Troponin I (ctnl) Rapid Test Rapid Test for the qualitative determination of Cardiac Troponin I (ctni) in human whole blood, serum and plasma

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1 Product information Information about other products is available at: Userś Manual Troponin I (ctnl) Rapid Test Rapid Test for the qualitative determination of Cardiac Troponin I (ctni) in human whole blood, serum and plasma DE004D098 / DE004D / 10 tests info@demeditec.de 1

2 1. INTENDED USE Demeditec Troponin I (ctnl) Rapid Test DE004D098_DE004D The ctni Test is a rapid immunoassay for the qualitative determination of Cardiac Troponin I (ctni) in human whole blood, serum and plasma specimen at the cutoff concentration of 0.5 ng/ml as an aid in the diagnosis of Acute Myocardial Infarction (AMI). ctni Test is a qualitative assay, which cannot monitor the rise and fall of ctni in single testing. Single testing is not recommended for AMI monitoring. Test results should be interpreted by the physician along with other test results and patient clinical symptoms findings. 2. SUMMARY AND EXPLANATION OF THE TEST When a myocardial infarction (MI) occurs in the hypoperfused region of the myocardium, oxygen can no longer be supplied to the cells in the region. Cell death is inevitable if oxygen is not restored within minutes and will result in the release of certain proteins from within cytoplasm into the blood stream. Some proteins are exclusive to and predominant in the cardiac muscle cells; they can function as cardiac makers and be detected in the blood specimens of AMI patients by specialized immunoassays. 1-3 ctni is one of the specific biochemical marker for detecting early stage of AMI, unstable angina (UA), and congestive heart failure (CHF) UA. Troponin is a contractile regulatory protein complex found in skeletal and cardiac muscle. The troponin complex consists of three distinctive polypeptide components, troponin I (TnI), troponin T (TnT), and troponin C (TnC), and plays a fundamental role in the transmission of intracellular calcium signal actinmyosin interaction. 5 TnC of cardiac tissues is identical to that in skeletal tissues, but TnI and TnT of cardiac isoforms are different from those of skeletal isoforms, which enables the development of cardiac specific antibodies. 6 Moreover, ctni level becomes elevated in the blood as a result of myocardial injury or necrosis. Therefore, ctni is used as an aid in the diagnosis of myocardial infarction. 7-8 Studies on the release kinetics indicate that ctni is not early marker of myocardial necrosis. It appears in serum within 3-6 hours after symptom onset, similar to the release of CK-MB. However, ctni remains elevated for 4-9 days post-ami and 13 times more abundant in the myocardium than CK-MB In addition to its utility in diagnosis, elevated ctni levels convey prognostic information and has been shown to identify patients having an increased risk of death PRINCIPLE The ctni Test is an immunchromatography assay for the determination of ctni in whole blood, serum and plasma. The membrane strip contains one test line and one control line; streptavidin for biotinylated ctni antibody and rabbit anti-goat IgG antibody for the control line. A dye pad is placed at the end of the membrane containing biotinylated ctni antibody and gold colloidal particles coupled with ctni antibody. When a sample is applied into the sample well, the cardiac makers present in the sample bind to the specific antibodies coupled with gold particles. ctni in a sample binds to both ctni specific dye coupled antibody and biotinylated antibody. The immune complexes move along the nitrocellulose membrane through the test lines and bind to streptavidin immobilized on the test line. Unbound immune complexes pass through the test line and are captured by rabbit anti-goat IgG antibody in the control line. If the concentration of this marker in the sample is above the cutoff level, red bands appear at the corresponding test lines and the control line. If the concentration of the marker in the sample is lower than the cutoff level, only the colored control line can be seen in the test window. This colored control line must always appear at the control line position (C) for valid test results. A test result is not valid if the colored control line does not appear in the test window. 4. REAGENTS The ctni Test contains all the reagents necessary for the detection of ctni in human whole blood, serum and plasma. The device contains a membrane strip coated with streptavidin on the test line and dye pad infused with biotinylated polyclonal goat anti-ctni antibody and gold colloidal particles coupled with anti-ctni specific antibody. A stabilizer containing 0.05% sodium azide and BSA protein are deposited on the dye pad in dried form. info@demeditec.de 2

3 5. PRECAUTIONS Demeditec Troponin I (ctnl) Rapid Test DE004D098_DE004D For professional in vitro diagnostic use only. Do not use after expiration date indicated on the package. Do not use the test if the foil pouch is damaged. Avoid cross-contamination of specimens by using a new specimen collection container for each specimen obtained. Wear protective clothing such as laboratory coats, disposable gloves and eye protection when specimens are assayed. The used testing materials should be discarded according to federal state and local regulations. Humidity and temperature can adversely affect results. The test should remain in the sealed pouch until use. Do not reuse tests. Handle all specimens as if they contain infectious agents. Observe established precautions against microbiological hazards throughout the procedure and follow the standard procedures for proper disposal of specimens. Do not eat, drink or smoke in the area where the specimens and kits are handled. Read the entire procedure carefully prior to testing. 6. STORAGE AND STABILITY The test kit should be stored at +2 C C in the original sealed pouch for the duration of shelf life. The test kit should be kept away from direct sunlight, moisture and heat. Perform the test immediately after removing the test cassette from the foil pouch. Do not use it beyond the expiration date. Do not freeze. Do not use beyond the expiration date. 7. MATERIALS PROVIDED Test device containing membrane strip in a sealed pouch with desiccant Instruction for use Disposable pipette (80 µl) 8. MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Timer Whole blood, Serum or Plasma Collection Container Positive and negative quality control material 9. SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION This test can be used for whole blood, plasma, and serum samples. If serum samples are to be used, collect the blood in a tube without anticoagulant and allow clotting for at least 25 minutes before centrifugation. Whole blood or plasma samples using heparin or EDTA as the anticoagulant can be used for testing with this product. Other blood anticoagulants have not been evaluated. Each laboratory should determine the acceptability of its own blood collection tubes and serum separation products. Variation in these products may exist between manufacturers and, at times, from lot-to-lot. Use only clear, non-hemolysed specimens. The samples should be collected under standard laboratory conditions. Optimal results were obtained when patient samples were tested immediately after collection. Whole blood samples should be used within 4 hours after collection. Plasma or serum samples may be refrigerated for 24 hours at 2-8 o C. If testing cannot be performed within 24 hours, or for shipment of samples, freeze at -20 o C or colder. 12,13 Sodium azide can be added as a preservative up to 0.1% without affecting the test results. Refrigerated or frozen serum or plasma specimen should reach room temperature and be homogeneous prior to testing. info@demeditec.de 3

