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- Albert Martin Schuster
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1 Inhalt Inhalt... Abbildungsverzeichnis... T abellenverzeichnis... Abkürzungsverzeichnis Einleitung Literatur Arthropoden-übertragene Krankheitserreger (VBDs) Die Ausbreitung von Vector-borne diseases - aktuelle Entwicklungen 2.2 Untersuchte Erreger Dirofilaria spp Taxonomische Einordnung und Morphologie: Wirtsspektrum und Vektoren: Entwicklungszyklus Klinisches Bild, Diagnostik,Therapie und Prophylaxe Verbreitung und Epidemiologie Zoonotisches Potenzial Weitere Filarienarten Anaplasma phagocytophilum Taxonomische Einordnung und Morphologie Wirtsspektrum und Vektoren Klinisches Bild, Diagnostik und Therapie Verbreitung und Epidemiologie Zoonotisches Potenzial Ehrlichia canis Taxonomische Einordnung und Morphologie Wirtsspektrum und Vektoren Klinisches Bild, Diagnostik und Therapie Verbreitung und Epidemiologie Zoonotisches Potenzial Candidatus Neoehrlichia mikurensis Rickettsia spp Piroplasmen.....VI VIII..IX Material und Methoden 23
2 3.1 Aufbau der Studie Standortwahl Probengewinnung und -lagerung Fragebogen für Patientenbesitzer Material Chemikalien Einwegartikel Enzyme Geräte Lösungen, Puffer und weitere Flüssigkeiten Marker Reaktionskits Software Weitere Laborartikel Herstellung von Lösungen, Puffern und Reagenzien x TAE Puffer bp, 1 kb und AEcoRI/Hindlll Marker LB-Agar x Loading Dye Einfache Phosphatgepufferte Salzlösung (1 x PBS) Methoden DNA Isolation DNA Isolation aus Blutproben mit Maxwell 16 LEV Blood DNA K it DNA Isolation aus Blutproben mittels innuprep Blood DNA mini Kit DNA Isolation aus Fuchsmilzproben mit innuspeed Tissue DNA K it Messung von DNA mit Epoch Biotek Spektralphotometer Polymerase-Kettenreaktion Primer Polymerasen Konventionelle PCR zur Untersuchung auf Dirofilarien High Resolution Melt PCR zur Untersuchung auf Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia canis und Candidatus Neoehrlichia mikurensis Konventionelle PCR zur Untersuchung auf Piroplasmen Konventionelle PCR zur Untersuchung auf Rickettsia spp Agarosegelelektrophorese... 42
3 3.3.5 Sequenzierung von DNA Aufreinigung von DNA und Plasmiden Aufreinigung mit DNA cleaner and concentrator - 5 Kit Aufreinigung von PCR Produkten mittels Zymoclean Gel DNA Recovery Kit Klonierung Vektoren Klonierung von DNA in E. coli Top 10 kompetente Zellen mittels Zero Blunt TOPO PCR Cloning K it Klonierung von DNA in E. coli Top 10 kompetente Zellen mittels TOPO TA PCR Cloning Kit Klonierung von DNA in StrataClone SoloPack kompetente Zellen mittels StrataClone Blunt PCR Cloning K it Retransformation von Plasmiden Isolation von Plasmiden Aufreinigung von Plasmiden mittels NucleoSpin Plasmid Aufreinigung mit EasyPrep Pro K it Restriktionsenzyme Restriktionsverdau von Plasmiden mit EcoRI Enzym Restriktionsverdau von PCR Produkten mit Vspl (Asel) Enzym Giemsa-Färbung von Blutausstrichen Saure Phosphatase Färbung Modifizierter Knott-Test Berechnung der Kopienzahl von Plasmiden Statistische Auswertung Berechnung der Stichprobengröße Ergebnisse Stichprobengröße Geographische Herkunft und Verteilung der Proben Fragebogenauswertung Signalement Herkunft der Hunde Wohnumfeld der Hunde Reisegewohnheiten Infektionswahrscheinlichkeit mit einem studienrelevanten Erreger...2
4 4.3.6 Parasitenprophylaxe Mid-p Exact Test Prävalenzen der Erreger bei Hunden und Füchsen in Brandenburg Nachweis von Filarien Nachweis von Filarien-DNA Differenzierung von Mf mithilfe der sauren Phosphatase Aktivität A. phagocytophilum, E. canis und Candidatus N. mikurensis Piroplasmen Rickettsia spp Einzelfallbeschreibung Hund Nr Diskussion Sammelgebiet und Stichprobengröße Beurteilung der Fragebogenanalyse Limitationen der Studie Beurteilung der Prävalenzen von Krankheitserregern bei Hunden und Füchsen in Brandenburg Dirofilaria spp A. phagocytophilum, E. canis und Candidatus N. mikurensis Rickettsia spp Piroplasmen Einflussfaktoren für die Verbreitung von VBDs Schlussfolgerungen und Ausblick Zusammenfassung Summary Literaturverzeichnis Publikationsverzeichnis Anhang Therapieplan für eine nachgewiesene D. immitis Infektion Fragebogen für Patientenbesitzer geographische Herkunft der Hunde- und Fuchsproben nach Landkreisen Hundeblutproben Fuchsproben
5 10.4 Parasitenprophylaxe: studienrelevante Wirkstoffgruppen, Beispiele für Wirkstoffe und ihre Wirkung auf Arthropoden Mid p-exacttest Danksagung Selbstständigkeitserklärung...115
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