Minigel Familie Vertikale Polyacrylamid Gelelektrophorese Apparaturen

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1 Minigel Familie Vertikale Polyacrylamid Gelelektrophorese Apparaturen Bedienungsanleitung Modell Best. Nr. Minigel , , Minigel-Twin , , Multigel , , Multigel-Long , , Maxigel , , !! Achtung!! Bitte lessen Sie die Bedienungsanleitung sorgfältig, bevor Sie mit dem Gerät arbeiten Biometra GmbH Service Department Rudolf-Wissell-Str. 30 Rudolf-Wissell-Str D Goettingen D Goettingen Tel: +49 (0) Tel.: +49 (0) or -12 Fax: +49 (0) Fax.: +49 (0) internet:

2 This document describes the state at the time of publishing. It needs not necessarily agree with future versions. Subject to change! Minigel-Familie Handbuch, 2011/04

3 Inhaltsverzeichnis INHALTSVERZEICHNIS LIEFERUMFANG: 3 ZUBEHÖR MINIGEL UND MINIGEL-TWIN 4 KÄMME FÜR MINIGEL UND MINIGEL-TWIN 4 ZUBEHÖR MULTIGEL 7 ZUBEHÖR MULTIGEL-LONG 7 ZUBEHÖR MULTIGEL UND MULTIGEL-LONG 7 KÄMME FÜR MULTIGEL UND MULTIGEL-LONG 7 ZUBEHÖR MAXIGEL 8 KÄMME FÜR MAXIGEL 9 ÜBERSICHT POLYACRYLAMID GELELEKTROPHORESE SICHERHEITSHINWEISE INSTALLATION AUSPACKEN UND KONTROLLIEREN INBETRIEBNAHME WICHTIGE SICHERHEITSHINWEISE PLAZIERUNG DER ELEKTROPHORESEKAMMER HANDHABUNG ZUSAMMENBAU DES GLASPLATTENSANDWICHES TRENNGEL SAMMELGEL MONTAGE AUFTRAGEN DER PROBEN ELEKTROPHORESE FÄRBEN UND ENTFÄRBEN REINIGUNG UND PFLEGE PFLEGE DER GRAUEN DICHTUNG 18 1

4 6.0 LÖSUNGEN FÜR SDS POLYACRYLAMID GELE TRENNGEL SAMMELGEL, 5% SDS-PROBENPUFFER LAUFPUFFER PH 8,3 (FÜR 5 LITER) FÄRBELÖSUNG (1 LITER) ENTFÄRBELÖSUNG SERVICE 23 RÜCKSENDUNGSINSTRUKTIONEN DEKONTAMINATIONSBESCHEINIGUNG NOTIZEN EU - KONFORMITÄTSERKLÄRUNG GEWÄHRLEISTUNG 29 2

5 1.0 Lieferumfang: Minigel, komplett mit 1 Glasplattenset mit fixierten 1 mm Spacern, 1 Silikonabdichtung, 1 Kamm 10-zähnig, 3 Klammern und Handbuch Gelgröße 8,6 x 7,7 cm Minigel, ohne Zubehör Gelgröße 8,6 x 7,7 cm Minigel, komplett mit 1 Glasplattenset mit fixierten 0,6 mm Spacern, 1 Silikonabdichtung, 1 Kamm 10-zähnig, 3 Klammern und Handbuch Gelgröße 8,6 x 7,7 cm Zum Lieferumfang des Biometra Minigel (Best.-Nr ) gehört folgendes Zubehör: - Eine Gelkammer mit Sicherheitsabdeckung für vertikale Gele der Größe 8,6 x 7,7 cm (BxL), - Eine Glasplatte mit Ausschnitt und geradem Schliff (Best.-Nr ), - Eine Glasplatte mit fixierten 1,0 mm Spacern (Best.-Nr ), - Ein 10-zähniger Kamm, 1mm (Best.-Nr ), - Eine Packung Klammern (3 Stück) (Best.-Nr ) - Eine Silikonabdichtung 1,0 mm (Best.-Nr ), - Ein Garantiezertifikat - Ein Handbuch Minigel-Twin, komplett mit 2 Glasplattensets mit fixierten 1 mm Spacern, 2 Silikonabdichtungen, 2 Kämmen 10-zähnig, 6 Klammern und Handbuch Gelgröße 8,6 x 7,7 cm Minigel-Twin, ohne Zubehör Gelgröße 8,6 x 7,7 cm Minigel-Twin, komplett mit 2 Glasplattensets mit fixierten 0,6 mm Spacern, 2 Silikonabdichtungen, 2 Kämmen 10-zähnig, 6 Klammern und Handbuch Gelgröße 8,6 x 7,7 cm Zum Lieferumfang des Biometra Minigel-Twin (Best.-Nr ) gehört folgendes Zubehör: - Eine Gelkammer mit Sicherheitsabdeckung für vertikale Gele der Größe 8,6 x 7,7 cm (BxL), - Zwei Glasplatten mit Ausschnitt und geradem Schliff (Best.-Nr ), - Zwei Glasplatten mit fixierten 1,0 mm Spacern (Best.-Nr ), 3

