Produktion von Serumeiern in Deutschland
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- Kilian Meissner
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1 Produktion von Serumeiern in Deutschland Was sind Serumeier? Serumeier bilden den wichtigsten Rohstoff vor allem von Grippeimpfstoffen. Dabei ist die Herstellung von Impfstoffen aus Serumeiern eine recht alte Technologie. Jedoch hat sie gegenüber neueren Verfahren einige Vorteile, die auch von der Pharmaindustrie geschätzt wird. In Zeiten einer befürchteten Pandemie sind nämlich die Bruteierproduzenten eine gesicherte Produktion gewährleisten. Zusammengefasst läuft dabei folgender Prozess ab: Das Brutei wird etwas zehn Tage vorgebrütet, bevor das Virus in geringer Menge in das Ei gespritzt wird. Im Ei trifft das Virus dann auf ein biologisch vollwertiges System und kann sich unter idealen Bedingungen vermehren. Dieser Prozess dauert etwa drei Tage. Im Vergleich zum Brutei, kann die Vermehrung der Viren auch auf Zellkulturen erfolgen. Das Saatvirus wird dabei in Kontakt mit den Zellen gebracht und vermehrt sich auf diesem Substrat. Da es sich hierbei nur um eine definierte Art von Zellen handelt, besteht im Vergleich zum Ei ein höheres Risiko einer Unverträglichkeit zwischen Virus und Zelle. Das bedeutet dann entsprechend eine geringere Ausbeute. Um den Anforderungen der Pharmaindustrie gerecht zu werden, sind erhebliche Aufwendungen erforderlich, die nach Erläuterungen zu gesetzlichen Grundlagen näher beschrieben werden sollen. Generelle Anforderungen / Gesetzliche Grundlagen Bruteier sollten generell SPF-Bruteier sein. Das bedeutet: Spezifiziert Pathogen Frei, d.h. die Abwesenheit bestimmter Krankheitserreger (Pathogene), wie Bakterien, Pilze und Viren. Das bedeutet gleichzeitig, dass SPF-Bruteier nicht komplett frei von Viren und Bakterien bzw. frei von Antikörpern gegen diese Mikroorganismen sein müssen. Da SPF-Eier in Rechtsvorschriften der EU nicht eigens definiert sind, wurde eine Definition festgelegt. Nach Artikel 1 der VO 2001/393/EG 1 sind SPF-Bruteier: 1
2 gemäß Artikel 2 Absatz 2 der Richtlinie 90/539/EWG des Rates 2, die von spezifiziert pathogenfreien Geflügelherden gemäß dem Europäischen Arzneibuch stammen und ausschließlich für Diagnose- oder Forschungszwecke oder für die pharmazeutische Verwendung bestimmt sind. Des Weiteren ist in genannter VO 2001/393/EG geregelt, dass SPF-Eier gemäß den im geltenden Europäischen Arzneibuch festgelegten Vorschriften erzeugt werden. Die Spezifikationen für den SPF-Status sind in offiziellen Dokumenten wie der Europäischen Pharmacopoeia oder dem Amerikanischen Veterinary Services Memorandum No niedergelegt. Die Grundlage für das Europäische Arzneibuch 4 (Pharmacopoea Europaea) wurde 1965 gelegt. Die Ausarbeitung des Europäischen Arzneibuchs liegt in der Verantwortung der Europäischen Arzneibuch-Kommission 5. Diese besteht aus nationalen Delegationen mit maximal drei Mitgliedern pro Land. Der Sitz der Europäischen Arzneibuch-Kommission (European Directorate for the Quality of Medicines, EDQM) ist der Europarat in Straßburg. Darüber hinaus ist es den Abnehmern von SPF-Eiern freigestellt, den Lieferanten weiter gehende Spezifikationen aufzugeben. Durch diese Maßnahmen kann die Qualität der SPF-Eier an die Anforderungen für die Herstellung von speziellen Produkten angepasst werden. Die in den offiziellen Dokumenten festgelegten Qualitätsparameter stellen insofern nur Mindestanforderungen für den Warenverkehr und die Herstellung pharmazeutischer Produkte dar, die im Verhältnis zwischen Produzenten und Abnehmern jederzeit überschritten werden können. Es treten aber auch Situationen auf, in denen von den offiziellen Anforderungen abgewichen werden muss und auf einzelne Anforderungen verzichtet wird. Dies ist immer dann der Fall, wenn signifikante Produktionsausfälle durch den Verlust des SPF-Status in größeren Produktionseinheiten auftreten. Unter diesen Umständen kann im Rahmen von
