Identifizierung von Bakterien Oberflächenwasser aus der Ruhr (Baldeneysee), Essen Trinkwasser (Stadtwerke Essen, Universität Duisburg- Essen, Campus Essen, Gebäude S07)

11 Hygienisch-mikrobiologische Wasseruntersuchungen nach der Trinkwasserverordnung Allgemeine Anforderungen (TrinkwV 4): Trinkwasser muss so beschaffen sein, dass durch seinen Genuss oder Gebrauch eine Schädigung der menschlichen Gesundheit insbesondere durch Krankheitserreger nicht zu besorgen ist. Trinkwasser wird zur Beurteilung der hygienisch-mikrobioogischen Beschaffenheit routinemäßig auf folgende Parameter untersucht: Koloniezahl bei 22 C in 1 ml Koloniezahl bei 36 C in 1 ml Zur Beurteilung der allgemeinen mikrobiellen Belastung von Wasser. Escherichia coli in 100 ml (Anwesenheit weist auf fäkale Verunreinigung des Wassers hin). Coliforme Bakterien in 100 ml (Anwesenheit weist auf fäkale oder eine andere allgemeine Verunreinigung des Wassers hin).

12 Versuchsübersicht Mikrobiologische Wasseruntersuchungen Tag Versuch 13 Bestimmung der Koloniezahl Montag Anlegen von Gussplatten Versuch 14 Nachweis E. coli und Coliforme: Flüssigkeitsanreicherung Ansatz von Flüssigkulturen Dienstag - Subkulturen Endo-Agar Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine Bunte Reihe Versuch 15 Nachweis E. coli und Coliforme: Membranfiltrationsverfahren Versuch 17 Nachweis E. coli: Mikrotiterplattenverfahren Membranfiltration Subkulturen CASO-Agar Oxidase-Test, Auswertung Versuch 16 Nachweis E. coli und Coliforme: Colilert- Verfahren Animpfen von Quanti-Trays Animpfen von Mikrotiterplatten Versuch 18 Identifizierung mit API 20 E- System Auswertung Auswertung - - Donnerstag Auszählung Auswertung Bunte Reihe Ansetzen von Teststreifen Freitag Auszählung Auswertung Bunte Reihe Auswertung

13 Versuch Nr. 13: Bestimmung der Koloniezahl Methoden zur Bestimmung der Koloniezahlen (koloniebildende Einheiten) Quelle: Madigan und Martinko, Brock Mikrobiologie, 2009

14 Versuch Nr. 13: Bestimmung der Koloniezahl 1. Tag (Montag) Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser. Beschreibung der Wasserproben. Ansatz: - Trinkwasser unverdünnt - Ruhrwasser 1:10, 1:100 und 1:1000. Anlegen von Gussplatten mit Hefeextraktagar. Bebrütung: 22 C und 36 C Tag (Mittwoch bis Freitag) Auszählung der Kolonien nach 2, 3 und 4 Tagen (Mittwoch bis Freitag). Berechnen der Koloniezahlen pro ml. Quelle: Madigan und Martinko, Brock Mikrobiologie, 2006.

15 Aus den Ergebnissen der Zählungen wird jeweils die Anzahl der koloniebildenden Einheiten (KBE) je ml Wasserprobe errechnet. Ruhrwasserprobe: es werden für die Berechnung der KBE pro ml nur die Agarplatten mit 10 bis 300 Kolonien berücksichtigt. Bei mehr als 300 Kolonien pro Platte werden die Zählergebnisse als "> 300 oder nur als Näherungswerte angegeben. BEISPIEL Berechnung der KBE/ml (gemäß ISO 8199: Wasserbeschaffenheit Allgemeine Anleitung zur Zählung von Mikroorganismen durch Kulturverfahren) KBE/ml = Z/V t Z: Summe aller gezählten Kolonien = 209 KBE V t : untersuchtes Gesamtvolumen (2 x 0,01 ml) + (2 x 0,001 ml) = 0,022 ml Konzentration in unverdünnter Ruhrwasserprobe: 209 KBE/0,022 ml = 9500 KBE/ml (9,5 x 10 3 KBE/ml)