6 - Zwei 10-zähnige Kämme, 1mm (Best.-Nr ), - Zwei Packungen Klammern (3 Stück) (Best.-Nr ) - Zwei Silikonabdichtungen 1,0 mm (Best.-Nr ), - Ein Garantiezertifikat - Ein Handbuch Zubehör Minigel und Minigel-Twin Glasplatte mit fixierten Spacern, 1,0 mm, Minigel/Twin Glasplatte mit fixierten Spacern, 0,6 mm, Minigel/Twin Glasplatte, ausgeschn., gerader Schliff, Minigel/Twin Glasplatte, ausgeschn., schräger Schliff, Minigel/Twin Silikonabdichtung, 1,0 mm, Minigel/Twin Silikonabdichtung, 0,6 mm, Minigel/Twin Klammern, 3 Stück, Minigel/Twin Glasplattenständer für Minigel/Twin Drehtisch für Twinkammern (Minigel/Twin, Mini-V8.10 und Multigel/Long) Graue Dichtung zur Fixierung an der oberen Pufferkammer, 2 Stück, Minigel/Twin Glasplatten-Set Ständer für alle Biometra Slabgelgrößen, justierbar, max. 4 Glasplattensets Gelgießstand für bis zu 5 Gele (10,5 x 9,8 cm Glasplattengröße), Minigel/Twin Kämme für Minigel und Minigel-Twin Kämme 1,0 mm Kamm präparativ, ohne Markerspur (1-zähnig)-1,0 mm-400 µl, Minigel/Twin Kamm präparativ, mit 2 Markerspuren (3-zähnig)-1,0 mm-25 bzw. 350 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 5-zähnig-1,0 mm-70 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 10-zähnig-1,0 mm-25 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 20-zähnig, 1,0 mm-15 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm präparativ, mit 1 Markerspur (2-zähnig)-1,0 mm-30 bzw. 380 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 10-zähnig-1,0mm-60 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 16-zähnig-1,0 mm-20 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 28-zähnig-1,0 mm-8 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm präparativ, ohne Markerspur (1-zähnig)-1,0 mm-450 µl, Minigel/Twin 4

7 Kämme 0,6 mm Kamm präparativ, ohne Markerspur (1-zähnig)-0,6 mm-240 µl, Minigel/Twin Kamm präparativ, mit 2 Markerspuren (3-zähnig)-0,6 mm-15 bzw. 210 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 5-zähnig-0,6 mm-40 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 10-zähnig-0,6 mm-15 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 20-zähnig-0,6 mm-9 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm präparativ, mit 1 Markerspur (2-zähnig)-0,6 mm-18 bzw. 230 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 10-zähnig-0,6 mm-35 µl/tasche, Minigel/Twin Kamm, 16-zähnig-0,6 mm-10 µl/tasche, Minigel/Twin 5

8 Multigel, komplett mit 2 Glasplattensets mit fixierten 1 mm Spacern, 2 Silikonabdichtungen, 2 Kämmen 24-zähnig, 9 Klammern und Handbuch Gelgröße 11 x 7 cm Multigel, komplett mit 2 Glasplattensets mit fixierten 0,6 mm Spacern, 2 Silikonabdichtungen, 2 Kämmen 24-zähnig, 9 Klammern und Handbuch Gelgröße 11 x 7 cm Multigel, ohne Zubehör Gelgröße 11 x 7 cm Zum Lieferumfang des Biometra Multigel (Best.-Nr ) gehört folgendes Zubehör: - Eine Gelkammer mit Sicherheitsabdeckung für vertikale Gele der Größe 11 x 7 cm (B x L), - Zwei Glasplatten mit Ausschnitt und geradem Schliff (Best.-Nr ), - Zwei Glasplatten mit fixierten 1,0 mm Spacern (Best.-Nr ), - Zwei 24-zähnige Kämme, 1mm (Best.-Nr ), - Vier Packungen Klammern (je 3 Stück) (Best.-Nr ) - Zwei Silikonabdichtungen 1,0 mm (Best.-Nr ), - Ein Garantiezertifikat - Ein Handbuch Multigel-Long, komplett mit 2 Glasplattensets mit fixierten 1 mm Spacern, 29 2 Silikonabdichtungen, 2 Kämmen 24-zähnig, 12 Klammern und Handbuch Gelgröße 11 x 12 cm Multigel-Long, komplett mit 2 Glasplattensets mit fixierten 0,6 mm Spacern, 2 Silikonabdichtungen, 2 Kämmen 24-zähnig, 12 Klammern und Handbuch Gelgröße 11 x 12 cm Multigel-Long, ohne Zubehör Gelgröße 11 x 12 cm Zum Lieferumfang des Biometra Multigel-Long (Best.-Nr ) gehört folgendes Zubehör: - Eine Gelkammer mit Sicherheitsabdeckung für vertikale Gele der Größe 11 x 12 cm (B x L), - Zwei Glasplatten mit Ausschnitt und geradem Schliff (Best.-Nr ), - Zwei Glasplatten mit fixierten 1,0 mm Spacern (Best.-Nr ), - Zwei 24-zähnige Kämme, 1mm (Best.-Nr ), - Vier Packungen Klammern (je 3 Stück) (Best.-Nr ) 6

