QUANTA Lite TPO ELISA Nur für In-Vitro Diagnostik CLIA Kompliziertheit: Hoch

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1 QUANTA Lite TPO ELISA Nur für In-Vitro Diagnostik CLIA Kompliziertheit: Hoch Verwendungszweck QUANTA Lite TPO ist ein Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) für die semi-quantitative Bestimmung von Antikörper gegen Schilddrüsen-Peroxydase (TPO) in Humanserum. Die Bestimmung dieser Antikörper gegen Schilddrüsen-Peroxydase (TPO) Antigen unterstützt mit anderen serologischen Nachweisen und der Beurteilung des klinischen Bildes die Diagnostik der autoimmune Schilddrüsenerkrankungen wie Hashimoto Thyreoiditis und Grave'sche Krankheit. Informationen zum Test Zirkulierende Thyreoid-Autoantikörper stehen in weiter Verbindung mit der Etiologie von autoimmunen Schilddrüsenerkrankungen und Autoantikörpern gegen Thyreoglobulin und auch mikrosomale Antikörper werden routinemäßig in der klinischen Praxis nachgewiesen. 1,2 Serum-Autoantikörper gegen thyreoidale, mikrosomale Antigene werden gemeinsam bei Patienten mit autoimmunen Schilddrüsenerkrankungen vorgefunden, ihr Nachweis korreliert gut mit den histologischen Veränderungen bei der Hashimoto-Thyreoiditis. 3 Antikörper gegen thyreoidale, mikrosomale Antigene sind bei % der Patienten mit chronischer Thyreoiditis zu finden. Diese Antikörper werden auch bei 64 % der Patienten mit Primärem Hypothyreoidismus, bei 50% mit Thyreotoxikose, bei 10 % mit einfachen Kropferkrankungen und bei 17 % der Patienten mit Schilddrüsentumoren nachgewiesen. 4 Autoantikörper gegen das Thyreoglobulin können hauptsächlich bei der autoimmunen Thyreoiditis und der Grave`schen Krankheit in hohen Titern bestimmt werden. Autoantikörper gegen Thyreoglobulin/Kolloid im Serum werden bei 40-70% der Patienten mit chronischer Thyreoiditis und bei einem kleineren Prozentsatz von Patienten mit Thyreotoxikose und nicht-toxischen Kropferkrankungen nachgewiesen. 5,6 Es wurde offensichtlich, daß das Hauptantigen, das in den Schilddrüsen-Mikrosomen gefunden wird, das Enzym Schilddrüsen-Peroxydase oder TPO ist. 7 Tests, die mit gereinigtem TPO konzipiert wurden, haben mehrere Vorteile gegenüber Test, die mit relativ rohen, ganzen Mikrosomenpräparationen arbeiten, die Thyreoglobulin und andere, zum Teil unbekannte Antigene enthalten. 8 Laut einer aktuellen Studie reagieren Autoantikörper ähnlich gegen rekombinante humane Thyreoperoxidase und aus Gewebe aufgereinigte native TPO. 9 Autoantikörper gegen Thyreoid wurden klassisch mittels Präzipitationsreaktionen, 10 Latexfixation 11, Hämagglutination 12 und Immunfluoreszenz bestimmt. 13,14 Vor kurzer Zeit wurden neuere ELISA Techniken entwickelt Diese ELISAs werden als die sensitivere Methode im Vergleich zu Hämagglutination oder Immunfluoreszenz angesehen 15,17, sind gleichzeitig objektiver und zeigen keine Interferenzprobleme mit agglutinationsinhibierenden Faktoren 18 oder heterophilen Anti-körpern. Die mit diesem Test angebotene ELISA-Technik ist objektiv, semi-quantitativ und stellt die Methode der Wahl bei einem hohen Probenaufkommen dar. Testprinzip Gereinigtes rekombinante humanes TPO Antigen wurde an die Kavitäten der