ARBEITSMETHODEN. der makroskopischen und mikroskopischen Anatomie. Ein Laboratoriumshandbuch für Biologen, Mediziner und technische Hilfskräfte.

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1 ARBEITSMETHODEN der makroskopischen und mikroskopischen Anatomie Ein Laboratoriumshandbuch für Biologen, Mediziner und technische Hilfskräfte Von HANS ADAM und GERHARD CZIHAK Mit 283 Abbildungen GUSTAV FISCHER VERLAG STUTTGART 1964

2 Inhaltsverzeichnis 1. Teil. -.. Die vergleichende Anatomie und ihre Objekte und die Bedeutung der vergleichenden Anatomie für Medizin und Biologie i 2. Teil Betäubung und Tötung von Tieren 5 Narkose- und Tötungsmittel 18 Hilfsstoffe für die Betäubung 26 Übersicht bewährter Betäubungsmethoden Teil Makroskopisch-anatomische Untersuchung von Tieren 33 Allgemeine Richtlinien 33 Vorbereitung und Aufbewahrung des Präparationsgutes 36 Geräte für die Präparation 37 Makroskopisch-anatomische Dauerpräparate, Teil Mikroskopisch-anatomische U n t e r s u c h u n g v o n Tieren Optische Geräte für die mikroskopisch-anatomische Untersuchung 65 Lupe oder einfaches Mikroskop 66 Zusammengesetztes Mikroskop 67 Stativ und mechanische Teile des Mikroskops 68 Die optischen Teile des Mikroskops 71 Objektiv 71 Okular 83 Beleuchtungsapparat und Lichtquellen 87 Mikroskopformen.. ; 101 Spezialverfahren der Lichtmikroskopie 109 Kennzeichen und Eigenschaften des Lichtes 110 Phasenkontrastmikroskopie 115 Auflichtmikroskopie 118 Polarisationsmikroskopie 121 Dunkelfeldmikroskopie Fluoreszenz- und Ultraviolettmikroskopie 129 Interferenzmikroskopie 133 Elektronenmikroskopie 140 IX

3 Hilfsmittel und Arbeitsgeräte für die mikroskopische. Untersuchung. 142 Instrumente 144 Glasgeräte und Glasbearbeitung 145 Geräte aus Kunststoffen 154 Objektträger 154 Mikroaquarien und -küvetten 155 Austausch von Flüssigkeiten in Mikroküvetten und Mikroaquarien Deckgläser : Reinigung der Objektträger und Deckgläser 161 Einschlußmittel 162 Wasserlösliche Einschlußmittel 162 Weiterbehandlung von Präparaten mit wasserlöslichen Einschlußmitteln Beschränkt wassertolerante Einschlußmittel 165 Wasserunlösliche Einschlußmittel 165 Brechungsindex des Einschlußmittels Immersionsflüssigkeiten 170 Umrandungslacke 171 Chemikalien in der Mikrotechnik. Herstellung von Lösungen 172 Allgemeines 172 Pufferlösungen 175 Mikroskopische Untersuchungsmethoden frischer Objekte 176 Instrumente und Hilfsmittel für die Untersuchung von Frischpräparaten Untersuchungsmedien für Frischpräparate 178 a) Wasser 178 b) Organflüssigkeiten und Körperpreßsäfte 178 c) Isotone, isoionale oder «physiologische Salzlösungen» 180 d) Bremsflüssigkeiten 180 e) Indifferente Untersuchungsmedien: Paraffinöl 181 Vorbereitung von Frischpräparaten für die Mikroskopie 186 Verfahren zur Verdeutlichung von Frischpräparaten 186 Verdeutlichung durch Fällung 186 Verdeutlichung durch Zusatz von Suspensionen 187 Verdeutlichung durch Färbung 187 Fixierung und Konservierung mikroskopischer Objekte 195 Der Fixierungsprozeß 196 Die Wirkung einiger wichtiger Faktoren bei der Fixierung 198 Ausführung der Fixation 203 Übersicht über die wichtigsten Fixierungsmittel 204 Herstellung von Präparaten fixierter mikroskopischer Objekte 216 Totalpräparate 216 A. Herstellung gefärbter Totalpräparate von Leberegeln 218 B. Mikroskopische Totalpräparate von Hühnerembryonen 219 C. Totalpräparate von Nerven und Nervenendigungen 219 D. Darstellung des neurosekretorischen Systems in Totalpräparaten des Gehirns niederer Vertebraten 220 E. Häutchenpräparate 221 X