9 - Zwei Silikonabdichtungen 1,0 mm (Best.-Nr ), - Ein Garantiezertifikat - Ein Handbuch Zubehör Multigel Glasplatte, ausgeschn., gerader Schliff, Multigel Glasplatte mit fixierten Spacern, 1,0 mm, Multigel Silikonabdichtung, 1,0 mm, Multigel Silikonabdichtung, 0,6 mm, Multigel Glasplatte mit fixierten Spacern, 0,6 mm, Multigel Graue Dichtung (lang), 2 Stück, Multigel Zubehör Multigel-Long Glasplatte, ausgeschn., gerader Schliff, Multigel-Long Glasplatte mit fixierten Spacern, 1,0 mm, Multigel-Long Silikonabdichtung, 1,0 mm, Multigel-Long Silikonabdichtung, 0,6 mm, Multigel-Long Glasplatte mit fixierten Spacern, 0,6 mm, Multigel-Long Graue Dichtung (lang), 2 Stück, Multigel-Long Zubehör Multigel und Multigel-Long Klammern, 3 Stück, Multigel-Long Drehtisch für Twinkammern (Minigel/Twin, Mini-V8.10 und Multigel/Long) Glasplatten-Set Ständer für alle Biometra Slabgelgrößen, justierbar, max. 4 Glasplattensets Graue Dichtung (kurz), 2 Stück, Multigel/Long Kämme für Multigel und Multigel-Long Kämme 1,0 mm Kamm, 12-zähnig-1,0 mm-45 µltasche, Multigel/Long Kamm, 24-zähnig-1,0 mm-18 µl/tasche, Multigel/Long Kamm, 11-zähnig-1,0 mm-50 µltasche, Multigel/Long Kamm präparativ, mit 2 Markerspuren (3-zähnig)-1,0 mm-40 bzw. 500 µl/tasche, Multigel/Long Kämme 0,6 mm Kamm, 24-zähnig-0,6 mm-14 µl/tasche, Multigel/Long 7

10 Maxigel, komplett mit 2 Glasplattensets mit fixierten 1 mm Spacern, 2 Silikonabdichtungen, 2 Kämmen 12-zähnig, 9 Klammern, 4 Spezialklammern und Handbuch, Gelgröße 17 x 18 cm Maxigel, komplett mit 2 Glasplattensets mit fixierten 2 mm Spacern, 2 Silikonabdichtungen, 2 Kämmen 12-zähnig, 9 Klammern, 4 Spezialklammern und Handbuch Gelgröße 17 x 18 cm Maxigel, ohne Zubehör Gelgröße 17 x 18 cm Zum Lieferumfang des Biometra Maxigel (Best.-Nr ) gehört folgendes Zubehör: - Eine Gelkammer mit integriertem Kühlkorpus und Sicherheitsabdeckung für vertikale Gele der Größe 17 x 18 cm (B x L), - Zwei Glasplatten mit Ausschnitt (Best.-Nr ), - Zwei Glasplatten mit fixierten 1,0 mm Spacern (Best.-Nr ), - Zwei 12-zähnige Kämme, 1mm (Best.-Nr ), - Drei Packungen Klammern (je 3 Stück) (Best.-Nr ) - Eine Packung Maxi-Klammern (4 Stück) (Best.-Nr ) - Zwei Silikonabdichtungen 1,0 mm (Best.-Nr ), - Ein Garantiezertifikat - Ein Handbuch Zubehör Maxigel Klammern, 3 Stück, Maxigel Glasplatten-Set Ständer für alle Biometra Slabgelgrößen, justierbar, max. 4 Glasplattensets Glasplatte, ausgeschn., gerader Schliff, Maxigel Glasplatte mit fixierten Spacern, 1,0 mm, Maxigel Glasplatte mit fixierten Spacern, 2,0 mm, Maxigel Spezialklammern zum Gelgießen, 4 Stk., Maxigel Silikonabdichtung, 1,0 mm, Maxigel Silikonabdichtung, 2,0 mm, Maxigel Graue Dichtung (lang), 2 Stk., Maxigel Graue Dichtung (kurz), 2 Stk., Maxigel 8

11 Kämme für Maxigel Kämme 1,0 mm Kamm, 12-zähnig-1,0 mm-140 µl/tasche, Maxigel Kamm, 18-zähnig-1,0 mm-90 µl/tasche, Maxigel Kamm, 24-zähnig-1,0 mm-50 µl/tasche, Maxigel Kamm präparativ, mit 2 Markerspuren (3-zähnig)-1,0 mm-50 bzw µl / Tasche, Maxigel Kamm, 25-zähnig-1,0 mm-40 µl/tasche, Maxigel Kamm präparativ, ohne Markerspur (1-zähnig)-1,0 mm µl, Maxigel Kämme 2,0 mm Kamm, 12-zähnig-2,0 mm-280 µl/tasche, Maxigel Kamm, 18-zähnig-2,0 mm-180 µl/tasche, Maxigel Kamm, 24-zähnig-2,0 mm-100 µl/tasche, Maxigel Kamm präparativ, mit 2 Markerspuren (3-zähnig)-2,0 mm-100 bzw µl / Tasche, Maxigel Kamm, 45-zähnig-2,0 mm-50 µl/tasche, Maxigel 9

12 Übersicht Polyacrylamid Gelelektrophorese Gerät Gel Größe B x L (cm) Glasplatten Größe B x L (cm) Anzahl Gele max. Minigel 8,6 x 7,7 10,5 x 9,8 1 Minigel-Twin 8,6 x 7,7 10,5 x 9,8 2 Multigel 11 x 7 14,8 x 9,3 2 Multigel-Long 11 x 12 14,8 x 14,3 2 Maxigel 17 x 18 20,2 x 20,8 2 Gel Dicke (mm) 0,6 1,0 0,6 1,0 Volumen pro Anzahl Zähne Geltasche (µl) 1 präp präp. 18 und präp 2 x 15 und präp präp präp präp. 30 und präp. 2 x 25 und präp präp präp. 18 und präp. 2 x 15 und präp präp präp präp. 30 und präp. 2 x 25 und präp , präp. 2 x 40 und , , präp. 2 x 40 und , ,0 2,0 1 präp präp. 2 x 50 und präp. 2 x 100 und Puffervolumen oben / unten (ca. ml) 140 / / 2 x / / / 350

