Andreas Gleixner Pharmakologische Untersuchungen zur Anreicherung von Clenbuterol und steroidalen Anabolika in pigmentierten Geweben Herbert Utz Verlag Wissenschaft München 1996
Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis*«. *..... > 3 Abkürzuncsverzeichnis* * *» * * *» * ** «9 1. Einleitung und Aufgabenstellung 11 1.1 Hormonelle Leistungsförderer... 11 1.1.1 ß-Agonisten, insbesondere Clenbuterol 11 1.1.2 Steroidale Anabolika 13 1.1.3 Gesetzliche Situation 15 1.2 Rückstandsanalytik...15 1.2.1 Clenbuterol 15 1.2.2 Haaranalyse 16 1.2.3 Steroidale Anabolika 18 1.3 " Ausscheidungshemmer" 19 2. Methoden und Materialien 22 2.1 Versuchsbeschreibungen, Validierung der Extraktionsmelhoden..22 2.1.1 Clenbuterolriickstände In den Augen von Mastkälbern nach Clenbuterolbehandlung..«..»». 22 2.1.1.1 Tiere, Clenbuterolapplikation, Blutproben und Wartezeit 22 2.1.1.2 Extraktion des Blutplasmas 22 2.1.1.3 Präparation und Extraktion der Augen 23 2.1.1.4 Validierung der Extraktionen 24 2.1.2 Anreicherung von Clenbuterol in Kälberhaaren unterschiedlicher Pigmentierung 25 2.1.2.1 Tiere 25 2.1.2.2 Haarproben 26 2.1.2.3 Vorbereitung der Haarproben 27 2.1.2.4 Extraktion von Clenbuterol aus den Haaren 28 2.1.2.5 Validierung der Extraktion 29 2.1 J Nachweis von Clenbuterol in menschlichem Kopfhaar 29 2.1.3.1 Haarproben 29
2.1.3.2 Probanden 29 2.1.3.3 Vorbereitung der Haarproben 30 2.1.3.4 Extraktion von Clenbuterol aus den Haaren 30 2.1.3.5 Validierung der Extraktion 30 2.1.3.6 Einfluß von Wasserstoffperoxid auf den meßbaren Clenbuterolgehalt in den Haaren 31 2.1.4 Anreicherung von Ethinylöstradiol und Methyltestosteron in Kälberhaaren unterschiedlicher Pigmentierung 31 2.1.4.1 Tiere 31 2.1.4.2 Haarproben 32 2.1.4.3 Vorbereitung der Haarproben 32 2.1.4.4 Extraktion von Ethinylöstradiol und Methyltestosteron aus den Haaren und Reinigung der Extrakte 33 2.1.4.4.1 Flüssig-Flüssig-Extraktion 33 2.1.4.4.2 Festphasenextraktion (SPE) 34 2.1.4.4.3 Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) 34 2.1.4.5 Extraktion von Ethinylöstradiol und Methyltestosteron aus Blutplasma 34 2.1.4.6 Validierung der Extraktionen 35 2.1.5 Nachweis von Östradiol und Testosteron in Rinderhaaren 35 2.1.5.1 Tiere 36 2.1.5.2 Haarproben 36 2.1.5.3 Vorbereitung der Haarproben 36 2.1.5.4 Extraktion von östradiol und Testosteron aus den Haaren 37 2.1.5.5 Validierung der Extraktion 37 2.1.6 Nachweis von östradiol, Testosteron, Ethinylöstradiol und Norethindron in menschlichem Kopfhaar... 38 2.1.6.1 Haarproben 38 2.1.6.2 Probanden 38 2.1.6.3 Vorbereitung der Haarproben 38 2.1.6.4 Extraktion der Steroide aus den Haaren 38 2.1.6.5 Validierung der Extraktion 38 4 2.1.7 2.1.7.1 2.1.7.2 2.1.7.3 2.1.7.4 2.1.7.5 2.2 2.2.1 2.2.1.1 2.2.1.2 2.2.1.3 2.2.1.4 2.2.1.5 2.2.1.6 2.2.2 2.2.2.1 2.2.2.2. 2.3 2.3.1 2.3.2 3. 