Die Schweine-Salmonellen-Verordnung und der SALMOTYPE PigScreen ELISA Schroeder C., Kramer T., Seifert S., Sasse O., Gabert J. Labor Diagnostik GmbH Leipzig I. Leipziger Labor Diagnostik Symposium Leipzig, 28. Juni 2007
Übersicht 1. Salmonelleninfektion beim Schwein 2. Was bisher geschah 3. Schweine-Salmonellen-Monitoring in der EU 4. Schweine-Salmonellen-Verordnung 5. Salmonellenüberwachung und SALMOTYPE PigScreen 6. Schlußfolgerungen
Salmonelleninfektion beim Schwein Klinische Salmonellose Durch unterschiedliche Salmonellen- Serovare verursachte Infektionskrankheit der Schweine. Erreger: Schweineadaptierte Salmonellen- Serovare (S. Choleraseuis, S. Typhisuis) Leitsymptome: Septikämie, Durchfall, Pneumonie, Aborte Latente Salmonelleninfektion Klinisch gesunde Salmonellen- Ausscheider Erreger: Zoonotische Salmonellen Serovare ohne eindeutige Wirtsadaption (S. Typhimurium u.a.) Quelle: Leyk und Piontkowski (2007): Leitfaden zur Bekämpfung der Salmonelleninfektion beim Schwein
Salmonelleninfektion beim Schwein Serovarenverteilung beim Schwein Typhimurium 79,6% der vom Schwein stammenden Isolate (max. 88%, 2002) Bei Lebensmittelproben: 65,9% (ca. 50 % STM DT 104) Derby 6,2% Agona 2,3% Infantis 2,0% London, Livingstone - je ca. 1% Enteritidis 0,9% Quelle: Dorn et. al. 2003 in Leyk und Piontkowski (2007): Leitfaden zur Bekämpfung der Salmonelleninfektion beim Schwein
Was bisher geschah www.lab-leipzig.de
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Was bisher geschah Richtlinie 2003/99/EG des Europäischen Parlaments und des EU-Rates vom 17. November 2003 zur Überwachung von Zoonosen und Zoonoseneerregern und zur Änderung der Entscheidung 90/324/EWG des EU-Rates sowie zur Aufhebung der Richtlinie 92/117 EWG des Rates Verordnung (EG) Nr. 2160/2003 des Europäischen Parlaments und des Rates vom 17. November 2003 zur Bekämpfung von Salmonellen und bestimmten anderen durch Lebensmittel übertragbaren Zoonoseerregern Verordnung zur Verminderung der Salmonellenverbreitung durch Schlachtschweine (Schweine-Salmonellen-Verordnung - SchwSalmV) Geltung ab 24.03.2007, V. v. 13.03.2007 BGBl. I S. 322
Kontrollprogramme Überwachung der Salmonelleninfektion beim Schwein in Europa Schweden, Norwegen, Finnland (seit den 50er Jahren) Dänemark (Modellcharakter) Niederlande Großbritannien Primäres Ziel dieser Kontrollprogramme ist nicht die Eradikation, sondern die Reduktion der Salmonellenprävalenz und Vermeidung des Eintrags in die Nahrungsmittelkette!
Schweine-Salmonellen-Verordnung Untersuchungspflicht Endmastbetrieb mit mehr als 50 Mastplätzen (bis 31.12.2008 : mehr als 100 Mastplätze ) Untersuchungseinrichtung akkreditiert nach DIN 17025/2005* Stichprobenschlüssel** gleichmäßig über das Jahr
Schweine-Salmonellen-Verordnung Stichprobenschlüssel Blutproben Probenentnahme frühestens 14 Tage vor der Schlachtung Fleischsaftproben Probenentnahme während der Schlachtung Anzahl der voraussichtlich zur Schlachtung abgegebenen Schweine pro Jahr: Anzahl der zu untersuchenden Schweine weniger als 45 45 bis 100 101 bis 200 mehr als 200 26* 38 47 60 * Sofern weniger als 26 Schweine voraussichtlich zur Schlachtung abgegeben werden, sind alle Schweine zu untersuchen.
