Leistungsverzeichnis - Labordiagnostik -
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- Leonard Baumann
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1 Leistungsverzeichnis - Labordiagnostik - Institut für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie DRK-Blutspendedienst Frankfurt gemeinnützige GmbH Sandhofstraße 1 D Frankfurt/Main Stand: September 2016 Version: 2.3
2 INHALTSVERZEICHNIS 1.Blutgruppenserologie und Immunhämatologie... 6 Vollständige Blutgruppenbestimmung (AB0, Rhesusfaktor, Antikörpersuchtest)... 6 Bestimmung spezieller Blutgruppenantigene... 6 Verträglichkeitsprobe (Kreuzprobe)... 6 Antikörper-Identifizierung... 6 Antikörpertiter... 6 Kontrolle von Antikörpertiter... 6 Isoagglutinin-Titer... 7 Hämolysin-Titer... 7 Direkter Coombstest bei Neugeborenen... 7 Aufgegliederter direkter Coombstest (IgG/C3d)... 7 Aufgegliederter direkter Coombstest (einschl. IgA und IgM)... 7 Untersuchungen bei V.a. Autoimmunhämolyse... 7 Untersuchungen bei V.a. Coombs-negative Autoimmunhämolyse... 8 Untersuchungen bei V.a medikamenteninduzierte Autoimmunhämolyse... 8 Donath-Landsteiner-Antikörper *... 8 T-Aktivierung oder positiver direkter Coombstest bei bakteriellen Infekten... 8 Verlaufsuntersuchung bei Autoimmunhämolyse... 8 Abklärung von Transfusionreaktionen... 8 Kryoglobuline *... 9 Kälteagglutinine *... 9 Bestimmung von Erythrozytenpopulationen nach allogener KM- /Blutstammzelltransplantation (Geltechnik)... 9 Untersuchung auf partial D... 9 DNA-Typisierung von Blutgruppenantigenen nach Vortransfusion oder Autoimmunhämolyse... 9 Charakterisierung von RHD-Allelen... 9 Charakterisierung von RHCE-Allelen Genotypisierung GYPA, GYPB (MNS-Blutgruppe) Genotypisierung KEL (Kell-Blutgruppe) Genotypisierung XK (Kell-Blutgruppe) Genotypisierung CD109 (HPA-15) DNA-Typisierung seltener Antigene Genotypisierung (Bestimmung der RHD-Zygotie) Identifizierung von Antikörpern gegen hochfrequente Antigene Nachweis gebundener spezifischer Antikörper Antigentypisierung nach Chloroquinelution Antigentypisierung mittels Adsorption/Elution Hämatologie, Durchflusszytometrie Differentialblutbild (quantitativ) Koloniebildende Zellen (CFU-Assay) Koloniebildende Zellen in der Langzeitkultur (LTC-IC-Assay) CD34+ - Zellen (quantitativ) Immunstatus (quantitativ) Transplantationsimmunologie und Immungenetik HLA-Klasse-I-Antikörperscreening mittels LCT HLA-Klasse-I-Antikörperdifferenzierung mittels LCT HLA-Klasse-I / II-Antikörperscreening mittels Microbead (Festphase) Luminex HLA-Klasse-I / II-Single-Antigen - Antikörperdifferenzierung mittels Luminex (Microbead). 15 HLA-Klasse-I / II-Single-Antigen mittels Luminex zum Nachweis von C1q-Komplementbindenden Antikörpern HLA-Crossmatch (serologische Verträglichkeitsprobe im HLA-System) HLA-Crossmatch (autolog) T-Zell-HLA-Crossmatch B-Zell-HLA-Crossmatch Serologische Bestimmung der HLA-Klasse-I-Merkmale (A, B) Molekularbiologische Bestimmung der HLA-Klasse-I-Merkmale (A, B, C) 1-Feld Molekularbiologische Bestimmung der HLA-Klasse-II-Merkmale (DRB1, DQB1, DQA1, ) 1- Feld
3 Molekularbiologische Bestimmung der HLA-Klasse-I-Merkmale (A, B, C) 2-Feld Molekularbiologische Bestimmung der HLA-Klasse-II-Merkmale (DRB1, DQB1, DPB1, DRB3, DRB4, DRB5) 2-Feld STR-Marker Untersuchungen (Genetisches Profil / Vaterschaftstest) Zusätzliche gonosomale STR-Systeme zur X und Y Chromosomanalyse KIR-Genotypisierung (2DL/2DL (inhibitorisch) und 2DS/3DS (aktivierend) Pharmakovigilanz (Bestimmung von HLA-Antigenen) Anhang spezifische Indikation mit relativem Risiko bei HLA-Untersuchungen zu Krankheitsassoziationen Infektionsserologie/PCR CMV-IgG oder IgM-Antikörper (Anti-CMV-IgG / -IgM) Hepatitis-A-Virus-IgM-Antikörper (Anti-HAV-IgM) Hepatitis-B-Virus-Core-Antikörper (Anti-HBc) Hepatitis-B-Core-IgM-Antikörper (Anti-HBc-IgM) Hepatitis-B-Surface-Antigen (HBs-Ag) Hepatitis-B-Surface-Antikörper (Anti-HBs) Hepatitis-C-Virus- (HCV) Antikörper (Anti-HCV) Human-Immunodeficiency-Virus-Typ-1/2-Antikörper (Anti-HIV-1/2) Lues-Antikörper HBV-DNA : Bestätigungstest nach AK Blut Votum 24/ HBV-DNA (Pool + Einzelprobe) HCV-RNA : Bestätigungstest nach AK Blut Votum 24/ HCV-RNA (Pool + Einzelprobe) HIV-RNA : Bestätigungstest nach AK Blut Votum 24/ HIV-RNA : Bestätigungstest nach AK Blut Votum 24/ HAV-RNA (Pool + Einzelprobe) Klinische Chemie Von Willebrand-Faktor-Antigen Bestimmung Von Willebrand-Faktor-Kollagen-Bindung Von Willebrand-Multimer-Analyse Von Willebrand-Faktor- Faktor-VIII-Bindung ADAMTS13-Aktivität Molekulare Diagnostik Fibrinogen-Gendiagnostik Faktor-II-Gendiagnostik (incl. Prothrombingen-Mutationen G20210A und A19911G) Faktor-V-Gendiagnostik (incl. Mutationen FV Leiden und FV HR2) Faktor-VII-Gendiagnostik Faktor-VIII-Gendiagnostik Faktor-IX-Gendiagnostik Faktor-X-Gendiagnostik Faktor-XI-Gendiagnostik Faktor-XII-Gendiagnostik Faktor-XIII-Gendiagnostik (incl. Polymorphismus V34L) Präkallikrein-Gendiagnostik Kininogen-Gendiagnostik Gendiagnostik bei kombiniertem FVIII / FV-Mangel Gendiagnostik bei Verminderung aller Vitamin-K-abhängigen Faktoren (VKCFD1 und 2) Gendiagnostik bei (partieller) Marcumar-Resistenz und Marcumar-Sensitivität Antithrombin-Gendiagnostik Plasminogen-Gendiagnostik Protein C-Gendiagnostik Protein S-Gendiagnostik Gendiagnostik bei Thrombophilie TAFI-Gendiagnostik PAI1-Gendiagnostik Gendiagnostik bei Aspirin-Resistenz (COX1) Bernard-Soulier-Syndrom-Gendiagnostik HPA-Gendiagnostik Von Willebrand-Syndrom -Gendiagnostik ADAMTS13-Gendiagnostik Homocysteinurie-Gendiagnostik Long-QT-Syndrom-Gendiagnostik Brugada-Syndrom-Gendiagnostik Catecholaminerge polymorphe ventrikuläre Trachykardie (CPVT)-Gendiagnostik Arrhythmogene rechtsventrikuläre Kardiomyopathie/Dysplasie (ARVC/D)-Gendiagnostik. 34 3
4 Hypertrophe obstruktive Kardiomyop pathie/hypertrophe Kardiomyopathie (HOCM/HCM)- Gendiagnostik Dilatative Kardiomyopathie (DCM)-Gendiagnostik Faktor-V-Quebec Alpha-Thalassämie Beta-Thalassämie Hereditäre Persistenz von HbF (HPFA) Hereditäre Hämochromatose (HH) Hämoglobinopathien (Hämoglobin-Strukturvarianten) HbS, HbE, HbC, HbD Thrombozytendiagnostik Benötigtes Material bei folgenden Abklärungen* *: Antikörperbeladung auf Thrombozyte en Freie Thrombozytenantikörper Heparin induzierte Thrombozytopenie (HIT Typ II) Allgemeine Vorgaben zurr Prä-Analytik Akkreditiert durch die DAkkS nach DINN EN ISO und DIN D EN ISO sowie European Federation for f Immunogenetics (EFI) Accreditation Programme und zertifiziert durch die DQS nach DINN EN ISO 9001 und DIN EN ISO