13 2.0 Sicherheitshinweise Bitte beachten Sie immer folgende Sicherheitsregeln: Achtung: Empfindliche Meßgeräte, vorsichtig handhaben! Nicht Schock- oder Stoßeinwirkungen aussetzen! Die Elektrophorese-Systeme nicht benutzten, wenn - Puffer aus der Elektrophoresekammer austritt, - die Elektrophoresekammer oder der Sicherheitsdeckel Risse aufweisen, - die Kabel für die Stromversorgung nicht in einwandfreiem Zustand sind. Die Elektrophoresekammer niemals auf ein Stromversorgungsgerät stellen! Als Stromversorgungsgeräte für die Elektrophorese-Systeme sind ausschließlich Geräte, die der Schutzklasse 2 entsprechen, zugelassen. Spezifikationen der Biometra Power Packs finden Sie unter Als Kabel zur Verbindung der Elektrophorese-Systeme mit den Stromversorgungsgeräten sind ausschließlich die von Biometra (mit)gelieferten Kabel zugelassen! Achtung: Im eingeschalteten Zustand liegt am Gerät Hochspannung an! Die Verbindung zwischen Stromversorger und Elektrophoreseeinheit trennen, bevor die Sicherheitsabdeckhaube geöffnet wird. Die Netzschalter und Netzstecker der Stromversorgungsgeräte dienen als Trenneinrichtung und müssen immer ungehindert zu erreichen sein. Bei Verwendung der Kühloption auf richtigen Anschluß ( in und out ) achten. Die Sicherheitsabdeckhaube auf die Kammer setzen, bevor das Kühlsystem angeschlossen wird. Ausschließlich Wasser für die Kühlung verwenden. Maximale Flußrate = 0,5 Liter / Minute (drucklos im Zufluß) Bei höherer Flußrate, diese durch geeignete Maßnahmen (z.b. Schlauchklemme) auf max. 0,5 l/min. reduzieren. Die Gelkammer nicht mit Alkoholen (z.b. Methanol, Ethanol) oder organischen Lösungsmitteln (z.b. Aceton) behandeln. Die Gelkammer nicht über 50 C erwärmen. Glasplatten mit aufgeklebten Spacern niemals mit Chromschwefelsäure reinigen!

14 Glasplatten mit aufgeklebten Spacern niemals in Flüssigkeit liegend lagern, sondern nach dem Reinigen immer trocken aufbewahren! ACRYLAMID ist ein NEUROTOXIN. Bei der Herstellung des Gels und beim Umgang mit Polyacrylamidgelen immer Gummihandschuhe tragen. Restliche Acrylamidmonomer-Lösungen nicht in den Ausguß gießen! Polymerisiertes Acrylamid ist "nicht" toxisch und kann über den normalen Abfall entsorgt werden. Die Geräte erfüllen die Anforderung nach Anhang F (Stückprüfung) der Norm EN Modifikationen/Abänderungen führen zum Erlöschen von Garantie und EN Zertifizierung, sowie einer potentiellen Gefährdung des Anwenders. Nicht-Beachtung der Gebrauchsanweisung kann zu einer potentiellen Gefährdung des Anwenders führen. Unabhängig von den Spezifikationen der verwendeten Stromversorgungsgeräte (Power Packs) gelten folgende maximale Grenzwerte für die Nutzung der Polyacrylamid Gelelektrophorese Geräte (typische Laufzeiten von ca. 4 6h, unter Beaufsichtigung): max. V (DC) max. ma max. W max. Temp. Minigel (1 Gel) C Minigel-Twin (2 Gele) C Multigel (2 Gele) C Multigel-Long (2 Gele) C Maxigel (2 Gele) C 12

15 3.0 Installation 3.1 Auspacken und Kontrollieren Sie erhalten die Biometra Slabgelsysteme sorgfältig verpackt. Bitte packen Sie die Geräte vorsichtig aus, überprüfen Sie die Lieferung auf Vollständigkeit und kontrollieren Sie sowohl die Geräte als auch das Zubehör. Beanstandungen sind unverzüglich an BIOMETRA zu melden. Versuchen Sie niemals mit einem Gerät zu arbeiten, welches nicht in ordnungsgemäßem Zustand ist. Falls Sie eine Beanstandung haben, schicken Sie das System unter Beachtung der Rücksendungsinstruktionen (siehe Kapitel 7.0) komplett in der Originalverpackung zurück.!! Achtung!! Bitte schicken Sie die beiliegende Postkarte mit dem Garantiezertifikat / Warranty Certificate ausgefüllt an Biometra zurück, damit Sie die volle Garantie in Anspruch nehmen können! 3.2 Inbetriebnahme Das Elektrophoresegerät wurde mit Sicherheitssteckern ausgestattet welche den modernsten Sicherheitsbestimmung gerecht werden und in alle BIOMETRA Power Packs passen... Die Elektrophoresekammer wurde für den Gleichspannungsbetrieb konzipiert und darf nicht separat geerdet betrieben werden! 3.3 Wichtige Sicherheitshinweise Betreiben Sie auf keinen Fall das Gelsystem, wenn - Puffer aus der Elektrophoresekammer austritt, - die Elektrophoresekammer oder der Sicherheitsdeckel Risse aufweisen, - die Kabel für die Stromversorgung nicht in einwandfreiem Zustand sind. Stellen Sie niemals die Elektrophoresekammer auf das Stromversorgungsgerät! 13