16 Anforderungen an Trinkwasser nach der TrinkwV Koloniezahl TrinkwV 2001 (KBE/mL) Grenzwert/Anforderung 22 C (2 d a), 3 d b) ) 100/mL a) bzw. ohne anormale Veränderung b) 36 C (2 d) 100/mL a) bzw. ohne anormale Veränderung b) a) Die Angaben gelten bei Anwendung des Verfahrens der Koloniezahlbestimmung nach der TrinkwV 2001 (Anlage 5, Teil I, d. Verfahren bb). b) Die Angaben gelten bei Anwendung des Verfahrens der Koloniezahlbestimmung nach der DIN EN ISO 6222 (Anlage 5, Teil I, d. Verfahren aa) (Praktikumsversuch). Beide Verfahren sind nach der aktuell gültigen Trinkwasserverordnung zulässig.

17 Versuch Nr. 13: Bestimmung der Koloniezahl Definition der Koloniezahl Zahl der mit dem Auge oder mit einer bestimmten Vergrößerung sichtbar werdenden Kolonien, die sich aus einer definierten Wassermenge bei festgelegtem Nährstoffangebot, festgelegter Bebrütungstemperatur und innerhalb einer bestimmten Zeit in oder auf einem Agarnährmedium entwickelt. Methode Es handelt sich um eine Bestimmung der Lebendzellzahl ( viable count, plate count, colony count ).

18 Versuch Nr. 13: Bestimmung der Koloniezahl Empirische Feststellung In Zeiten häufiger Epidemien wurde festgestellt, dass keine Seuchengefahr bestand, wenn der Ablauf eines Langsamsandfilters weniger als 100 Kolonien pro ml aufwies. Sinn der Koloniezahl-Bestimmung nach der Trinkwasserverordnung Arbeitstechnisch einfache Erfassung hygienisch-relevanter Mikroorganismen mit einem streng festgelegten Verfahren, Erfassung hygienisch risikoreicher Veränderungen der mikrobiellen Trinkwasserqualität bei der Gewinnung, Aufbereitung und Verteilung des Wassers. Koloniezahlen bei 22 C und 36 C gelten nach der TrinkwV als allgemeine Indikatorparameter.

19 Versuche Nr : Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien Coliforme Bakterien Bakterien aus der Familie der Enterobacteriaceae, die bei 36 C Lactose unter Gas- und Säurebildung vergären können; sie bilden β-galactosidase (katalysiert Lactose-Spaltung). Vor allem Vertreter der Gattungen Escherichia, Citrobacter, Enterobacter und Klebsiella. Natürliches Habitat: Darmtrakt von Mensch und Tier (fäkale Herkunft), Vermehrung auch im Oberflächenwasser und Abwasser (Umwelt). Nachweis im Wasser Hinweis auf entsprechende Verunreinigung. Escherichia coli Typischerweise in hohen Konzentrationen im Darm von Menschen und warmblütigen Tieren. Nachweis im Wasser Hinweis auf eine fäkale Verunreinigung.

20 Versuch Nr. 14: Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mittels Flüssigkeitsanreicherung 1. Tag (Montag) Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser. Ansatz: je 100 ml Trinkwasser und Ruhrwasser. Anlegen von Primärkulturen in Lactose-Pepton-Bouillon (Flüssigkeitsanreicherung). Bebrütung: 36 C, 24 h. Quelle: Süßmuth et al., 1999

21 Versuch Nr. 14: Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mittels Flüssigkeitsanreicherung 4. und 5. Tag (Donnerstag und Freitag) Ablesen der Reaktionen aller Bunten Reihen (positive bzw. negative Reaktionen) 1. Lactose-Bouillon (36 C, 24 h - 48 h): Gas- und Säurebildung 2. Glucose-Bouillon (44 C, 24 h): Gas- und Säurebildung 3. Tryptophan-Bouillon (36 C, 24 h): Indolbildung 4. Nähragar (36 C 24 h): Oxidase-Test 5. Citratagar (36 C, 24 h - 48 h): Wachstum Angabe der Ergebnisse: Nachweis von E. coli, coliformen Bakterien bzw. Nicht-Coliformen in 100 ml Wasserprobe. Quelle: Süßmuth et al., 1999

22 Prinzip des Nachweises von E. coli und coliformen Bakterien in Lactose-Pepton-Bouillon Der Abbau von Lactose durch E. coli und coliforme Bakterien erfolgt durch 1. enzymatische Spaltung von Lactose 2. Vergärung von Glucose zu organischen Säuren, Alkoholen und Gas (Säurebildung: Farbumschlag von rot nach gelb; Gasbildung: Gasblasen im Gärröhrchen) H β-d-galactosidase D-Galactose H D-Glucose

23 Vergärung von Glucose durch E. coli und coliforme Bakterien Formiat Quelle: Madigan und Martinko, Brock Mikrobiologie, 2009

24 Prinzip des Indolnachweises 1. Abbau von Tryptophan zu Ammoniak, Pyruvat und Indol. Quelle: Alexander und Strete, Mikrobiologisches Grundpraktikum: ein Farbatlas, 2006.