5 Institut für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie: Ansprechpartner und Telefonnummern Anschrift: Sandhofstraße 1, D Frankfurt am Main Telefon-Zentrale: 069 / Ärztlicher Leiter: Prof. Dr. med. Dr. h. c. Erhard Seifried, FA Innere Medizin und Transfusionsmedizin Tel.: 069 / /-202, (Sekretariat) Fax: 069 / e.seifried@blutspende.de Ständiger Vertreter Ärztlicher Leiter: Prof. Dr. med. Christian Seidl, FA Transfusionsmedizin, Fachimmungenetiker DGI Tel.: 069 / , (Sekretariat) Fax: 069 / c.seidl@blutspende.de Bereichs- und Abteilungsleiter / Oberärzte: Dr. med. Christof Geisen, FA Transfusionsmedizin und Laboratoriumsmedizin Prof. Dr. med. Halvard Bönig, FA Transfusionsmedizin und Kinderheilkunde Dr. med. Markus M. Müller, FA Transfusionsmedizin, ZB Hämostaseologie Dr. med. Richard Schäfer, FA Transfusionsmedizin und Innere Medizin Prof. Dr. med. Michael Schmidt, FA Transfusionsmedizin Befundauskunft: Immunhämatologie Tel.: Fax.: Bei Rückfragen betreffend ausgetesteter/gekreuzter Blutkonserven wenden Sie sich bitte an: Blutkonservenausgabe (24-Stunden) Tel.: Fax.: Molekulare Hämostaseologie Tel.: / 359 Fax.: Transplantationsimmunologie Tel.: Immungenetik Fax.: Infektionsserologie Tel.: Fax.:
6 1. Blutgruppenserologie und Immunhämatologie Vollständige Blutgruppenbestimmung (AB0, Rhesusfaktor, Antikörpersuchtest) Hämagglutinationstest 10 ml EDTA-Blut (oder 10 ml Venenblut, nativ) Serologische Bestimmung der Blutgruppenmerkmale, z. B. bei möglichem Blutbedarf, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Bestimmung spezieller Blutgruppenantigene Hämagglutinationstest 10 ml EDTA-Blut (oder 10 ml Venenblut, nativ) Verdacht auf Alloimmunisierung, Verdacht auf "Null-Phänotyp, Bereitstellung kompatibler Präparate, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Verträglichkeitsprobe (Kreuzprobe) Hämagglutinationstest 10 ml EDTA-Blut (oder 10 ml Venenblut, nativ) Vor Transfusion, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Antikörper-Identifizierung Hämagglutinationstest 10 ml EDTA-Blut (oder 10 ml Venenblut, nativ) Identifizierung des Antikörpers bei positivem Antikörpersuchtest, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Antikörpertiter Hämagglutinationstest 10 ml EDTA-Blut (oder 10 ml Venenblut, nativ) Bestimmung des Titers eines Antikörpers nach Identifizierung, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Kontrolle von Antikörpertiter Hämagglutinationstest 10 ml EDTA-Blut (oder 10 ml Venenblut, nativ) Verlaufskontrolle des Titers eines Antikörpers, z.b. bei Schwangerschaft, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden 6
7 Isoagglutinin-Titer Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Hämagglutinationstest 10 ml DTA-Blut (oder 10 ml Venenblut, nativ) Bestimmung des Titers der Isoagglutinine, z.b. nach KMT, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Hämolysin-Titer Hämagglutination bzw. Lysintest 10 ml Venenblut (nativ) Bestimmung des Hämolysin-Titers z.b. im Rahmen der Schwangerschaft bei V. a. ABO- Inkompatibilität, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Direkter Coombstest bei Neugeborenen Hämagglutinationstest 5 ml Nabelschnurblut oder 1ml EDTA-Blut vom Kind Nachweis von Komplement- oder Immunglobulin-Beladung auf der Erythrozytenoberfläche, z.b. bei V.a. Erythroblastose, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Aufgegliederter direkter Coombstest (IgG/C3d) Hämagglutinationstest 10 ml EDTA-Blut Spezifischer Nachweis von Komplement oder Immunglobulin G auf der Erythrozytenoberfläche, z.b. bei V. a. Autoimmunhämolyse, inkompatible Transfusionen), Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Aufgegliederter direkter Coombstest (einschl. IgA und IgM) Hämagglutinationstest 10 ml EDTA-Blut Spezifischer Nachweis von Immunglobulin M oder Immunglobulin A auf der Erythrozytenoberfläche, z.b. bei V. a. Autoimmunhämolyse, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Untersuchungen bei V.a. Autoimmunhämolyse Hämagglutinationstest, Elutionsverfahren 10 ml EDTA-Blut (oder 10 ml Venenblut, nativ) Nachweis und Charakterisierung von Autoantikörpern bei V. a. Autoimmunhämolyse, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden 7
8 Untersuchungen bei V.a. Coombs-negative Autoimmunhämolyse Hämagglutinationstest, Elutionsverfahren Nach Vereinbarung Nachweis und Charakterisierung von Autoantikörpern bei V. a. Autoimmunhämolyse, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Untersuchungen bei V.a medikamenteninduzierte Autoimmunhämolyse Hämagglutinationstest, Elutionsverfahren 10 ml EDTA-Blut und 10 ml Venenblut (nativ) Nachweis und Charakterisierung von medikamentenabhängigen Autoantikörpern (genaue Medikamentenanamnese erforderlich), Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Donath-Landsteiner-Antikörper * Wärmeexposition, Hämagglutinationstest 10 ml Venenblut (nativ), sofort bei 37 C gerinnen lassen und warm trennen Nachweis von biphasischen Hämolysinen bei V.a. Autoimmunhämolyse Aufgetrenntes Material bei Raumtemperatur, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden T-Aktivierung oder positiver direkter Coombstest bei bakteriellen Infekten Hämagglutinationstest, z.t. mit Lektinen 5 ml EDTA-Blut, 10 ml Venenblut (nativ) Nachweis von T-Aktivierung, z.b. bei Clostridieninfektion, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Verlaufsuntersuchung bei Autoimmunhämolyse Hämagglutinationstest 10 ml EDTA-Blut, 10 ml Venenblut (nativ) Verlaufskontrolle von Autoantikörpern bei Autoimmunhämolyse, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Abklärung von Transfusionreaktionen Hämagglutinationstest, bakteriologische Kultur Vor Transfusion:10 ml Venenblut oder 10ml EDTA-Blut (z.b. Rückstellungsprobe der Kreuzprobe), nach Transfusion:10 ml Venenblut und 10 ml EDTA-Blut; Restmaterial (Beutel) aller transfundierten Präparate (steril) Verdacht auf hämolytische Transfusionsreaktion, Ausschluß bakterieller Kontaminationen Bei 4 C, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden 8