4 10. DIRECTIONS FOR USE Bring tests, specimens and/or controls to room temperature (20-30 C) before use. 1. Collect specimen according to instructions in Specimen Collection and Preparation. 2. Test device and sample should be brought to room temperature (+20 C C) prior to testing. 3. Remove the test device from the sealed pouch immediately before use. Label the device with patient or control identification. 4. Using sample transfer pipette, deliver dropper contents (80 µl) of sample into the sample well. See the detailed description below. Otherwise use another quantitative laboratory pipette and pipette 80 µl into the sample well. 5. Read the results at 15 minutes. For qualitative interpretation of results, please see section below, Interpretation of Results. Do not interpret results after 15 minutes. Procedure for collecting sample with whole blood micro dropper if no other quantitative laboratory pipette is available: Step 1: Collecting sample - Squeeze bulb - Insert pipette tip into sample - Slowly release bulb - Sample will fill the collection tube Any and all excess sample volume should rest at the bottom of the reservoir as in example A Correct volume intake A B Incorrect volume intake C D E exactly 80 µl (A), (B) - insufficient volume (C) will result in delayed or partial migration - excess volume (D), (E) will result in flooding Step 2: To expel sample - Hold the transfer pipet over test sample well - Squeeze bulb until collection tube is empty Do not squeeze reservoir bulb info@demeditec.de 4

5 11. INTERPRETATION OF RESULTS The results of the ctni Test are determined visually and interpreted according to the predetermined cutoff value of 0.5 ng/ml for ctni. This cutoff level was determined by comparison to the quantitative assay system of Beckman Coulter, Access AccuTnI TM Assay. This cutoff level may be different if compared to a quantitative assay system other than Beckman Coulter. We recommend that users should establish a correlation if a quantitative assay system other than Beckman Coulter Access is used. positive negative invalid Reproductions may vary from original! Positive*: Appearance of red colored line at the control area (C) and appearance of red colored line at the test line indicate that concentrations of ctni in the sample is at or above the cutoff level. The intensity of red color in the test line may be weaker or stronger than that in the control line. *IMPORTANT NOTICE: The colour of the test line (T) may vary, even a very faint red line must be interpreted as a positive result Negative: A single red colored line at the control area (C) without a T-line (ctni) is a valid negative result and indicates the concentrations of ctni in the sample is below the cutoff level. Invalid: If no colored line appears in the control area in 15 minutes (C), the test result is invalid. The test result is inconclusive and the assay should be repeated. Note: Very faint T-line indicates that the ctni in the specimen is near the cutoff level. The samples should be re-tested or test results should be confirmed by other quantitative assay. The signal intensity may not correlate with the concentration of the protein in the sample. Therefore, quantitative interpretation should not be made based on the intensity of the bands. Do not interpret the results after 15 min. 12. QUALITY CONTROL A pink line appearing in the control region (C) is the internal procedural control. It confirms sufficient specimen volume and correct procedural technique. In the absence of this Control line, the test is invalid and must be repeated. Good laboratory practice recommends the use of control materials to ensure proper kit performance. Quality control specimens are available from commercial sources, and should be assayed using the same procedures followed when running patient samples. Controls should minimally be run before using each new lot or shipment of the ctni Test, at regular intervals afterwards and any time the validity of the test results are questioned. info@demeditec.de 5

6 13. LIMITATIONS OF THE TEST 1. The test is for professional and in-vitro diagnostic use only. 2. A positive test result may only be used as an indicator of myocardial damage and requires further confirmation. Serial sampling of patients suspected of AMI at multiple time points is also recommended due to the delay between onset of symptoms and the release of cardiac marker proteins into the blood stream. 3. As with all diagnostic tests, all results must be interpreted together with other clinical information available to the physician. A negative result does not exclude the possibility of myocardial infarction at any time. 4. As with all diagnostic tests, a definitive clinical diagnosis should not be made based on the results of a single test. The test result should be used in conjunction with other clinical information such as clinical signs and symptoms and other test results to diagnose AMI. Confirmation of test results should only be made by a physician along with clinical symptoms and laboratory findings. 5. Samples containing unusually high titers of certain antibodies such as human anti-mouse or human anti-rabbit antibodies have been known to affect the performance of this device.14 However, these studies using the ctni Test have not been performed. 6. Some specimens containing unusually high titers of heterophile antibodies or rheumatic factor (RF) may affect the test result. Even if the test results are positive, further clinical evaluation should be considered with other clinical information available to the physician. 7. It is possible that the test does not yield any results if whole blood specimens have a high viscosity or if the whole blood specimens have been stored for more than 2 days. In this case the test should be repeated with a new test card using a plasma or serum specimen of the same patient. 8. False negative test results: In rare cases, autoantibodies can prevent the antigen-antibody reaction in the blood of the patient during the test. This can lead to false negative test results. Please note that this problem can generally occur with all test methods involving the detection of a protein via an antibody reaction. 14. EXPECTED VALUES The cutoff values of the ctni Test were determined by comparison to the Beckman Coulter quantitative assay, Access AccuTnI TM Assay. The cutoff level of TnI is 0.5 ng/ml. The specimens containing ctni at the concentration of equal or above established cutoff level will give positive result using the ctni Test. The cutoff level may be different if a quantitative assay system other than Beckman Coulter Access is used. 15. PERFORMANCE CHARACTERISTICS Assay Cutoff Patient plasma containing ctni, were diluted in normal human serum to the concentration at or near the cutoff level. Analyte concentrations in the diluted samples were confirmed by Quantitative Assay, Access AccuTnI TM of Beckman Coulter. Fifteen devices were tested for each sample at concentrations of 0.31, 0.57 and 1.07 ng/ml ctni. The results are shown in following table. The cutoff concentration was assigned as 0.5 ng/ml for ctni. Analyte ctni Conc. determined by Access Assay (ng/ml) Test Result Negative (n) Positive (n) Cutoff level 0.5 ng/ml info@demeditec.de 6

