BBL Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood (TSA II) und BBL MacConkey II Agar with MUG - I Plate

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1 BBL Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) und BBL MacConkey II Aar with MUG - I Plate Rev. 03 April 2015 MASSNAHMEN ZUR QUALITÄTSKONTROLLE I II EINFÜHRUNG Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (Trypticase-Soja-Aar mit 5 % Schafblut) wird zur Kultivierun anspruchsvoller Oranismen sowie zur Visualisierun von Hämolyseraktionen verwendet. MacConkey II Aar with MUG (MacConkey-II-Aar mit MUG) dient zum präsumtiven Nachweis von Escherichia coli. TESTDURCHFÜHRUNG A. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood 1. Repräsentative Proben mit Verdünnunen der nachstehend aufeführten Kulturen inokulieren. a) Mit einer volumetrischen Pipette oder einer verleichbaren Methode 0,1 ml einer Verdünnun, die KBE eribt, auf jede Platte eben und zur Inokulation mit einem sterilen läsernen Spatel ausstreichen. b) Die Staphylococcus- und Escherichia-Stämme in einer aeroben Atmosphäre bei 35 ± 2 C inkubieren. Die Streptococcus-Stämme in einer aeroben, mit Kohlendioxid anereicherten Atmosphäre bei 35 ± 2 C inkubieren. 2. Die Platten nach 18 bis 24 h auf Wachstum, Kolonieröße und Hämolysereaktionen untersuchen. 3. Zu erwartende Erebnisse CLSI-Kontrolloranismen (ATCC-Stämme) *Streptococcus pyoenes... Wachstum, Beta-Hämolyse (19615) *Streptococcus pneumoniae.... Wachstum, Alpha-Hämolyse (6305) *Staphylococcus aureus... Wachstum (25923) *Escherichia coli... Wachstum (25922) * Empfohlener Oranismusstamm für die Qualitätssicherun durch den Anwender. B. MacConkey II Aar with MUG 1. Repräsentative Proben mit Verdünnunen der nachstehend aufeführten Kulturen inokulieren. a) Die Platten zur Isolierun mit 18 bis 24 h alten und im Verhältnis 1:10-1 verdünnten Bouillonkulturen ausstreichen. Für Proteus mirabilis vor dem Ausstreichen zwei zusätzliche 10fache Verdünnunen anfertien. b) Die Platten bei 35 ± 2 C in einer aeroben Atmosphäre inkubieren. c) Für alle Oranismen Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (Aarplatten) als nichtselektive Kontrollen mittesten. 2. Die Platten nach 18 bis 48 h auf Wachstum, Fluoreszenz, Pimentierun und Selektivität untersuchen. 3. Zu erwartende Erebnisse *Escherichia coli... Wachstum, rosarote Kolonien, Fluoreszenz (ATCC 25922) Proteus mirabilis... Wachstum, farblose Kolonien, Schwärmen ehemmt, keine Fluoreszenz (ATCC 12453) *Salmonella enterica... Wachstum, farblose Kolonien, keine Fluoreszenz Subsp. enterica Serotyp Typhimurium (ATCC 14028) *Enterococcus faecalis... Hemmun (teilweise bis vollständi), keine Fluoreszenz (ATCC 29212) * Empfohlener Oranismusstamm für die Qualitätssicherun durch den Anwender. 1

2 III ZUSÄTZLICHE QUALITÄTSKONTROLLE 1. Die Platten wie unter Haltbarkeit des Produkts beschrieben untersuchen. 2. Die repräsentativen Platten im Hinblick auf Beschädiunen sichtprüfen, durch die ihre Verwendun beeinträchtit werden könnte. 3. Den ph-wert potentiometrisch bei Raumtemperatur bestimmen. Er sollte innerhalb der Spezifikation lieen: 7,4 ± 0,2 (TSA II) bzw. 7,1 ± 0,2 (MacConkey II Aar with MUG). 4. Die Festikeit der Platten während der Inokulation beachten. 5. Unbeimpfte repräsentative Platten 72 h lan bei 35 ± 2 C inkubieren und im Hinblick auf mikrobielle Kontamination untersuchen. PRODUKTINFORMATIONEN IV VERWENDUNGSZWECK Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood wird zur Kultivierun anspruchsvoller Mikrooranismen und zur Visualisierun hämolytischer Reaktionen verwendet, welche viele Bakterienspezies zeien. MacConkey II Aar with MUG dient zum präsumtiven Nachweis von Escherichia coli. V ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG A. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood Trypticase Soy Aar ist auf Grund seiner Nährstoffzusammensetzun ein häufi verwendetes Medium, sowohl ohne Zusatz als auch als Basis für bluthaltie Medien. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood wird häufi zur Gewinnun und Kultivierun anspruchsvoller Mikrobenspezies sowie zum Nachweis hämolytischer Reaktionen verwendet, die ein wichties Differenzierunsmerkmal für Bakterien, besonders für Streptococcus-Spezies, darstellen. B. MacConkey II Aar with MUG Die BBL MacConkey II Aar-Formulierun wurde 1983 veröffentlicht. Sie wurde speziell entwickelt, um die Hemmwirkun een das Schwärmen der Proteus-Spezies zu verbessern, um eine eindeutiere Differenzierun zwischen Lactose fermentierenden Mikrooranismen und Lactose-Non-Fermentern zu ermölichen sowie um hervorraendes Wachstum enterischer Pathoene zu fördern. Trepeta und Edber 1 modifizierten den MacConkey-Aar durch die Hinzufüun von MUG (4-Methylumbelliferyl-β-D-Glucuronid). Das resultierende Medium ermölichte den Autoren innerhalb von 5 min den präsumtiven Nachweis von E. coli aus dem primären Plattenmedium. VI VERFAHRENSGRUNDLAGEN A. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood Die Kombination von Casein und Sojapeptonen in der Trypticase Soy Aar-Basis verleiht dem Medium einen hohen Nährwert, da es oranischen Stickstoff, insbesondere Aminosäuren und lankettie Peptide, liefert. Durch das Natriumchlorid wird das osmotische Gleichewicht ewahrt. Defibriniertes Schafblut ist das für die Anreicherun von Medien auf Aar-Basis am häufisten verwendete Blut. 2 Die Hämolysereaktionen der Streptokokken sind klar definiert, und das Wachstum von Haemophilus haemolyticus, einem Apathoen, dessen hämolytische Kolonien von denen der beta-hämolytischen Streptokokken nicht zu unterscheiden sind, wird ehemmt. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) eribt ein hervorraendes Wachstum sowie Beta-Hämolyse bei Streptococcus pyoenes (Lancefield-Gruppe A); darüber hinaus eribt es hervorraendes Wachstum und entsprechende Hämolysereaktionen bei anderen anspruchsvollen Oranismen. Das Medium einet sich zur Verwendun mit Bacitracin- Blättchen (Taxo A) von niedrier Konzentration (0,04 Einheiten) zur präsumtiven Identifizierun von Streptokokken der Gruppe A (S. pyoenes). B. MacConkey II Aar with MUG MacConkey II Aar ist ein selektives Differenzierunsmedium. Es ist nur erinfüi selektiv, da die Konzentration an Gallensalzen, welche rampositive Mikrooranismen hemmen, im Verleich mit anderen enterischen Plattenmedien niedri ist. Kristallviolett ist ebenfalls im 2

3 Medium enthalten, um das Wachstum rampositiver Bakterien, besonders von Enterokokken und Staphylokokken, zu hemmen. Die Differenzierun enterischer Mikrooranismen wird durch die Kombination von Lactose und Neutralrot-Indikator erreicht. Farblose oder rosa bis rote Kolonien werden je nach Fähikeit des Isolats, Kohlenhydrat zu fermentieren, ebildet. Die meisten E. coli-stämme (96 97 %) produzieren das Enzym β-d-glucuronidase. 3 Dieses Enzym hydrolysiert MUG unter Bildun von 4-Methylumbelliferon, einer Verbindun, die unter lanwelliem UV-Licht (366 nm) fluoresziert. Die Aufnahme von MUG in die Formulierun lässt β-d-lucuronidase-positive E. coli-stämme bei der Betrachtun unter UV-Licht blaurün fluoreszieren. VII REAGENZIEN Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) Unefähre Zusammensetzun* pro L destilliertem Wasser Pankreatisch abebautes Casein... 14,5 Papainisch abebautes Sojamehl... 5,0 Natriumchlorid... 5,0 Aar... 14,0 Wachstumsfaktoren... 1,5 Defibriniertes Schafblut... 5 % *Nach Bedarf abestimmt und/oder eränzt auf die eforderten Testkriterien. MacConkey II Aar with MUG Unefähre Zusammensetzun* pro L destilliertem Wasser Pankreatisch abebaute Gelatine... 