Polystyrol-Mikrotiterplatte unter Wahrung der reaktiven Konfiguration gebunden. Vorverdünnte Kontrollen und verdünnte Patientenseren werden in verschiedene Kavitäten pipettiert. Die vorhandenen mikrosomales Antikörper binden an das Antigen. Der Rest der Probe/Kontrolle wird durch Waschen entfernt. Enzymmarkiertes anti-humanes IgG wird in die Kavitäten pipettiert und bindet während einer zweiten Inkubation an den Patienten-Antikörper. Nachdem in einem weiteren Waschschritt das restliche Konjugat entfernt worden ist, wird ein Chromogen-Substrat zugegeben. Die Intensität der entstandenen Farbreaktion wird nach dem Abstoppen mit dem Mikrotiterplatten-Photometer gemessen. Die quantitative Auswertung erfolgt durch einen Vergleich der Extinktionswerte der Patienten mit dem Wert eines Kalibrators. Inhalt der Testpackung 1. Mikrotiter-ELISA-Platte beschichtet mit hochgereinigtem rekombinante TPO Antigen (12-1 x 8 Kavitäten), mit Streifenhalter in Folienverpackung und Trockenmittel 2. ELISA Negative Kontrolle, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum ohne humane Antikörper gegen 3. TPO ELISA Low Positive Kontrolle, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum mit Antikörpern gegen 1. TPO ELISA Kalibrator A, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum mit Antikörpern gegen 2. TPO ELISA Kalibrator B, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum mit Antikörpern gegen 3. TPO ELISA Kalibrator C, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum mit Antikörpern gegen 4. TPO ELISA Kalibrator D, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum mit Antikörpern gegen 5. TPO ELISA Kalibrator E, 1 Flasche Puffer mit Stabilisator und Humanserum mit Antikörpern gegen 6. HRP Probenverdünner, 1 Flasche rosa gefärbt mit Tris-gepufferter Kochsalzlösung, Tween 20, Proteinstabilisatoren und Konservierungsmittel, 50 ml 7. HRP Waschkonzentrat, 1 Flasche mit 40fachem Konzentrat rot gefärbt mit gepufferter Kochsalzlösung und Tween 20, 25 ml. Zur Verdünnung bitte das entsprechende Kapitel in der Anleitung beachten. 8. HRP IgG Konjugat, (Ziege), anti-humanes IgG, 1 Flasche blau gefärbt mit Puffer, Proteinstabilisatoren und Konservierungsmittel, 10 ml 9. TMB Chromogen, 1 Flasche mit Stabilisatoren, 10 ml 10. HRP Stopplösung, 0,344M Schwefelsäure, 1 Flasche farblos, 10 ml 1

2 Hinweise 1. VORSICHT: Probenverdünner, Kontrollen und Konjugat enthalten 0,02% Chloramphenicol. Es ist im US- Bundesstaat Kalifornien und allgemein bekannt, daß dieser Stoff Krebs verursachen kann. 2. Alle Reagenzien für die Herstellung dieses Tests wurden auf Antikörper gegen HIV, HBsAg und HCV getestet und für negativ befunden. Dennoch sollten alle humanen Kontrollen wie potentiell infektiöses Humanserum oder Blutproben behandelt werden NaN 3 wird als Stabilisator verwendet. NaN 3 ist ein Giftstoff und kann bei Einnahme toxische Reaktionen verursachen. Vorsichtig handhaben, und Kontakt mit Augen und Haut vermeiden! Den Kontakt mit Metall, basischen Stoffen oder anderen Komponenten, die mit Säure reagieren können, vermeiden. Bei der Entsorgung von Reagenzien ist daher mit viel Leitungswasser nachzuspülen, um Ansammlungen im Abwassersystem zu verhindern. 