7 Recovery Studies Recovery studies were performed with patient serum diluted in normal human serum. Patient sera containing high levels of ctni was sequentially diluted with normal human serum to yield different concentrations. Each diluted sample was tested using the ctni Test in 3 replicates. The data shown in the table below demonstrates recovery rate between observed results and expected results at each concentration of ctni. Analyte ctni Expected Conc. (ng/ml) Determined Average Concentration Agreement % of Expect Values Total Recovery (%) Analytical Specificity Potentially interfering substances were spiked into normal serum and patient serum containing ctni about 1.5 times of the cutoff concentration. The substances at the following level do not interfere with the performance of the ctni Test. Endogenous substances Substances Bilirubin Hemoglobin Human serum albumin Triglycerides Concentration 50 mg/dl 4000 mg/dl 10 g /dl 1250 mg/dl The device was tested for interference by potentially cross-reacting endogenous proteins. Potentially cross-reacting proteins, added into normal human serum up to the following concentrations, do not interfere with test result. Cross-reacting endogenous proteins Substances Cardiac myosin light chain Cardiac Troponin T Cardiac Troponin C Skeletal Troponin I Concentration 1000 ng/ml 1000 ng/ml 1000 ng/ml 1000 ng/ml Precision Test Two Clinical sites and one in-house operator were provided with blindly labeled serum samples. Patient serum samples, containing high levels of ctni were diluted in normal human serum to make positive samples of different concentrations. A normal human serum sample was also provided as negative control of the test. Five aliquots from each sample were tested at each testing site. The results shown in the table below demonstrate 100% agreement for between run as well as for within. Analyte ctni Testing Site Concentration of each analyte (ng/ml) in each sample and ctni Test Precision Testing Result Sample 1 Sample 2 Sample 3 % ctni 0 ctni 1.03 ctni 2.05 agreement within run Site I % Site % Site % % agreement between run 100% 100% 100% info@demeditec.de 7

8 Correlation Assay between Plasma and Serum Sample Patient samples were prepared for matched samples of serum and heparinized plasma. Samples were grouped as four different levels; , , and <0.06 ng/ml of ctni. Ten samples in each group were tested using the ctni Test, and the results demonstrated in the following table: Analyte TnI Concentration range of samples (ng/ml) Serum Positive Serum Negative Plasma Positive Plasma Negative Correlation Assay between Whole blood and Plasma Sample To test correlation of assay results between plasma and whole blood samples in the ctni Test, normal whole blood samples were spiked with clinical specimens containing ctni to make three different desired levels between negative and 4 time then cut off value of ctni. Five samples in each group were tested using the ctni Test, prior to removal of cells and after removal of cells by centrifugation. The test results are demonstrated in the following table: Analyte TnI Concentration range of samples (ng/ml) Plasma Positive Plasma Negative Whole Blood Positive Whole Blood Negative Method Comparison Study Plasma samples were collected from 206 emergency room patients who were admitted because examination results suggested a cardiac event. Additionally, 50 samples were collected from outpatients who were not suspected of having a cardiac event. The 256 clinical samples were tested using the ctni Test and the Beckman Coulter Access test system. Results are summarized below. c TnI Test Results Compared to Quantitative Access Accu TnI Results (ng/ml) ctni Test Access Accu TnI Test Result >100 Positive Negative info@demeditec.de 8

9 16. BIBLIOGRAPHY Demeditec Troponin I (ctnl) Rapid Test DE004D098_DE004D Panteghini M, Pagani F, Bonetti G. (1999) the sensitivity of cardiac markers: an evidence-based approach. Clin Chem Lab Med. 37(11-12): Wu AH. (1997) Use of cardiac markers as assessed by outcomes analysis. Clin Biochem. 30(4): Apple FS. (1992) Acute myocardial infarction and coronary reperfusion. Serum cardiac markers for the 1990s. Am J Clin Pathol. 97(2): Alan H.B. Wu, Fred S. Apple, W. Brian Gibler, Robert L. Jesse, Myron M. Warshaw, and Roland Valdes, Jr. (1999) The National Academy of Clinical Biochemistry Laboratory Medicine Practice: Recommendations for the use of cardiac markers in coronary artery diseases. The National Academy of Clinical Biochemistry Laboratory Medicine Practice Guidelines 5. Mehegan JP, Tobacman LS. (1991) Cooperative interactions between troponin molecules bound to the cardiac thin filament. J Biol Chem. 266(2): Bodor GS, Porter S, Landt Y, Ladenson JH (1992) Development of monoclonal antibodies for an assay of cardiac troponin-i and preliminary results in suspected cases of myocardial infarction. Clin Chem. 38(11): Adams JE 3rd, Bodor GS, Davila-Roman VG, Delmez JA, Apple FS, Ladenson JH, Jaffe AS (1993) Cardiac troponin I. A marker with high specificity for cardiac injury. Circulation. 88(1): Adams JE 3rd, Sicard GA, Allen BT, Bridwell KH, Lenke LG, Davila-Roman VG, Bodor GS, Ladenson JH, Jaffe AS (1994) Diagnosis of perioperative myocardial infarction with measurement of cardiac troponin I. N Engl J Med. 330(10): Mair J, Morandell D, Genser N, Lechleitner P, Dienstl F, Puschendorf B. (1995) Equivalent early sensitivities of myoglobin, creatine kinase MB mass, creatine kinase isoform ratios, and cardiac troponins I and T for acute myocardial infarction. Clin Chem. 41(9): Mair J, Genser N, Morandell D, Maier J, Mair P, Lechleitner P, Calzolari C, Larue C, Ambach E, Dienstl F, Pau B, Puschendorf B.(1996) Cardiac troponin I in the diagnosis of myocardial injury and infarction. Clin Chim Acta. 245(1): Antman EM, Tanasijevic MJ, Thompson B, Schactman M, McCabe CH, Cannon CP, Fischer GA, Fung AY, Thompson C, Wybenga D, Braunwald E.(1996) Cardiac-specific troponin I levels to predict the risk of mortality in patients with acute coronary syndromes. N Engl J Med. 335(18): The Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (2003) Approved Standard H03-A5; Procedure for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture, Fifth Edition. 13. The Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (2004) Approved Guideline H18; Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens, Third Edition. 14. Kazmierczak, S.,Catrou, P., Briley, K. (2000), Transient Nature of Interference Effects from Heterophile Antibodies: Examples of Interference with Cardiac Marker Measurements. Clin Chem Lab Med; 38(1):33-9 info@demeditec.de 9