16 4.0 Plazierung der Elektrophoresekammer Stellen Sie die Elektrophoreskammer grundsätzlich so, daß Sie den optimalen Abstand zu dem von Ihnen verwendeten Power Pack haben. Vergewissern Sie sich vor Inbetriebnahme, daß die Elektrophoresekammer sicher und an einem trockenen Platz steht. Stellen Sie die Kammer niemals an die Kante der Arbeitsfläche. Setzen Sie das System nicht der direkten Sonneneinstrahlung aus. 5.0 Handhabung 5.1 Zusammenbau des Glasplattensandwiches Die Glasplatten müssen sauber und absolut fettfrei sein! (Achtung: Glasplatten mit aufgeklebten Spacern niemals mit Chromschwefelsäure reinigen!) Nehmen Sie eine Glasplatte mit fixierten Glasspacern und legen Sie die Silikonabdichtung um die Spacer auf die Platte. Plazieren Sie die ausgeschnittene Glasplatte exakt auf der Glasplatte mit fixierten Spacern und fixieren Sie das Glasplattenset mittels der Klammern: 1 Klammer rechts, 1 Klammer links und 1 Klammer unten beim Minigel und Minigel- Twin, 1 Klammer rechts, 1 Klammer links und 2 Klammern unten beim Multigel, 2 Klammern, 2 Klammern links und 2 Klammern unten beim Multigel-Long, 2 Klammern rechts, 2 Klammern links und 2 Maxi-Klammern unten beim Maxigel. Achtung: ACRYLAMID ist ein NEUROTOXIN. Tragen Sie daher bei der Herstellung des Gels und beim Umgang mit Polyacrylamidgelen immer Schutzhandschuhe. 14

17 5.2 Trenngel Stellen Sie das Glasplattenset mittels der unteren Klammern auf eine waagerechte Fläche (bzw. in den für alle Slabgelgrößen geeigneten Glasplattenset-Ständer Best.- Nr ) und pipettieren Sie die Trenngellösung blasenfrei in das Glasplattensandwich: Minigel / Minigel-Twin: Pipettieren Sie die (entgaste) Trenngellösung nach der Zugabe von TEMED und Ammoniumpersulfat blasenfrei bis auf eine Höhe von ca. 4 cm in das Glasplattensandwich. Bei Verwendung von 1,0 mm Spacern sind hierfür ca. 6 ml Gellösung notwendig. Überschichten Sie die Trenngellösung anschließend vorsichtig mit ca. 0,2 ml bidest. Wasser. Multigel: Pipettieren Sie die (entgaste) Trenngellösung nach der Zugabe von TEMED und Ammoniumpersulfat blasenfrei bis auf eine Höhe von ca. 5 bis 5,5 cm in das Glasplattensandwich. Bei Verwendung von 1,0 mm Spacern sind hierfür ca. 9 ml Gellösung notwendig. Überschichten Sie die Trenngellösung anschließend vorsichtig mit ca. 0,8 ml bidest. Wasser. Multigel-Long: Pipettieren Sie die (entgaste) Trenngellösung nach der Zugabe von TEMED und Ammoniumpersulfat blasenfrei bis auf eine Höhe von ca. 9 bis 9,5 cm in das Glasplattensandwich. Bei Verwendung von 1,0 mm Spacern sind hierfür ca. 12 ml Gellösung notwendig. Überschichten Sie die Trenngellösung anschließend vorsichtig mit ca. 0,8 ml bidest. Wasser. Maxigel: Pipettieren Sie die (entgaste) Trenngellösung nach der Zugabe von TEMED und Ammoniumpersulfat blasenfrei bis auf eine Höhe von ca. 16 cm in das Glasplattensandwich. Bei Verwendung von 1,0 mm Spacern sind hierfür ca. 30 ml Gellösung notwendig. Überschichten Sie die Trenngellösung anschließend vorsichtig mit bidest. Wasser. Lassen Sie die Gellösung bei Raumtemperatur (RT) ca Minuten polymerisieren. Nach vollständiger Polymerisation (Erkennbar an der Ausbildung einer scharfen Trennlinie zwischen Gel und überschichtetem Wasser) muß das bidest. Wasser vom Laufgel entfernt werden. Benutzen Sie zum vollständigen Entfernen des Wassers Filterpapier. 15

18 5.3 Sammelgel Minigel / Minigel-Twin: Ca. 2 ml Sammelgellösung werden benötigt. Multigel / MultigeL-Long: Ca. 2,5 bis 3 ml Sammelgellösung werden benötigt. Maxigel: Ca. 3,5 ml Sammelgellösung werden benötigt. Pipettieren Sie die Sammelgellösung bis an den unteren Rand des Ausschnittes auf das bereits polymerisierte Trenngel. Fügen Sie anschließend den Kamm zwischen die Glasplatten. Die Sammelgellösung polymerisiert in ca Minuten bei RT zum Sammelgel. 5.4 Montage Füllen Sie nun das untere Pufferreservoir mit Laufpuffer, entfernen Sie die Klammern und die Silikonabdichtung vorsichtig und setzen Sie das Gelsandwich, mit der ausgeschnittenen Glasplatte in Richtung oberes Pufferreservoir zeigend, ein. Befestigen Sie das Sandwich rechts und links mit Klammern am Korpus. Luftblasen an der Unterseite des Gels können mit einer Spritze, die mit einer gebogenen Kanüle versehen ist, rasch entfernt werden. Füllen Sie das obere Pufferreservoir mit Laufpuffer und entfernen Sie den Kamm. Waschen Sie sodann die Geltaschen mittels einer Spritze durch vorsichtiges ein- und aussaugen des Puffers. 5.5 Auftragen der Proben Tragen Sie dann durch Unterschichten die in Probenpuffer bzw. SDS- Probenpuffer gelöste Probe in die Taschen des Sammelgels auf. Wurden die Proben mit Trichloressigsäure gefällt, sollten sie vor dem Auftragen mit Tris-Puffer neutralisiert werden. Die 24-zähnigen Kämme (Best.-Nr ) für Multigel und Multigel-Long sind mit Mehrkanalpipetten kompatibel und erlauben das schnelle Auftragen vieler Proben. 16