4. Das HRP Konjugat enthält eine verdünnte Chemikalie, die bei Einnahme toxisch wirken kann. Daher den Kontakt mit Haut und Augen vermeiden. 5. Das TMB Chromogen enthält ein Reizmittel, das bei Inhalation, Einnahme oder Absorbtion durch die Haut gesundheitliche Schäden verursachen kann. Kontakt mit Haut und Augen vermeiden. 6. Die HRP Stopplösung besteht aus verdünnter Schwefelsäure. Den Kontakt mit Basen, Metallen und anderen Stoffen, die mit Säure reagieren können, vermeiden. Schwefelsäure ist ein Giftstoff und kann bei Einnahme toxische Reaktionen hervorrufen. Den Kontakt mit Haut und Augen vermeiden. 7. Die vorgeschriebene persönliche Schutzausrüstung während der Arbeit mit Reagenzien tragen. 8. Verschüttete Reagenzien sofort beseitigen. Bei der Entsorgung von Abfällen alle Umweltvorschriften beachten. Vorsichtsmaßnahmen 1. Dieser Test ist für In-Vitro Diagnostik. 2. Die Verwendung anderer als im Testkit vorhandenen Komponenten kann zu widersprüchlichen Ergebnissen führen. 3. Unvollständiges Waschen und ungenügendes Entfernen der Flüssigkeiten aus den ELISA Kavitäten führt zu einer schlechten Präzision und zu hohen Hintergrund-Extinktionen. 4. Die Adaptation dieses Testsystems auf automatische Probenverarbeitung und andere Instrumentierung, ganz oder teilweise, kann unterschiedliche Ergebnisse zur manuellen Durchführung ergeben. Es liegt in der Verantwortung eines jeden Labors, die automatische Bearbeitung so zu überprüfen, daß Testergebnisse innerhalb akzeptabler Bereiche erzielt werden. 5. Eine Reihe von Faktoren beeinflusst das Testergebnis. Hierzu zählen die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit des Pipettierens, der Typ des verwendeten Photometers, die Temperatur der Reagenzien, die Umgebungs- Temperatur, die Gründlichkeit des Waschens und der Entfernung der Flüssigkeiten aus den Vertiefungen der ELISA-Streifen, und die Einhaltung der Inkubationszeiten. Es ist deshalb sehr wichtig, für gleichbleibende Bedingungen zu sorgen. 6. Die strikte Einhaltung der Testprozedur wird empfohlen. Jede Änderung im Protokoll erfolgt auf Risiko des Anwenders. 7. Das unvollständige Verschließen der Mikrotiterkavitäten und des Trockenmittels führt zu Antigenabbau und schlechter Präzision. 8. Eine unakzeptabel niedrige Absorption kann beobachtet werden, wenn eine Flasche HRP Konjugat bei zweioder mehrfachem Gebrauch über einen längeren Zeitraum benutzt wird. Daher ist es wichtig, die Hinweise zum Umgang mit dem HRP Konjugat genau zu beachten. 9. Chemische Kontamination des HRP Konjugates kann durch unzureichendes Reinigen oder Spülen der Ausrüstung oder der Instrumente verursacht werden. Rückstände gebräuchlicher Laborchemikalien wie z.b. Formalin, Bleichmittel, Ethanol oder Spülmittel führen zum Abbau des HRP Konjugates im Verlauf der Zeit. Das gründliche Spülen der gesamten Ausrüstung und Instrumentierung nach Verwendung chemischer Reinigungsmittel ist daher unbedingt erforderlich. Lagerung 1. Lagerung aller Kit-Reagenzien bei 2-8 C. Nicht einfrieren. Die Reagenzien sind stabil bis zum Ende des Haltbarkeitsdatums bei vorschriftsmäßiger Lagerung und Handhabung. 