4 Mechanische Abtrennung kleiner Objektteile 223 Mazeration 224 A. Isolierung von Nervenzellen 225 B. Isolierung von Epithelzellen 226 C. Mazeration eines Süßwasserpolypen 226 Ausstrich und Abstrich 226 A. Herstellung eines Blutausstriches 226 B. Darmausstrich zur Untersuchung intestinaler Protozoen 229 C. Nachweis des BARRschen Körperchens in Abstrichen der Mundhöhlenschleimhaut des Menschen 230 Quetschpräparate 231 Schnittpräparate 238 Anschnitte und Dickschnitte 238 Freihandschnitte 240 Anfertigung von Dünnschnitten mit speziellen Schneidemaschinen Mikrotome 241 Mikrotommesser 245 Sonstige Hilfsmittel 252 Gefriermikrotome 252 Paraffinmethode 262 Celloidinmethode 275 Celloidin-Paraffin-Methode 279 Einbettung in wasserlösliche Kunstwachse 281 Herstellung von Dünnschnitten nach Einbettung in polymerisierenden Kunstharzen Vorbehandlung schwer schneidbarer Objekte 285 Mikroveraschung 288 Schliffpräparate 289 Abdruckpräparate 290 Mikroskopische Dauerpräparate 291 Dauerpräparate mit wasserlöslichen Einschlußmitteln 291 Harz- oder Balsampräparate : 292 Beschriftung und Aufbewahrung mikroskopischer Präparate 293 Färbung fixierter mikroskopischer Objekte 294 Farbstoffe.* 294 Klassifikation der in der Mikrotechnik gebräuchlichen Farbstoffe 295 Stammlösungen und Löslichkeit von Farbstoffen 296 Vorgänge bei der Färbung und Ausführung der Färbung 297 Demonstrationsversuch zur Differenzierung Färbung der Zellkerne 300 Hämatoxylin und Hämatoxylin-Gemische 300 Herstellung und Anwendung der Hämatoxylinfarbstoffe \ Carmine 303 Orcein 305 Basische Teerfarbstoffe als Kernfärber 305 XI

5 Färbung von Zellkernen und NissL-Substanz in Nervenzellen 306 Bestimmung des isoelektrischen Bereiches mit Methylenblau 306 Synthetische Farbstoffe in Kombination mit Beizmitteln 309 Kern-und Plasmafärbung mit Hämatoxylinen 309 Gegenfärbung cytoplasmatischer Gewebebestandteile 313 Kombinations- oder Übersichtsfärbungen 313 Mehrfachfärbungen 316 Azanähnliche Methoden für Übersichtspräparate 317 Färbung von Zeil- und Gewebebestandteilen mit Metallen 319 Darstellung von Neurofibrillen durch Silberfärbung 321 ' Nervenfaserfärbung mit Silbersalzen bei Wirbellosen 326 Histochemische «Baustein-Analyse» in mikroskopischen Objekten 329 Vorbereitung der Objekte 329 Einschluß und Auswertung fertiger histochemischer Präparate 330 Histochemische Nachweismethoden für Kohlenhydrate ' Nachweis von Lipiden durch Färbung 334 Nachweis von Proteinen 340 Nachweis von Nucleinsäuren 343 Nächweis organischer Stoffe in Schnitten 347 Histochemischer Nachweis von Enzymen 348 Nachweis von Phosphatasen 350 Nachweismethoden für Esterasen 354 Nachweismethoden für Dehydrogenasen 355 Nachweis einer Peroxydase 357 Amylase-Nach weismethoden 357 Nachweis von Peptidasen 360-5Vergleichende Übersicht der verschiedenen mikroskopischen Untersuchungsverfahren 361 Bezugsquellenverzeichnis von Reagentien für die Mikroskopie Teil Objektivierung im Protokoll 368 Die wissenschaftliche Abbildung 368 Beobachten und Registrieren 368 Messen und Zählen mit dem Mikroskop 369 Erheben eines Befundes 376 Vergleich mit bereits bekannten Tatsachen 376 Die wissenschaftliche Arbeit 377 Wissenschaftliche Photographie 378 Die photographische Optik und ihre Anwendung Beleuchtung und Belichtungsmessung 387 Filter 391 Kameraformen 393 Aufnahmematerial 401 XII

