GEBRAUCHSANWEISUNG GEBRAUCHSFERTIGE DIP- SLIDE-MEDIEN DA Rev.: Sept BD BBL GO Slide

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1 GEBRAUCHSANWEISUNG GEBRAUCHSFERTIGE DIP- SLIDE-MEDIEN DA Rev.: Sept 2006 BD BBL GO Slide VERWENDUNGSZWECK BBL GO Slide ist ein zweiseitiges Objektträgersystem zur Isolierung von Neisseria gonorrhoeae aus klinischen Proben. GRUNDLAGEN UND ERLÄUTERUNG DES VERFAHRENS Mikrobiologische Methode. Gonorrhö ist eine Geschlechtskrankheit, die von Neisseria gonorrhoeae (= Gonokokken) verursacht wird. 1-3 Obgleich die Infektion häufig anhand ihrer klinischen Symptome diagnostiziert werden kann, ist für eine geeignete Antibiotikatherapie eine Isolierung des Erregers erforderlich. Zudem ist bei asymptomatischen Patienten oder bei Patienten mit einer chronischen Infektion eine mikrobiologische Diagnose erforderlich. Neisseria gonorrhoeae ist anspruchsvoll, da es Cystein, Purine, Pyrimidine und eine abbaubare Energiequelle (z.b. Glucose oder Pyruvat) zum Wachsen braucht; auxotrophe Stämme können zudem weitere Nährstoffe benötigen, die nicht üblicherweise in den Kulturmedien enthalten sind. Aus diesem Grund wird im Allgemeinen Schokoladenagar, welchem IsoVitaleX zugesetzt wird, als Basismedium verwendet. Das Wachstum des Organismus wird zudem durch eine erhöhte Luftfeuchtigkeit und Kohlendioxid gefördert. 1-4 Es kommt häufig zu einer Autolyse, nachdem Neisseria gonorrhoeae die stationäre Wachstumsphase erreicht hat, gefolgt von einer schnellen Abnahme der Lebensfähigkeit der Kultur. Aus diesem Grund sind geeignete Transport- und Wachstumsmedien und von noch größerer Bedeutung ein schneller Transport und eine unverzügliche Verarbeitung unbedingt erforderlich, um eine hohe Rate positiver Proben zu erhalten. Die beiden Medien auf dem BBL GO Slide basieren auf einem modifizierten GC-Agar. Während das Medium 1 selektiv ist für pathogene Neisseriae und die meisten der Begleitorganismen in der Probe hemmt, ist das Medium 2 nichtselektiv und fördert das Wachstum aller Bakterien und Pilze. Medium 2 wird hauptsächlich für die Isolierung von N. gonorrhoeae-stämmen verwendet, die gegenüber den im Medium 1 enthaltenen Hemmstoffen empfindlich sind. In beiden Medien liefert Proteose-Pepton Nr. 3 die allgemeinen Nährstoffe. IsoVitaleX liefert Vitamine, Aminosäuren, Purine, Pyrimidine, und mit Glycose eine abbaubare Energiequelle. Maisstärke absorbiert möglicherweise in der Probe enthaltene toxische Substanzen. Natriumchlorid wahrt das osmotische Gleichgewicht. Im Medium 1 hemmen Vancomycin, Colistin und Trimethoprim die begleitenden Bakterien; Primaricin (Natamyin) hemmt Pilze. Nach der Inokulation wird jedem Röhrchen eine CO 2 -Tablette hinzugefügt, um eine CO 2 - angereicherte Atmosphäre zu erzeugen. BBL GO Slide wird zur Isolierung von N. gonorrhoeae aus klinischen Proben verwendet. Nach der Inokulation kann BBL GO Slide von der Arztpraxis zur weiteren Verarbeitung in ein Analyselabor eingeschickt werden. DA