10 1. VERWENDUNGSZWECK Der ctni-test ist ein immunologischer Schnelltest für die qualitative Bestimmung von kardialem Troponin I (ctni) in menschlichen Vollblut-, Serum- und Plasmaproben mit einer Nachweisgrenze von 0,5 ng/ml. Ein einzelner Test gibt keine Aussage über den Anstieg oder den Abfall von ctni und ist nicht für die Überwachung eines Myokardinfarkts (AMI) geeignet. Der Test dient als Hilfe bei der Diagnose von akutem AMI. Die Testergebnisse müssen vom Arzt zusammen mit weiteren Befunden und den klinischen Symptomen des Patienten interpretiert werden. 2. ZUSAMMENFASSUNG Wenn ein Myokardinfarkt (MI) in der hypoperfundierten Region das Myokards auftritt, können die Zellen in der Region nicht mehr mit Sauerstoff versorgt werden. Zelltod ist unvermeidlich, wenn nicht innerhalb Minuten der Sauerstoff zurückgeführt wird. Dies führt anschließend zur Freisetzung von bestimmten Proteinen aus dem Zytoplasma in den Blutstrom. Einige Proteine kommen ausschließlich in den Herzmuskelzellen vor und sind dort vorherrschend. Sie können als Herzmarker dienen und durch spezielle Immunoassays in den Blutproben von AMI-Patienten nachgewiesen werden. 1-3 ctni ist ein biochemischer Marker, zur Erkennung der frühen Phase der AMI, instabile Angina (UA) und Herzinsuffizienz (CHF) UA. Bei Troponin handelt es sich um einen kontraktilen, regulatorischen Proteinkomplex, der in den Skelett- und den Herzmuskeln auftritt. Der Troponinkomplex besteht aus drei charakteristischen Polypeptidkomponenten, Troponin I (TnI), Troponin T (TnT) und Troponin C (TnC), und spielt eine wesentliche Rolle bei der Übertragung der intrazellularen Calciumsignal-Aktin-Myosin-Interaktion. 5 TnC des Herzgewebes ist mit dem des Skelettgewebes identisch, aber TnI und TnT der kardialen Isoformen unterscheiden sich von denen der skelettalen Isoformen. Das ermöglicht die Entwicklung von herzspezifischen Antikörpern. 6 Außerdem erhöht sich der ctni-spiegel im Blut infolge einer Myokardschädigung oder Myokardnekrose. Daher wird ctni als Hilfe bei der Diagnose des Myokardinfarkt angewendet. 7-8 Studien über die Freisetzungskinetik zeigen, dass ctni kein Frühmarker für Myokardnekrose ist. Es tritt innerhalb 3 6 Stunden nach Einsetzen der Symptome im Serum auf, ähnlich wie bei der Freisetzung von CK-MB. ctni bleibt allerdings 4 9 Tage post-ami erhöht und 13 mal häufiger im Herzmuskel als CK-MB Zusätzlich zu seiner Nützlichkeit bei der Diagnose, liefern erhöhte ctni-spiegel prognostische Informationen und können einen Beitrag zur Ermittlung von Patienten mit einem erhöhten Todesrisiko leisten PRINZIP Der ctni-test ist ein immunchromatografischer Test für die qualitative Bestimmung von ctni in Vollblut, Serum und Plasma. Der Membranstreifen enthält eine Testlinie und eine Kontrolllinie: Streptavidin (T-Linie) und Kaninchen Anti-Ziege-IgG-Antikörper (C-Linie). Ein Farbpad, beladen mit biotinyliertem ctni-antikörper und kolloidalen Goldpartikel mit ctni-antikörper, wird am Ende der Membran platziert. Wenn eine Probe in die Probenvertiefung gegeben wird, bindet sich der Herzmarker, der in der Probe vorhanden ist, mit den spezifischen, mit Goldpartikeln gekoppelten Antikörpern. ctni in einer Probe bindet sowohl an den ctni-spezifischen, farbgekoppelten Antikörper, als auch an den biotinylierten Antikörper. Die Immunkomplexe bewegen sich entlang der Nitrozellulosemembran durch den Testlinienbereich und binden an, auf der Testlinie immobilisiertes, Streptavidin. Ungebundene Immunkomplexe passieren den Testlinienbereich und werden durch Kaninchen Anti-Ziegen-IgG-Antikörper als Kontrolllinie aufgefangen. Wenn sich die Konzentration dieses Markers in der Probe über der Nachweisgrenze befindet, erscheint eine rote Linie an der entsprechenden Testlinie. Auch die Kontrolllinie wird angezeigt. Wenn sich die Konzentration des Markers in der Probe unter der Nachweisgrenze befindet, ist nur die farbige Kontrolllinie im Testfenster zu sehen. Diese farbige Kontrolllinie muss stets an der Position der Kontrolllinie (C) erscheinen, damit das Testergebnis gültig ist. Ein Testergebnis ist nicht gültig, wenn die farbige Kontrolllinie nicht im Testfenster erscheint oder aber gar keine Linie zu sehen ist. info@demeditec.de 10

