Organoide und ihre Anwendungsmöglichkeiten in der Medizin
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- Heinz Koch
- vor 5 Jahren
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1 Presentation title / topic OR Presenter's name Organisational unit 1 Organoide und ihre Anwendungsmöglichkeiten in der Medizin Organoide sind sich autonom entwickelnde Stammzell-Aggregate. Was sind Stammzellen? Ao. Univ. Prof. Dr. Zentrum für Medizinische Biochemie, Max F. Perutz Laboratorien, Vienna BioCenter Medizinische Universität Wien Zentrum für Medizinische Biochemie 2 1
2 Inhalt Was sind Stammzellen? Welche Arten von Stammzellen gibt es? Worin unterscheiden sich Stammzellen von anderen (somatischen) Zellen? Wo spielen Stammzellen in unserem Körper eine Rolle? Künstlich hergestellte Stammzellen Was kann man mit Stammzellen (nicht) machen? Grundlagenforschung Stammzellenbiologie: Wie funktionieren Stammzellen? Erforschung von Entwicklungsprozessen Erforschung von Krankheitsursachen Zelltherapie: Heilung von Krankheiten? Warum ist Stammzellenforschung und deren Anwendung einer ethischen Güterabwägung zu unterziehen? 3 Inhalt Was sind Stammzellen Welche Arten von Stammzellen gibt es? Worin unterscheiden sich Stammzellen von anderen (somatischen) Zellen? Wo spielen Stammzellen in unserem Körper eine Rolle? Künstlich hergestellte Stammzellen Embryonale Carcinomazellen ~ ~1970 Embryonale Stammzellen ~ Keimbahnstammzellen ~ Adulte / somatische Stammzellen ~ (1) Krebsstammzellen ~
3 Inhalt Was sind Stammzellen Welche Arten von Stammzellen gibt es? Worin unterscheiden sich Stammzellen von anderen (somatischen) Zellen? Wo spielen Stammzellen in unserem Körper eine Rolle? Künstlich hergestellte Stammzellen 5 Worin unterscheiden sich Stammzellen von anderen Zellen? Selbsterneuerungsfähigkeit = nicht endend wollende Teilung zu identischen Tochterzellen. (In vivo gibt es auch die asymmetrische Teilung zu einer gleichbleibenden und einer sich weiter entwickelnden Zelle) Differenzierungspotenzial = Anzahl der Möglichkeiten in verschiedene somatische Zellen zu differenzieren. Totipotenz (Zygote und Blastomere) > Pluripotenz (ESCs) > Paucipotenz (HSCs) > Monopotenz (somatische Zelle) Stammzellen brauchen Nischen zum Überleben. (In vivo sind sogenannte Helfer- oder Nischenzellen notwendig.) Die Stammzelleneigenschaften sind der Grundzustand einer jeden Zelle. = Alle sich daraus ableitenden zellulären Zustande sind reversibel. 6 3
4 Inhalt Was sind Stammzellen Welche Arten von Stammzellen gibt es? Worin unterscheiden sich Stammzellen von anderen (somatischen) Zellen? Wo spielen Stammzellen in unserem Körper eine Rolle? Künstlich hergestellte Stammzellen 7 Woher kommen die embryonalen Stammzellen? Prägastrulationsentwicklung des Säugetierembryonen E0 32 Zellen Zellen I m: E2.5 h: E3.5 Implantation m: E3.0 h: E4.5 E 6.5 E 4.5 Embryonale Stammzellen m: E4.5 h: E
5 Isolierung von embryonalen Stammzellen Beim Menschen durch in vitro Fertilisation 9 Wo spielen Stammzellen in unserem Körper eine Rolle? Somatische oder adulte Stammzellen Keimzellen 10 5
6 Tumorstammzellen und Krebs Melanome Tumorstammzelle n Rezidivierender Tumor 11 Inhalt Was sind Stammzellen Welche Arten von Stammzellen gibt es? Worin unterscheiden sich Stammzellen von anderen (somatischen) Zellen? Wo spielen Stammzellen in unserem Körper eine Rolle? Künstlich hergestellte Stammzellen 12 6
7 Herstellen von embryonalen Stammzellen durch Klonieren Sir John Gurdon, Nobelpreis für Medizin : Frosch geklont: Konstanz der DNA bewiesen Ian Wilmut and Dolly 1997 Embryonic stem cells 2013 Shoukhrat Mitalipov: geklonte Menschen-Blastozysten : Erste geklonte humane embryonale Stammzellen Human Embryonic Stem Cells Derived by Somatic Cell Nuclear Transfer Masahito Tachibana, Paula Amato, Michelle Sparman, Nuria Marti Gutierrez, Rebecca Tippner-Hedges, Hong Ma, E... Cell, Volume 153, Issue 6, 2013,