17,0 Pankreatisch abebautes Casein... 1,5 Peptisch abebautes Tierewebe... 1,5 Lactose... 10,0 Gallensalze... 1,5 Natriumchlorid... 5,0 Neutralrot... 0,03 Kristallviolett... 0,001 MUG (4-Methylumbelliferyl-β-D-Glucuronid)... 0,1 Aar... 13,5 *Nach Bedarf abestimmt und/oder eränzt auf die eforderten Testkriterien. Warnunen und Vorsichtsmaßnahmen In-vitro-Dianostikum. Bei übermäßier Feuchtikeit das Unterteil der Platte nach oben drehen, versetzt auf den Deckel leen und an der Luft trocknen lassen, um zu verhindern, dass sich während der Inkubation Deckel und Unterteil aneinander festsauen. Klinische Proben können pathoene Mikrooranismen, wie z.b. Hepatitis-Viren und HIV, enthalten. Beim Uman mit allen mit Blut oder anderen Körperflüssikeiten kontaminierten Artikeln sind die Allemeinen Vorsichtsmaßnahmen 4-7 sowie die einschläien Institutionsrichtlinien zu beachten. Gebrauchsfertie Platten, Probenbehälter und sonstie kontaminierte Materialien nach der Verwendun im Autoklaven sterilisieren und erst dann entsoren. Aufbewahrun Die Aarplatten nach Erhalt bei 2 8 C im Dunkeln aufbewahren. Einfrieren oder Überhitzen vermeiden. Erst unmittelbar vor Gebrauch öffnen. Vor Lichteinwirkun schützen. Gebrauchsfertie Platten, die bis unmittelbar vor der Verwendun bei 2 8 C in der Oriinalverpackun aufbewahrt wurden, können bis zum Verfallsdatum inokuliert und für die empfohlene Inkubationsdauer inkubiert werden. Das Medium vor der Inokulation auf Raumtemperatur erwärmen lassen. Haltbarkeit des Produkts Die Platten bei Anzeichen von mikrobieller Kontamination, Verfärbun, Austrocknun oder sonstien Anzeichen von Produktverfall nicht verwenden. 3

4 VIII PROBENENTNAHME UND -HANDHABUNG Zur Kultivierun eeinete Proben können auf unterschiedliche Weise ehandhabt werden. Nähere Informationen entnehmen Sie bitte der entsprechenden Fachliteratur. 8,9 Die Probenentnahme sollte vor der Verabreichun anderer antimikrobieller Mittel erfolen. Für einen umehenden Transport zum Labor ist zu soren. IX VERFAHREN Miteliefertes Arbeitsmaterial Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) und MacConkey II Aar with MUG (I Plate) Benötites, jedoch nicht miteliefertes Arbeitsmaterial Zusätzliche Kulturmedien, Reaenzien, Qualitätskontrolloranismen und Laboreräte nach Bedarf. Testverfahren Aseptisch vorehen. Die Aaroberfläche sollte latt und feucht sein, jedoch keine überschüssie Feuchtikeit aufweisen. Die Probe nach dem Eintreffen im Labor so bald wie mölich ausstreichen. Die Ausstrichplatte dient primär zur Isolierun von Reinkulturen aus Proben mit Mischflora. Wenn das Material direkt von einem Abstrich kultiviert wird, alternativ den Abstrichtupfer über einen kleinen Oberflächenbereich am Rand rollen; dann von diesem inokulierten Bereich aus ausstreichen. Die Platten vor Licht eschützt h lan bei 35 ± 2 C inkubieren. Atemwesproben in einer aeroben Atmosphäre mit Kohlendioxid-Anreicherun inkubieren. Andere Proben aerob ohne Zusatz von CO 2 inkubieren. Qualitätssicherun durch den Anwender Siehe Maßnahmen zur Qualitätskontrolle. Es sind die eltenden esetzlichen und behördlichen und in den Akkreditierunsbedinunen festeleten Vorschriften zur Qualitätskontrolle sowie die laborinternen Standardvoraben zur Qualitätskontrolle zu beachten. Benutzer sollten die relevanten CLSI-Dokumente und CLIA- Vorschriften über eeinete Testverfahren zur Qualitätskontrolle einsehen. X ERGEBNISSE Nach der Inkubation weisen die meisten Platten einen Bereich mit konfluierendem Wachstum auf. Da es sich bei dem Ausstrichverfahren eientlich um eine Verdünnunstechnik handelt, wird in den Ausstrichbereichen eine stets abnehmende Anzahl von Mikrooranismen deponiert. Follich