11 4. REAGENZIEN Demeditec Troponin I (ctnl) Rapid Test DE004D098_DE004D Der ctni-test enthält alle für den Nachweis von ctni in menschlichem Vollblut, Serum und Plasma erforderlichen Reagenzien. Der Test enthält einen an der Testlinie mit Streptavidin beschichteten Membranstreifen und ein Farbfeld mit biotinyliertem polyklonalem Ziege Anti-cTnI-Antikörper sowie mit spezifischen anti-ctni-antikörper gekoppelte kolloidale Goldpartikel. Ein 0,05%iger Natriumazid- Stabilisator und BSA-Protein befinden sich als Trockenreagenzien auf dem Farbfeld. 5. VORSICHTSMASSNAHMEN Nur zur professionellen In-vitro-Diagnostik bestimmt. Den Test nicht nach Ablauf des auf der Verpackung aufgedruckten Verfallsdatums verwenden. Den Test nicht verwenden, wenn der Folienbeutel beschädigt ist. Vermeiden Sie eine Kreuzkontamination der Proben, indem Sie für jede neue Probe einen neuen Probensammelbehälter verwenden. Lesen Sie den gesamten Ablauf vor der Testdurchführung sorgfältig durch. Die verbrauchten Testmaterialien sind gemäß den Bestimmungen von Bund, Ländern und Kommunen zu entsorgen. Die Tests nicht wiederverwenden. Feuchtigkeit und Temperatur können die Ergebnisse nachteilig beeinflussen. Der Test muss bis zur Verwendung im versiegelten Beutel bleiben. Gehen Sie mit allen Proben so um, als wenn sie Infektionserreger enthalten würden. Beachten Sie die festgelegten Vorsichtsmaßnahmen bei mikrobiologischen Gefahren während der gesamten Testdurchführung und befolgen Sie die Standardverfahren für die richtige Entsorgung der Proben. Essen, trinken oder rauchen Sie nicht in der Nähe der Proben oder der verwendeten Hilfsmittel. Tragen Sie angemessene Schutzkleidung, wie Laborkittel, Einweghandschuhe und Schutzbrille, wenn Sie die Proben testen. 6. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Den Test während der Zeit der Haltbarkeit bei +2 C C in der versiegelten Originalverpackung aufbewahren. Den Test vor direktem Sonnenlicht, Feuchtigkeit und Hitze schützen. Den Test unverzüglich nach Entnehmen der Testkassette aus dem Folienbeutel durchführen. Nach Ablauf des Haltbarkeitsdatums nicht mehr verwenden. Nicht einfrieren. Nicht nach Ablauf des Verfalldatums verwenden. info@demeditec.de 11

12 7. LIEFERUMFANG Demeditec Troponin I (ctnl) Rapid Test DE004D098_DE004D Testkassetten Einmaltransferpipette (80 µl) Packungsbeilage 8. BENÖTIGTE, ABER NICHT MITGELIEFERTE MATERIALIEN Stoppuhr Vollblut-, Serum- oder Plasmaröhrchen Positiv- und Negativkontrollmaterial 9. PROBENGEWINNUNG UND VORBEREITUNG Dieser Test kann für Vollblut-, Plasma- und Serumproben verwendet werden. Für die Gewinnung von Serumproben wird das Blut in einem Röhrchen ohne Antikoagulans auffangen und vor dem Zentrifugieren mindestens 25 Minuten für die Gerinnung stehen gelassen. Weiterhin können Vollblut- oder Plasmaproben mit Heparin oder EDTA als Antikoagulans versetzt und zum Testen verwendet werden. Sonstige Antikoagulanzien sind nicht untersucht worden. Jedes Labor muss die Angemessenheit seiner eigenen Blutabnahmeröhrchen und Serumabscheidungssysteme beurteilen und festlegen. Abweichungen der Blutabnahmesysteme zwischen den Herstellern und manchmal von Charge zu Charge können vorkommen. Nur klare, nicht hämolytische Proben dürfen verwendet werden. Die Proben müssen unter Standard-Laborbedingungen gewonnen werden. Optimale Ergebnisse werden erzielt, wenn die Patientenproben unverzüglich nach der Abnahme getestet werden. Vollblutproben müssen innerhalb von 4 Stunden nach der Abnahme verwendet werden. Plasma- oder Serumproben können 24 Stunden lang bei 2 8 o C gekühlt aufbewahrt werden. Falls die Testung nicht innerhalb von 24 Stunden durchgeführt werden kann, bzw. für das Verschicken von Proben, müssen diese bei 20 C oder kälter gefrieren. 12,13 Bis zu 0,1 % Natriumazid kann als Konservierungsmittel hinzugefügt werden, ohne die Testergebnisse zu beeinflussen. Gekühlte oder gefrorene Serum- oder Plasmaproben müssen vor dem Testen auf Raumtemperatur gebracht werden und homogen sein. info@demeditec.de 12

13 10. TESTDURCHFÜHRUNG Bringen Sie die Tests, Proben und/oder Kontrollen vor der Verwendung auf Raumtemperatur (20-30 C). 1. Probe gemäß Punkt Probengewinnung und -vorbereitung abnehmen. 2. Testkassette und Probe müssen vor dem Testen Raumtemperatur ( C) erreicht haben. 3. Den Test unmittelbar vor der Verwendung aus dem Folienbeutel nehmen. Den Test mit dem Namen des Patienten oder der Kontrollkennzeichnung versehen. 4. Mit der mitgelieferten Einmaltransferpipette 80 µl (siehe detaillierte Beschreibung in unten stehender Abbildung) oder quantitativer Laborpipette 80 µl Probe in die Probenvertiefung geben. 5. Bei 15 Minuten die Ergebnisse ablesen. Zur qualitativen Interpretation der Ergebnisse bitte weiter unter Interpretation der Ergebnisse nachlesen. Nach 15 Minuten die Ergebnisse nicht mehr ablesen. Gewinnung der Vollblutprobe mit der Einmaltransferpipette: 1. Schritt: Sammeln der Probe - das Pipettenende zusammendrücken - halten Sie die Pipettenspitze in die Probe - langsam das Pipettenende loslassen - die Probe füllt sich in die Sammelkapillare Alles überschüssige Probenvolumen sollte am unteren Rand des Überlaufes sein (A). korrekte Volumenaufnahme A B inkorrekte Volumenaufnahme C D E 2. Schritt: Ausstoßen der Probe genau 80 µl (A), (B) - zu wenig Volumen (C) kann zu einer Verzögerung der Probenmigration und Chromatographieproblemen führen - überschüssiges Volumen (D), (E) kann zu einer Überflutung des Teststreifen führen - Halten Sie die Einmaltransferpipette über die Probenöffnung der Testkassette - Drücken Sie das Pipettenende zusammen, bis die Sammelkapillare vollständig entleert ist. Nicht den Überlauf drücken info@demeditec.de 13

