Standardisierung des HbA1c DR. ANDREAS KREBS

Transkript

1 Standardisierung des HbA1c DR. ANDREAS KREBS

2 Themata Einführung Hämoglobin und HbA1c Bestimmungsmethoden Standardisierung des HbA1c

3 Themata Einführung Hämoglobin und HbA1c Bestimmungsmethoden Standardisierung des HbA1c

4 WHO Position zur Verwendung von HbA1c in der Diagnose des Diabetes mellitus. HbA1c zur Diagnose des Diabetes mellitus empfohlen. WHO, 2011

5 WHO Empfehlung wurde von den Präsidenten der IDF, ADA und EASD bestätigt.

6 HbA1c vs. ogtt vs. nbg zur Diagnose des Diabetes mellitus. Sacks DB Diabetes Care, 2011

7 HbA1c vs. ogtt vs. nbg zur Diagnose des Diabetes mellitus. Sacks et al. Diabetes Care, 2011

8 HbA1c in der Primärdiagnostik Ende 2010: neue Leitlinie der DDG Diagnostik des Diabetes mellitus bisher nur durch ogtt 1. Ein HbA1c unter 5,7% (39 mmol/mol Hb) schließt einen Diabetes mellitus aus. 2. Ein HbA1c-Wert über 6,5% (48 mmol/mol Hb) beweist ihn. 3. Patienten mit HbA1c 5,7% - 6,4%: Nüchternglukose oder ogtt 4. Patienten mit Zuständen, die zu einer Verfälschung des HbA1c führen könnten (Hämoglobinvarianten, Verkürzung der Erythrozytenlebensdauer ): Nüchternglukose oder ogtt

9 Themata Einführung Hämoglobin und HbA1c Bestimmungsmethoden Standardisierung des HbA1c

10 Hämoglobin Sauerstofftransportierendes Molekül: 95% des Erythrozyten Bestehend aus 4 Untereinheiten: 2 α und 2 ß Ketten = Hb A 2 α und 2 δ Ketten = Hb A2 2 α und 2 γ Ketten = Hb F = Fetales Hämoglobin Normales adultes Hämoglobin: 95% HbA < 2% HbF 2-3% HbA2

11 Hämoglobine Hämoglobin (Hb) HbF (α 2 γ 2 ) HbA (α 2 β 2 ) HbA2 (α 2 δ 2 ) (<2% vom Hb) (95% vom Hb) (2-3.5% vom Hb) HbA 0 (90% von HbA) HbA 1 (6% von HbA) HbA 1a (0,4% von HbA) HbA 1b (0,4% von HbA) HbA 1c (5% von HbA) HbA 1a1 (0,2% von HbA) HbA 1a2 (0,2% von HbA)

12 Hämoglobin Vor der Geburt: Hohes HbF (2 α und 2 γ Ketten ) Kein A2 Geburt: HbF fällt ab HbA steigt an HbA2 2-3% Nach 6-12 Monaten: 95% HbA (2 α und 2 ß Ketten) < 2% HbF (2 α und 2 γ Ketten) 2-3% HbA2 (2 α und 2 δ Ketten)

13 Glykierung des Hb Glykierung des Hämoglobins: Nicht-enzymatische Glykierung (chemische Reaktion zwischen Glukose und primären Aminogruppen von Proteinen): Glukose reagiert mit der NH 2 -Gruppe des endständigen Valin der ß- Kette HC=O HC=N-ß CH2-NH-ß HCOH HCOH C=O HOCH HOCH HOCH ß-NH2 + HCOH schnell HCOH langsam HCOH < HCOH HCOH HCOH CH2OH CH2OH CH2OH Amin Glukose Aldimin Ketoamin (labiles HbA1c) (stabiles HbA1c)

14 HbA1c und Hämoglobinopathien Einflüsse auf die HbA1c-Bestimmung: HbA1c = Bindung der Glukose an die ß-Kette des Hämoglobins (HbA) HbA1c abhängig von der Erythrozytenlebensdauer (Normbereich) Hämoglobinvarianten: auch diese werden glykiert (z.b. HbS1c), sind aber vom HbA1c zu unterscheiden Hämoglobinvarianten: Änderung der Erythrozytenlebensdauer ( Tage) Homozygote Varianten (z.b. HbSS): HbA wird nicht gebildet kein HbA1c vorhanden 14

15 Themata Einführung Hämoglobin und HbA1c Bestimmungsmethoden Standardisierung des HbA1c

16 Consensus statement der EASD, ADA, IDF, IFCC, AACC und CEN (European Committee for standardisation), 2002: The clinical requirements of a HbA1c test include: 1. Low individual variance 2. Precision that justifies clinicians acting on differences of 0.35%-0.5% as being significant; 3. HbA1c assays with coefficient of variation (CV) <2% for combined, between- and within-run precision.