25 Prinzip des Indolnachweises 2. Nachweis von Indol durch Reaktion mit para-dimethylaminobenzaldehyd zu Rosindol. negative Reaktion Rosindol Indol positive Reaktion Dimethylaminobenzaldehyd

26 Differenzierung E. coli, Coliforme und Nicht-Coliforme

27 Mikrobiologische Trinkwasseruntersuchung nach DIN Teil 6 (Juni 1991): Nachweis von Escherichia coli und coliformen Keimen 1. Flüssigkeitsanreicherung in Lactose-Pepton-Bouillon (Montag) 36 C, max. 44 h ± 4 h 2. bei Gas- und Säurebildung, Subkultur auf Endo-Agar (Dienstag) 36 C, 24 h ± 4 h 3. Bunte Reihe (Einzelkolonien von Reinkulturen) (Mittwoch bis Freitag) E. coli Coliforme Cytochromoxidase-Reaktion (Nähr-Agar, 36 C, 24 h) - - Gas- und Säurebildung in Lactose-Bouillon (36 C, 44 h) + + Gas- und Säurebildung in Glucose-Bouillon (44 C, 24 h) + - Indolbildung in Tryptophan-Bouillon (36 C, 24 h) + - (+) Verwertung von Citrat (36 C, 44 h) - + (-)

28 Versuch Nr. 15: Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mittels Membranfiltration Wasserprobe Bakterien Rasterelektronenmikroskopische Aufnahme von einem konventionellen Membranfilter (Porengröße der Membranfilter im Praktikum: 0,45 µm). Quelle: Madigan und Martinko, Brock Mikrobiologie, 2009

29 Versuch Nr. 15: Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mittels der Membranfiltration Ziel der Anwendung der Membranfiltration im Rahmen von Trinkwasseruntersuchungen: Konzentrierung von Bakterien aus großen Wasservolumina (oft 100 ml) auf der Membranoberfläche ermöglicht Quantifizierung von Bakterien anhand ihrer Koloniebildung auf den Membranfiltern nach Bebrütung der Filter auf der Oberfläche von Agarnährmedien. Im Praktikum verwendete Filtrationseinrichtung Bakterienkolonien auf einem Membranfilter

30 Versuch Nr. 15: Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mittels Membranfiltration (genormtes Verfahren: ISO ) 1. Tag (Montag) Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser. Ansätze: Trinkwasser 100 ml Ruhrwasser 10 ml und 1 ml (1mL zu 10 ml Deionat). Membranfiltration (0,45 µm Filter) Anlegen von Primärkulturen: Transfer der Filter auf Chromogenen Coliformen-Agar (CCA) und Bebrütung (36 C, 24 h).

31 Versuch Nr. 15: Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mittels Membranfiltration 2. Tag (Dienstag) Auswertung der Primärkulturen auf CCA: - Auszählung aller dunkelblauen bis violetten Kolonien (E. coli), Berechnung der Konzentration von E. coli (KBE/100 ml) - Auszählung aller rosa bis roten Kolonien (verdächtige coliforme Bakterien, die nicht E. coli sind). Anlegen von Subkulturen von 4 verdächtigen rosa bis roten Kolonien aus der Ruhrwasserprobe auf Trypton-Soja-Agar (CASO-Agar) und Bebrütung der Subkulturen (36 C, 24 h) Oxidase-Test.