2. Nicht verwendete Mikrotiterstreifen wieder in die Originalverpackung geben, luftdicht verschließen und in den Kühlschrank zurücklegen. 3. Der verdünnte Waschpuffer ist bei 2-8 C eine Woche stabil. Proben Die Testdurchführung sollte mit Serumproben erfolgen. Werden Azide oder andere Stabilisatoren zu den Serumproben gegeben, können die Ergebnisse nachteilig beeinflusst werden. Mikrobakteriell kontaminierte, hämolytische, lipämische oder durch Hitzeeinwirkung inaktivierte Proben sollten nicht verwendet werden. Nach der Blutentnahme ist das Serum vom Blut zu trennen. Das CLSI (früher NCCLS) Dokument H18-A2 empfiehlt die folgenden Lagerungsbedingungen für Patientenproben: 1) Proben bei Raumtemperatur nicht länger als 8 Stunden lagern. 2) Kann die Testdurchführung nicht innerhalb von 8 Stunden erfolgen, die Proben bei 2-8 C kühl lagern. 3) Kann die Testdurchführung nicht innerhalb von 48 Stunden erfolgen ist die Probe bei -20 C oder niedriger einzufrieren. Eingefrorene Proben müssen nach dem Auftauen und vor der Testung gut geschüttelt werden. Testdurchführung In der Testpackung vorhandenes Material 1 TPO ELISA Mikrotiterplatte (12-1 x 8 Kavitäten), mit Streifenhalter 1 1,2 ml vorverdünnte ELISA Negative Kontrolle 1 1,2 ml vorverdünnte TPO ELISA Low Positive Kontrolle 1 1,2 ml vorverdünnter TPO ELISA Kalibrator A 1 1,2 ml vorverdünnter TPO ELISA Kalibrator B 1 1,2 ml vorverdünnter TPO ELISA Kalibrator C 1 1,2 ml vorverdünnter TPO ELISA Kalibrator D 1 1,2 ml vorverdünnter TPO ELISA Kalibrator E 1 50 ml HRP Probenverdünner 2

3 1 25 ml HRP Waschkonzentrat, 40faches Konzentrat 1 10 ml HRP IgG Konjugat (von der Ziege), anti-humanes IgG 1 10 ml TMB Chromogen 1 10 ml HRP Stopplösung, 0,344M Schwefelsäure Zusätzliches benötigtes Material Pipetten für 5, 100, und 500 µl Einmal-Pipettenspitzen Eppendorf-Reaktionsgefäße für die Serumverdünnung, 4 ml Volumen Distilliertes oder deionisiertes Wasser 1 L Gefäß für verdünntes HRP Waschkonzentrat Reader für Mikrotiterplatten mit 450 nm Filter (und 620 nm für eine bichromatische Messung) Methode Testvorbereitung 1. Alle Reagenzien und Proben auf Raumtemperatur bringen (20-26 o C) und gründlich mischen. 2. Den gesamten Inhalt (25 ml) des Waschkonzentrats mit 975 ml Aqua dest. mischen (1:40 Verdünnung). Die verdünnte Pufferlösung ist bei 2-8 C eine Woche stabil. Soll nicht die gesamte Mikrotiterplatte auf einmal verwendet werden, so können für einen Ansatz von 16 Kavitäten 2 ml Konzentrat mit 78 ml Aqua dest. gemischt werden. 3. Serumproben 1:101 verdünnen, indem 5 µl Serum mit 500 µl gebrauchsfertigem Probenverdünner gemischt werden. Verdünnte Proben sollen innerhalb von 8 Stunden getestet werden. Die TPO ELISA Kalibratoren, die TPO ELISA Kontrolle und die ELISA Negative Kontrolle nicht verdünnen. 4. Jeder Test benötigt zwei Kavitäten für die Kalibratoren und Kontrollen sowie eine oder zwei Kavitäten für die Patientenprobe (Es wird empfohlen, alle Proben in Doppelbestimmung anzusetzen, bis die erforderliche Präzision und Reproduzierbarkeit erreicht sind). 