19 5.6 Elektrophorese Setzen Sie die Sicherheitsabdeckhaube auf und schließen Sie das Slabgelsystem an ein Power Pack (z.b. Biometra Standard Power Pack P25 Best.-Nr ) an. Bitte beachten: Der Plus-Pol (rot) des Power Packs ist mit der unteren Pufferkammer verbunden, der Minus-Pol (schwarz) mit der oberen Pufferkammer. Stellen Sie maximal folgende Bedingungen für 10%ige Trenngele mit 1 mm Spacer ein (typische Laufzeiten von 4 6 h, unter Beaufsichtigung): Gerät max. Stromstärke max. Spannung (pro Gel) Minigel: Sammelgel Trenngel Minigel-Twin: Sammelgel Trenngel Multigel: Sammelgel Trenngel Multigel-Long: Sammelgel Trenngel Maxigel: Sammelgel Trenngel 10 ma 25 ma 10 ma 25 ma ma ma ma ma ma ma 400 V 400 V 400 V 450 V 500 V Multigel, Multigel-Long und Maxigel: Noch homogenere Trennungen und schärfere Banden können durch Benutzung der Wasserkühlung erreicht werden! Bei Verwendung der Kühloption auf richtigen Anschluß ( in und out ) achten. Die Sicherheitsabdeckhaube auf die Kammer setzen, bevor das Kühlsystem angeschlossen wird. Ausschließlich Wasser für die Kühlung verwenden. Maximale Flußrate = 0,5 l/min (drucklos im Zufluß)! Stoppen Sie die Elektrophorese, wenn die Bromphenolblau-Front das untere Ende des Trenngels erreicht hat. Schalten Sie das Power Pack aus und trennen Sie die Verbindung bevor Sie die Kammer öffnen! 17

20 5.7 Färben und Entfärben Entfernen Sie das Glasplattenset aus der Kammer und lösen Sie die Glasplatten mit Hilfe eines Spatels vorsichtig voneinander. Entnehmen Sie das Gel und färben Sie es (evtl. nach vorherigem Fixieren) unter Schüttelbewegung auf einem Wipptisch z.b. 30 Minuten bis 1 Stunde mit Coomassie Brilliant Blau-Lösung oder bereiten Sie das Gel zum Blotting oder zur Autoradiographie vor. Eine schnelle Entfärbung kann in einer Lösung aus 45% Ethanol, 10% Essigsäure und 45% bidest. Wasser und anschließend in einer Lösung aus 7% Essigsäure in bidest. Wasser erfolgen. 5.8 Reinigung und Pflege Achtung: Vor der Reinigung die Verbindung zum Stromversorger trennen. Zur Reinigung verwenden Sie bitte ein weiches, feuchtes Tuch und ein mildes Reinigungsmittel. Verwenden Sie keine Scheuermittel. Die Gelkammer nicht mit Alkoholen (z.b. Methanol, Ethanol) oder organischen Lösungsmitteln (z.b. Aceton) behandeln. Die Gelkammer nicht über 50 C erwärmen. Glasplatten mit aufgeklebten Spacern niemals mit Chromschwefelsäure reinigen! 5.9 Pflege der grauen Dichtung Ein Einfetten der Dichtung ist im allgemeinen nicht notwendig! Dichtung nur bei Bedarf und sehr sparsam mit ph-neutralem Siliconfett einstreichen. Hat sich die Dichtung aus der Nut im Gerätekorpus gelöst und zeigt Abdrücke, sollte sie ausgetauscht werden. Dichtung beim Einsetzen in die Nut nicht dehnen oder stauchen. Anschließend mit einem scharfen Skalpell bündig an der Oberkante des Gerätekorpus abschneiden und einmalig etwas ph-neutrales Fett auf die Schnittkante auftragen. 18

21 6.0 Lösungen für SDS Polyacrylamid Gele 6.1 Trenngel Minigel und Minigel-Twin: ( 6 ml pro Gel) Acrylamidkonzentration in % ,0 12,5 15,0 17,5 30% Acrylamid, 0,8% Bisacrylamid Stammlösung in ml 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 1,88 M Tris/HCl ph 8,8 in ml 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 0.5% SDS in ml 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 bidest. H2O in ml 2,1 1,6 1,1 0,6 0,1 TEMED in μl Ammoniumpersulfatlsg., 10%ig in μl Multigel. (9 ml pro Gel) Acrylamidkonzentration in % ,0 12,5 15,0 17,5 30% Acrylamid, 0,8% Bisacrylamid Stammlösung in ml 2,25 3,0 3,75 4,5 5,25 1,88 M Tris/HCl ph 8,8 in ml 1,8 1,8 1,8 1,8 1,8 0.5% SDS in ml 1,8 1,8 1,8 1,8 1,8 bidest. H2O in ml 3,15 2,4 1,65 0,9 0,15 TEMED in μl Ammoniumpersulfatlsg., 10%ig in μl Mulitgel-Long: (12 ml pro Gel) Acrylamidkonzentration in % ,0 12,5 15,0 17,5 30% Acrylamid, 0,8% Bisacrylamid Stammlösung in ml 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 1,88 M Tris/HCl ph 8,8 in ml 2,4 2,4 2,4 2,4 2,4 0.5% SDS in ml 2,4 2,4 2,4 2,4 2,4 bidest. H2O in ml 4,2 3,2 2,2 1,2 0,2 TEMED in μl Ammoniumpersulfatlsg., 10%ig in μl