2 REAGENZIEN BBL GO Slide Zusammensetzungen* pro L destilliertem Wasser Medium 1 BD IsoVitaleX Anreicherung Bacto Proteose Peptone No. 3 15,0 g Vitamin B 12 0,01 g Maisstärke 1,0 L-Glutamin 10,0 Dikaliumhydrogenphosphat 4,0 Adenin 1,0 Kaliumdihydrogenphosphat 1,0 Guaninhydrochlorid 0,03 Natriumchlorid 5,0 p-aminobenzoesäure 0,013 Hämoglobin 10,0 Nikotinamidadenindinukleotid 0,25 Agar 13,5 Thiaminpyrophosphat 0,1 Vancomycin 0,004 Eisen (III)-nitrat 0,02 Colistinsulfat 0,009 Thiaminhydrochlorid 0,003 Trimethoprimlactat 0,006 Cysteinhydrochlorid 25,9 Pimaricin (= Natamycin) 0,2 L-Cystin 1,1 IsoVitaleX-Anreicherung 10,0 ml Glucose 100,0 ph 7,2 ± 0,2 *Nach Bedarf abgestimmt und/oder ergänzt auf die geforderten Testkriterien. Medium 2 enthält dieselben Nährstoffe und weist denselben ph-wert auf wie das Medium 1, enthält jedoch kein Vancomycin, Colistin, Trimethoprim und Pimaricin. Die CO 2 -Tabletten enthalten als aktive Bestandteile (in einer Basis aus Carnauba-Wachs and Magnesiumstearat): Zitronensäure 24,8 % Natriumhydrogencarbonat 26,7 % Jede Verpackungseinheit enthält 10 Tabletten in einer Blisterverpackung. VORSICHTSMASSNAHMEN. Nur für den professionellen Gebrauch. BBL GO Slide bei Anzeichen von mikrobieller Kontamination, Verfärbung, Eintrocknen, Rissen oder sonstigen Anzeichen von Produktverfall nicht verwenden. Während des gesamten Verfahrens aseptische Arbeitsmaßnahmen beachten und Schutzmaßnahmen gegen biologisches Gefahrenmaterial treffen. Schutzhandschuhe beim Entnehmen von und im Umgang mit Proben und positiven Objektträgern mit infektiösen Stoffen tragen. Hinweise zu Verfahren unter Einhaltung aseptischer Arbeitsweise, Biogefährdung und Entsorgung des gebrauchten Produkts sind den ALLGEMEINEN GEBRAUCHSANLEITUNGEN zu entnehmen. Bei der Verwendung von BBL GO Slide als Transportmedium von der Arztpraxis zum Diagnoselabor die lokalen Bestimmungen für den Transport infektiöser Proben beachten. Warnung: CO 2 -Tabletten nicht einnehmen! AUFBEWAHRUNG UND HALTBARKEIT Nach Erhalt BBL GO Slide bis unmittelbar vor dem Gebrauch im Dunkeln bei 2 8 C in der Originalverpackung lagern. Einfrieren, Überhitzen, Austrocknen und Temperaturschwankungen vermeiden. Die Objektträger können bis zum Verfallsdatum (s. Kennzeichnung auf der Verpackung) inokuliert und entsprechend den empfohlenen Inkubationszeiten inkubiert werden. Ungeöffnete Objektträger aus geöffneten Packungen können bei Lagerung in einem sauberen Bereich bei 2 8 C bis zum Verfallsdatum verwendet werden. Wenn die Objektträger geöffnet wurden, müssen sie umgehend verbraucht werden. Die CO 2 -Tabletten bei 2 bis 8 C aufbewahren. Zu beachten ist, dass die Tabletten direkt nach dem Öffnen der Blisterverpackung verwendet werden müssen. DA

3 QUALITÄTSSICHERUNG DURCH DEN ANWENDER Supensionen der unten aufgeführten Stämme vorbereiten, die einem McFarland-Standard von 0,5 entsprechen. Für jeden Organismus ein Röhrchen (ausreichend breit, um die Einführung eines BBL GO Slide-Agarträgers zu ermöglichen) mit 20 bis 25 ml steriler Kochsalzlösung vorbereiten und 1 ml der oben genannten Suspension des Stammes zugeben. Einen BBL GO Slide öffnen, den Agarträger entnehmen, kurz in die Teststammsuspension tauchen, eine CO 2 - Tablette in die Röhrchen für die Neisseria-Stämme geben und wie unter Testverfahren beschrieben fortfahren. 