Schweine-Salmonellen-Verordnung Dokumentation Untersuchungspflichtiger hat sicherzustellen: Probennahmebericht 3 fach! Name, Anschrift, VVO-Nummer Name, Anschrift und Reg.-Nr. der Schlachtstätte Name Probennehmer Art der Probe und Datum der Probennahme Alternativ Probennahmebericht elektronisch Zentrale Datenbank Hinweis: Untersuchungsstelle, Untersuchungspflichtiger und Probennehmer müssen den Probennahmebericht drei Jahre aufzubewahren.
Schweine-Salmonellen-Verordnung Ergebnisse & Kategorisierung Untersuchungspflichtiger muss: Endmastbetrieb mit mehr als 50 Mastplätzen Ergebnisse abfordern, sammeln Kategorisierung durchzuführen Ergebnisse aufzuzeichnen Alternativ Befundung vor Abgabe zur Schlachtung (Zentrale Datenbank) Die erste Feststellung erfolgt 12 Monate nach dem 24.03.2007 bzw. früher, wenn bereits Untersuchungen durchgeführt wurden.
Schweine-Salmonellen-Verordnung Ergebnisse & Kategorisierung
Schweine-Salmonellen-Verordnung Impfung: Maßnahmen: Beauftragung: Keine Impfung die mit Antikörperuntersuchung beeinträchtigt. Bestand mit >40% positiven Tieren: Mitteilung an zuständige Behörde innerhalb 2 Wochen Maßnahmen zusammen mit betreuendem Tierarzt Bakteriologische und epidemiologische Untersuchungen Reinigung, Desinfektion, Schadnagerbekämpfung Untersuchungspflichtiger kann eine Einrichtung beauftragen
Schweine-Salmonellen-Überwachung in Deutschland Schlachthof/Hoftierarzt Fleischsaft/Serum Untersuchungseinrichtung ELISA* Salmonella antibodies Qualiproof Zentrale Salmonellen Datenbank Prävalenz: niedrig <20% pos. Kategorie 1 Herde Prävalenz: mittel 20-40% pos. Kategorie II Herde Prevalence: high > 40% pos. Kategorie III Herde Suche der Eintragsquelle Restriktionen für Kategorie III Herden *akreditiertes Labor, Tests von LDL, IDEXX, Svanova, Bommeli
SALMOTYPE PigScreen ELISA Indirekter ELISA zum Nachweis von Salmonellenantikörpern Serum, Fleischsaft Salmonella LPS Antigen-Mix (angelehnt an dänischen Mix ELISA) O-Antigene 1,4,5,6,7 und 12 Nachweis von 90% der beim Schwein vorkommenden Salmonella Serovare Group Serotype O-Antigens A S. paratyphi A 2 1,2,12 B S. abortus equi 4 4,12 S. paratyphi B 4 1,4,5,12 S. typhimurium 4 1,4,5,12 S. derby 4 1,4,5,12 S. agona 4 1,4,12 S. brandenburg 4 1,4,12 S. heidelberg 4 1,4,5,12 C1 S. paratyphi C 7 6,7 S. choleraesuis 7 6,7 S. livingstone 7 6,7,14 S. montevideo 7 6,7,14 S. virchow 7 6,7 S. infantis 7 6,7,14 S. ohio 7 6,7 C2-C3 S. new port 8 6,8 S. muenchen 8 6,8,20 S. hadar 8 6,8 D S. typhi 9 9,12 S. enteritidis 9 1,9,12 S. dublin 9 1,9,12 S. panama 9 1,9,12 S. gallinarum-pu 9 1,9,12 E S. anatum 10 3, 15 S. new ington 10 3, 15 S. london Kauffmann-White Schema