5. Standardkurve vorbereiten: Für Punkte A bis E der Standardkurve mit 5 Punkten die VOR-VERDÜNNTEN ELISA-Kalibratoren TPO A bis E direkt aus den Fläschchen benutzen. Die Standardkurve mit fünf Punkten hat die folgenden Werte: Punkt # TPO WHO Units A Vorverdünnter TPO ELISA Kalibrator A 1000,0 B Vorverdünnter TPO ELISA Kalibrator B 500,0 C Vorverdünnter TPO ELISA Kalibrator C 250,0 D Vorverdünnter TPO ELISA Kalibrator D 125,0 E Vorverdünnter TPO ELISA Kalibrator E 62,5 Testdurchführung 1. ALLE REAGENZIEN UND PATIENTENPROBEN AUF RAUMTEMPERATUR (20-26 C) BRINGEN. Die entsprechende Anzahl Mikrotiterkavitäten abbrechen. Die Kavitäten im Rahmen befestigen. Die unbenutzten Kavitäten wieder in die Originalverpackung geben, luftdicht verschließen und in den Kühlschrank zurücklegen, um Verdunstung zu minimieren. 2. Je 100 µl der gebrauchsfertigen TPO ELISA Low Positive Kontrolle, destpo ELISA Kalibrators A bis E (falls gewünscht), der ELISA Negative Kontrolle und der verdünnten Patientenproben in die entsprechenden Kavitäten pipettieren. Streifen abdecken und bei Raumtemperatur 30 Minuten inkubieren. Die Inkubationszeit beginnt nach Zugabe der letzten Probe. 3. Waschen: Den Inhalt aller Kavitäten absaugen. Die Kavitäten vollständig ( µl) mit verdünntem HRP Waschpuffer füllen und dann gründlich absaugen. Diesen Waschschritt noch zweimal wiederholen (Insgesamt: drei Waschschritte). Anschließend die Platte auf saugfähigem Papier ausklopfen, um restliche Waschflüssigkeit zu entfernen. Die Waschschritte sind in der selben Reihenfolge wie die Pipettierschritte durchzuführen μl des HRP IgG Konjugates in jede Kavität geben. Sterile Pipetten verwenden! Nur das benötigte Volumen an Konjugat aus der Flasche entnehmen. UNBENUTZTES KONJUGAT NICHT IN DIE FLASCHE ZURÜCKPIPETTIEREN. KONTAMINATIONSGEFAHR!! Abgedeckte Streifen bei Raumtemperatur 30 Minuten inkubieren, wie in 2. beschrieben. 5. Waschen: Schritt Nr. 3 wiederholen µl TMB Chromogen in jede Kavität geben. 30 Minuten im Dunkeln bei Raumtem-peratur inkubieren µl HRP Stopplösung in jede Kavität pipettieren Bei der Hinzugabe der Stopplösung dieselbe Reihenfolge und Zeitplan wie bei der Hinzugabe des TMB Chromogens einhalten. Die Mikrotiterplatte vorsichtig schütteln. 8. Die optische Dichte (OD) jeder Kavität bei 450 nm innerhalb einer Stunde nach Abstoppen der Reaktion ablesen. Es wird eine bichromatische Messung mit 620 nm als Referenzwellenlänge empfohlen. Qualitätskontrolle 1. Die TPO ELISA Low Positive Kontrolle, die Kalibratoren TPO A bis E und die ELISA Negative Kontrolle sollten bei jedem Testansatz mitgeführt werden, um sicherzustellen, daß alle Reagenzien und der Testansatz insgesamt ordnungsgemäß funktionieren. 2. Da die TPO ELISA Low Positive Kontrolle, die Kalibratoren TPO A bis E und die ELISA Negative Kontrolle vorverdünnt sind, entfällt der Verdünnungsschritt der Patientenproben bei den Kontrollen. 3. Zusätzliche Kontrollen zur Qualitätssicherung können gemäß den Richtlinien nationaler oder internationaler Regulierungs- oder Akkreditierungsbehörden eingesetzt werden. Geeignete Kontrollen können aus Humanserum gewonnen und bei <-20 C gelagert werden. 4. Um sicher zu sein, daß alle Patientenwerte korrekt sind, müssen die nachfolgenden Kriterien erfüllt werden (Wurden ein oder mehrere Kriterien nicht erfüllt, so ist das Ergebnis als ungültig zu betrachten und der Testansatz ist zu wiederholen). a. Die Absorption der vorverdünnten TPO ELISA Kalibrator A muß größer sein als die Absorption der vorverdünnten TPO ELISA Low Positive Kontrolle. Die Absorption der Low Positive Kontrolle wiederum muß größer sein als die der vorverdünnten ELISA Negative Kontrolle. b. Die Absorption der vorverdünnten TPO ELISA Kalibrator A muß größer als 1,0 sein, die Absorption der vorverdünnten Negative Kontrolle darf nicht größer als 0,2 sein. 3