24 bis 48 h bei 35 bis 37 C inkubieren. Agaroberflächen wie unter Ergebnisse und Interpretation beschrieben auf Wachstum kontrollieren. Teststamm Medium 1 Medium 2 Neisseria gonorrhoeae Wachstum Wachstum ATCC Neisseria sicca Vollständig gehemmtes Wachstum Wachstum ATCC 9913 Escherichia coli Teilweise bis vollständig gehemmtes Wachstum Wachstum ATCC Proteus mirabilis Teilweise bis vollständig gehemmtes Wachstum; Wachstum ATCC gehemmtes Schwärmen Enterococcus faecalis Teilweise bis vollständig gehemmtes Wachstum Wachstum ATCC Staphylococcus epidermidis Teilweise bis vollständig gehemmtes Wachstum Wachstum ATCC Candida albicans ATCC Teilweise bis vollständig gehemmtes Wachstum Wachstum VERFAHREN Mitgeliefertes Arbeitsmaterial BBL GO Slide. Mikrobiologisch kontrolliert. CO 2 -Tabletten; eine Tablette pro Röhrchen, um eine CO 2 -angereicherte Atmosphäre zu erzeugen. Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial Zusätzliche Kulturmedien, Reagenzien und Geräte nach Bedarf. Oxidase Dropper Reagent, 50 Ampullen, Best.-Nr ; alternativ kann BD DrySlide Oxidase Test (Best.-Nr , 75 Tests) verwendet werden. Probenarten BBL GO Slide kann zur Isolierung von Neisseria gonorrhoeae aus allen Arten klinischer Proben verwendet werden. Häufig enthalten Proben Abstriche aus dem Urogenitalbereich, dem Rektum und dem Oropharynx (siehe auch LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN). 1-4 Probenentnahme Dacron-Tupfer verwenden. Watte- und Kalziumalginat-Tupfer sollten nicht verwendet werden, da sie Reste von Stoffen enthalten können, die für N. gonorrhoeae toxisch sind. 1 Proben bei beiden Geschlechtern aus der Harnröhre, aus der Cervix, den Bartholinischen Drüsen, dem Rektum oder dem Rachen mit einem sterilen Tupfer oder einer Öse entnehmen. Einzelheiten sind die Literatur zu entnehmen. 1-4 Für eine optimale Isolierung BBL GO Slide direkt nach der Probenentnahme inokulieren. Testverfahren 1. Die Agaroberflächen bei geschlossenem BBL GO Slide-Röhrchen sichtprüfen. Die Objektträger mit Kontamination bzw. die, auf denen die Medien schrumpfen, entsorgen. 2. Das Röhrchen mit dem Patientennamen, der Probennummer und dem Inokulationsdatum beschriften. 3. Die Abdeckung abschrauben und den Objektträger ohne die Agaroberflächen zu berühren aus dem Kunststoffröhrchen nehmen. DA

4 4. Zuerst das Medium 1 und dann das Medium 2 mit einem Tupfer oder einer Impföse inokulieren. Der Tupfer sollte unter leichtem Druck über beide Agaroberflächen gerollt werden. Mit der Öse entnommene Proben werden über beide Agarflächen ausgestrichen. 5. Eine CO 2 -Tablette in jedes Röhrchen geben. Die Tablette nicht auf die Agarmedien auf dem Kunststoffträger geben. Kein Wasser zugeben! 6. Den inokulierten Objektträger in das entsprechende Kunststoffröhrchen geben und den Schraubverschluss fest verschließen. Die hohe Luftfeuchtigkeit im Kunststoffröhrchen führt zu einer Freisetzung des für das Wachstum der Gonokokken erforderlichen CO 2 s aus der Tablette. Alternativ den Objektträger in einem CO 2 -Inkubator inkubieren. Dabei die Verschlusskappen leicht gelöst lassen, um einen Gasaustausch zu ermöglichen. 7. Wenigstens 24 h bei 35 bis 37 C inkubieren. Wenn kein Wachstum festzustellen ist, sollte die Inkubationszeit auf 48 oder 72 h verlängert werden, bevor eine Kultur als negativ gewertet werden kann. Zu beachten ist, dass BBL GO Slide nach der Inokulation, jedoch vor der Inkubation in ein Analyselabor eingeschickt werden sollte. Das Einsenden von bereits inkubierten Objektträgern in ein Analyselabor wird nur empfohlen, wenn diese innerhalb von 24 h zugestellt und verarbeitet werden können. Ergebnisse und Interpretation Nach der Inkubation