22 Maxigel: (30 ml pro Gel) Acrylamidkonzentration in % 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 30% Acrylamid, 0,8% Bisacrylamid Stammlösung in ml 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 1,88 M Tris/HCl ph 8,8 in ml 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 0.5% SDS in ml 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 bidest. H2O in ml 10,5 8,0 5,5 3,0 0,5 TEMED in μl Ammoniumpersulfatlsg., 10%ig in μl Achtung: Die Ammoniumpersulfat sollte jeden Tag neu zubereitet werden und bis zum Gebrauch bei 4 C aufbewahrt werden. 20

23 6.2 Sammelgel, 5% Minigel und Minigel-Twin: (2 ml pro Gel) 0,33 ml 30% Acrylamid, 0,8% Bisacrylamid Stammlösung 0,4 ml 0,625 M Tris/HCl ph 6,8 0,4 ml 0,5% SDS 0,87 ml bidest. H2O 2 μl TEMED 10 μl 10% ige Ammoniumpersulfatlsg. Multigel und Multigel-Long: (4 ml pro Gel) 0,66 ml 30% Acrylamid, 0,8% Bisacrylamid Stammlösung 0,8 ml 0,625 M Tris/HCl ph 6,8 0,8 ml 0,5% SDS 1,74 ml bidest. H2O 4 μl TEMED 20 μl 10% ige Ammoniumpersulfatlsg. Maxigel: (6 ml pro Gel) 1,0 ml 30% Acrylamid, 0,8% Bisacrylamid Stammlösung 1,2 ml 0,625 M Tris/HCl ph 6,8 1,2 ml 0,5% SDS 2,6 ml bidest. H2O 6 μl TEMED 30 μl 10% ige Ammoniumpersulfatlsg. Achtung: Die Ammoniumpersulfat sollte jeden Tag neu zubereitet werden und bis zum Gebrauch bei 4 C aufbewahrt werden. 21

24 6.3 SDS-Probenpuffer für SDS-PAGE-Gele (denaturierende Bedingungen) 2 ml O,625 M Tris/HCl ph 6,8 0,2 g SDS 5 ml Glycerin 0,5 ml ß-Mercaptoethanol 0,1 ml Bromphenolblau (1%ige Lsg. in Ethanol) 2,4 ml bidest. H 2 O Den SDS-Probenpuffer im Verhältnis 1:1 mit der Probe vermischen. Die Proben gegebenenfalls 5 Minuten im kochenden Wasserbad erhitzen. 6.4 Laufpuffer ph 8,3 (für 5 Liter) 15,1 g Tris-Base 72,0 g Glycin 5,0 g SDS 6.5 Färbelösung (1 Liter) 2,0 g Coomassie Brilliant Blau R 250 0,5 g Coomassie Brilliant Blau G ml Ethanol 50 ml Methanol 100 ml Essigsäure 425 ml bidest. Wasser Über Nacht unter rühren lösen, in dunkler Flasche aufbewahren, vor dem Gebrauch filtrieren. 6.6 Entfärbelösung schnelles Entfärben mit: 45% Ethanol 10% Essigsäure 45% bidest. Wasser langsames Entfärben mit: 25% Isopropanol 10% Eisessig 65% bidest. Wasser abschließende Entfärbung mit: 7% Essigsäure in bidest. Wasser 22

25 7.0 Service Sollten Sie Probleme mit dem Gerät haben, setzen Sie sich bitte mit unserer Serviceabteilung bzw. dem für Sie zuständigen lokalen Biometra Händler in Verbindung: Biometra GmbH Serviceabteilung Rudolf-Wissell-Str D Göttingen Tel.: ++49 (0)5 51 / oder 12 Fax: ++49 (0)5 51 / Service@biometra.com Falls Sie das Gerät an uns zurücksenden möchten, beachten Sie bitte unsere Rücksendungsinstruktionen: Rücksendungsinstruktionen Senden Sie nur fehlerhafte Geräte zurück. Bitte wenden Sie sich bei technischen Problemen, die nicht eindeutig als Gerätefehler erkennbar sind, vor Einsendung an den technischen Service von Biometra. Kontaktieren Sie die Serviceabteilung um eine RAN-Nummer für die Rücksendung zu erhalten. Diese Nummer muß außen am Karton deutlich sichtbar angebracht werden. Rücksendungen ohne RAN-Nummer können nicht angenommen werden. Wichtig: Reinigen Sie alle Teile des Gerätes von Rückständen, sowie biologisch gefährlichen, chemischen und radioaktiven Verunreinigungen. Bei verunreinigten Geräten verweigert Biometra die Annahme des Gerätes! Für eventuelle Schäden oder Verlsute infolge mangelhafter Dekontamination des Gerätes haftet der Absender des Gerätes. Bitte bestätigen Sie bei jeder Einsendung schriftlich, daß das Gerät frei von biologisch gefährlichen und radioaktiven Kontaminationen ist. Nutzen Sie hierfür das Dekontaminationsbescheinigungs-Formular auf der folgenden Seite. Benutzen Sie für den Versand die Originalverpackung oder eine ähnlich robuste Verpackung. Kennzeichnen Sie die Verpackung äußerlich mit CAUTION! SENSITIV ELECTRONIC INSTRUMENT! oder " VORSICHT! HOCHEMPFINDLICHE ELEKTROGERÄTE". 23

