Erythrozytäre Antikörper

Transkript

1 U N I V E R S I T Ä T S M E D I Z I N B E R L I N Erythrozytäre Antikörper - gehören zur IgG, IgM und selten zur IgA-Klasse - direkt aggl. Antikörper (komplette) IgM, selten IgG oder IgA - nicht aggl. Antikörper IgG, IgA und selten IgM - Komplementaktivierende Antikörper IgM, selten IgG 3 oder IgG 1, IgA? - Wärmeantikörper 0 50 o C - Kälteantikörper < 37 o C Erythrozytäre Antikörper Isoagglutinine Alloantikörper Autoantikörper medikamentös induzierte Antikörper 1

2 Isoagglutinine IgM, IgG, (IgA) hämolytische Transfusionsreaktionen (HTR) klinisch irrelevant IgG 2, IgG 4, Anti-A 1 Mhn (IgG 1 und IgG 3 ) Alloantikörper IgG, IgM, (IgA) natürliche Antikörper IgM, IgG, (IgA) Immunantikörper IgG Hämolytische Transfusionsreaktionen und/oder Morbus haemolyticus neonatorum Ja Häufig Vereinzelt Nicht bekannt Nein Anti Anti-S, -s, Anti-M, - N Anti-GIL Nur in A, -B -U der Kälte wirksam Anti-Rh (D,C,c,E,e) Anti-Colton Anti-Lewis Anti-MAM Nur im Enzym wirksam Anti-Kell Anti-Vell Anti-Indian AntiABTI Anti-LW Anti-Kidd Anti-Lan Anti-Dombrock Anti-Scianna Anti-Duffy Anti-AnWj Anti-Gerbich Anti-P, -PP1p K Anti-OK a Anti-Knops Anti-H bei Oh Phenotyp Anti-Diego Anti-Cost Anti-Lutheran Anti-Cromer Anti-Yt a Anti-Jr a Anti-JMH Anti-Xg a Anti-Sd a Anti-Chido Anti-Rodgers Anti-HLA Anti-PEL Anti-Er Anti-EMM Anti-LKE Anti-Duclas Anti-MER 2 2

3 Immunhämolyse intravasal intra & extra extravasal Alle Immunhämolysen (IH) werden durch Antikörper mit oder ohne Komplementaktivierung verursacht. 3

4 C 3dg 4 Nachweis erythrozytärer AK Agglutination -Supplement z.b. Albumin - Enzym - Antiglobulintest indirekt -ELISA - FACS - Absorption - Hämolyse - Phagozytose - Hemmung - Inaktivierung direkte Agglutination z.b. Isoagglutinine Dualer Coombstest zum Nachweis inkompletter IgM IgM-Erythrozyten + IgG Rabbit-Anti-human IgM = negativ 3 x Waschen (im Röhrchen) 50 µl Erythrozyten 1% NaCl-Gelkarte 20 µl IgG-Ziege-Anti-Rabbit IgG 4

5 Hämolysetest 20 µl Ery 50% µl PS µl Komplement Alloantikörper PH o C Wärme- und Kälteautoantikörper PH o C bzw 20 o C Donath-Landsteiner Test PH o C/30 Min + 37 o C/30 Min Säurehämolysetest Ham-Test 20 µl Patientenery 50% µl Komplement 37 o C / 30 Min. PNH alle Testseren pos. HEMPAS 2 3 / 10 pos. Absorption 1. 1 ml Erythrozyten + 1 ml Serum 2. 1 ml Erythrozyten + 1. Absorbat 3. 1 ml Erythrozyten + 2. Absorbat 5

6 Hemmung Testserum / Eluat + antigenhaltige Lösung z.b. 100 µl PS (1:20) + inaktiviertes Sputum / Milch / rekombinantes Ag / Anti-IgG, -IgA und -IgM 1 h / 37 o C Elution iv vivo oder in vitro sensibilisierte Erys Hitze 30 50% Ausbeute falsch neg. < 20% Säure RT > 50% Ausbeute falsch neg. > 20% Chloroform Äther usw. > 50% Ausbeute falsch neg. > 20% z.b. IgM z.b. IgM Hitze Elution 1 Teil Ery + 1 Teil 6 8% Alb 56 o C / 10 Min. 6

7 Säure Elution Ery + Säurereagenz zentrifugieren Überstand + Puffer Indikator - Lösung Äther - Elution 1 Teil Ery + 1 Teil Nach + 1 Teil Äther 1 2 Min. stark mischen 15 Min. / 37 o C scharf zentrifugieren Äther Eluat Stroma Chloroform - Elution 1 Teil Ery + 1 Teil Rinderalbumin + 2 Teile Chloroform 15 Sek. stark mischen 5 Min. / 56 o C zentrifugieren 7

8 Elution von Kälteautoantikörpern 1 Teil Ery + 1 RA 6 8% 1 h / 40 o C Medikamententest (ohne Autoantikörper / IgG DAT und IAT neg) 1. Ery + PS + Medikamentenlösung (0,1 1%) 2. Ery + PS + ex vivo Antigen (100 µl Urin / Serum) 8

9 Medikamententest mit Autoantikörpern und ohne Medikamentenreste Absorption der Autoantikörper (PS + Ery) Absorbat + Ery + Medikament / ex vivo Antigen Medikamententest Panagglutination / verzögerte Medikamentenelimination 1. PS Dekontamination 1 ml PS Dialyseschlauch (< dalton) 2. Dialysat* + Ery + Med. / ex vivo * Autoantikörperfrei Penicillin-beladene Erys 500 µl Ery + 4,5 ml Penicillin-Puffer* (1 mg/ml) 37 o C / 1 2 h * 5,5 Diäthylbarbitursäure-Natriumsalz 0,1 M Sodiumbarbiturat-Puffer ph 9,6 (20 g, 618 g / ml Aqua) 600 mg Penicillin + 10 ml 0,1 M Puffer 1 ml Penicillin-Puffer + 59 ml NaCl (1 mg Penicillin / ml) 9

10 Immunphagozytose - Objektträger - FACS* * in vitro und in vivo Nachweis von Anti-IgA T (Hübener-Thomsen-Friedrich-Antigen)-Ery Acetyl Neuraminsäure-Ery 900 µl Neuraminidase (1:10) 100 µl Ery 10

11 Anti T* P-Ery + Anti-T (Lectin aus Arachis hypogaea) T-Ery (polyagglutinabel) + Anti-T pos. Kontrolle Ery + Anti-T neg. Kontrolle * vorhanden in allen normalen Seren Enzymbehandelte Erys Verstärkung: Rh, Wärmeautoantikörper, Anti I (i, Le (a+b), JK, P1) Abschwächung: Fy, MNS s, M g, Mi a, V w, Xg a, Tn, Ge, Yt a, Pr, Ch, Rg, Lu a, JMH, In a, En a DTT (Zur Inaktivierung von IgM) Serum 9 Teile (180 µl) + DTT* 1 Teil (20 µl) RT / 30 Min. * D, L-Dithiothereitol Lösung 0,05 mol/l 11

12 Erythrozytäre Autoantikörper Autoantikörper - wärmewirksame AAK - kältewirksame AAK Medikamentös induzierte AK - AAK - CAK Fall X: Blutprobe vor und nach Hämolyse Fall X AKS, DCT, Eluat, Kreuzprobe unauffällig? 12

13 Eine IH kann nicht immer durch eine einfache/routinemäßige serologische Untersuchung bewiesen oder ausgeschlossen werden. 13