den Objektträger vorsichtig zur Interpretation aus dem Röhrchen nehmen. Bei dem gesamten Kontrollvorgang aseptische Vorgehensweisen beachten. Es wird empfohlen, während der Kontrolle sterile Handschuhe zu tragen. Agarflächen nicht berühren! Wachstum zeigt sich durch die Bildung von Kolonien auf beiden Medien des Röhrchens. Jede Koloniebildung von Neisseria gonorrhoeae bedeutet eine Infektion. Medium 1: Die Kolonien von Neisseria gonorrhoeae sind klein, durchscheinend (wie Tautropfen) und oxidasepositiv. Die Kultur wird als negativ gewertet, wenn nach einer Inkubationszeit von 72 h keine Koloniebildung erkennbar ist. In Ausnahmefällen können antibiotikaresistente Streptokokken oder Enterobacteriaceae auf dem Medium 1 wachsen. Diese lassen sich von Gonokokken durch die Form ihrer Kolonien und eine negative Oxidasereaktion unterscheiden. Medium 2: Da es sich um ein nichtselektives Medium handelt, können alle Pilze und Bakterien auf diesem Medium wachsen. Wenn auf dem Medium 1 kein Wachstum von N. gonorrhoeae sichtbar ist, sollte das Medium 2 auf Wachstum dieser Erreger überprüft werden, da einige Gonokokkenstämme gegenüber den in Medium 1 vorhandenen Antibiotika empfindlich sind und aus diesem Grund nur auf dem Medium 2 wachsen. Zur Bestätigung der Diagnose wie folgt vorgehen: 1. Wenn sich ein schwaches Wachstum von N. gonorrhoeae (eine bis drei isolierte Kolonien) auf den Medien entwickelt habt, sollte eine Subkultur für weitere Tests angelegt werden (beispielsweise erneut eine Subkultur auf einem frischen BBL GO Slide). 2. Wenn mehr als drei Kolonien vorhanden sind, sollte eine Kolonie einem Oxidasetest unterzogen werden (für nähere Angaben zu den lieferbaren Produkten siehe den Abschnitt Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial). Die Gonokokkenkolonien oder das Koloniematerial nehmen innerhalb von 10 bis 30 sec eine dunkelblaue bis schwarze Farbe an. Abgesehen von Gonokokken sind andere Mikroorganismen, wie beispielsweise Pseudomonas aeruginosa, ebenfalls oxidasepositiv. Das Wachstum dieser Bakterien ist auf dem Medium 1 dieses Objektträgers jedoch fast vollständig gehemmt. Dei Unterscheidung von Pseudomonas aeruginosa von Gonokokken ist mithilfe einer Gramfärbung sowie mikroskopisch möglich. In der Gramfärbung erscheint Neisseria gonorrhoeae als kleine, gramnegative Diplokokken, während P. aeruginosa als gramnegatives Stäbchen erscheint. Für die vollständige Identifizierung mit biochemischen und/oder serologischen Methoden und für Empfindlichkeitstests sollte der Objektträger in ein bakteriologisches Labor eingeschickt werden. Positive Objektträger unverzüglich versenden! DA

5 Nach dem Gebrauch und vor der Entsorgung müssen alle verwendeten Objektträger und alles andere kontaminierte Material autoklaviert oder verbrannt werden. Für nähere Einzelheiten siehe das Dokument ALLGEMEINE GEBRAUCHSANLEITUNG. LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN BBL GO Slide wird zur Isolierung von Neisseria gonorrhoeae aus klinischen Proben verwendet. Die Medien auf diesem System sind gängige Rezepturen für die Isolierung und Kultivierung von Neisseria gonorrhoeae. 1,3,4 Neisseria gonorrhoeae ist sehr anfällig für ungünstige Umgebungsbedingungen. Wenn inokulierte oder inokulierte und inkubierte Objektträger zur weiteren Diagnose in ein Labor eingeschickt werden sollen, muss dies unmittelbar nach der Inokulation oder nach dem Ablesen erfolgen. Die optimale Transporttemperatur beträgt C. Nicht kühlen! 