9 Kryoglobuline * Kälteagglutinine * Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Kälteexposition, qualitative Beurteilung von Ausfällungen 10 ml Venenblut (nativ) V. a. Kryoglobulinämie Bei 37 C, Anlieferung möglichst sofort, nach Trennung von Serum (unter Vermeidung vorheriger Abkühlung) kann Serum bei Raumtemperatur versandt werden Die Entnahme kann alternativ im Institut erfolgen Kälteexposition, Hämagglutination 10 ml Venenblut (nativ) V. a. Autoimmunhämolyse vom Kältetyp Bei 37 C, Anlieferung möglichst sofort, ggf. abgesert transportieren Bestimmung von Erythrozytenpopulationen nach allogener KM- /Blutstammzelltransplantation (Geltechnik) Hämagglutinationstest 5 ml EDTA-Blut Orientierende Quantifizierung unterschiedlicher Erythrozytenpopulationen, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Untersuchung auf partial D Hämagglutination 5 m EDTA-Blut Probleme bei D-Typisierung, V.a. Partial D, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden DNA-Typisierung von Blutgruppenantigenen nach Vortransfusion oder Autoimmunhämolyse Polymerase-Kettenreaktion 5 ml EDTA-Blut Unklares Ergebnis der serologischen Antigenbestimmung, bei Vortransfusionen oder stark positivem direktem Coombstest, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Charakterisierung von RHD-Allelen Hämagglutination, Polymerase-Ketten-Reaktion, Sequenzierung 5 ml EDTA-Blut Unklares Ergebnis bei serologischer D-Bestimmung; Anti-D- Immunisierung bei D-positiven Personen; Abklärung von weak D-Typen (z.b. bei Schwangerschaft), Anlieferung innerhalb von 24 Stunden 9
10 Charakterisierung von RHCE-Allelen Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Hämagglutination, Polymerase-Ketten-Reaktion, Sequenzierung 5 ml EDTA-Blut Unklares Ergebnis bei serologischer Rh-Bestimmung; Alloimmunisierung bei antigen-positiven Personen, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Genotypisierung GYPA, GYPB (MNS-Blutgruppe) Polymerase-Ketten-Reaktion, Sequenzierung 5 ml EDTA-, bzw. Citrat-Blut Unklares Ergebnis bei serologischer MNS-Bestimmung; Alloimmunisierung bei antigen-positiven Personen Genotypisierung KEL (Kell-Blutgruppe) Polymerase-Ketten-Reaktion, Sequenzierung 5 ml EDTA-, bzw. Citrat-Blut Unklares Ergebnis bei serologischer Kell-Bestimmung; Alloimmunisierung bei antigen-positiven Personen Genotypisierung XK (Kell-Blutgruppe) Polymerase-Ketten-Reaktion, Sequenzierung 5 ml EDTA-, bzw. Citrat-Blut Unklares Ergebnis bei serologischer Kell-Bestimmung (XK-Gen ist mitverantwortlich für die Präsentation der Kell-Antigene); Alloimmunisierung bei antigen-positiven Personen Genotypisierung CD109 (HPA-15) Polymerase-Ketten-Reaktion, Sequenzierung 5 ml EDTA-, bzw. Citrat-Blut HPA-Bestimmung DNA-Typisierung seltener Antigene Polymerase-Kettenreaktion 5 ml EDTA-Blut Bereitstellung antigen-negativer Präparate im Colton, Dombrock oder Scianna-System, Kontrolle des Antigenstatus für diese Blutgruppensysteme, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden 10
11 Genotypisierung (Bestimmung der RHD-Zygotie) Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Polymerase-Kettenreaktion 5 ml EDTA-Blut Bestimmung des Genotyps des voraussichtlichen Vaters zur Abschätzung des Wiederholungsrisikos eines Morbus hämolyticus neonatorum, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Identifizierung von Antikörpern gegen hochfrequente Antigene Hämagglutination 20 ml EDTA-Blut (oder 20 ml Venenblut, nativ) Durchgehend positive Reaktionen bei der Antikörper-Identifizierung mit kommerziellen Identifizierungszellen, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Nachweis gebundener spezifischer Antikörper Elutionsverfahren (Chloroformelution, Säureelution), Hämagglutination 10 ml EDTA-Blut (oder 10 ml Venenblut, nativ) Autoimmunhämolyse, inkompatible Vortransfusion, unklarer positiver Coombstest, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Antigentypisierung nach Chloroquinelution Elutionsverfahren (Chloroquinelution), Hämagglutination 10 ml EDTA-Blut Antigenbestimmung bei positivem direktem Coombstest, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden Antigentypisierung mittels Adsorption/Elution Elutionsverfahren ( Chloroquinelution Chloroformelution, Säureelution), Hämagglutination 10 ml EDTA-Blut Nachweis eines stark abgeschwächten Antigens, Anlieferung innerhalb von 24 Stunden * nicht akkreditiert nach ISO
12 2. Hämatologie, Durchflusszytometrie Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Differentialblutbild (quantitativ) automatische Zellzählung (Sysmex XT 1800), oder mikroskopische Differenzierung 5 ml EDTA-Blut, 0,5 ml Präparat, 4 ml Cirtratblut (nur bei Thrombozytenzählung) Bestimmung des kleinen Blutbildes Erythrozyten, Hämoglobin, Hämatokrit, mittleres korpuskuläres Hämoglobin =MCH, mittleres Zellvolumen = MCV, mittlere zelluläre Hämoglobin-Konzentration = MCHC, Leukozyten, Thrombozyten) bzw. mikroskopische/ elektronische Zelldifferenzierung (Differentialblutbild) bei Raumtemperatur Messung innerhalb von 6 h Koloniebildende Zellen (CFU-Assay) semisolide Zellkultur mononukleärer Zellen und Differenzierung in CFU-E, CFU-G, CFU-GEMM 0,5 ml der Stammzellpräparation Bestimmung des Gehalts an koloniebildenden Zellen in Stammzellpräparaten bei 4 C, innerhalb von 24 h ansetzen alternativ kryokonserviert bei 180 C (LN2) Koloniebildende Zellen in der Langzeitkultur (LTC-IC-Assay) Zellkultur mononukleärer Zellen auf Feederzellen und Differenzierung in CFU-E, CFU-G, CFU-GEMM 0,5 ml der Stammzellpräparation Bestimmung des Gehalts an besonders frühen koloniebildenden Zellen in Stammzellpräparaten bei 4 C, innerhalb von 24 h ansetzen alternativ kryokonserviert bei 180 C (LN2) 12
13 CD34+ - Zellen (quantitativ) Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Durchflusszytometrie 5 ml EDTA-Blut, 0,5 ml Präparat Kontrolle der CD34+-Mobilisation von Stammzellspendern zur Festlegung des Apheresezeitpunktes, sowie Bestimmung des Gehalts an CD34+-Zellen in Stammzellpräparaten (Knochenmark, Nabelschnurblut, peripheres Blut bei Raumtemperatur Messung innerhalb von 6 h Immunstatus (quantitativ) Durchflusszytometrie 5 ml EDTA-Blut, 0,5 ml Präparat Bestimmung der Immunzellen (T-Lymphozyten, T-Helfer Zellen, zyotoxische T-Zellen, B-Lmyphozyten, Natürliche Killerzellen) bei Verdacht auf Immundefekten oder zur Bestimmung der Dosis allogener T Lymphozyten in Stammzelltransplantaten bei Raumtemperatur Messung innerhalb von 6 h 13