14 11. INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Die Ergebnisse des ctni-tests werden visuell, mit bloßem Auge ermittelt und gemäß der vorgegebenen Nachweisgrenze von 0,5 ng/ml für ctni interpretiert. Der cut-off von 0,5 ng/ml wurde durch Vergleich mit dem quantitativen Assaysystem von Beckman Coulter, Access AccuTnI TM Assay, ermittelt. Dieser Grenzwert kann möglicherweise anders ausfallen, wenn er mit einem anderen quantitativen Assaysystem als dem von Beckman Coulter verglichen wird. Wir empfehlen die Erstellung einer neuen Korrelation, falls ein anderes quantitatives Assaysystem als das von Beckman Coulter angewendet wird. Abbildung ähnlich! Positiv*: Zwei deutlich erkennbare Linien werden sichtbar. Eine rote oder rötliche Linie liegt im Kontrollbereich (C) und eine weitere im Testbereich (TnI). Eine rote Linie im Testbereich zeigt an, dass die ctni Konzentration am oder über den cut-off liegt. Die Intensität der roten T-Linie kann schwächer oder stärker als die Kontrolllinie sein. *Wichtiger Hinweis: Der Farbton der Linie im Testbereich (TnI) kann variieren, bereits eine schwach rote T-Linie ist als positives Ergebnis zu interpretieren. Negativ: Nur eine rote Linie wird im Kontrollbereich (C) sichtbar. Die Konzentration des ctni in der Probe ist unterhalb des Cutoff-levels. Ungültig: Die Kontrolllinie (C) wird nicht ausgebildet. Sollte in 15 Minuten (Ablesezeit) keine Linie im Kontrollbereich erscheinen, ist das Ergebnis ungültig, selbst wenn die Testergebnislinie sichtbar ist. Abweichungen von der korrekten Testdurchführung oder ein zu geringes Probevolumen können die Ursache hierfür sein. Überprüfen Sie noch einmal die Testdurchführung auf mögliche Fehler und wiederholen sie die Untersuchung mit einem neuen Test. Taucht das Problem erneut auf, setzen Sie sich bitte mit dem Hersteller in Verbindung. Hinweis: Eine sehr schwache T-Linie zeigt einen Troponinwert in der Probe in der Nähe des cut-offs an. Eine weitere Messung ist erforderlich, oder bestätigen Sie das Ergebnis mit einer anderen quantitativen Laboranalyse. Die Signalintensität korreliert nicht mit der Konzentration des Proteins in der Probe. Daher darf keine quantitative Auswertung basierend auf sie Intensität der T-Linie vorgenommen werden. Nach 15 Minuten kein Ergebnis mehr ablesen. 12. QUALITÄTSKONTROLLE Zur internen Verfahrenskontrolle erscheint eine rote Linie im Kontrollbereich (C). Diese zeigt an, dass die Probenmenge ausreichend war und das Verfahren korrekt durchgeführt wurde. Falls verfügbar, können auch externe Kontrollen verwendet werden, um zu gewährleisten, dass die Reagenzien ordnungsgemäß funktionieren und dass das Testverfahren korrekt befolgt wurde. Es ist empfehlenswert, für eine gute Labortestpraxis die Testdurchführung regelmäßig mit einer Kontrollsubstanz zu überprüfen. Nutzer müssen die entsprechenden lokalen Richtlinien zur Durchführung externer Qualitätskontrollen befolgen. 14

15 13. EINSCHRÄNKUNGEN DES TESTES 1. Der Test ist nur für professionelle In-vitro-Diagnostik vorgesehen. 2. Ein positives Testergebnis kann nur als Hinweis auf eine Myokardschädigung verstanden werden und erfordert weitere Bestätigung. Serienproben von Patienten mit Verdacht auf AMI zu verschiedenen Zeitpunkten sind ebenfalls empfehlenswert wegen der Verzögerung zwischen dem Beginn der Symptome und der Freisetzung der Herzmarkerproteine in den Blutstrom. 3. Wie bei allen diagnostischen Tests müssen alle Ergebnisse zusammen mit weiteren dem Arzt verfügbaren klinischen Informationen interpretiert werden. Ein negatives Ergebnis schließt die Möglichkeit eines bestehenden Myokardinfarkts zu keiner Zeit aus. 4. Wie bei allen diagnostischen Tests darf eine klinische Diagnose nicht auf der Grundlage der Ergebnisse eines einzelnen Tests vorgenommen werden. Das Testergebnis sollte in Verbindung mit weiteren klinischen Informationen wie klinischen Anzeichen und Symptomen und weiteren Testergebnissen zur Diagnose von AMI verwendet werden. Eine Bestätigung der Testergebnisse darf nur von einem Arzt zusammen mit klinischen Symptomen und Laborbefunden vorgenommen werden. 5. Proben mit ungewöhnlich hohen Titern bestimmter Antikörper wie humane Anti-Maus- bzw. humane Anti-Kaninchen-Antikörper beeinträchtigen bekanntermaßen die Funktion dieses Testes.14 Diese Studien wurden mit dem ctni-test allerdings noch nicht durchgeführt. 6. Einige Proben mit ungewöhnlich hohen Titern von heterophilen Antikörpern bzw. Rheumafaktor (RF) können das Testergebnis beeinträchtigen. Selbst wenn die Testergebnisse positiv sind, sollte eine weitere klinische Bewertung mit zusätzlichen, dem Arzt verfügbaren klinischen Informationen erwogen werden. 7. Es ist möglich, dass der Test keine Ergebnisse anzeigt wenn die Vollblutproben eine hohe Viskosität aufweisen bzw. wenn die Vollblutproben länger als 2 Tage aufbewahrt wurden. In diesem Fall muss der Test mit einer neuen Testkassette unter Verwendung einer Plasma- oder Serumprobe desselben Patienten wiederholt werden. 8. Falsch negative Testergebnisse: In seltenen Fällen können Autoantikörper die Antigen- Antikörperreaktion im Blut des Patienten während des Tests verhindern. Dies kann zu falsch negativen Testergebnissen führen. Bitte beachten Sie, dass dieses Problem allgemein bei allen Testverfahren auftreten kann, bei denen es um den Nachweis eines Proteins über eine Antikörperreaktion geht. 14. ERWARTETE WERTE Die Nachweisgrenze des ctni-tests wurden durch Vergleich mit dem quantitativen Assay von Beckman Coulter, Access AccuTnI TM Assay, ermittelt. Die Nachweisgrenze von TnI beträgt 0,5 ng/ml. Die Proben, die ctni in einer Konzentration gleich oder über dem ermittelten cut-off enthalten, ergeben bei Verwendung des ctni-tests positive Ergebnisse. Der cut-off kann möglicherweise anders ausfallen, wenn ein anderes quantitatives Assaysystem als das von Beckman Coulter verwendet wird. info@demeditec.de 15