8 Gürteltiere klonen ihren einzigen Embryo und bekommen immer vier genetisch identische Junge. Nine-banded armadillos consistently give birth to genetically identical quadruplets. LAVIES/NATIONAL GEOGRAPHIC/GETTY IMAGES LAVIES/NATIONAL GEOGRAPHIC/GETTY IMAGES 15 Herstellen von induzierten pluripotenten Stammzellen (ipscs) seit 2006 Shinya Yamanaka, Nobelpreis für Medizin 2012 Künstliche Stammzellen aus somatischen Zellen Proto-Onkogen microrna-binding protein Harold Weintraub 1987 (1987 verstorben) MyoD macht aus Fibroblasten Muskelzellen 16 8
9 Somatische Zellen Somatischer-Kern Transfer ( Klonen ) Zelltherapie Organspende In vitro Fertilisation Somatische Stammzellen Biopsie Reprogrammieren Induzierte Pluripotente Stammzellen Gentherapie Eispende Organoide Autonome gesteuerte Differenzierung z. B.: Herzmuskelzellen Embryonale Stammzellen Isolierung reiner und funktioneller Zellen In vitro Differenzierung Somatische Zellen 17 Inhalt Was sind Stammzellen? Welche Arten von Stammzellen gibt es? Worin unterscheiden sich Stammzellen von anderen (somatischen) Zellen? Wo spielen Stammzellen in unserem Körper eine Rolle? Künstlich hergestellte Stammzellen Was kann man mit Stammzellen (nicht) machen? Grundlagenforschung Stammzellenbiologie: Wie funktionieren Stammzellen? Erforschung von Entwicklungsprozessen Erforschung von Krankheitsursachen Zelltherapie: Heilung von Krankheiten? Warum ist Stammzellenforschung und deren Anwendung einer ethischen Güterabwägung zu unterziehen? 18 9
10 Was kann man mit Stammzellen machen? Grundlagenforschung Stammzellenbiologie: Wie funktionieren Stammzellen? Erforschung von Entwicklungsprozessen Erforschung von Krankheitsursachen Grundlegende Arbeiten zur Zellbiologie Genregulation (z.b. zum Erhalt der Selbsterneuerung) Genexpression (z.b. zum Erhalt der Differenzierungsbereitschaft) Regulation des Metabolismus (z.b. Warburg Effekt bei Krebsstammzellen) um die Eigenschaften und Verhaltensweisen von allen Arten von Stammzellen zu erforschen. Für weitere Details, siehe meine Embryonen- und Stammzellforschung I + II Vorlesungen auf der Uni Wien. 19 Was kann man mit Stammzellen machen? Grundlagenforschung Stammzellenbiologie: Wie funktionieren Stammzellen? Erforschung von Entwicklungsprozessen in vivo und in vitro Erforschung von Krankheitsursachen 20 10
11 Herstellen von Embryoid Bodies und Organoiden Durch Aggregation von wildtyp und genetisch veränderten embryonalen Stammzellen und spontaner autonomer aber regulierbarer Differenzierung dieser Zellen. ESC N = Blastozyst (= 3,5 Tage alter Embryo) Embryoid Body Erforschung der Funktionen der einzelnen Gene und des Entwicklungspotentials der verschiedenen Stammzellen wurde so möglich. 21 EB Entwicklung siehe file InvitroDiff. pdf 22 11
12 Sie finden den Vortrag und eine Zusammenfassung auf meiner Homepage unter dem URL Georg LA Weitzer Vorlesung Teil Dienstag
13 Herstellung von Embryoid Bodies Herstellen von somatischen Zellen 20 min. Trypsin ESC Kolonie 24 Stunden 3-4 Tage 25 Differenzierung von embryonalen Stammzellen zu somatischen Zellen 26 13
14 Mit Hilfe von ESCs ist das Studium der frühen Embryonalentwicklung in embryoid bodies möglich Murine Embryo, day 7 Blastocyst, day 3.5 Embryonic Stem Cells Embryoid Body, day 7 Bis zur Gastrulation vergleichbar! In vivo In vitro 27 Herstellen von transgenen Mäusen Durch Injektion von genetisch veränderten embryonalen Stammzellen in die innere Zellmasse von Blastozysten. Genetisch Veränderung von embryonalen Stammzellen durch homologe Rekombination. Blastozyst (= 3,5 Tage alter Embryo) Chimäre Maus F1 Generation kann das Transgen in der Keimbahn tragen Erforschung der Funktionen der einzelnen Gene wurde so möglich