sollte(n) einer oder mehrere dieser Bereiche isolierte Kolonien der in der Probe enthaltenen Oranismen aufweisen. Außerdem kann das Wachstum jedes Oranismus auf der Basis des Wachstums in jedem der ausestrichenen Bereiche semiquantitativ bestimmt werden. Typische Erebnisse auf Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood sind die Folenden: 1. Hämolytische Streptokokken können als durchsichtie oder undurchsichtie, als räuliche, kleine (1 mm) oder roße, matte und schleimhaltie (2 4 mm) Kolonien erscheinen, umrint von einer Hämolysezone. Es sollten Gramfärbunen anefertit und untersucht werden, um die makroskopischen Erebnisse zu überprüfen (andere Oranismen, die Hämolyse verursachen können, sind u.a. Listeria, verschiedene Corynebakaterien, hämolytische Staphylokokken, Escherichia coli und Pseudomonas). Bei der Berichtausabe kann sich die unefähre quantitative Bestimmun der Anzahl von Kolonien hämolytischer Streptokokken als hilfreich für den Kliniker erweisen. 2. Pneumokokken erscheinen üblicherweise als sehr flache, latte, durchsichtie, räuliche und mitunter schleimhaltie Kolonien, die von einer schmalen Zone rüner (Alpha-)Hämolyse umeben sind. 3. Staphylokokken erscheinen als undurchsichtie, weiße bis oldelbe Kolonien mit oder ohne Beta-Hämolysezonen. 4. Listeria. Es werden kleine Beta-Hämolysezonen ebildet. Diese lassen sich anhand ihrer Stäbchenform in den Färbunen unterscheiden sowie anhand ihrer Motilität bei Raumtemperatur. 5. Andere Oranismen zeien minimale Flora, und es ist zu erwarten, dass klinisch sinifikante Isolate auch auf dieser nichtselektiven Formulierun wachsen. 4

5 Typische Koloniemorpholoie auf MacConkey II Aar with MUG: Kolonien von Lactose fermentierenden Bakterien erscheinen rosa bis rosarot und können von einer Galle-Niederschlaszone umeben sein, während Lactose-Non-Fermenter-Kolonien farblos sind. Das Medium unter lanwelliem UV-Licht (366 nm) untersuchen. Für β-d-glucuronidase positive Kolonien zeien blaurüne Fluoreszenz; für β-d-glucuronidase neative Kolonien zeien keine Fluoreszenz. XI VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN Berichten zufole ist das Wachstum von einien Enterobacteriaceae und Pseudomonas aeruinosa auf MacConkey Aar ehemmt, wenn die Inkubation in einer mit CO 2 anereicherten Atmosphäre erfolt. 10 Nicht alle E. coli-stämme fermentieren Lactose oder produzieren β-d-glucuronidase. Einie Salmonellen- und Shiella-Stämme produzieren β-d-glucuronidase und fluoreszieren. 11 Berichten zufole fluoresziert ein eriner Prozentsatz an Yersinia und Streptokokken. 12 Zur Identifizierun müssen die Oranismen in Reinkultur vorlieen. Für die endültie Identifizierun sollten morpholoische, biochemische und/oder seroloische Tests durcheführt werden. Detaillierte Informationen und empfohlene Verfahren sind der einschläien Fachliteratur zu entnehmen. 8,9,13 XII LEISTUNGSMERKMALE Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood Trypticase Soy Aar (TSA) with 5% Sheep Blood wurde bei einer Studie unter Einsatz einer mit Bouillon anereicherten Kultur (Todd Hewitt) und der optischen Immunoassay-Methode zur Dianose von Infektionen mit β-hämolytischen Streptokokken als Kontrolle verwendet. Es wurden fünfhundertundzwei (502) Proben etestet. TSA with 5% Sheep Blood zeite eine Empfindlichkeit und Spezifität von 92,5 % bzw. 99,4 %. 14 Nuyen et al. verwendeten Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood als Goldstandard für den Nachweis von Streptokokken der Gruppe B im unteren Genitalbereich schwanerer Frauen. 15 Bei einer anderen Studie konnten Rossmann et al. auf Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood erfolreich Lautropia mirabilis aus den Mundhöhlen HIVinfizierter Kindern neu isolieren. 