17 Methodenabhängiger Bias der HbA1c Bestimmung Holmes et al Am J Clin Pathol 2008

18 Methodenabhängiger Bias der HbA1c Bestimmung HPLC, G7 Holmes et al Am J Clin Pathol 2008

19 Point of care testing von HbA1c Lenters-Westra E. und Slingerland R. Clin Chem, 2010

20 HbA1c Bestimmung mit HPLC vs. immunologische Bestimmung Intra-assay and interassay coefficients of variation for the HPLC method are 0.8% and 0.7%, respectively. This systemis designed also to detect and estimate levels of HbA2 and fetal, S, C, D, J- Baltimore, O-Arab, H, and E hemoglobin variants; hence, the presence of any of these abnormalities was ruled out in all 178 subjects studied. The intra-assay and interassay coefficients of variation of the immunoturbidimetric (IT) inhibition assay are 1.5% and 2.6%, respectively. García-Alcalá et al. Am J Clin Pathol 2009

21 Klassifikation von Diabetespatienten mit HPLC vs. immunologische Detektion von HbA1c 17% der Patienten durch immunologische Methode falsch klassifiziert! García-Alcalá et al. Am J Clin Pathol 2009

22 Bias bei automatisierten immunologischen HbA1c Methoden. Barrot A. et al. Clin Lab 2012

23 Schlussfolgerung It is important to recognize that a particular HbA1c method must have an analytic imprecision of less than 3% to reliably distinguish between HbA1c treatment goals that differ by 1% (ie, to differentiate 7% from 8% or 8% from 9%). Holmes et al Am J Clin Pathol 2008 It is important that the upper limit of the normal range (6.0% HbA1c) can be differentiated from the most common target of 6.5% HbA1c. This requires that the imprecision range (2SD) must significantly less than 0.5% HbA1c and of the order of ± 0.3%. In terms of 95% confidence intervals as ±2 SD limits, this implies that the SD must besignificantly less than 0.25 and needs to be approximately This necessitates a CV of <2%. Goodall et al Clin Chem Lab Med 2007 Consensus statement of the EASD, ADA, IDF, IFCC, AACC and CEN (European Committee for standardisation), 2002: The clinical requirements of a HbA1c test include: 1. Low individual variance 2. Precision that justifies clinicians acting on differences of 0.35%-0.5% as being significant; 3. HbA1c assays with CV <2% for combined, between-, and within-run precision.

24 Themata Einführung Hämoglobin und HbA1c Bestimmungsmethoden Standardisierung des HbA1c

25 HbA1c- vor und nach der DCCT-Studie Litte et al. ClinChemLab Med2003

26 HbA1c- Standardisierung in der DCCT-Studie

27 HbA1c: mmol/mol (IFCC) vs. % (DCCT) Weykampet al. Ann Lab Med2013

28 HbA1c- IFCC-Standardisierung

29 HbA1c- IFCC-Standardisierung Jeppssonet al. ClinChemLab Med2002

30 HbA1c- IFCC-Standardisierung

31 HbA1c- IFCC-Standardisierung Hoelzelet al 2004

32 HbA1c: mmol/mol (IFCC) vs. % (DCCT) IFCC-HbA 1c (mmol/mol) = [DCCT-HbA 1c (%) ] Hoelzelet al 2004

33 Themata Einführung Hämoglobin und HbA1c Bestimmungsmethoden Standardisierung des HbA1c HbA1c im Ringversuch

34 HbA1c im Ringversuch DÄ 2009

35 HbA1c im Ringversuch DÄ 2009

36 HbA1c im Ringversuch DÄ 2009

37 HbA1c im Ringversuch Ringversuch RfB 1/2016

38 Schlussfolgerungen Nur standardisierte Methoden sind für die Bestimmung des HbA1c zulässig (CV < 2.0 %). Eine Bestimmung von HbA1c mittels HPLC (Referenzmethode) ist wann immer möglich anzustreben (CV <1, geringer Bias) Die Abweichung des HbA1c eines Labor im Ringversuch kann bis zu 10% betragen.

39 Herzlichen Dank für Ihre Aufmerksamkeit!

40