14 3. Transplantationsimmunologie und Immungenetik HLA-Klasse-I-Antikörperscreening mittels LCT Komplementabhängiger Mikrolymphozytotoxizitätstest (LCT) 10 ml Nativblut oder Serum Nachweis von komplementbindenden HLA-Klasse-I-Antikörpern vor / nach Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation, bei Patienten auf der EUROTRANSPLANT-Warteliste für Organtransplantation, nach immunisierenden Ereignissen, bei HLAsensibilisierten Patienten vor Thrombozyten- / Granulozytentransfusion, Transfusionszwischenfällen Transport bei Raumtemperatur. Nativblut wird bei +2 C bis +8 C gelagert, Serum bei 20 C gelagert HLA-Klasse-I-Antikörperdifferenzierung mittels LCT Komplementabhängiger Mikrolymphozytotoxizitätstest (LCT) 10 ml Nativblut oder Serum Nachweis von spezifischen komplementbindenden HLA-Klasse-I- Antikörpern vor / nach Organ- oder Knochenmark- /Blutstammzelltransplantation, bei Patienten auf der EUROTRANSPLANT-Warteliste für Organtransplantation, nach immunisierenden Ereignissen, bei HLA-sensibilisierten Patienten vor Thrombozyten- / Granulozytentransfusion, Transfusionszwischenfällen bei gegebener Indikation Transport bei Raumtemperatur, Nativblut wird bei +2 C bis +8 C gelagert, Serum bei 20 C gelagert 14
15 HLA-Klasse-I / II-Antikörperscreening mittels Microbead (Festphase) Luminex Bead basierte Festphase / Luminex 10 ml Nativblut oder Serum Nachweis von HLA-Klasse-I/II-Antikörpern (komplementunabhängig) vor / nach Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation, bei Patienten auf der EUROTRANSPLANT-Warteliste für Organtransplantation, nach immunisierenden Ereignissen, bei HLAsensibilisierten Patienten vor Thrombozyten- Granulozytentransfusion, Transfusionszwischenfällen bei gegebener Indikation. Besondere Lebendnierenspende Transplantationsmonitoring bei Verdacht auf Transplantatspezifische Antikörper (Donor-spezifische Antikörper DSA) Hochimmunisierte Patienten mit polyspezifischen und stark kreuzreagierendem Reaktionsmuster Festlegung von NAHA (Nicht Akzeptable HLA-Antigene) für die Meldung in das ENIS System von Eurotransplant Spezifizierung von Acceptable Antigens als Vorbereitung auf das Acceptable Mismatch (AM) Programm von Eurotransplant Transport bei Raumtemperatur. Nativblut wird bei +2 C bis +8 C gelagert, Serum bei 20 C gelagert. HLA-Klasse-I / II-Single-Antigen - Antikörperdifferenzierung mittels Luminex (Microbead) Bead basierte Festphase / Luminex 10 ml Nativblut oder Serum Nachweis von HLA-Klasse-I/II-Antikörpern (komplementunabhängig) vor / nach Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation, bei Patienten auf der EUROTRANSPLANT-Warteliste für Organtransplantation, nach immunisierenden Ereignissen, bei HLAsensibilisierten Patienten vor Thrombozyten- Granulozytentransfusion, Transfusionszwischenfällen bei gegebener Indikation. Besondere Lebendnierenspende Transplantationsmonitoring bei Verdacht auf Transplantatspezifische Antikörper (Donor-spezifische Antikörper DSA) Hochimmunisierte Patienten mit polyspezifischen und stark kreuzreagierendem Reaktionsmuster Festlegung von NAHA (Nicht Akzeptable HLA-Antigene) für die Meldung in das ENIS System von Eurotransplant Spezifizierung von Acceptable Antigens als Vorbereitung auf das Acceptable Mismatch (AM) Programm von Eurotransplant Transport bei Raumtemperatur. Nativblut wird bei +2 C bis +8 C gelagert, Serum bei 20 C gelagert. 15
16 HLA-Klasse-I / II-Single-Antigen mittels Luminex zum Nachweis von C1q- Komplement- bindenden Antikörpern Bead basierte Festphase / Luminex 10 ml Nativblut oder Serum Nachweis von HLA-Klasse-I/II-Antikörpern (komplementabhängig) vor / nach Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation, bei Patienten auf der EUROTRANSPLANT-Warteliste für Organtransplantation, nach immunisierenden Ereignissen, bei HLAsensibilisierten Patienten vor Thrombozyten- Granulozytentransfusion, Transfusionszwischenfällen bei gegebener Indikation. Besondere Lebendnierenspende Transplantationsmonitoring bei Verdacht auf Transplantatspezifische Antikörper (Donor-spezifische Antikörper DSA) Hochimmunisierte Patienten mit polyspezifischen und stark kreuzreagierendem Reaktionsmuster Festlegung von NAHA (Nicht Akzeptable HLA-Antigene) für die Meldung in das ENIS System von Eurotransplant Spezifizierung von Acceptable Antigens als Vorbereitung auf das Acceptable Mismatch (AM) Programm von Eurotransplant Transport bei Raumtemperatur. Nativblut wird bei +2 C bis +8 C gelagert, Serum bei 20 C gelagert. HLA-Crossmatch (serologische Verträglichkeitsprobe im HLA-System) Komplementabhängiger Mikrolymphozytotoxizitätstest (LCT) Empfänger: 5 10 ml Nativblut / Serum Spender: 10 ml Heparinblut oder ACD / CPDA Blut bei Organspende ein 1,5 cm 3 großes Milzstück oder mindestens 2 Lymphknoten in steriler physiologischer Kochsalzlösung Verträglichkeitsuntersuchung auf vorhandene HLA-Antikörper vor Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation Transport bei Raumtemperatur. Heparinblut oder ACD / CPDA Blut wird bei Raumtemperatur gelagert. Nativblut, Milz bzw. Lymphknoten wird bei +2 C bis +8 C gelagert. 16
17 HLA-Crossmatch (autolog) Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Komplementabhängiger Mikrolymphozytotoxizitätstest (LCT) Empfänger: 5 10 ml Nativblut / Serum und Empfänger 10 ml Heparinblut oder ACD / CPDA Blut Verträglichkeitsuntersuchung auf vorhandene auto-reaktive Antikörper vor Organ- oder Knochenmark- /Blutstammzelltransplantation Transport bei Raumtemperatur. Heparinblut oder ACD / CPDA Blut wird bei Raumtemperatur gelagert. Nativblut, Milz bzw. Lymphknoten wird bei +2 C bis +8 C gelagert T-Zell-HLA-Crossmatch Komplementabhängiger Mikrolymphozytotoxizitätstest (LCT) Empfänger: 5 10 ml Nativblut / Serum Spender: 10 ml Heparinblut oder ACD / CPDA Blut bei Organspende ein 1,5 cm 3 großes Milzstück oder mindestens 2 Lymphknoten in steriler physiologischer Kochsalzlösung Verträglichkeitsuntersuchung auf präformierte T-Zell-reaktive HLA- Antikörper (insbesondere HLA-Klasse I) vor Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation Transport bei Raumtemperatur. Heparinblut oder ACD / CPDA Blut wird bei Raumtemperatur gelagert. Nativblut, Milz bzw. Lymphknoten wird bei +2 C bis +8 C gelagert B-Zell-HLA-Crossmatch Komplementabhängiger Mikrolymphozytotoxizitätstest (LCT) Empfänger: 5 10 ml Nativblut / Serum Spender: 5 x 10 ml Heparinblut oder ACD / CPDA Blut bei Organspende ein 1,5 cm 3 großes Milzstück oder mindestens 2 Lymphknoten in steriler physiologischer Kochsalzlösung Verträglichkeitsuntersuchung auf präformierte B-Zell-reaktive HLA- Antikörper (insbesondere HLA-Klasse II) vor Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation Transport bei Raumtemperatur. Heparinblut oder ACD / CPDA Blut wird bei Raumtemperatur gelagert. Nativblut, Milz bzw. Lymphknoten wird bei +2 C bis +8 C gelagert 17