15 Was kann man mit Stammzellen machen? Grundlagenforschung Stammzellenbiologie: Wie funktionieren Stammzellen? Erforschung von Entwicklungsprozessen Erforschung von Krankheitsursachen 29 Herstellen von induzierten pluripotenten Stammzellen (ipscs) von Patienten um die Ursache ihrer Erkrankung herauszufinden Proto-Onkogen microrna-binding protein Zellen mit den gleichen Defekten, wie der Patient sie hat
16 2012 Herstellung von ipscs von Alzheimer Patienten und gesunden Menschen. Herstellung von Neuronen aus den ipscs, die die gleichen (genetischen) Defekte haben, wie die Patienten und Vergleich mit denen der gesunden Menschen. Analyse der molekularen Ursachen der Erkrankung nun möglich. 31 Inhalt Was sind Stammzellen? Welche Arten von Stammzellen gibt es? Worin unterscheiden sich Stammzellen von anderen (somatischen) Zellen? Wo spielen Stammzellen in unserem Körper eine Rolle? Künstlich hergestellte Stammzellen Was kann man mit Stammzellen (nicht) machen? Grundlagenforschung Stammzellenbiologie: Wie funktionieren Stammzellen? Erforschung von Entwicklungsprozessen Erforschung von Krankheitsursachen Zelltherapie: Heilung von Krankheiten? Warum ist Stammzellenforschung und deren Anwendung einer ethischen Güterabwägung zu unterziehen? 32 16
17 Advanced therapy medical products (ATMPs) Advanced therapy (bio-) medical / -cinal products (ATMPs) Arzneimittel für neuartige Therapien (auch ATMPs für Advanced Therapy Medicinal Products) ist der Überbegriff dreier Arzneimittel-Produktklassen, den somatischen Zelltherapeutika, den Gentherapeutika und den biotechnologisch bearbeiteten Gewebezubereitungen [auch Tissue-Engineering-Produkte (TEP)]. [1] Diese Arzneimittel enthalten oder bestehen meistens aus lebenden Zellen oder Gewebe und zeichnen sich daher durch eine hohe Komplexität aus. Die verwendeten Zellen werden oft einem Patienten entnommen, im Labor bearbeitet (zum Beispiel vermehrt oder gentechnisch verändert), und anschließend demselben Patienten wieder verabreicht. ATMPs sind aufgrund dessen häufig ein Beispiel für Personalisierte Medizin. ( am ), LA Vorlesung Es funktioniert bei: Knochenmarksstammzellen-Austausch bei Patienten mit Leukämie. Eigene Knochenmarksstammzellen werden durch hohe tödlichen Dosen an Strahlung vernichtet und durch allogene gesunde Knochenmarksstammzellen ersetzt. Danach ist allerdings lebenslange Immunsupression notwendig. Alternative: Eigene Knochenmarksstammzellen genetisch reparieren, expandieren und nach Strahlenbehandlung den Patienten wieder einpflanzen. (geht derzeit nur bei der Maus) 34 17
18 Heilungsversuche von Herzkrankheiten mittels Knochenmark-Stammzellen. Heilung von Krankheiten? Nach 18 Jahre noch immer kein Erfolg! 35 Stammzellentherapie mit aus embryonalen Stammzellen und ipscs hergestellten somatischen Zellen: Geron Oligodendrozyten aus humanen ESCs FDA aproved dann abgebrochen ( Advanced Cell Technology (ACT) Makula degeneration (jetzt bis jetzt keine messbaren Erfolge XCell Center Deutsches Zentrum für Frischzellen-Therapie Stem Tech Lab Parkinson s Disease and Macula degeneration therapies with autologous and allogenic ipscs
19 Induzierte pluripotente Stammzellen zur Heilung von genetisch bedingten Erkrankungen autologous and allogenic ipscs Personalisierte Medizin 37 Warum wird man voraussichtlich mit den bis heute hergestellten geklonten ESCs und ipscs keine Therapie durchführen können? Das epigenetisches Gedächtnis der ipscs kann nicht richtig gelöscht werden. Gefahr der Tumorbildung durch virale Vektoren und Proto-Onkogene in den Zellen. Derzeitige Unmöglichkeit reine somatische Zellen eines Typs herzustellen