16 Von den 85 Kindern, die in dieser Studie untersucht wurden, waren 35 (41,4 %) L. mirabilis-positiv. Isenber et al. verwendeten Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood als Kontrolle zur Beurteilun der Isolierun von Enterococcus aus einem untersuchten selektiven Medium. 17 Es wurden zweihundertundfünfzi (250) Streptokokkenstämme der Gruppe D aus klinischem Material und 8 Stämme des National Communicable Disease Center (Atlanta, USA) verwendet. MacConkey II Aar with MUG Bei einer in einem Krankenhaus und in einem Universitätsklinikum durcheführten klinischen Studie wurde MUG zu BBL MacConkey II Aar hinzuefüt, um β-glucuronidase nachzuweisen. Es zeite sich, dass die Dauer des Nachweises von E. coli-stämmen von einer Stunde auf fünf Minuten reduziert werden konnte und dass die Fähikeit, diese Oranismen in Mischspezies nachzuweisen, verbessert war. 1 XIII LIEFERBARE PRODUKTE Best.- Nr. Beschreibun BD BBL Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) und BD BBL MacConkey II Aar with MUG-I Plate, Packun zu 20 Platten 5

6 XIV LITERATUR 1. Trepeta, R.W., and S.C. Edber Methylum belliferyl-β-d-lucuronide-based medium for rapid isolation and identification of Escherichia coli. J. Clin. Microbiol. 19: Vera, H.D., and D.A. Power Culture media, p In E.H. Lennette, A. Balows, W.J. Hausler, Jr., and J.P. Truant (ed.), Manual of clinical microbioloy, 3rd ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 3. Killian, M., and P. Bulow Rapid dianosis of Enterobacteriaceae. I Detection of bacterial lycosidases. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec. B, 84: National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 5. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbioloical and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printin Office, Washinton, D.C. 7. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to bioloical aents at work (seventh individual directive within the meanin of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbioloy, 8th ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 9. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld Bailey & Scott's dianostic microbioloy, 11th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 10. Mazura-Reetz, G., T.R. Neblett, and J.M. Galperin MacConkey aar: CO 2 vs. ambient incubation, abstr. C 179, p Abstr. 79th Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol Fen, P.C.S., and P.A. Hartmen Fluoroenic assays for immediate confirmation of Escherichia coli. Appl. Environ. Microbiol. 43: Robison, B.J Evaluation of a fluoroenic assay for detection of Escherichia coli in foods. Appl. Environ. Microbiol. 48: Holt, J.G., N.R. Krie, P.H.A. Sneath, J.T. Staley, and S.T. Williams (ed.) Berey's Manual of determinative bacterioloy, 9th ed. Williams & Wilkins, Baltimore. 14. Fries, S.M Dianosis of roup A streptococcal pharynitis in a private clinic: comparative evaluation of an optical immunoassay method and culture. J. Pediatr. 126: Nuyen, T.M., et al Detection of roup B streptococcus: comparison of an optical immunoassay with direct platin and broth-enhanced culture methods. J. Matern. Fetal. Med. 7: Rossmann, S.N. et.al Isolation of Lautropia mirabilis from oral cavities of human immunodeficiency virus-infected children. J. Clin. Microbiol. 36: Isenber, H.D., D. Goldber, and J. Sampson, Laboratory studies with a selective medium. Appl. Microbiol. 20: BD Dianostics Technischer Kundendienst: setzen Sie sich mit Ihrer zuständien BD-Vertretun oder Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD USA Benex Limited Pottery Road, Dun Laohaire Co. Dublin, Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Loo, and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company BD 6