16 15. LEISTUNGSMERKMALE Assay cut-off Patientenplasma, das ctni enthält, wurde in normalem menschlichem Serum genau oder ungefähr auf die Konzentration des Grenzwertes verdünnt. Analytenkonzentrationen in den verdünnten Proben wurden durch den quantitativen Assay, Access AccuTnI TM von Beckman Coulter bestätigt. Fünfzehn Testkassetten wurden für jede der Proben bei Konzentrationen von 0,31, 0,57 und 1,07 ng/ml ctni getestet. Die Ergebnisse werden in der folgenden Tabelle gezeigt. Die cut-off Konzentration wurde für ctni in der Höhe 0,5 ng/ml festgelegt. Analyt ctni Konz. bestimmt mit Access Assay (ng/ml) Test Ergebnis Negativ (n) Positiv (n) 0, , , Cutoff 0,5 ng/ml Studie zur Ermittlung der Wiederfindung Die Studie wurde mit, in normalem Humanserum verdünntem Patientenserum durchgeführt. Hohe Konzentrationen von ctni enthaltendes Patientenserum wurde mit normalem Humanserum verdünnt, um unterschiedliche Konzentrationen zu erhalten. Jede verdünnte Probe wurde unter Verwendung von ctni-test in 3 Replikaten getestet. Die in der Tabelle unten aufgeführten Daten zeigen die Übereinstimmung zwischen beobachteten und erwarteten Ergebnissen bei den einzelnen ctni- Konzentrationen. Analyte ctni Erwartende Konz. (ng/ml) Ermittelte durchschnittliche Konzentration Übereinstimmung mit den erwarteten Ergebnissen Gesamtwertungsquote (%) Analytische Spezifität Potenziell störende Substanzen wurden normalem Serum und Patientenserum (ctni 1,5-facher cut-off Wert) zugesetzt. Folgende Substanzen haben keinen Einfluss auf das Ergebnis des ctni-tests. Endogene Substanzen Substanz Bilirubin Hämoglobin Human Serum Albumin Triglyceride Konzentration 50 mg/dl 4000 mg/dl 10 g /dl 1250 mg/dl Der Test wurde auf Beeinträchtigung durch potenziell zu Kreuzreaktion führende endogene Proteine mit Konzentrationen bis zu 1000 ng/ml getestet. Potenziell zu Kreuzreaktion führende Proteine (siehe Tabelle) beeinträchtigen das Testergebnis nicht. Kreuzreaktion endogene Proteine Substanz kardiales Myosin (leicht kettig) kardiales Troponin T kardiales Troponin C Skelett Troponin I Konzentration 1000 ng/ml 1000 ng/ml 1000 ng/ml 1000 ng/ml info@demeditec.de 16

17 Präzisionstest Zwei klinische Studienzentren und ein interner Mitarbeiter bekamen blind etikettierte Serumproben. Hohe Konzentrationen von ctni enthaltende Patientenserumproben wurde mit Normalserum verdünnt, um positive Proben unterschiedlicher Konzentrationen zu erhalten. Eine normale Humanserumprobe wurde ebenfalls als Negativkontrolle des Tests bereitgestellt. An jedem Testort wurden fünf Aliquots aus jeder Probe getestet. Die in der Tabelle unten aufgeführten Ergebnisse zeigen 100% Übereinstimmung zwischen, sowie innerhalb der Testdurchgänge. Analyt ctni Testing Team Konzentration des Analyten (ng/ml) in jeder Probe und Testergebnis der Präzision ctni Probe 1 Probe 2 Probe 3 % ctni ctni - 1,03 + ctni - 2,05 + Übereinstimmung innerhalb der Testung Team % Team % Team % % Übereinstimmung innerhalb der Testung 100% 100% 100% Korrelation zwischen Plasma- und Serumprobe Patientenproben wurden für aufeinander abgestimmte Proben von Serum und heparinisiertem Plasma vorbereitet. Die Proben wurden in vier verschiedenen Stufen aufgeteilt: 1,2-1,8, 0,5-1,0, 0,3-0,5 und <0,06 ng/ml ctni. Zehn Proben in jeder Gruppe wurden mit Hilfe des ctni-tests getestet, die Ergebnisse wurden in der folgenden Tabelle aufgeführt: Analyt TnI Konzentrationsbereich der Probe (ng/ml) Serum Positiv Serum Negativ Plasma Positiv Plasma Negativ 1,2-1, ,5-1, ,3-0, Korrelation zwischen Vollblut- und Plasmaprobe Um die Korrelation der Testergebnisse zwischen Plasma- und Vollblutproben im ctni-test zu untersuchen, wurden normale Vollblutproben mit ctni enthaltenden, klinischen Proben versetzt. Es entstanden drei verschiedene Stufen zwischen negativ und dem 4-fachen cut-off von ctni. Fünf Proben in jeder Gruppe wurden mit Hilfe des ctni-tests vor und nach der Zellentfernung durch Zentrifugieren getestet. Die Testergebnisse sind in der folgenden Tabelle aufgeführt: Analyt TnI Konzentrationsbereich der Probe (ng/ml) Plasma Positiv Plasma Negativ Vollblut Positiv Vollblut Negativ 1,3-2, ,5-1, ,1-0, info@demeditec.de 17