4 c. Die Absorption des TPO ELISA Low Positive muß mehr als doppelt so hoch sein wie die der ELISA Negative Kontrolle oder über 0,25 liegen. d. Die Konzentration der TPO ELISA Kontrolle muß innerhalb des auf dem Fläschchenetikett angegebenen Bereichs liegen. e. Der Anwender sollte unter anderem das CLSI (früher NCCLS) Dokument Nr. C24-A3 für zusätzliche Hinweise zur zeitgemäßen Qualitätskontrolle beachten. Berechnung der Ergebnisse 1. Den Mittelwert aller Doppelbestimmungen ermitteln. 2. Die errechneten Mittelwerte der Absorption der einzelnen Kalibratoren gegen den log der entsprechenden Konzentrationen auftragen und durch die Punkte eine Kurve zeichnen. Alternativ kann auch eine log/log Auswertung durchgeführt werden. Die WHO-Units der verschiedenen Kalibratoren sind auf den Fläschchen- Etiketten aufgedruckt. 3. Die unbekannte TPO-Konzentration in WHO Units über die X - Achse bestimmen, indem die ermittelte Absorption auf der Y -Achse abgelesen wird. Kalibrator und Kontrolle in diesem Testkit wurden gegen die WHO Referenz- Standards kalibriert, die von der WHO, Reference Preparation MRC 66/387 erhältlich sind. 4. Negative Ergebnisse haben einen Wert von Units, positive Ergebnisse >100 Units (WHO). 5. Proben außerhalb des Normbereichs mit ODs über dem S1 Standard können als> 1000 Units gewertet werden. Alternativ kann die Probe weiter verdünnt werden (z.b. 1:2 und 1:4 in HRP Probenverdünner) und dann nochmals getestet werden, um die OD wieder in den Bereich der Standardkurve zu bringen. Nachfolgend das Beispiel einer typischen Standardkurve: Standard Mittlere OD Konzentration (WHO) A 1, ,0 B 1, ,0 C 0, ,0 D 0, ,0 E 0,306 62,5 Interpretation der Ergebnisse Dieser ELISA-Test ist sehr sensitiv und in der Lage, sogar kleine Unterschiede in Patientenpopulationen zu messen. Die folgenden Werte dienen als Beispiel für die Interpretation der Testergebnisse. Es wird empfohlen, daß sich jedes Labor seine eigenen Normalwerte, basierend auf eigener Technik, Kontrollen, Ausrüstung und Patientenpopulation erarbeitet. 1. Ein positives Ergebnis zeigt das Vorhandensein von TPO Antikörper an und legt die Möglichkeit der autoimmune Schilddrüsenerkrankungen wie Hashimoto Thyreoiditis und Grave'sche Krankheit. 2. Ein negatives Ergebnis deutet auf das Nichtvorhandensein von TPO Antikörpern oder auf Konzentrationen unterhalb der Nachweisgrenze des Testsystems hin. 3. Wir schlagen vor, die Laborergebnisse mit folgendem Hinweis zu versehen: Die folgenden Ergebnisse wurden mit dem INOVA QUANTA Lite TPO ELISA erzielt. TPO Werte, die mit Testsystemen anderer Hersteller ermittelt wurden, können nicht untereinander ausgetauscht werden. Die Höhe des gefundenen IgG-Titers kann nicht mit einem Endpunkttiter in Korrelation gebracht werden. Grenzen des Verfahrens 1. Immunkomplexe oder andere Immunglobulin-Aggregate im Patientenserum können nicht-spezifische Bindungen und falsch-positive Ergebnisse hervorrufen. 