Indirekter ELISA zum Nachweis von Salmonellenantikörpern Serum, Fleischsaft Salmonella LPS Antigen-Mix (angelehnt an dänischen Mix ELISA) O-Antigene 1,4,5,6,7 und 12 Nachweis von 90% der beim Schwein vorkommenden Salmonella Serovare Kauffmann-White Schema SALMOTYPE PigScreen ELISA www.lab-leipzig.de Group Serotype O-Antigens A S. paratyphi A 2 1,2,12 B S. abortus equi 4 4,12 S. paratyphi B 4 1,4,5,12 S. typhimurium 4 1,4,5,12 S. derby 4 1,4,5,12 S. agona 4 1,4,12 S. brandenburg 4 1,4,12 S. heidelberg 4 1,4,5,12 C1 S. paratyphi C 7 6,7 S. choleraesuis 7 6,7 S. livingstone 7 6,7,14 S. montevideo 7 6,7,14 S. virchow 7 6,7 S. inf antis 7 6,7,14 S. ohio 7 6,7 C2-C3 S. new port 8 6,8 S. muenchen 8 6,8,20 S. hadar 8 6,8 D S. typhi 9 9,12 S. enteritidis 9 1,9,12 S. dublin 9 1,9,12 S. panama 9 1,9,12 S. gallinarum-pu 9 1,9,12 E S. anatum 10 3, 15 S. new ington 10 3, 15 S. london
SALMOTYPE PigScreen ELISA 3 Packungsgrössen 1 Platte (Streifen) 5 Platten (solid) 20 Platten (solid) Gebrauchsfertige Reagenzien Inkubation 60-30-10 bei Raumtemperatur Einfache manuelle und automatisierte Abarbeitung (Tecan Genesis, Dynex DSX) Jede Charge FLI zugelassen
SALMOTYPE PigScreen ELISA Software: PigSoft TM 1.1 Probenerkennung über Barcode-Scanner Einfacher Import der Readerdaten über ASCI- oder Excel-Files * Ergebniskalkulation, -interprätation und Datenverwaltung in Software-Database Einfache Datenübermittlung in Q&S Qualiproof Datenbank über integrierte Schnittstelle
SALMOTYPE PigScreen ELISA 34 Deutsche Labore teilgenommen 26 Labore mit PigScreen 11 Labore mit IDEXX 2006 Q&S Ringversuch 3 Labore mit Enterisol/ Svanovir Alle drei verwendeten Tests können eingesetzt werden SALMOTYPE PigScreen ELISA zeigte eine exzellente Übereinstimmung mit dänischem mix ELISA 20
SALMOTYPE PigScreen ELISA Vergleich des SALMOTYPE ELISA und Dänischer Mix-ELISA (DVL, Kopenhagen) anhand von 497 Fleischsaftproben Sehr gute Übereinstimmung mit Dänischem Mix ELISA OD% SALMOTYPE 140 120 100 80 60 40 20 y = 0,9461x + 3,598 R 2 = 0,9454 y = 1,014x + 0,287 R² = 0,972 DVL/SALMOTYPE Charge 500S18 R=0,972 DVL/SALMOTYPE Charge 500S17 R=0,986 0 0 20 40 60 80 100 120 140 OD% DVL
SALMOTYPE PigScreen ELISA / Referenzen Harris et al. 2003 Evaluated and referenced in international studies High sensitivity and specificity at cut-off 40%
SALMOTYPE PigScreen ELISA / Referenzen Salmonellendiagnostik beim Schwein: Bakteriologie vs. Serologie Höhere Sensitivität des kulturellen Nachweises in der Frühphase der Infektion. (Höhere Sensitivität der Serologie im Latenzstadium. Scherer et al. 2007
SALMOTYPE PigScreen ELISA / Referenzen www.lab-leipzig.de
SALMOTYPE PigScreen ELISA / Referenzen Journal of Applied Microbiology 2003, 95, 891 903
Schlußfolgerungen SALMOTYPE PigScreen ELISA basiert auf dem bewährten Dänischen Mix ELISA Test ist validiert in nationalen und internationalen Studien und Ringversuchen Anwenderfreundliches Testformat Softwarelösungen 10 Jahre Erfahrung bei der Überwachung der Schweinesalmonellose