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1 !" " " " """""""""""""""""""""""""""""""""" """""""""""""""""""""" JAA 2005/07 Deutsch #" BBL Gebrauchsferties Medium in Fläschchen und Röhrchen zum Nachweis und zur präsumtiven Identifikation von Dermatophyten Dermatophyte Test Medium (DTM), Modified with Chloramphenicol Siehe Symbol-Erklärunen am Ende der Packunsbeilae. VERWENDUNGSZWECK Dermatophyt-Testmedium (DTM) ist ein selektives und differenziertes Medium zum Nachweis und zur präsumtiven Identifikation von Dermatophyten in klinischen Proben. Aufrund der Nichtverfübarkeit eines der Hemmstoffe, Chlortetracyclin, wird das mit Chloramphenicol modifizierte Dermatophyt-Testmedium (DTM) als Substitut für die Oriinal-DTM-Formulierun empfohlen. ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG Dermatophyten verursachen kutane Pilzinfektionen des Haars, der Haut und der Näel, die im Allemeinen als Rinelflechte oder Herpes bezeichnet werden. 1-3 Mitlieder der Gattunen Trichophyton, Microsporum und Epidermophyton sind die bekanntesten Erreer dieser Infektionen. Taplin et al. entwickelten DTM als Screenin-Medium zur selektiven Isolierun und zum Nachweis von Dermatophyten in klinischen Proben. 4 Eine Kombination aus drei antimikrobiellen Wirkstoffen (Cycloheximid, Chlortetracyclin und Gentamycin) hemmte Bakterien und saprophytische Hefen und Schimmelpilze. Da Chlortetracyclin Ende 1992 nicht verfübar war, wurde es durch Chloramphenicol ersetzt. Dermatophyten werden präsumtiv nachewiesen, basierend auf der Makromorpholoie und der Bildun alkalischer Metaboliten, die den ph-wert erhöhen und dazu führen, dass der Phenolrot-Indiktator die Farbe des Mediums von elb nach rosa bis rot ändert. 2-4 Taplin et al. berichteten, dass sie mit dem Medium (mit Chlortetracyclin) in 97 von 100% Fällen Dermatophyten enau nachweisen konnten. 4 VERFAHRENSGRUNDLAGEN Papainisch abebautes Sojabohnenmehl liefert die für das Pilzwachstum erforderlichen Aminosäuren und anderen stickstoffhaltien Substanzen. Dextrose ist ein Enerielieferant. Phenolrot soll als kolorimetrischer Indikator den Anstie des ph-wertes im Medium dokumentieren. Antimikrobielle Wirkstoffe verbessern die Gewinnun von Dermatophyten durch die Hemmun von Bakterien und saprophytischen Pilzen. Cycloheximid ist ein Funizid, das een saprophytische Hefen und Schimmelpilze wirksam ist, jedoch keine Wirkun een Dermatophyten entfaltet. Chloramphenicol ist ein Breitbandantibiotikum, das eine Vielzahl rampositiver und ramneativer Bakterien hemmt. Gentamicin ist ein Aminolykosid-Antibiotikum, welches ramneative und einie rampositive Bakterien, einschließlich Staphylokokken, hemmt. REAGENZIEN Dermatophyte Test Medium, Modified with Chloramphenicol Unefähre Zusammensetzun* pro L destilliertem Wasser Papainisch abebautes Sojamehl...10,0 Dextrose...10,0 Aar...24,0 Phenolrot... 0,2 Cycloheximid... 0,5

2 Gentamicin... 0,1 Chloramphenicol... 0,1 *Nach Bedarf abestimmt und/oder eränzt auf die eforderten Testkriterien. Warnunen und Vorsichtsmaßnahmen: In-vitro-Dianostikum. Röhrchen und Fläschchen mit fest sitzenden Verschlusskappen sind vorsichti zu öffnen, um Verletzunen durch Glasbruch zu vermeiden. Klinische Proben können pathoene Mikrooranismen, wie z.b. Hepatitis-Viren und HIV, enthalten. Beim Uman mit allen mit Blut oder anderen Körperflüssikeiten kontaminierten Artikeln sind die Allemeinen Vorsichtsmaßnahmen 5-8 sowie die einschläien Institutionsrichtlinien zu beachten. Präparierte Platten, Fläschchen, Probenbehälter und andere kontaminierte Materialien im Autoklav sterilisieren und erst dann entsoren. Aufbewahrun: Röhrchen und Fläschchen nach Erhalt bei 2 8 C im Dunkeln aufbewahren. Nicht einfrieren oder überhitzen. Erst unmittelbar vor Gebrauch öffnen. Vor Lichteinwirkun schützen. Medien in Röhrchen und Fläschchen, die vor Gebrauch emäß der Anleitun auf dem Etikett elaert werden, können bis zum Verfallsdatum inokuliert und entsprechend den empfohlenen Inkubationszeiten inkubiert werden. Medium vor der Inokulation Raumtemperatur annehmen lassen. Haltbarkeit des Produkts: Medium bei Anzeichen von Kontamination durch andere Mikrooranismen, Verfärbun, Eintrocknen oder sonstien Anzeichen von Produktverfall nicht verwenden. PROBENENTNAHME UND -HANDHABUNG Einzelheiten zur Probenentnahme und -handhabun sind der einschläien Fachliteratur zu entnehmen. 1-3,9 VERFAHREN Miteliefertes Arbeitsmaterial: Dermatophyte Test Medium (DTM), Modified with Chloramphenicol Benötites, jedoch nicht miteliefertes Arbeitsmaterial: Zusätzliche Kulturmedien, Reaenzien, Qualitätskontrolloranismen und Laboreräte, die für dieses Verfahren ebraucht werden. Testverfahren: Antiseptische Vorsichtmaßnahmen beachten. Das Medium nach Eintreffen der Probe im Labor schnellstmölich inokulieren. Die Probe mitti auf die Aaroberfläche eben und vorsichti in den Aar drücken, um einen festen Kontakt mit dem Medium zu ewährleisten. Die Verschlusskappe locker aufsetzen, damit die Luft zirkulieren kann. Bis zu 14 Tae bei C inkubieren. Qualitätssicherun durch den Anwender: 1. Die Röhrchen und Fläschchen auf Zeichen von Verfall überprüfen, wie unter Haltbarkeit des Produkts beschrieben. 2. Leistunsprüfun anhand einer repräsentativen Probe der Röhrchen und Fläschchen mit Reinkulturen stabiler Kontrolloranismen durchführen, die bekannte, ewünschte Reaktionen liefern. Folende Teststämme werden empfohlen: TESTSTAMM Trichophyton mentarophytes ATCC 9533 Microsporum audouinii ATCC 9079 Asperillus nier ATCC Pseudomonas aeruinosa ATCC ZU ERWARTENDE ERGEBNISSE Wachstum mit rosa bis roter Farbe im Medium. Wachstum mit rosa bis roter Farbe im Medium. Gehemmt (teilweise oder vollständi). Gehemmt (teilweise oder vollständi).