18 Serologische Bestimmung der HLA-Klasse-I-Merkmale (A, B) Komplementabhängiger Mikrolymphozytotoxizitätstest (LCT) 10 ml Heparinblut oder ACD / CPDA-Blut Bestimmung der HLA-Merkmale von Spender und Empfänger vor Organ,- oder Blutstammzelltransplantation, Untersuchung bei Krankheitsassoziationen, Abklärung von Erkrankungen mit Autoimmunpathogenese schneller Transport (nicht > 2 Tage) bei Raumtemperatur Molekularbiologische Bestimmung der HLA-Klasse-I-Merkmale (A, B, C) 1-Feld Polymerase-Kettenreaktion (PCR), DNA-Festphasen-Hybridisierung mit sequenzspezifischen Oligonukleotiden (SSO), HLA- Merkmalbestimmung mittels SSP 10 ml EDTA-, ACD / CPDA- oder Citrat-Blut Bestimmung der HLA-Merkmale von Spender und Empfänger vor Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation, Untersuchung bei Krankheitsassoziationen**, Abklärung von Erkrankungen mit Autoimmunpathogenese Spezifische Indikationen bei Krankheitsassoziation mit Relativem Risiko (RR): siehe unter 3.-Anhang bei Raumtemperatur Molekularbiologische Bestimmung der HLA-Klasse-II-Merkmale (DRB1, DQB1, DQA1, ) 1-Feld Polymerase-Kettenreaktion (PCR), DNA-Festphasen-Hybridisierung mit sequenzspezifischen Oligonukleotiden (SSO), HLA- Merkmalbestimmung mittels SSP 10 ml EDTA-, ACD / CPDA- oder Citrat-Blut Bestimmung der HLA-Merkmale von Spender und Empfänger vor Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation, Untersuchung bei Krankheitsassoziationen, Abklärung von Erkrankungen mit Autoimmunpathogenese Spezifische Indikationen bei Krankheitsassoziation mit Relativem Risiko (RR): siehe unter 3.-Anhang bei Raumtemperatur 18
19 Molekularbiologische Bestimmung der HLA-Klasse-I-Merkmale (A, B, C) 2-Feld Polymerase-Kettenreaktion (PCR), Amplifikation mit sequenzspezifischen Primern (PCR-SSP), Sequenzierung (SBT) 10 ml EDTA-, ACD / CPDA- oder Citrat-Blut Bestimmung der HLA-Merkmale von Spender und Empfänger vor Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation, Untersuchung bei Krankheitsassoziationen, Abklärung von Erkrankungen mit Autoimmunpathogenese bei Raumtemperatur Molekularbiologische Bestimmung der HLA-Klasse-II-Merkmale (DRB1, DQB1, DPB1, DRB3, DRB4, DRB5) 2-Feld Polymerase-Kettenreaktion (PCR), Amplifikation mit sequenzspezifischen Primern (PCR-SSP), Sequenzierung (SBT) 10 ml EDTA-, ACD / CPDA- oder Citrat-Blut Bestimmung der HLA-Merkmale von Spender und Empfänger vor Organ- oder Knochenmark-/Blutstammzelltransplantation, Untersuchung bei Krankheitsassoziationen, Abklärung von Erkrankungen mit Autoimmunpathogenese bei Raumtemperatur STR-Marker Untersuchungen (Genetisches Profil / Vaterschaftstest) PCR-Amplifikation von Short-Tandem-Repeat (STR) Polymorphismen und Analyse des genetischen Profils Achtung: Besondere Vorrausetzungen zur Identitätssicherung vor Entnahme des Material bitte unter 2 x 1-10 ml EDTA-Blut, 2 x Mundschleimhautabstrich Andere Untersuchungsmaterialien, wie z.b. Gewebe und Paraffinblöcke, nur nach telefonischer Rücksprache Vaterschaftstestung, weitere Informationen einschließlich Aufklärungsunterlagen entsprechend dem Gendiagnostik Gesetz unter ww.lfa-frankfurt.de Semi-Quantitative DNA -Analyse von Short-Tandem-Repeat- (STR) Polymorphismen. Bei Verlaufskontrolle nach allogener Knochenmark- / Blutstammzelltransplantation; Cave: Vergleichsprobe (Profil) von Spender und Empfänger vor Transplantation erforderlich. bei Raumtemperatur 19
20 Zusätzliche gonosomale STR-Systeme zur X und Y Chromosomanalyse PCR-Amplifikation von Short-Tandem-Repeat (STR) Polymorphismen und Analyse des genetischen Pofils Achtung: Besondere Vorrausetzungen zur Identitätssicherung vor Entnahme des Material bitte unter 2 x 1-10 ml EDTA-Blut, 2 x Mundschleimhautabstrich bei Raumtemperatur KIR-Genotypisierung (2DL/2DL (inhibitorisch) und 2DS/3DS (aktivierend) Polymerase-Kettenreaktion (PCR), Amplifikation mit sequenzspezifischen Primern (PCR-SSP) 5-10 ml EDTA-, ACD / CPDA- oder Citrat-Blut Allogene Blutstammzell- Knochenmarktransplantation. Immuntherapie mittels Natürlichen Killer (NK) - Zellen bei Raumtemperatur Pharmakovigilanz (Bestimmung von HLA-Antigenen) Polymerase-Kettenreaktion (PCR), Amplifikation mit sequenzspezifischen Primern (PCR-SSP), Sequenzierung (SBT) 5-10 ml EDTA-, ACD / CPDA- oder Citrat-Blut Pharmokovigilanz, z.b. HLA-B57:01 vor Gabe von Abacavir zum Ausschluss einer Abacavir-Hypersensitivität HLA-B15 Carbamazepin-ind. Stevens-Johnson-S HLA-B58. Allopurinol-ind. Stevens-Johnson-S. bei Raumtemperatur 20
21 3- Anhang spezifische Indikation mit relativem Risiko bei HLA- Untersuchungen zu Krankheitsassoziationen Erkrankung Merkmal RR** Abacavir-Hypersensitivität B*57:01 33*** AGS late-onset-form B AGS Salzverlust-Form B Akute vordere Uveitis B Allopurinol-ind. Stevens-Johnson-S. B*58:01 580*** Autoimmunhepatitis DR3 4.5 Birdshot-Chorionretinopathie A Carbamazepin-ind. Stevens-Johnson-S. B*15: *** Dermatitis herpetiformis B8/DR3/DR Diabetes mellitus Typ I (insulinabhängig)* DR4/DQ3 3.6 Diabetes mellitus Typ I (insulinabhängig)* DR3/DQ2 3.3 Felty-Syndrom DR Gold-induzierte Nephropatie B8/DR Hashimoto-Thyreoiditis DR5 3.2 Hereditäre IgA-Defizienz DR Idiopath. Glomerulonephritis DR Idiopathische Hämochromatose A3 6.7 Juvenile chronische Arthritis DR8 8.0 Kaposi-Sarkom DR5 5.3 Neonatale alloimmun. Thrombopenie DR3/DRB3/DQ2 9.2 M. Addison (idiopatisch) DR3 6.3 M. Basedow DR3 3.7 M. Bechterew* (HLA-Subtypisierung) B M. Behcet B5 3.8 M. Reiter B Multiple Sklerose* DR2/DQ6 2.7 Myasthenia gravis B8/DR3 3.3 Narkolepsie* DRB1*15/DQB1*06: Postinfektiöse Arthritis B Psoriasis vulgaris Cw Psoriasis arthropatica B Rheumatoide Arthritis* DR4/DR1/DR Sjögren-Syndrom DR3 9.7 Subakute Thyreoiditis de Quervain B system. Lupus erythematodes DR3 2.6 Zöliakie* DR3/DR7/DQ2/DQ8/DQA1*05: *molekulargenetische HLA-Subtypisierung zur besseren Charakterisierung empfehlenswert. **RR = relatives Risiko - gibt an, um welchen Faktor die Krankheit bei einem Merkmalsträger häufiger auftritt, als bei einem Nicht-Merkmalsträger ***Odds Ratio nach Becquemont L., Pharmacogenomics, 11:277 (2010) 21