6 Ausarbeiten des aufgenommenen Bildes 411 Chemikalien für photographische Arbeiten 412 Entwickeln von Negativen und Positiven Bestandteile der Entwickler Temperatur während der Entwicklung Entwicklungsdauer Durchmischung des Entwicklers Entwicklung und Gradation Kontrolle und Gradation Unterbrechen der Entwicklung 422 Photographischer Fixierungsprozeß 423 Wässern von photographischem Material 425 Trocknen von Negativen und Positiven 426 Die Negativherstellung 427 Die wichtigsten Typen von Negativentwicklern 429 Beurteilung des Negativs während der Entwicklung 434 Korrektur von Dichte und Gradation eines Negativs 435 Abschwächen von Negativen 436 Verstärken von Negativen 436 Umentwickeln 437 Umentwicklung nach Chrombehandlung 437 Umentwicklung mit Gradationsbeeinflussung 437 Negativverstärkung durch Reproduktion 438 Fehler in Negativen 438 Aufbewahren der Negative 440 Zusammenfassende Übersicht über die Negativ Verarbeitung 440 Positivherstellung 440 Photographische Papiere 443 Aufbau 443 Emulsionstypen bei Photopapieren 444 Gradation von Photopapieren 445 Bezeichnung der Photopapiere im Handel 446 Spezialpapiere 446 Positivbelichtung 447 Positiventwicklung 454 Besondere Formen der Positiventwicklung 457 Fertigstellen der Papierpositive 459 Retuschieren und Ausflecken 463 Abschwächen und Verstärken 463 Beschriften und Aufbewahren fertiger Bilder, 464 Herstellung von Diapositiven im Negativ-Positiv-Verfahren 464 Herstellung von Schwarz-Weiß-Diapositiven mittels Umkehrentwicklung Einrahmen und Bezeichnen von Diapositiven 468 Zusammenfassende Übersicht üher die Positivherstellung 469 Mikrophotographie 476 Mikrophotographie durch das Kameraobjektiv 478 Mikrophotographie mit Platten-, Balgen- und Spiegelreflexkameras 479 Mikrophotographie mit einer Aufsatzkamera 481 XIII

7 Herstellung mikrophotographischer Übersichtsaufnahmen Ubersichtsaufnahmen mit dem einfachen Mikroskop Ubersichtsaufnahmen mit dem zusammengesetzten Mikroskop Herstellung von Übersichtsmikrophotographien mit einem Vergrößerungsapparat 486 Bestimmung der Belichtungszeit in der Mikrophotographie Bestimmung der Belichtungszeit durch Probeaufnahmen Bestimmung der Belichtungszeit mit elektrischen Belichtungsmessern Verwendung von Lichtfiltern in der Mikrophotographie 494 Abbildungsmaßstab und Vergrößerung Aufnahmematerial für die Schwarz-Weiß-Mikrophotographie 502 Die Entwicklung der mikrophotographischen Negative 503 Verarbeitung mikrophotographischer Negative zupapierbildern und Diapositiven 503 Farbmikrophotographie 507 Aufnahmematerial für die Farbmikrophotographie -508 Aufnahmeprotokoll 509 Anfertigung von Zeichnungen nach Mikrophotographien 510 Wissenschaftliches Zeichnen 512 Histologische Analyse und Zeichnung 514 Hilfsmittel für das wissenschaftliche Zeichnen 526 Rekonstruktion anatomischer Lagebeziehungen nach Schnittserien 528 Anhang Grundbegriffe der Histologie 535 Wichtige Maßeinheiten 542