26 Bitte legen Sie eine präzise Fehlerbeschreibung bei, die möglichst auch aufzeigt, bei welchen Prozeduren der Fehler auftritt bzw. entstanden ist. Bitte legen Sie eine Notiz bei, die folgendes enthält: a) Name und Adresse des Absenders b) Ansprechpartner und Telefonnummer für mögliche Rückfragen c) Präzise Beschreibung des Fehlers 24

27 8.0 Dekontaminationsbescheinigung Um eine Gefährdung von Mitarbeitern während der Reparatur- oder Wartungsarbeiten ausschließen zu können, bitten wir Sie folgendes auszufüllen und zu bestätigen. Insbesondere verweisen wir auf die 71 Strahlenschutzverordnung, 17 Gefahrstoffverordnung und 19 Chemikaliengesetz. FIRMA / INSTITUT ADRESSE TEL Nr. FAX Nr. PRODUKT Modell Serien Nr. Falls als Leih-/Probestellgerät: Beginn (Datum): Ende (Datum): Gesundheitsgefährdende Substanzen ( Gefahrstoffe ), die mit diesem Produkt benutzt wurden: Das Produkt wurde gereinigt und ggf. dekontaminiert (bei Verwendung radioaktiver Substanzen ein Wischtest-Protokoll beifügen!) Art der Reinigung/ Dekontamination: Mit der Unterschrift wird bestätigt, daß das Produkt frei von Kontaminationen ist. Falls die Dekontamination unzureichend durchgeführt wurde, wird mit der Unterschrift akzeptiert, daß die damit verbundenen Folgekosten (z.b. Dekontamination durch eine Fachfirma, bzw. Entsorgung des Produktes als radioaktiver Abfall durch eine Fachfirma) zu Lasten des Verursachers gehen. Name: Stellung in Fa./Institut: (Leiter des Institutes/ Abt./ Firma) Unterschrift: Datum: Bitte senden Sie dieses Formular zusammen mit dem Produkt an Biometra Göttingen oder an Ihren Biometra-Außendienstmitarbeiter. Bitte bringen Sie dieses Formular ausgefüllt an der Außenseite der Verpackung an. Produkte ohne dieses Formular werden kostenpflichtig an den Absender zurückgeschickt. 25

28 Allgemeine Hinweise zur Dekontamination: Bitte wenden Sie sich an Ihren Sicherheitsbeauftragen oder Sicherheitsingenieur. Bei Verwendung radioaktiver Substanzen: Bitte wenden Sie sich an Ihren Strahlenschutzbeauftragten. Bei Verwendung gentechnisch veränderter Organismen oder Teilen davon: Bitte wenden Sie sich an Ihren Gentechnikbeauftragten. 26

29 9.0 Notizen 27

30 10.0 EU - Konformitätserklärung EU - Declaration of Conformity Göttingen, April 2011 im Sinne der EG-Richtlinie über elektrische Betriebsmittel zur Verwendung innerhalb bestimmter Spannungsgrenzen 2006/95/EG. following the EC directive about electrical equipment for use within certain limits of voltage 2006/95/EC. Hiermit erklären wir, daß folgende Slabgele Herewith we declare that the following Slabgel Systems Typen / types: Minigel, Minigel-Twin, Multigel, Multigel-Long, Maxigel Best.-Nr. / Order No , , , , , , , , , , , , , , , den grundlegenden Anforderungen der corresponds to the basic requirements of EG-Niederspannungsrichtlinie 2006/95/EG entsprechen. EC low voltage directive 2006/95/EC. Folgende harmonisierte Normen wurden angewandt: The following harmonized standards have been used: EN EN /A2 (in Anlehnung / corresponding to) (in Anlehnung / corresponding to) Dr. Jürgen Otte Quality Manager 28

31 11.0 Gewährleistung Dieses Biometra Produkt wurde sorgfältig hergestellt und die Qualität vor der Auslieferung gründlichst kontrolliert. Biometra garantiert, dass dieses Produkt den im Handbuch angegebenen Spezifikationen entspricht. Die Gewährleistung ist gültig für 24 Monate ab dem Tag der Auslieferung an den Besteller durch Biometra oder einen autorisierten Händler. Die Gewährleistung kann ohne schriftliches Einverständnis von Biometra nicht auf Dritte übertragen werden. Die Gewährleistung ist beschränkt auf das Produkt und gegebenenfalls mitgeliefertes Originalzubehör. Die Gewährleistung setzt voraus, dass das Gerät ausschließlich entsprechend der Anleitung betrieben wurde. Innerhalb der Gewährleistung repariert oder ersetzt Biometra alle zurückgesandten defekten Teile ohne Berechnung. Die Gewährleistung gilt nicht für Schäden, die durch unsachgemäßen Gebrauch, Fahrlässigkeit oder normalen Verschleiß verursacht sind. Biometra GmbH Rudolf-Wissell-Str. 30 D Göttingen Service Postfach 1544 Rudolf-Wissell-Str D Göttingen D Göttingen Tel: ++49 (0)5 51 / Tel.: ++49 (0)5 51 / oder -12 Fax: ++49 (0)5 51 / Fax: ++49 (0)5 51 / Info@biometra.com Service@biometra.com internet: 29