32 Testprinzip Nachweis von coliformen Bakterien: 6-Chlor-3-indoxyl-β-D-galactopyranosid (Salmon-Gal; chromogenes Substrat) β-d-galactosidase 6-Chlor-3-indoxyl + β-d-galactose (rosa bis rote Färbung der Kolonien) Nachweis von E. coli: 5-Brom-4-chlor-3-indoxyl-β-D-glucuronsäure Cyclohexylammoniumsalz-Monohydrat (X-Gluc; chromogenes Substrat) β-d-glucuronidase 5-Brom-4-chlor-3-indoxyl + β-d-glucuronat 5-Brom-4-chlor-3-indoxyl wird von O 2 der Luft zum tiefblauen Farbstoff 5,5'-Dibrom- 4,4'-dichlor-indigo oxidiert (dunkelblaue bis violette Färbung der Kolonien) Salmon-Gal X-Gluc

33 Versuch Nr. 15: Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mittels Membranfiltration 3. Tag (Mittwoch) Oxidase-Test von Einzelkolonien der 4 Subkulturen (verdächtige coliforme Bakterien); verreiben von Kolonien auf Oxidase Teststreifen und Ablesen der Farbreaktion innerhalb von 1 bis 2 min. Befunde: blauviolette Verfärbung Cytochromoxidase-positiv keine Verfärbung Cytochromoxidase-negativ Berechnung (Hochrechnung) der Konzentration von coliformen Bakterien (KBE/100 ml). Coliforme Bakterien: Summe aller dunkelblauen bis violetten und aller rosa bis roten Kolonien mit negativer Oxidase-Reaktion.

34 Untersuchung von E. coli und coliformen Bakterien mittels Membranfiltration Membranfiltration Maximal 100 ml Chromogener Coliformen-Agar 21 ± 3 h bei 36 C Coliforme Bakterien Rosa bis rote Kolonien E. coli Dunkelblaue bis violette Kolonien Subkultur auf CASO-Agar 36 C, 24 h E. coli bestätigt Oxidase-Test negativ Oxidase-Test positiv Coliforme Bakterien bestätigt Nicht-coliforme Bakterien

35 Prinzip des Oxidase-Tests (Oxidase-positive Reaktion, rechts) (Oxidase-negative Reaktion, links) Oxidase-Nachweisreagenzien: Tetramethyl- oder Dimethyl-p-phenylendiamin Einsatz als Lösung oder auf Teststreifen Quelle: Alexander und Strete, Mikrobiologisches Grundpraktikum: ein Farbatlas, 2006.

36 Hygienisch-mikrobiologische Wasseruntersuchungen nach der Trinkwasserverordnung Allgemeine Anforderung: Wasser für den menschlichen Gebrauch muss frei von Krankheitserregern, genusstauglich und rein sein. Escherichia coli in 100 ml (Anwesenheit weist auf fäkale Verunreingung des Wassers hin) Coliforme Bakterien in 100 ml (Anwesenheit weist auf fäkale oder eine andere allgemeine Verunreinigung des Wassers hin; Hinweis auf Defizite in der Aufbereitung, Speicherung und Verteilung von Trinkwasser) Zugelassene Untersuchungsverfahren: - Membranfiltrationsverfahren (Referenzverfahren, DIN EN ISO ) - Colilert-18/Quanti-Tray (alternatives Verfahren, DIN EN ISO )

37 Anforderungen nach TrinkwV

38 Versuch Nr. 16: Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mit dem Colilert-18/Quanti-Tray-System 1. Tag (Montag) Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser. Ansätze: 100 ml Trinkwasser und 100 ml Ruhrwasser. Zugabe des Colilert-18-Reagenzes. Den gesamten Ansatz in Quanti-Tray füllen. Quanti-Tray versiegeln. Bebrütung: 36 C, 18 h - 22 h

39 Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mit dem Colilert-System: Auswertung 2. Tag (Dienstag) Auszählung aller gelben großen und kleinen Vertiefungen (coliforme Bakterien). Auszählung aller gelben + fluoreszierenden großen und kleinen Vertiefungen unter einer UV-Handlampe bei 366 nm (Escherichia coli). Ablesung der wahrscheinlichsten Zahl aus der MPN-Tabelle für coliforme Bakterien und E. coli; Ergebnisangabe: MPN/100 ml. MPN = Most Probable Number ( wahrscheinlichste Keimzahl ) Ergebnisse in Tabelle (Aushang) eintragen. Anmerkung: Keine Vertiefung positiv: < 1 MPN/100 ml Alle Vertiefungen positiv: > 2419,2 MPN/100 ml Große Vertiefungen Kleine Vertiefungen