20 Was kann man mit Stammzellen (nicht) machen? Herstellung von transgene Mäuse, von hipscs und hnt-escs für die Grundlagenforschung ist möglich. Aufklärung von Genfunktionen und Entwicklungsprozesse ist möglich. Aufklärung von Ursache von genetisch bedingten Erkrankungen ist möglich. Aber: Bis heute gibt es keine etablierte Therapie von Krankheiten. 39 Somatische Zellen Somatischer-Kern Transfer ( Klonen ) Zelltherapie Organspende In vitro Fertilisation Somatische Stammzellen Biopsie Reprogrammieren Induzierte Pluripotente Stammzellen Gentherapie Eispende Organoide Embryonale Stammzellen In vitro Differenzierung Isolierung reiner und funktioneller Zellen z. B.: Herzmuskelzellen Somatische Zellen 40 20
21 Inhalt Was sind Stammzellen? Welche Arten von Stammzellen gibt es? Worin unterscheiden sich Stammzellen von anderen (somatischen) Zellen? Wo spielen Stammzellen in unserem Körper eine Rolle? Künstlich hergestellte Stammzellen Was kann man mit Stammzellen (nicht) machen? Grundlagenforschung Stammzellenbiologie: Wie funktionieren Stammzellen? Erforschung von Entwicklungsprozessen Erforschung von Krankheitsursachen Zelltherapie: Heilung von Krankheiten? Warum ist Stammzellenforschung und deren Anwendung einer ethischen Güterabwägung zu unterziehen? 41 Warum ist Stammzellenforschung und deren Anwendung einer ethischen Güterabwägung zu unterziehen? Weil bei der Isolierung von embryonalen Stammzellen, primären Keimzellen oder fötalen Stammzellen immer ein potenziell zum Leben fähiger Embryo vernichtet wird. Somatische Stammzellen setzen immer den Tod einer organspendenden Person voraus. (- solange nicht durch Biopsie isolierbar und kontinuierlich kultivierbar.) Klärung des moralischer Status des Embryos bzw. des toten Menschen
22 Ethisch relevante Aspekte der humanen Stammzellforschung Gewinnung von Stammzellen es wird menschliches Leben vernichtet Potenzial von Stammzellen inkl. ipscs es könnten Menschen daraus entstehen Klonieren von Organismen es könnten Menschen daraus entstehen In vitro Fertilisation: Eispende / Samenspende / Leihmutter / Präimplantationsdiagnostik etc. - - birgt immer die Gefahr der Instrumentalisierung von Menschen in sich Es besteht die Notwendigkeit einer Güterabwägung! 43 Ein unverzichtbarer Aspekt dieser Güterabwägung sind die hier geschilderten biologischen Grundlagen Aber es bedarf offensichtlich mehr, um folgende Frage zu beantworten: 44 22
23 Darf man - oder - soll man sogar mit Stammzellen un damit auch mit Lebewesen Forschungen betreiben? 45 auftreten liegen auf einer Naturwissenschaftliche Fakten ontologischer Ebene Wir haben keine einheitlichen Begriffe für Embryo, Leben, Mensch,... und wir stehen vor dem Phänomen der Kontingenz des Lebens. * ethischer Ebene Was ist die Würde des Menschen? -a priori oder zu erwerbend? moralischer Ebene Kann / Muss ich alles menschliche Leben gleich behandeln? Konflikt: Sterben lassen oder Heilen (Triage) rechtlicher Ebene Wie läßt sich der moralische Anspruch rechtlich für alle festlegen? * Unzählige Spielarten zwischen Deontologie (Pfichtenethik) und Utilitarismus (Möglichst größtes Wohl für möglichst 46 23