1,3,4 Selten können andere Organismen als Neisseria gonorrhoeae (wie z.b. Neisseria lactamica) auf dem selektiven Medium (Medium 1) des Objektträgers wachsen; diese können N. gonorrhoeae ähneln. 1 Eine Unterscheidung dieser Spezies ist nur mithilfe von biochemischen oder immunologischen Methoden möglich. Zu beachten ist, dass dies hauptsächlich bei Proben aus dem Oropharynx eintritt, da nicht pathogene Neisseria-Spezies regulärer Bestandteil der Flora in den oberen Atemwegen sind. Medium 2 ist nichtselektiv; auf diesem Medium kann N. gonorrhoeae von normaler Flora überwachsen werden. Wenn Mischkulturen erhalten werden, kann das Anlegen von Subkulturen auf geeigneten Agarmedien erforderlich sein. Zu beachten ist, dass morphologisch ähnliche, jedoch nicht pathogene Neisseria-Spezies und verwandte Organismen einen regulärer Bestandteil der menschlichen Mundflora darstellen und auf dem Medium 2 aus Proben, wie beispielsweise Mundabstrichen, wachsen können. BBL GO Slide ist für die Erstisolierung und den Transport bestimmt. Für weitere Tests und besonders, wenn Mischkulturen auf den Medien dieses Systems entstehen, müssen Subkulturen auf einem geeigneten Agarmedium angelegt werden, um die für eine Identifizierung und für Empfindlichkeitstests unbedingt erforderlichen Reinkulturen zu gewinnen. 1,3 Es ist zu beachten, dass weitere Tests, wie beispielsweise biochemische und/oder mikroskopische Verfahren, erforderlich sind, um die Identifizierung der auf diesem Objektträger isolierten Pathogene zu vervollständigen. 1,3 Die meisten dieser Methoden sind nur in Diagnoselabors durchführbar und können üblicherweise nicht in einer Arztpraxis durchgeführt werden. Aus diesem Grund sollten alle Dip-Slides mit zweifelhaften oder eindeutig positiven Ergebnissen in ein geeignetes Analyselabor eingesendet werden. BBL GO Slide ist nicht für die Isolierung von anderen Pathogenen als Neisseria gonorrhoeae bestimmt. LITERATUR 1. Janda, W.M., and J.S. Knapp Neisseria and Moraxella catarrhalis. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Halle, E. et al Genitalinfektionen Teil I: Infektionen des weiblichen und männlichen Genitaltrakts. In: Mauch, H., R. Lüttiken, and S. Gatermann (eds.). MiQ Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 10. Urban und Fischer, München. 3. Halle, E. et al Genitalinfektionen Teil II: Infektionserreger. In: Mauch, H., R. Lüttiken, and S. Gatermann (eds.). MiQ Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol 11. Urban und Fischer, München. 4. Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. DA

6 VERPACKUNG/LIEFERBARE PRODUKTE BBL GO Slide Best.-Nr Objektträger WEITERE INFORMATIONEN Weitere Informationen erhalten Sie bei Ihrer örtlichen BD-Vertretung. Becton Dickinson GmbH BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: , Fax: Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès Le Pont de Claix/France Tel: Fax: BD, BD logo, BBL, IsoVitaleX and DrySlide are trademarks of Becton, Dickinson and Company. Bacto is a trademark of Difco Laboratories, divison of Becton, Dickinson and Company. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection Becton, Dickinson and Company DA