3 Es sind die eltenden esetzlichen und behördlichen und in den Akkreditierunsbedinunen festeleten Vorschriften zur Qualitätskontrolle sowie die laborinternen Standardvoraben zur Qualitätskontrolle zu beachten. Anwendern wird eraten, sich über eeinete Maßnahmen zur Qualitätskontrolle an die einschläien CLSI-Richtlinien (ehemals NCCLS) und CLIA-Vorschriften zu halten. ERGEBNISSE Dermatophyten zeien nach 10 bis 14 Inkubationstaen eine typische Morpholoie und eine rosa bis rote Farbe im Medium, um die Kolonie herum. Farbänderunen nach dem 14. Inkubationsta außer Acht lassen, da sie durch kontaminierte Pilzen verursacht worden sein können. 4 VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN Ein einzelnes Medium reicht selten zum Nachweis aller potenziell sinifikanten Oranismen in einer Probe aus. Die Wirkstoffe in selektiven Medien können einie Stämme der ewünschten Spezies hemmen oder das Wachstum einer Spezies zulassen, die sie eientlich hemmen sollten, besonders, wenn diese Spezies sehr zahlreich in der Probe vertreten ist. Auf selektiven Medien kultivierte Proben sollten deshalb auch auf nichtselektiven Medien kultiviert werden, um zusätzliche Informationen zu erhalten und die Gewinnun potenzieller Pathoene sicherzustellen. Zum Nachweis müssen die Oranismen in Reinkultur vorhanden sein. Morpholoische, biochemische und/oder seroloische Tests sollten für den endültien Nachweis durcheführt werden. Nähere Informationen sind der entsprechenden Literatur zu entnehmen. 1-3,9-11 LEISTUNGSMERKMALE Vor der Freiabe werden alle Charen von mit Chloramphenicol modifizierten Dermatophyt-Testmedium (DTM) auf ihre Leistunsmerkmale etestet. Repräsentative Proben der Chare werden direkt mit frischen, auf BBL Sabouraud-Dextrose-Aarplatten anesetzten Kulturen von Trichophyton mentarophytes, ATCC 9533, Microsporum audouinii, ATCC 9079 und Asperillus nier, ATCC inokuliert. Die Behälter werden bis zu 7 Tae bei C in einer aeroben Atmosphäre inkubiert. Bei T. mentarophytes und M. audouinii ist ein mäßies bis starkes Wachstum und eine rosa/rote Farbentwicklun im Medium zu beobachten. A. nier ist teilweise bis vollständi ehemmt. LIEFERBARE PRODUKTE Best.- Nr. Beschreibun BBL Dermatophyte Test Medium, Modified with Chloramphenicol Slants, Packun mit 10 Röhrchen der Größe C # BBL Dermatophyte Test Medium, Modified with Chloramphenicol Transrow-Fläschchen, Packun mit je 100 Fläschchen BBL Dermatophyte Test Medium, Modified with Chloramphenicol Mycoflask-Fläschchen, Packun mit je 10 Fläschchen LITERATUR. 1. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld Bailey & Scott's dianostic microbioloy, 10th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 2. Summerbell, R.C Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and aents of superficial mycoses, p In P.R. Murray, E.J. Baron, J.H. Jorensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken (ed)., Manual of clinical microbioloy, 8th ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 3. Kwon-Chun, and J.E. Bennett Medical mycoloy. Lea & Febier, Philadelphia. 4. Taplin, D., N. Zaias, G. Rebell, and H. Blank Isolation and reconition of dermatophytes on a new medium (DTM). Arch. Dermatol. 99: National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 6. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbioloical and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printin Office, Washinton, D.C. 8. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to bioloical aents at work (seventh individual directive within the meanin of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of funi in the clinical mycoloy laboratory. Coordinatin ed., J.C. Sherris. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C.

4 10. Koneman, E.W., S.D. Allen, W.M. Janda, P.C. Schreckenberer, and W.C. Winn, Jr Mycoloy, p Color atlas and textbook of dianostic microbioloy, 5th ed. Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia. 11. Larone, D.H Medically important funi: a uide to identification, 3rd ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Loo, BBL and Mycoflask are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.

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