22 4. Infektionsserologie/PCR CMV-IgG oder IgM-Antikörper (Anti-CMV-IgG / -IgM) Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Mikropartikel-Enzym-Immuno-Assay (MEIA) Enzym-Immuno-Assay (EIA) 1 ml Serum oder Plasma Screening von Blutspender- und Patientenproben mit unbekanntem Antikörperstatus maximal 7 Tage zwischen +4 C bis Raumtemperatur Hepatitis-A-Virus-IgM-Antikörper (Anti-HAV-IgM) Mikropartikel-Enzym-Immuno-Assay (MEIA) 1 ml Serum oder Plasma Nachweis einer akuten HAV-Infektion maximal 7 Tage zwischen +4 C bis Raumtemperatur Hepatitis-B-Virus-Core-Antikörper (Anti-HBc) Mikropartikel-Enzym-Immuno-Assay (MEIA) Enzym-Immuno-Assay (EIA) 1 ml Serum oder Plasma Nachweis einer (durchgemachten) Hepatitis-B-Virus-Infektion maximal 7 Tage zwischen +4 C bis Raumtemperatur Hepatitis-B-Core-IgM-Antikörper (Anti-HBc-IgM) Mikropartikel-Enzym-Immuno-Assay (MEIA) 1 ml Serum oder Plasma Nachweis einer akuten Hepatitis-B-Virus-Infektion maximal 7 Tage zwischen +4 C bis Raumtemperatur 22
23 Hepatitis-B-Surface-Antigen (HBs-Ag) Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Enzym-Immuno-Assay (EIA) Mikropartikel-Enzym-Immuno-Assay (MEIA) 1 ml Serum oder Plasma Nachweis einer Hepatitis-B-Virus-Infektion maximal 7 Tage zwischen +4 C bis Raumtemperatur Hepatitis-B-Surface-Antikörper (Anti-HBs) Enzym-Immuno-Assay (EIA) 1 ml Serum oder Plasma Nachweis des Immunitätsstatus gegen Hepatitis-B-Virus, Kontrolle des Impfstatus (>100 IU/l = Impfschutz vorhanden) maximal 7 Tage zwischen +4 C bis Raumtemperatur Hepatitis-C-Virus- (HCV) Antikörper (Anti-HCV) Enzym-Immuno-Assay (EIA), Mikropartikel-Enzym-Immuno.Assay (MEIA), Line-Immuno-Assay (Immunblot) 1 ml Serum oder Plasma Nachweis einer Hepatitis-C-Virus-Infektion maximal 7 Tage zwischen +4 C bis Raumtemperatur Human-Immunodeficiency-Virus-Typ-1/2-Antikörper (Anti-HIV-1/2) Enzym-Immunoassay (EIA), Mikropartikel-Enzym-Immuno-Assay (MEIA), Line-Immuno-Assay (Immunblot) 1 ml Serum oder Plasma Nachweis einer HI-Virus-Infektion der Typen 1 und 2 maximal 7 Tage zwischen +4 C bis Raumtemperatur 23
24 Lues-Antikörper Hämagglutinationstest (TPHA) 1 ml Serum Screening auf eine Lues-Infektion maximal 7 Tage bei +2 C bis +8 C HBV-DNA : Bestätigungstest nach AK Blut Votum 24/34 Qualitativer Nachweis von HBV-DNA. Analysegerät: Roche Cobas 8800/ 6800 MPX Assay 1,2 ml EDTA-Plasma oder mindestens 3 ml EDTA-Vollbut Bestätigung serologisch HBV-reaktiver Proben. Klärung unklarer Befunde, z.b. serologisch reaktiv - PCR negativ. Lookback Verfahren. Nachweisgrenze: <10 IU/ml Einzelprobenplasma Vollblut maximal nach 48 Stunden abzentrifugieren. Abzentrifugiertes Plasma im Überstand max. 56 Stunden bei +4 C bis max. Raumtemperatur lagern; abgetrenntes Plasma bzw. bei Gelröhrchen Plasmaüberstand max. 7 Tage bei +4 C bis max. Raumtemperatur HBV-DNA (Pool + Einzelprobe) Qualitativer Nachweis von HBV-DNA. Analysegerät: Roche Cobas 8800/ 6800 mindestens 6 ml EDTA-Vollblut bevorzugt Gelröhrchen Screening von Blutspendeproben auf Hepatitis-B-Virus Sequenzen Nachweisgrenze: 134,4 IU/ml Spenderplasma Vollblut maximal nach 48 Stunden abzentrifugieren. Abzentrifugiertes Plasma im Überstand max. 56 Stunden bei +4 C bis max. Raumtemperatur lagern; abgetrenntes Plasma bzw. bei Gelröhrchen Plasmaüberstand max. 7 Tage bei +4 C bis max. Raumtemperatur 24
25 HCV-RNA : Bestätigungstest nach AK Blut Votum 24/34 Qualitativer Nachweis von HCV-RNA. Analysegerät: Roche Cobas 8800/ 6800 MPX Assay 1,2 ml EDTA-Plasma oder mindestens 3 ml EDTA-Vollbut Bestätigung serologisch HCV-reaktiver Proben. Klärung unklarer Befunde, z.b. serologisch reaktiv - PCR negativ. Lookback Verfahren. Nachweisgrenze: 7 IU/ml Einzelprobenplasma Vollblut maximal nach 48 Stunden abzentrifugieren. Abzentrifugiertes Plasma im Überstand max. 56 Stunden bei +4 C bis max. Raumtemperatur lagern; abgetrenntes Plasma bzw. bei Gelröhrchen Plasmaüberstand max. 7 Tage bei +4 C bis max.raumtemperatur HCV-RNA (Pool + Einzelprobe) Qualitativer Nachweis von HCV-RNA. Analysegerät: Roche Cobas 8800/ 6800 MPX Assay mindestens 6 ml EDTA-Vollblut bevorzugt Gelröhrchen Screening von Blutspendeproben auf Hepatitis-C-Virus-Sequenzen Nachweisgrenze: 672 IU/ml Spenderplasma Vollblut maximal nach 48 Stunden abzentrifugieren. Abzentrifugiertes Plasma im Überstand max. 56 Stunden bei +4 C bis max. Raumtemperatur lagern; abgetrenntes Plasma bzw. bei Gelröhrchen Plasmaüberstand max. 7 Tage bei +4 C bis max.raumtemperatur HIV-RNA : Bestätigungstest nach AK Blut Votum 24/34 Qualitativer Nachweis von HIV-RNA. Analysegerät: Roche Cobas 8800/ 6800 MPX Assay 1,2 ml EDTA-Plasma oder mindestens 3 ml EDTA-Vollbut Bestätigung serologisch HIV-reaktiver Proben. Klärung unklarer Befunde, z.b. serologisch reaktiv - PCR negativ. Lookback Verfahren. Nachweisgrenze: 25,7 IU/ml Einzelprobenplasma Vollblut maximal nach 48 Stunden abzentrifugieren. Abzentrifugiertes Plasma im Überstand max. 56 Stunden bei +4 C bis max. Raumtemperatur lagern; abgetrenntes Plasma bzw. bei Gelröhrchen Plasmaüberstand max. 7 Tage bei +4 C bis max. Raumtemperatur 25