18 Methodenvergleichsstudie Von 206 Patienten, die wegen vorausgegangenen Untersuchungsergebnissen in die Notaufnahme eingeliefert wurden, wurden Plasmaproben gewonnen. Untersuchungen deuteten auf ein kardiales Ereignis hin. Außerdem wurden 50 Proben von ambulanten Patienten gewonnen, bei denen kein kardiales Ereignis vermutet wurde. Die 256 klinischen Proben wurden mit Hilfe des ctni-tests und des Beckman Coulter Access-Testsystems untersucht. Dabei ergaben sich folgende Ergebnisse: ctni Testergebnis verglichen mit den quantitativen Ergebnissen des Access Accu TnI (ng/ml) ctni Access Accu TnI Testergebnis 0,023 0,29 0,3 0,47 0,52 0,6 0,61 - >100 Positiv Negativ info@demeditec.de 18

19 16. BIBLIOGRAPHIE Demeditec Troponin I (ctnl) Rapid Test DE004D098_DE004D Panteghini M, Pagani F, Bonetti G. (1999) the sensitivity of cardiac markers: an evidence-based approach. Clin Chem Lab Med. 37(11-12): Wu AH. (1997) Use of cardiac markers as assessed by outcomes analysis. Clin Biochem. 30(4): Apple FS. (1992) Acute myocardial infarction and coronary reperfusion. Serum cardiac markers for the 1990s. Am J Clin Pathol. 97(2): Alan H.B. Wu, Fred S. Apple, W. Brian Gibler, Robert L. Jesse, Myron M. Warshaw, and Roland Valdes, Jr. (1999) The National Academy of Clinical Biochemistry Laboratory Medicine Practice: Recommendations for the use of cardiac markers in coronary artery diseases. The National Academy of Clinical Biochemistry Laboratory Medicine Practice Guidelines 5. Mehegan JP, Tobacman LS. (1991) Cooperative interactions between troponin molecules bound to the cardiac thin filament. J Biol Chem. 266(2): Bodor GS, Porter S, Landt Y, Ladenson JH (1992) Development of monoclonal antibodies for an assay of cardiac troponin-i and preliminary results in suspected cases of myocardial infarction. Clin Chem. 38(11): Adams JE 3rd, Bodor GS, Davila-Roman VG, Delmez JA, Apple FS, Ladenson JH, Jaffe AS (1993) Cardiac troponin I. A marker with high specificity for cardiac injury. Circulation. 88(1): Adams JE 3rd, Sicard GA, Allen BT, Bridwell KH, Lenke LG, Davila-Roman VG, Bodor GS, Ladenson JH, Jaffe AS (1994) Diagnosis of perioperative myocardial infarction with measurement of cardiac troponin I. N Engl J Med. 330(10): Mair J, Morandell D, Genser N, Lechleitner P, Dienstl F, Puschendorf B. (1995) Equivalent early sensitivities of myoglobin, creatine kinase MB mass, creatine kinase isoform ratios, and cardiac troponins I and T for acute myocardial infarction. Clin Chem. 41(9): Mair J, Genser N, Morandell D, Maier J, Mair P, Lechleitner P, Calzolari C, Larue C, Ambach E, Dienstl F, Pau B, Puschendorf B.(1996) Cardiac troponin I in the diagnosis of myocardial injury and infarction. Clin Chim Acta. 245(1): Antman EM, Tanasijevic MJ, Thompson B, Schactman M, McCabe CH, Cannon CP, Fischer GA, Fung AY, Thompson C, Wybenga D, Braunwald E.(1996) Cardiac-specific troponin I levels to predict the risk of mortality in patients with acute coronary syndromes. N Engl J Med. 335(18): The Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (2003) Approved Standard H03-A5; Procedure for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture, Fifth Edition. 13. The Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (2004) Approved Guideline H18; Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens, Third Edition. 14. Kazmierczak, S.,Catrou, P., Briley, K. (2000), Transient Nature of Interference Effects from Heterophile Antibodies: Examples of Interference with Cardiac Marker Measurements. Clin Chem Lab Med; 38(1):33-9 Diese Gebrauchsanweisung entspricht dem letzten Stand der Technik. Änderungen ohne Vorankündigung vorbehalten! info@demeditec.de 19

20 SYMBOLS USED WITH DEMEDITEC ASSAYS Symbol English Deutsch Francais Espanol Italiano RUO European Conformity Consult instructions for use In vitro diagnostic device For research use only Gebrauchsanweisung beachten In-vitro-Diagnostikum Nur für Forschungszwecke Conforme aux normes européennes Consulter les instructions d utilisation Ussage in vitro Diagnostic Seulement dans le cadre de recherches Conformidad europea Consulte Instrucciones Diagnóstico in vitro las Sólo para uso en investigación Conformità europea Catalogue number Katalog-Nr. Référence Número de catálogo No. di Cat. Lot. No. / Batch code Chargen-Nr. No. de lot Número de lote Lotto no Contains sufficient for <n> tests/ Note warnings and precautions Storage Temperature Expiration Date Ausreichend für n Ansätze Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen beachten Lagerungstemperatur CE-Konfirmitätskennzeichnung Mindesthaltbarkeitsdatum Contenu suffisant pour n tests Avertissements et mesures de précaution font attention Temperature conservation de Contenido suficiente para <n> ensayos Tiene en cuenta advertencias y precauciones Temperatura conservacion de Consultare le istruzioni per l uso Per uso Diagnostica in vitro Solo a scopo di ricerca Contenuto sufficiente per n saggi Annoti avvisi e le precauzioni Temperatura conservazione Date limite d utilisation Fecha de caducidad Data di scadenza Legal Manufacturer Hersteller Fabricant Fabricante Fabbricante Distributed by Distributor Vertreiber Distributeur Distribuidor Distributtore di info@demeditec.de 20