40 Versuch Nr. 16: Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mit dem Colilert-System Nachweis von coliformen Bakterien: o-nitrophenyl-β-d-galactopyranosid (ONPG; chromogenes Substrat) β-d-galactosidase o-nitrophenol + β-d-galactose (Gelbfärbung) ONPG Nachweis von E. coli: 4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronid (MUG; fluorogenes Substrat) β-d-glucuronidase 4-Methylumbelliferon + β-d-glucuronat (hellblaue Fluoreszenz) MUG

41 MPN-Verfahren in einem Schritt Konventionelles MPN-Verfahren: Verschiedene Verdünnungsröhrchen in Mehrfachansätzen notwendig. MPN-Verfahren (Colilert-System): ein Ansatz ausreichend.

42 Versuch Nr. 16: Nachweis von E. coli und coliformen Bakterien mit dem Colilert-System Gleichzeitiger Nachweis von Coliformen und E. coli in einem Schritt. Verwendung von Indikator-Nährstoffen (ONPG, MUG), die von den Zielorganismen durch spezifische Enzyme hydrolysiert und metabolisiert werden. Ergebnisse in 18 Stunden; keine Bestätigungstests notwendig. Geringer Arbeits- und Zeitaufwand. In Deutschland: Colilert-18/Quanti-Tray als alternatives Nachweisverfahren zum Referenzverfahren (Membranfiltration, DIN EN ISO ) nach Trinkwasserverordnung vom Umweltbundesamt zugelassen. Das Verfahren ist genormt: DIN EN ISO (Juni 2014).

43 Versuch Nr. 17: Nachweis von Escherichia coli mit mit einem Mikrotiterplattenverfahren (genormtes Verfahren: ISO ) 1. Tag (Montag) Probe: Ruhrwasser Verdünnung von Ruhrwasser 1:2 und 1:20. Animpfen einer Mikrotiterplatte. Bebrütung der versiegelten Platte: 44 C, 2 d. Mikrobiologisches Praktikum WS 2009/10 3. Woche: Wasseruntersuchungen

44 Versuch Nr. 17: Nachweis von Escherichia coli mit mit einem Mikrotiterplattenverfahren 2. Tag (Mittwoch) Ablesung aller Vertiefungen auf hellblaue Fluoreszenz mit einer UV-Handlampe. Bestimmung der charakteristischen Zahl: z. B. 32/5 (32 von 64 Vertiefungen der 1:2 Verdünnung positiv und 5 der 32 Vertiefungen der 1:20 Verdünnung positiv). Ermittlung der wahrscheinlichsten Zahl mit Hilfe einer ausliegenden MPN-Tabelle; Ergebnisangabe: MPN/100 ml.

45 Mikrobiologische Anforderungen an Badegewässer gemäß der EU-Badegewässerrichtlinie (2006) Die Bewertung der Qualität eines Badegewässers erfolgt auf Basis von Daten über vier Jahre (vier abgelaufene Badesaisons).

46 Versuch Nr. 19: Identifizierung coliformer und anderer Bakterien mit einem standardisierten Testsystem Kommerzielle, standardisierte Testsysteme in Form von miniaturisierten Bunten Reihen:

47 Versuch Nr. 19: Identifizierung coliformer und anderer Bakterien mit einem standardisierten Testsystem (api 20 E) 1. Tag (Donnerstag) Identifizierung von 4 Reinkulturen auf Nähragar mit api 20 E-System (aus Ruhrwasser gewonnene Isolate in Versuch Nr. 14). Beimpfen von 4 Teststreifen mit 4 Reinkulturen auf Nähragar aus Versuch Nr. 14. Bebrütung der Streifen: 36 C, 24 h. 2. Tag (Freitag) Auswertung und Identifizierung.

48 Versuchsablauf

49 Auswertung und Identifizierung Ablesen der Reaktionen und Protokollierung in Auswertebogen (21 Reaktionen: "ONPG" bis "OX") Oxidase-Test: Ergebnisse der Reinkulturen auf Nähragar aus Versuch Nr. 15 (Flüssigkeitsanreicherung)

50 Auswertung und Identifizierung Ermittlung eines 7-stelligen Zahlenprofils. Identifizierung anhand des Zahlenprofils im Analytischen-Profil-Index. Ergebnisse in ausgehängte Tabelle eintragen.

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