2. Nicht alle Hashimoto-Thyreoiditis Patienten sind mikrosomal oder TPO positiv. 3. Ergebnisse dieses Testes müssen im Zusammenhang mit klinischen Ergebnissen und anderen serologischen Tests verwendet werden. 5. Die Leistungscharakteristika für andere Untersuchungsmaterialien als Serum wurden nicht bestimmt. Erwartungswerte Normalbereich Insgesamt wurden 198 Normalseren getestet. Diese Gruppe beinhaltete 104 Männer im Alter von Jahren und 94 Frauen im Alter von Jahren. Elf Proben oder 5,5% waren positiv. Sechs der 11 positiven Seren stammten von Frauen und 5 von Männern. Sieben dieser 11 positiven Normalseren waren positiv in einer ELISA Methode für Antikörper gegen Schilddrüsen-Mikrosome und/oder einem anderen kommerziellen TPO ELISA. Der Durchschnittswert der männlichen Normalbevölkerung betrug 17 Units und bei der weiblichen Normalbevölkerung 36 Units. Relative Sensitivität und Spezifität Die Fähigkeit des QUANTA Lite TPO ELISA Autoantikörper gegen Schilddrüsen-Peroxydase (TPO) zu bestimmen wurde durch den Vergleich mit einem anderen kommerziell erhältlichen TPO ELISA Test evaluiert. Eine Gesamtanzahl von 88 Proben wurde getestet. 69 Proben, die in ein Referenzlabor zur Testung auf Autoantikörper gegen Thyreoid eingeschickt wurden, und zusätzlich 19 Normalseren wurden getestet. Die Ergebnisse sind nachfolgend zusammengefaßt. INOVA TPO * Relative Sensitivität 90,8% Referenz TPO Relative Spezifität 100% Relative Übereinstimmung 92,6% * Eine dieser Proben war aus der Normalbevölkerung und vier waren negativ sowohl in der Immunfluoreszenz als auch im ELISA gegen Schilddrüsen-Mikrosome. In einer anderen Studie wurde der QUANTA Lite TPO Test mit einem anderen ELISA zum Nachweis von Autoantikörper gegen humane thyroide Mikrosome verglichen. Die Ergebnisse sind nachfolgend zusammengefaßt: 4

5 INOVA TPO * Relative Sensitivität 80,5% Mikrosomaler ELISA Relative Spezifität 92,7% - 17** 200 Relative Übereinstimmung 89,7% * 13 der 15 hatten hohe Werte von Antikörpern gegen Thyreoglobulin ** 16 der 17 waren auch positiv bei der Verwendung eines Referenz TPO ELISA In einer dritten Studie wurde der QUANTA Lite TPO ELISA mit dem indirekten Immun-fluoreszenz-Test verglichen, der als Substrat Schilddrüsengewebe vom Affen verwendet. Die Ergebnisse sind nachfolgend zusammengefaßt: INOVA TPO Relative Sensitivität 100% Indirekte Relative Spezifität 81,5% Immunfluoreszenz - 5* 17 Relative Übereinstimmung 89% * Alle 5 dieser Proben waren ebenfalls positiv in einem Referenz TPO ELISA. Präzision und Reproduzierbarkeit Die Präzision und Reproduzierbarkeit des Tests wurde durch Messen einer negativen, einer deutlich positiven und einer stark positiven Probe in sechs Wiederholungen in sechs verschiedenen Testansätzen bestimmt. Die mittlere Absorption der stark positiven Probe betrug 815, die der deutlich positiven 294 und die der negativen 53. Die Standardabweichung (SD) und der Variationskoeffizient (VK) jeder Probe sind nachfolgend aufgeführt. Negativ Stark positiv Deutlich positiv SD VK SD VK SD VK Gesamt 6,0 11,1% 44,4 5,4% 28,3 9,6% Intraassay 4,6 8,5% 33,5 4,1% 21,4 7,2% Interassay 6,6 12,5% 45,2 5,5% 25,9 8,7% QUANTA Lite ist ein eingetragenes Warenzeichen von INOVA Diagnostics, Inc. Referenzen 1. Davies TF and DeBernardo E. Thyroid autoantibodies and disease. In "Autoimmune Endocrine Disease", TF Davies, ed., Wiley, New York, NY, 1983, p Wall JR and Kuroki T. Immunologic factors in thyroid disease. Medical Clinics of North America, 69: 913, Hall R and Evered DC. Autoimmune thyroid disease: thyroiditis. In "Endocrinology", DeGroot LJ, et al., eds., Grune and Stratton, New York, NY, 1979, p Delespesse G, et al. Thyroid autoimmunity. In Thyroiditis and Thyroid Function, Bastenie PA and Evans AM, eds., Pergamon Press, Oxford, 1972, p Balfour BM, et al. Fluorescent antibody studies in human thyroiditis: autoantibodies to an antigen of the thyroid colloid distinct from thyroglobulin. Br J Exp Pathol, 43:307, Tung KSK, et al. Antithyroid antibodies in juvenile lymphocytic thyroiditis. Am J Clin Pathol, 61: 549, Kotani T, et al. Detection of autoantibodies to thyroid peroxidase in autoimmune thyroid diseases by micro-elisa and immunoblotting. J Clin Endrocrinol Metab, 62: 928, Feldt-Rasmussen U. Analytical and clinical performance goals for testing autoantibodies to thyroperoxidase, thyroglobulin, and thyrotropin receptor. Clinical Chemistry, 42: 160, Gut P, et al. Recombinant human thyroid peroxidase produced in insect cells has similar properties to native human thyroid peroxidase. Thyroid. 10:543-50, Doniach D and Roitt IM. Autoimmunity in Hashimoto's disease and its implications. J Clin Endocrinol Metab, 17: 1293, Philip JR, et al. A latex particle precipitation test in the diagnosis of thyroid disease. J Clin Pathol, 15: 148, Fulthorpe AJ, et al. A stable sheep cell preparation for detecting thyroglobulin auto-antibodies and its clinical applications. J Clin Pathol, 14: 654, Holborrow J, et al. Cytoplasmic localization of complement-fixing auto-antigen in human thyroid epithelium. Br J Exp Pathol, 40: 583, Doniach D. Thyroid autoimmune disease: symposium on thyroid gland. J Clin Pathol, 20: 385, Ohwovoriole AE, et al. Improved ELISA for thyroid microsomal auto-antibodies, comparison with hemagglutination and immunofluorescent techniques. Int Arch Allergy Appl Immun, 86: 183, Hoshijima Y, et al. A sensitive enzyme immunoassay for anti-thyroglobulin antibody using Fabhorseradish peroxidase conjugate. J Immunl Methods, 96: 121, Roman SH, et al. Enzyme-linked immunosorbent microassay and hemagglutination compared for detection of thyroglobulin and thyroid microsomal autoantibodies. Clin Chem, 30: 246, Wilkin TJ, et al. A passive hemagglutination (TRC) inhibitor in thyrotoxic serum. J Clin Endocrinol, 10: 507, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control and Prevention/National Institutes of Health, Fifth Edition,

6 Hersteller: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : Technical Service (Outside the U.S.) : support@inovadx.com Autorisierter Repräsentant: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: DEU November 2010 Revision 9 6