26 HIV-RNA : Bestätigungstest nach AK Blut Votum 24/34 Qualitativer Nachweis von HIV-RNA. Analysegerät: Roche Cobas 8800/ 6800 MPX Assay mindestens 6 ml EDTA-Vollblut bevorzugt Gelröhrchen Screening von Blutspendeproben auf HIV-Virus-Sequenzen Nachweisgrenze: 25,7 IU/ml Spenderplasma Vollblut maximal nach 48 Stunden abzentrifugieren. Abzentrifugiertes Plasma im Überstand max. 56 Stunden bei +4 C bis max. Raumtemperatur lagern; abgetrenntes Plasma bzw. bei Gelröhrchen Plasmaüberstand max. 7 Tage bei +4 C bis max. Raumtemperatur HAV-RNA (Pool + Einzelprobe) Qualitativer Nachweis von HIV-RNA. Analysegerät: Roche Cobas 8800/ 6800 DPX Assay mindestens 6 ml EDTA-Vollblut bevorzugt Gelröhrchen Screening von Blutspendeproben auf Hepatitis-A-Virus-Sequenzen Nachweisgrenze: 105,6 IU/ml Spenderplasma Vollblut maximal nach 48 Stunden abzentrifugieren. Abzentrifugiertes Plasma im Überstand max. 56 Stunden bei +4 C bis max. Raumtemperatur lagern; abgetrenntes Plasma bzw. bei Gelröhrchen Plasmaüberstand max. 7 Tage bei +4 C bis max. Raumtemperatur Parvo-B19-DNA (Pool + Einzelprobe) Qualitativer Nachweis von HIV-RNA. Analysegerät: Roche Cobas 8800/ 6800 DPX Assay mindestens 6 ml EDTA-Vollblut bevorzugt Gelröhrchen Screening von Blutspendeproben auf Parvovirus B 19-Sequenzen Nachweisgrenze: 1334,4 IU/ml Spenderplasma Cut off: 1x 10 5 IU/ml Spenderplasma Vollblut maximal nach 48 Stunden abzentrifugieren. Abzentrifugiertes Plasma im Überstand max. 56 Stunden bei +4 C bis max. Raumtemperatur lagern; abgetrenntes Plasma bzw. bei Gelröhrchen Plasmaüberstand max. 7 Tage bei +4 C bis max. Raumtemperatur 26
27 5. Klinische Chemie Von Willebrand-Faktor-Antigen Bestimmung ELISA Citrat-Blut v.a. von Willebrand-Syndrom Raumtemperatur Von Willebrand-Faktor-Kollagen-Bindung ELISA Citrat-Blut v.a. von Willebrand-Syndrom Raumtemperatur Von Willebrand-Multimer-Analyse Agarose-Gel-Elektrophorese, Infrarotfluoreszenzdetektion Citrat-Blut v.a. von Willebrand-Syndrom Raumtemperatur Von Willebrand-Faktor- Faktor-VIII-Bindung ELISA Citrat-Blut v.a. von Willebrand-Syndrom Raumtemperatur ADAMTS13-Aktivität Lagerung / ELISA Citrat-Blut Thrombotisch-thrombozytopenische Purpura Raumtemperatur 27
28 6. Molekulare Diagnostik Fibrinogen-Gendiagnostik Sequenzierung des FGA-, FGB- und FGG-Gens Afibrinogenämie, Hypofibrinogenämie, Dysfibrinogenämie Faktor-II-Gendiagnostik (incl. Prothrombingen-Mutationen G20210A und A19911G) Sequenzierung des F2-Gens, SSP-PCR, Gel-Elektrophorese FII-Mangel Faktor-V-Gendiagnostik (incl. Mutationen FV Leiden und FV HR2) Sequenzierung des F5-Gens, SSP-PCR, Gel-Elektrophorese FV-Mangel Faktor-VII-Gendiagnostik Sequenzierung/MLPA des F7-Gens FVII-Mangel Faktor-VIII-Gendiagnostik Sequenzierung/MLPA des F8-Gens, Intron1, Intron22- Inversionsanalyse FVIII-Mangel (Hämophilie A) 28
29 Faktor-IX-Gendiagnostik Sequenzierung/MLPA des F9-Gens FIX-Mangel (Hämophilie B) Faktor-X-Gendiagnostik Sequenzierung/MLPA des F10-Gens FX-Mangel Faktor-XI-Gendiagnostik Sequenzierung/MLPA des F11-Gens FXI-Mangel Faktor-XII-Gendiagnostik Sequenzierung des F12-Gens FXII-Mangel Faktor-XIII-Gendiagnostik (incl. Polymorphismus V34L) Sequenzierung des F13A-Gens, SSP-PCR, Gel-Elektrophorese Sequenzierung des F13B-Gens FXIII-Mangel 29
30 Präkallikrein-Gendiagnostik Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Sequenzierung des KLKB1-Gens Präkallikrein-Mangel Kininogen-Gendiagnostik Sequenzierung des KNG-Gens Kininogen-Mangel Gendiagnostik bei kombiniertem FVIII / FV-Mangel Sequenzierung des LMAN1- und MCFD2-Gens Kombinierter FV / FVIII-Mangel Gendiagnostik bei Verminderung aller Vitamin-K-abhängigen Faktoren (VKCFD1 und 2) Sequenzierung des VKORC1- und GGCX-Gens Verminderung aller Vitamin-K-abhängigen Faktoren (VKCFD2) Gendiagnostik bei (partieller) Marcumar-Resistenz und Marcumar-Sensitivität Sequenzierung des VKORC1- und CYP2C9 (Exone 2,3 und 7)- und CYP4F2 (Exon 11)- Gens Marcumar-Resistenz und Marcumar-Sensitivität 30
31 Antithrombin-Gendiagnostik Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Sequenzierung/MLPA des SERPINC1-Gens Antithrombin-Mangel Plasminogen-Gendiagnostik Sequenzierung des PLG-Gens Plasminogen-Mangel Protein C-Gendiagnostik Sequenzierung/MLPA des PROC-Gens Protein C-Mangel Protein S-Gendiagnostik Sequenzierung/MLPA des PROS1-Gens Protein S-Mangel Gendiagnostik bei Thrombophilie Sequenzierung des SERPINC1-, PROC- und PROS-, PROZ-, PROCR-Gens Thrombophilie 31
32 TAFI-Gendiagnostik Sequenzierung des TAFI-Gens TAFI-Mangel PAI1-Gendiagnostik Sequenzierung des PAI1-Gens, SSP-PCR, Gel-Elektrophorese Thrombophilie Gendiagnostik bei Aspirin-Resistenz (COX1) Sequenzierung des PTGS1-Gens (bei Bedarf F13A, ITGA2, ITGB3-Gen) Aspirin-Resistenz Bernard-Soulier-Syndrom-Gendiagnostik Sequenzierung des GP1BA, GP1BB, GP9, GP5- Gens Bernard-Soulier-Syndrom HPA-Gendiagnostik PCR/Sequenzierung des ITGA2-, ITGB3-, ITGA2B-, bzw. GP1BA- Gens Thrombozyten-Transfusionen, bei neonataler Immunthrombozytopenie (NAIT), bei posttransfusioneller Purpura (PTP) 32
33 Von Willebrand-Syndrom -Gendiagnostik Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Sequenzierung/MLPA des VWF- Gens Von Willebrand-Syndrom ADAMTS13-Gendiagnostik Sequenzierung des ADAMTS13-Gens Hereditäre TTP Homocysteinurie-Gendiagnostik Sequenzierung des CBS-Gens, SSP-PCR, Gel-Elektrophorese Homocysteinurie Long-QT-Syndrom-Gendiagnostik Stufe I: Sequenzierung der KCNQ1-, KCNH2-, SCN5A- KCNE1-, KCNE2-Gene Stufe II: MLPA der KCNQ1-, KCNH2-, KCNE1-, KCNE2-Gene Stufe III: Sequenzierung der ANK2-, KCNJ2-, CAV3-, SCN4B-, SNTA1-, KCNE3-Gene Stufe IV: MLPA der CLCN1-, KCNJ2-Gene 5-10ml EDTA-Blut, DNA; nach Rücksprache weniger Long-QT-Syndrom (LQTS) Brugada-Syndrom-Gendiagnostik Stufe I: Sequenzierung des SCN5A-Gens Stufe II: :Sequenzierung der GPD1L-, CACNA1C-, CACNB2-, SN1B-, KCNE3-, SCN3B-Gene Stufe III: MLPA des SCN5A-Gens 5-10ml EDTA-Blut, DNA; nach Rücksprache weniger Brugada-Syndrom 33
34 Catecholaminerge polymorphe ventrikuläre Trachykardie (CPVT)-Gendiagnostik Stufe I: Sequenzierung der 45 am häufigsten betroffenen Exone des RYR2-Gens Stufe II: :Komplette Sequenzierung des RYR2-Gens Stufe III: MLPA des RYR2-Gens Stufe IV: Sequenzierung des CASQ2-Gens 5-10ml EDTA-Blut, DNA; nach Rücksprache weniger Catecholaminerge polymorphe ventrikuläre Trachykardie (CT) Arrhythmogene rechtsventrikuläre Kardiomyopathie/Dysplasie (ARVC/D)-Gendiagnostik Stufe I: Sequenzierung der PKP2-, DSP-, DSG2-Gene Stufe II: MLPA der PKP2-, DSG2-, DSC2-, JUP-, DSP-, TGFβ3- RYR2-Gene 5-10ml EDTA-Blut, DNA; nach Rücksprache weniger Arrhythmogene rechtsventrikuläre Kardiomyopathie/Dysplasie (ARVC/D) Hypertrophe obstruktive Kardiomyopathie/Hypertrophe Kardiomyopathie (HOCM/HCM)- Gendiagnostik Stufe I: Sequenzierung der MYH7-, MYBPC3-, TNNT2-, TNNI3- Gene 5-10ml EDTA-Blut, DNA; nach Rücksprache weniger Hypertrophe obstruktive Kardiomyopathie/Hypertrophe Kardiomyopathie (HOCM/HCM) Dilatative Kardiomyopathie (DCM)-Gendiagnostik Stufe I: Sequenzierung der LMNA-, MYH7-, MYBPC3-, TMMT2- Gene 5-10ml EDTA-Blut, DNA; nach Rücksprache weniger Dilatative Kardiomyopathie (DCM) Kardiomyopathie 34