24 Religiöse Ethische Positionen im Bezug auf die Embryonenforschung Muslimische Interpretation Im Koran gibt es keine explizite Angaben über einen normativen Zusammenhang zwischen Beseelung und Schutzwürdigkeit des Blastozysten. Was nicht verboten ist, ist erlaubt. Jüdische Interpretation Der Fötus ist erst ab den 40 Tag beseelt. Was nicht verboten ist, ist erlaubt. Die Welt ist nicht perfekt, der Mensch muss sie verbessern (Tikkun Olam). Evangelische Interpretation Frühformen des Lebens sind gegenüber der Forschungsfreiheit bzw. dem Gesundheitsschutz auf die Waagschale zu legen. Katholische Interpretation Aus der a priori gesetzten Würde des Menschen ergibt sich eine negative Unterlassungspflicht. Es besteht ein Vorrang der negativen Rechtspflichten vor den positiven Tugendpflichten. Der Mensch darf in keinen seiner Entwicklungsstadien instrumentalisiert werden. Hinduismus Buddhismus Daoismus Konfuzianismus Shintoismus* * Man das das Leben von Neugeborenen den Göttern zurückgeben. Kulturell bedingter Wissenshorizont 47 Rechtliche Lage in Österreich Es ist untersagt mit Zellen, aus denen Menschen entstehen könnten zu experimentieren, außer wenn das Ziel die Fortpflanzung ist. ( in vitro Fertilisation). Es ist nicht untersagt mit bereits existierenden embryonalen Stammzellen Experimente zu machen
25 Positionen der Bioethik Kommission des Bundeskanzleramtes der Republik Österreich (März 2009) Position A Forschung an überzähligen Embryonen und existierenden hescs soll erlaubt werden. Der Embryo hat keinen spezifischen verfassungsrechtlichen Schutz. Grundlagenforschung ist nie aussichtslos und Wissensgewinn auch nicht ethisch bewertbar. Herstellung von Embryonen für die Forschung soll verboten bleiben. Position B Verbot der verbrauchenden und manipulierenden Embryonenforschung. Vernunft muss sich mit Nichtwissen begnügen. Fokus der Forschung auf adulte SSCs und ipscs. Eventuell Stichtagsregelung, die die Verwendung alter bereits existierenden hescs zuläßt. 49 Technologie: Anwendung in Produktionsprozessen. Ökonomie: Sind diese Ressourcen nachhaltig und leistbar? Medizin: Kann ich die Lebensqualität damit verbessern? Politik: Steuerung von Erkenntnisgewinn, Forstschritt und Schutz von Werten. Rechstwissenschafte n: Reglementierung moralischer Ansprüche. Chemie und Biologie der Stammzellen Philosophie: Was ist Leben? Begriffsbestimmungen Ethik: Was sind schützenswerte Güter? Moral: Wie verhalte ich mich gegenüber verschiedenen Lebensformen? Chemie und Biologie der somatischen Zellen 50 25
26 Sie finden den Vortrag und eine Zusammenfassung auf meiner Homepage unter dem URL Georg LA Weitzer Vorlesung =
27 Our Scientific Interest: The homeostasis of cardiac stem cells Molecular mechanisms in cardiac stem cells and how they contribute to the regulation of cardiomyogenesis and to homeostasis of the adult heart. General Aim of Research: To understand the role of cardiac stem cells in the healthy and diseased heart - and as a surplus - to possibly contribute to new therapies of chronic heart diseases. Specific Aim of Research: To understand the role of two non-transcription factor proteins, desmin and SPARC in the regulation of the expression of the heart specific transcription factor Nkx2.5 in cardiac stem cells. 53 Introduction: How does cardiomyogenesis commence during embryogenesis? What do we know about the cardiac regulatory molecular machinery? What do we know about cardiac stem cells? How can we isolate and investigate cardiac stem cells? How can cardiac stem cells be used as a model system to study the molecular machinery regulating cardiomyogenesis? 54 27
28 ENDE Presentation title / topic OR Presenter's name Zentrum für Medizinische Biochemie 55 Darf man oder soll man sogar mit Stammzellen und damit auch mit Lebewesen Forschungen betreiben? Nicht liegt es an dir, das Werk zu vollenden, aber du bist auch nicht frei, von ihm abzulassen. (Rabbi Tarphon Pirkej Awot 2,21.[Talmud]), LA Vorlesung
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