3.1 3.1.1 3.1.2 3.2 3.2.1 3.2.2 Einfluß von "Ausscheidungshemmern" auf die urinäre Ausscheidung von Clenbuterol, Ethinylöstradiol und Methvltestosteron. ~ 39 Versuchsaufbau Tierexperiment 1: Urinstichproben 39 Versuchsaufbau Tierexperiment 2: 24-h-Urin 40 Extraktion von Clenbuterol, Ethinylöstradiol und Methyltestosteron aus Urin und Blutplasma 42 Validierung der Extraktionen 43 Statistische Auswertung.' 44 Ilormonmessungen............ 44 Enzymimmuntest (EIA). 44 Clenbuterol (Clen) 44 Ethinylöstradiol (EEj) 44 Methyltestosteron (MT) 45 östradiol (Ej) 45 Testosteron (T) 46 Norethindron (NE) 46 Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) 46 Clenbuterol 46 EEj, MT, E* T und NE 47 Materialien und Geräte 47 Materialien 47 Geräte 49 Clenbuterolrflckstände in den Augen von Mastkälbern nach Clen buterolbehandlung.......... 51 Konzentrationen von Clenbuterol im Blutplasma 51 Clenbuterolrückstfinde in den Augen 53 Anreicherung von Clenbuterol in Kälberhaaren unterschiedlicher Pigmentierung....»...»>......««..... «.......«....55 Konzentrationen von Clenbuterol im Blutplasma 55 Anreicherung von Clenbuterol in "Althaaren" 56
3.2.3 Zeitlicher Zusammenhang zwischen der Applikation von Clenbuterol und dem Nachweis in den Haaren 59 3.2.4 Zusammenhang zwischen der Anreicherung von Clenbuterol in den Haaren und der Haarfarbe 61 3.2.5 Bestätigung der Werte aus dem Enzymimmuntest. 62 3.3 Nachweis von Clenbuterol in menschlichem Kopfhaar 63 3.3.1 Anreicherung von Clenbuterol in menschlichem Kopfhaar 63 3.3.2 Sequentielle Analyse von Haarabschnitten 66 3.3.3 Dauer der Nachweisbarkeit von Clenbuterol in menschlichem Kopfhaar 66 3.3.4 Einfluß von Wasserstoffperoxid auf den Clenbuterolgehalt von Haaren 67 3.3.5 Bestätigung der Werte aus dem Enzymimmuntest 67 3.4 Anreicherung von EE 2 und MT in Kälberhaaren unterschiedlicher Pigmentierung... 68 3.4.1 Konzentrationen von EEj und MT im Blutplasma 68 3.4.2 Anreicherung von EEj und MT in Kälberhaaren 69 3.4.3 Zusammenhang zwischen der Anreicherung von EEj und MT in den Haaren und der Haarfarbe 73 3.5 Nachweis von E, und T in Rinderhaaren......74 3.6 Nachweis von Ej, T, EE, und NE in menschlichem KoDfhaar...»... «.... 77 3.7 Auswirkung von "Ausscheidungshemmern" auf die urinäre Ausscheidung von Clenbuterol, EE 2 und MT 79 3.7.1 Konzentrationen von Clenbuterol im Plasma der drei weiblichen Kälber aus dem Tierexperiment 1 79 3.7.2 Konzentrationen von Clenbuterol in Urinstichproben der drei weiblichen Kälber aus Tierexperiment 1 79 3.7.3 Konzentrationen von Clen, EEj und MT im Plasma der sechs männlichen Kälber aus dem Tierexperiment 2 81 3.7.4 Ausscheidung von Clen, EEj und MT im 24-h-Urin der sechs männlichen Kälber aus Tierexperiment 2 83 3.7.5 Bestätigung der Werte aus dem Enzymimmuntest 86 4. Diskussion.. 