Zusammenfassung... I. Abkürzungsverzeichnis... III. Abbildungsverzeichnis... VI. Tabellenverzeichnis... IX. 1 Einleitung... 1
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- Heinrich Bruhn
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1 Inhaltsverzeichnis Zusammenfassung... I Abkürzungsverzeichnis... III Abbildungsverzeichnis... VI Tabellenverzeichnis... IX 1 Einleitung Die Leber als zentrales Organ des Stoffwechsels Die nichtalkoholische Fettlebererkrankung Die Rolle einer gestörten Lipidhomöostase auf die Entstehung einer Steatose Fettsäuren aus dem Fettgewebe Fettsäuren aus der Nahrung Fettsäuren aus der de novo-lipogenese VLDL-Export und β-oxidation TAG-Biosynthese und -Speicherung Entzündung des Fettgewebes und der Leber bei Übergewicht Entzündung im Fettgewebe Entzündung in der Leber aufgrund einer metabolischen Endotoxämie Verschiedene Quellen für erhöhte LPS-Konzentrationen Aktivierung der Kupfferzellen durch LPS Click-Markierung von zellulären Lipiden Zielsetzung Materialien Material und Chemikalien Geräte Verbrauchsmaterialien Reagenziensysteme Allgemeine Chemikalien und Lösungen Stammlösungen, Puffer und Medien Stammlösungen und Puffer Sonstige Puffer und Lösungen Medien Antibiotika Enzyme... 28
2 3.1.8 Verwendete Fettsäuren Primer Antikörper Zytokine Computerprogramme Methoden Tierexperimente Fütterungsexperimente HFD-Mausmodell Cholindefizientes HFD-Mausmodell Einleitung der Narkose Blutglukose-Messungen Glukose-Toleranztest Insulin-Toleranztest Analyse metabolischer Parameter im Blut Gewinnung von Blutserum FFS-Bestimmung im Serum Bestimmung von ALT, AST, Cholesterol und TAG Induktion einer in vivo LPS-Stimulation Bestimmung des Lipidgehalts der Leber In vivo Analyse der hepatischen Fettsäureaufnahme nach intravenöser oder oraler Applikation von Alkin-Fettsäuren Primärzellkultur Isolation primärer Leberzellen Kollagenisieren der Zellkulturschalen Perfusion der Leber Hepatozytenisolation Magnetische Zellisolation von Kupfferzellen Isolation primärer Splenozyten Zellzahlbestimmung Kultivierung der Primärzellen Kokultur- und Überstandsexperimente Hepatozyten mit Kupfferzellen Hepatozyten mit Splenozyten In vitro Stimulation der Leberzellen In vitro Analyse der hepatischen Fettsäureaufnahme und VLDL-Sekretion Einfluss diverser Milz-Zellsubpopulationen auf die Fettsäureaufnahme in vitro... 44
3 4.3 Metabolische Markierung von Lipiden Pulse-Chase-Analyse Lipidextraktion Click-Reaktion Dünnschichtchromatographie Färbung und Mikroskopie Molekularbiologische Methoden RNA-Isolation aus primären Hepatozyten cdna-synthese PCR und RT-qPCR Immunologische Methoden Durchflusszytometrie ELISA Statistik Ergebnisse Analyse des hepatischen Lipidstoffwechsels unter wechselnden metabolischen Bedingungen Etablierung der Methoden Pulse-Chase-Analyse und Lipidextraktion in primären Hepatozyten Einfluss verschiedener Insulin- und Glukosekonzentrationen auf den Lipidmetabolismus primärer Hepatozyten Metabolismus der Fettsäuren Ölsäure und Palmitinsäure in primären Hepatozyten Einfluss eines künstlichen Fettsäureüberschusses auf den Lipidmetabolismus primärer Hepatozyten HFD-Mäuse zeigten Tendenzen eines metabolischen Syndroms Steatotische Leberveränderungen in HFD-Mäusen Analyse des Lipidmetabolismus in Hepatozyten von ND- und HFD-Mäusen Einfluss Kupfferzell-sezernierter Faktoren Einfluss des Kupfferzellüberstandes auf eine Steatose in Hepatozyten TNF als Stimulus für die Entstehung einer Steatose in HFD-Mäusen Effekt einer kurzzeitigen in vivo LPS-Stimulation auf den hepatischen Lipidmetabolismus LPS-Einfluss auf die Fettsäureaufnahme und TAG-Sekretion in Hepatozyten LPS-Einfluss auf den Lipidmetabolismus Einfluss LPS-aktivierter Kupfferzellen auf den hepatischen Fettstoffwechsel... 79
4 5.3.4 LPS-abhängige Sekretion pro- und antiinflammatorischer Zytokine in Kupfferzellen Effekt der Faktoren von LPS-behandelten Kupfferzellen auf die Lipidakkumulierung in Hepatozyten Analyse der Genexpression in Hepatozyten nach in vivo LPS-Stimulation Untersuchung der TNF-abhängigen TAG-Einlagerung in Hepatozyten Einfluss von Splenozyten auf die Entwicklung einer Steatose in der Leber Vergleich der hepatischen Fettsäureaufnahme in Rag1 -/- - und C57BL/6J ND- Mäusen in vivo Vergleich der hepatischen Fettsäureaufnahme in Rag1 -/- - und C57BL/6J ND-Mäusen nach intravenöser Applikation Vergleich der hepatischen Fettsäureaufnahme in Rag1 -/- - und C57BL/6J ND-Mäusen nach oraler Applikation Vergleich der hepatischen Fettsäureaufnahme in Rag1 -/- - und ND-Mäusen in vitro Analyse der hepatischen Fettsäureaufnahme nach Kokultur mit Splenozyten aus ND-Mäusen und CD-HFD-Mäusen Einfluss der Fettsäuredosierung und des Verhältnisses von Splenozyten zu Hepatozyten auf den Steatose-Effekt Analyse der hepatischen Fettsäureaufnahme in unstimulierten Hepatozyten nach Zugabe von Splenozytenüberstand aus ND-Mäusen und CD-HFD-Mäusen Untersuchung des LIGHT-Einflusses auf die hepatische Lipidanlagerung Analyse des Einflusses einzelner Splenozytensubpopulationen auf die Fettsäureaufnahme in Hepatozyten Diskussion Einfluss von Fettsäuren, Insulin und Glukose auf den Lipidmetabolismus Auswirkung einer HFD auf die Entstehung einer Steatose in der Leber Effekt von LPS auf die Entwicklung einer Steatose TNF als bekannter Regulator des Lipidmetabolismus Der Einfluss von TNF auf die Leber Der Einfluss von TNF auf das Fettgewebe Effekt von Splenozyten auf die Entstehung einer Steatose Schlussfolgerung Ausblick Referenzen
5 Danksagung
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