35 Faktor-V-Quebec Sequenzierung des MMRN1- und PLAU-Gens FV-Mangel Alpha-Thalassämie Sequenzierung/MLPA des HBA1- und HBA2- Gens Alpha-Thalassämie Beta-Thalassämie Sequenzierung/MLPA des HBB- Gens Beta-Thalassämie Hereditäre Persistenz von HbF (HPFA) Sequenzierung/MLPA des HBG1- und HBG2- Gens Hereditäre Persistenz von HbF Hereditäre Hämochromatose (HH) Stufe I: sequenzspezifischer Nachweis des HFE-Gens (incl. Mutationen C282Y, H63D, S65C), SSP-PCR, Gel- Elektrophorese Stufe II: Komplettsequenzierung des HFE-Gens Stufe III: Komplettsequenzierung der HJV- und HAMP, TRF2 und SLC11A3-Gene Stufe IV: MLPA der HJV- und HAMP, TRF2 und SLC11A3-Gene Hereditäre Hämochromatose 35
36 Hämoglobinopathien (Hämoglobin-Strukturvarianten) HbS, HbE, HbC, HbD Sequenzierung/MLPA des HBB- Gens Hämoglobinopathien/Sicherzellkrankheit 36
37 7. Thrombozytendiagnostik Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Benötigtes Material bei folgenden Abklärungen*: Abklärung neonatale (Allo-) Immunthrombozytopenie: Mutter: 10 ml EDTA-Blut, 10 ml Nativblut (ohne Trenngel!) Vater: 10 ml EDTA-Blut Kind: 0,5 ml EDTA-Blut, wenn möglich Abklärung Refraktärzustand auf Thrombozytentransfusionen 10 ml Nativblut (ohne Trenngel!) und 3 ml EDTA-Blut (incl. HLADiagnostik) Diagnostik Thrombozytärer Autoantikörper: 10 ml EDTA-Blut (20 ml bei Thrombozytopenie < /μl) und 10 ml Nativblut (ohne Trenngel!) Transport bei Raumtemperatur Nativblut wird bei +2 C bis +8 C gelagert, Serum bei 20 C * Die Untersuchungen werden im Institut Mannheim im Unterauftrag durchgeführt Antikörperbeladung auf Thrombozyten Plättchen-Immunfluoreszenztest (direkter PIFT), direkter MAIPA 20 ml EDTA-Blut Screening auf Plättchen-assoziierte Antikörper (z. B. bei Immunthrombozytopenien (ITP) und Thrombozytenfunktionsstörungen) max. 2 Tage bei Raumtemperatur Freie Thrombozytenantikörper Plättchen-Immunfluoreszenztest (indirekter PIFT), indirekter MAIPA 3 ml Serum Screening auf Plättchen-bindende Antikörper (z. B. bei Refraktärität auf Thrombozyten-Transfusionen, bei neonataler Immunthrombozytopenie (NAIT), bei posttransfusioneller Purpura (PTP) und zum Nachweis freier thrombozytärer Autoantikörper) max. 7 Tage zwischen 4 C und Raumtemperatur 37
38 Heparin induzierte Thrombozytopenie (HIT Typ II) Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 HIPA-Test (Heparin-induced Platelet Antibody) 1 ml Serum oder Plasma Klinischer Verdacht auf HIT Typ II (Thrombozytenabfall > 50%, Thrombozytenzahl < /μl) max. 7 Tage zwischen 4 C und Raumtemperatur 38
39 8. Allgemeine Vorgaben zur Prä-Analytik 8.1 Probenkennzeichnung Institut Frankfurt - Leistungsverzeichnis, Version 2.3 September 2016 Die Probenkennzeichnung dient der eindeutigen Zuordnung einer Patientenblutprobe zum Laborauftrag. Bei Nutzung von Barcode-Etiketten ist zu beachten, dass sowohl auf das Probenröhrchen als auch auf den Untersuchungsauftrag jeweils ein Klebeetikett mit der gleichen Nummer aufgebracht wird. Alternativ muss das Probengefäß mit Vor- und Zuname sowie Geburtsdatum und Barcode beschriftet werden. Die Beschriftung der Probengefäße für die Blutgruppenbestimmung unterliegt den Hämotherapie-Richtlinien. Hier wird neben einem Barcode die Angabe von Name, Vorname und Geburtsdatum des Patienten gefordert. Der anfordernde Arzt ist für die Identität der Blutprobe verantwortlich. Es ist darauf zu achten, dass für bestimmte Untersuchungen ein separates Probengefäß erforderlich ist (z.b. Blutgruppenbestimmung). 8.2 Anforderungsschein Für Ihre Anforderungen stellt Ihnen unser Labor die entsprechenden Laboraufträge zur Verfügung. Der Anforderungsschein muss folgende Angaben enthalten: 1. Name, Vorname, Geburtsdatum und Geschlecht des Patienten 2. Adresse des Patienten bzw. Kostenträger GKV-Patient - Ü-Schein notwendig Selbstzahler Rechnung an Einsender 3. Angaben zum einsendenden Arzt /Praxisstempel 4. Art des Untersuchungsmaterials 5. Abnahmedatum Insbesondere für Kreuzprobendiagnostik und HLA-Antikörperuntersuchungen (ET-Warteliste) 6. Reihenfolge (z.b. vor / nach Plasmapherese) 7. Verdachtsdiagnose 8. Klinische Angaben zur Anamnese frühere Transfusionen, früh. Schwangerschaften, Zustand nach Blutstammzell- oder solider Organ-Transplantation 9. Medikation 39
40 Um einen reibungslosen und zügigen Ablauf bei der Auftragsannahme zu gewährleisten bitten wir Sie soweit nicht bei uns im Kundenstamm hinterlegt eine Telefonnummer für Rückfragen zu hinterlassen. Anforderungsscheine können telefonisch beim Sekretariat bestellt werden oder unter der Internetadresse kostenfrei heruntergeladen werden. 8.3 Gewinnung von Untersuchungsmaterial Venenblutentnahme unter Standardbedingungen Nach einer Ruhezeit (sitzend oder liegend) von mindestens 10 Minuten kann dem Patienten Blut aus einer gut gefüllten Vene nach vorheriger Desinfektion entnommen werden. Es sollte keine Entnahme aus liegenden venösen oder arteriellen Zugängen erfolgen. Falls dies nicht möglich ist, sollte mindestens das 10fache des Totvolumens des Katheters vorab entnommen und verworfen werden. Die Staubinde wird handbreit oberhalb der vorgesehenen Einstichstelle angelegt (bei Entnahme am Arm). Zum Einstechen der Kanüle bis 1 Minute stauen, der Einstich muss streng intravenös erfolgen. Die Haut wird gegen die Stichrichtung gespannt und die Schliffseite der Kanüle nach oben gerichtet. Die Stauung kann gelöst werden, sobald Blut in die Röhrchen läuft. Die Punktionsstelle nach Entfernen der Kanüle ausreichend lange (ca. 5 Minuten) mit einem Tupfer unter ausreichendem Druck verschließen. Die Reihenfolge der Blutentnahme sollte wie folgt sein: 1. Blutkulturen 2. Nativblut (Serum) 3. Citratblut (Gerinnung) 4. EDTA- / Heparinblut Blutentnahmeröhrchen mit Antikoagulantienzusatz müssen umgehend durch Schwenken der Probe durchmischt werden nicht schütteln! 40
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