57 4.1 Clenbuterolrflckstände in den Augen von Mastkälbern nach Clenbuterol behandlung... 87 4.2 Anreicherung von Clenbuterol in verschieden pigmentierten Kälberhaaren... 88 4.2.1 Extraktion von Clenbuterol aus den Haaren 88 4.2.2 Bestätigung der Werte aus dem Enzymimmuntest 89 4.2.3 Pharmakokinetik von Clenbuterol und Anreicherung in den Haaren 90 4.2.4 Zusammenhang zwischen der Anreicherung von Clenbuterol in den Haaren und der Haarfarbe 92 4.2.5 Toxikologie und Rückstandsanalyse 93 4.3 Nachweis von Clenbuterol in menschlichem Kopfhaar...94 4.3.1 Extraktion von Clenbuterol aus den Haaren 94 4.3.2 Bestätigung der Werte aus dem Enzymimmuntest 94 4.3.3 Anreicherung von Clenbuterol in menschlichem Kopfhaar. 94 4.3.4 Sequentielle Analyse von Haarproben 95 4.3.5 Bedeutung der Haaranalyse für die Dopingkontrolle 95 4.3.6 Einfluß von Wasserstoffperoxid auf den Clenbuterolgehalt von Haaren 96 4.3.7 Zusammenhang zwischen der Anreicherung von Clenbuterol in den Haaren und der Haarfarbe 97 4.4 Anreicherung von EE, und MT in Kälberhaaren unterschiedlicher Pigmentierung...97 4.4.1 Extraktion von EEj und MT aus den Haaren 97 4.4.2 Anreicherung von EEj und MT in Kälberhaaren 98 4.4.3 Vergleich der Anreicherung von EEj und MT mit der Anreicherung von Clenbuterol in Kälberhaaren.98 4.4.4 Zusammenhang zwischen der Anreicherung von EEj und MT in den Haaren und der Haarfarbe 99
4.5 Nachweis von E 2 und T in Rinderhaaren 100 4.5.1 Extraktion von Ej und T aus den Haaren 100 4.5.2 Nachweis von Ej und T in Rinderhaaren 100 4.5.3 Zusammenhang zwischen den Konzentrationen von Ej und T in den Haaren und im Plasma 100 4.5.4 Zusammenhang zwischen den Konzentrationen von Ej und T in den Haaren und dem Alter bzw. dem Geschlecht der Rinder 102 4.6 Nachweis von E T, EE 2 und NE in menschlichem Kopfhaar. 103 4.6.1 Extraktion der Steroide aus den Haaren 103 4.6.2 Zusammenhang zwischen den Konzentrationen der Steroide in den Haaren und im Plasma 103 4.6.3 Zusammenhang zwischen den Konzentrationen der Steroide in den Haaren und dem Alter bzw. dem Geschlecht der Probanden 104 4.6.4 Nachweis der xenobiotischen Steroide EB 2 und NE in menschlichem Kopfhaar 104 4.6.5 Bedeutung der Haaranalyse für die Dopingkontrolle 105 4.6.6 Zusammenhang zwischen der Anreicherung der Steroide in den Haaren und der Haarfarbe 105 4.7 Auswirkung von "Ausscheidungshemmern" auf die urinäre Ausscheidung von Clenbuterol, EE 2 und MT 105 4.7.1 Bestätigung der Werte aus dem Enzymimmuntest 105 4.7.2 Bedeutung von "Ausscheidungshemmern" für die Messungen von Clenbuterol, EE 2 und MT im Urin 106 4.8 Abschlußdiskussion 107 Zusammenfassung 111 Summarv...........115 "*" """ J»..»...».». » «...«.»..»»»..»..»»..»..»......»».».......».....»..."» "."..»».«»w Literaturverzeichnis*...** *............*....119 Verzeichnis der Tabellen und Abbildungen 127 Danksagung 130 Lebenslauf. 131