Abkürzungen...VI. 1 Einleitung Das Immunorgan Darm Das Immunsystem des Darms (GALT)...2
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1 Inhaltsverzeichnis Abkürzungen...VI 1 Einleitung Das Immunorgan Darm Anatomischer und histologischer Aufbau des Darms Das Immunsystem des Darms (GALT) Das intestinale Epithel des Darms Chronisch entzündliche Darmerkrankungen (CED) Colitis Ulcerosa (CU) Therapieansätze in der CU Konventionelle Strategien Alternative Strategien Chemisch induzierte Tiermodelle für die CU Natriumdextransulfat (DSS) Trinitrobenzoesulfonsäure (TNBS) lodacetamid (IA) In s/fu-perfusion Mineral-Silikate Eigenschaften von Mineralsilikaten Verwendung in der Humanmedizin Friedländer Mineralsilikate Zielstellung Material und Methoden Geräte, Labormaterialen, Chemikalien und Reagenzien Geräte Labormaterialien Chemikalien verwendete Kits... 26
2 3.1.5 verwendete Antikörper für die Immunhistochemie Stimulanzien Enzyme Puffer Lösungen und Puffer für EMSA Lösungen für RNA-Elektrophorese Tiermodell Tiergruppen Organentnahme und Gewebeasservierung Biochemische Methoden Immunhistologische Färbungen Molekularbiologische Methoden Isolierung der RNA Photometrische Bestimmung der RNA-Konzentration Kontrolle der RNA in Agarose-Gelelektrophorese Reverse Transkription Quantitative Real-time-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) Auswertung der quantitativen Real-Time-PCR Electric mobility shift assay (EMSA) Methoden der Zellkultur Auftauen von Zellen Kryokonservierung von Zellen Zellzahlbestimmung Kultivierung von Caco-2-Zellen Kultivierung von SW480- und THP-1-Zellen Kultivierung von IEC-6-Zellen Kultivierung und Passagieren von Zellen Herstellung der Tonsuspensionen Proliferationsassay (BrdU-Test)
3 Vitalitätsassay (WST-Test) Stimulation mit Zytokinen Enzym-Iinked Immunosorbent Assay (ELISA) Zellkultivierung auf Transwell-Einsätzen Stimulation der Caco-2-Zellen auf Transwell-Einsätzen mit proinflammatorischen Zytokinen Caco-2-Kokultur mit THP-1-Makrophagen Messung des transepithelialen elektrischen Widerstandes (TEER) Statistische Methoden...45 Ergebnisse Etablierung des Kurzzeitschädigungsmodells Perfusion eines Darmsegments mit Kontrollmedium Induktion einer mukosalen Entzündung mittels DSS- und TNBS-Perfusion Induktion einer mukosalen Entzündung mittels IA Effekte von IA auf die Histologie Effekt von IA auf die Infiltration von CD68+-Zellen Expression von Targetgenen Effekte verschiedener Therapeutika auf die IA-induzierte mukosale Entzündung Die Perfusion mit den Therapeutika führte zur einer Reduktion der IAinduzierten histologischen Veränderungen Die Perfusion mit den Therapeutika führte zur einer geringen Abnahme der IAinduzierten CD68+-Zell-lnfiltration Die Perfusion mit den Therapeutika verringerte die IA-induzierte mrna Expression von IL-6, IL-10, MCP-1 und iap positiv Untersuchungen zu den molekularen Wirkmechanismen der Tonmineralien Untersuchungen zur Toxizität von Friedländer Mineral-Silikaten Untersuchung zur Wirkung von Friedländer Tonmineralien auf die Expression von Zytokinen Untersuchungen zur Wirkung von Friedländer Mineral-Silikaten auf die epitheliale Barriere Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) zu NF-kB in IEC
4 Die NF-kB Aktivierung durch Lipid A Die NF-kB-Aktivierung durch LPS Diskussion Die Etablierung des Kurzzeitschädigungsmodells Die Perfusion mit IA induzierte Kolitis-ähnliche Veränderungen in der intestinalen Mukosa Die Perfusion mit IA induzierte eine erhöhte Infiltration von CD68+-Zellen Die Perfusion mit IA induzierte eine erhöhte Expression von Zytokinen und führt zu einer verminderten Expression der intestinalen Alkalischen Phosphatase Die Vorteile des Kurzzeitschädigungsmodells Die Wirkung von Therapeutika auf die IA-induzierte Kolitis Dexamethason Mutaflor (EcN) Resormin Der Einfluss der Friedländer Silikate auf humane intestinale Epithelzellen in vitro Toxizitätspotential Wirkung auf Zytokine Wirkung auf die intestinale Barriere Putativer Wirkmechanismus von Resormin unter Berücksichtigung der in vitro- Daten Ausblick Zusammenfassung Summary Literaturverzeichnis Abbildungsverzeichnis Tabellenverzeichnis Wissenschaftlicher Lebenslauf Veröffentlichungen Danksagung...123
5 Eidesstattliche Erklärung 124
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