3 Ausnahmeregelungen die Spezifikation für die Herstellung von definierten Produkten angepasst werden. Mit der zunehmenden Spezialisierung und Konzentration in der Geflügelhaltung ergeben sich auch neue Anforderungen an die Erzeugung und Qualität von SPF-Eiern. Die mit diesen Eiern erzeugten Impfstoffe sind entscheidend für die Gesunderhaltung der Bestände. Keinesfalls dürfen mit den Impfstoffen Krankheitserreger verbreitet oder durch die Impfungen diagnostische Ergebnisse verfälscht werden. Erweiterungen der Spezifikation für den SPF-Status, höhere Ansprüche an die Sicherheit und Genauigkeit der Testverfahren und sogar Anforderungen an den genetischen Hintergrund der verwendeten SPF-Zuchttiere sind deshalb nicht ungewöhnlich. Bedingungen für das Halten von SPF-Hühnern Wie Eingangs beschrieben, eignen sich Zellsysteme und Tiere zur Anzucht von Viren und anderen Mikroorganismen besser als Zellkulturen. Im Laufe der Forschung stellte sich heraus, dass sich das Hühnerei mit dem sich darin entwickelnden Embryo als natürliches Anzuchtgefäß" für diesen Zweck geradezu anbietet. Dabei ist es erforderlich, dass ausgeschlossen werden muss, dass sich der betreffende Mikroorganismus, der in das Ei eingebracht wird, bereits vor der Infektion im Ei befunden hat. Ebenso dürfen keine Antikörper gegen diesen Mikroorganismus das Wachstum und damit den Nachweis behindern. Daraus ergibt sich die Notwendigkeit Hühner zu halten, die niemals in ihrem Leben mit den entsprechenden Mikroorganismen in Kontakt gekommen sind und auch nicht bereits über das Brutei belastet waren. Diese Anforderungen entsprechen im Wesentlichen den Bedingungen für die Haltung von SPF- Hühnern. Der Grad der Abschirmung gegenüber der Umwelt hängt dabei vom Übertragungsweg der entsprechenden Mikroorganismen ab. Mit zunehmender Zahl der in die Spezifikation aufgenommenen Erreger steigen folglich auch die Ansprüche an die Absicherung der Bestände. Werden für diagnostische Zwecke und die Forschung im einfachsten Fall nur Eier oder Tiere mit nachgewiesener Freiheit von einem spezifischen Erreger und Antikörpern gegen diesen Erreger benötigt, so steigen die Ansprüche für die Erzeugung von Impfstoffen erheblich. Hier muss
4 insbesondere bei der Herstellung von Lebendimpfstoffen sichergestellt sein, dass keinerlei pathogene Mikroorganismen mit dem Impfstoff verbreitet werden können. Die Anzahl der benötigten SPF-Tiere und -Eier unter- scheidet sich je nach Verwendungszweck ebenfalls erheblich. Für diagnostische Zwecke werden in der Regel nur wenige Eier und Tiere benötigt. Die Haltung von SPF- Zuchttieren für diesen Zweck kann deshalb mit einem hohen technischen Aufwand betrieben werden, zumal wirtschaftliche Zwänge zumeist keine große Rolle spielen. Der Anfang der SPF-Hühnerhaltung ist daher durch einen hohen technischen Aufwand mit der Verwendung von Isolatoren und sehr kleinen Tierzahlen je Bestand geprägt. Solche Haltungen findet man auch heute noch in Instituten und Laboratorien. Für die Erzeugung von Impfstoffen werden dagegen große Mengen von SPF-Eiern mit gleich bleibender Qualität benötigt. Mit den wachsenden Geflügelbeständen steigt auch der Bedarf an Impfstoffen und damit auch die Anzahl der benötigten SPF-Eier an. Eine Erzeugung mit Kleinbeständen in Isolatoren ist deshalb ausgeschlossen. Es mussten daher Systeme entwickelt werden, die eine sichere Abschirmung größerer Bestände unter Beachtung wirtschaftlicher Parameter ermöglichen. Die Herausforderung besteht dabei darin, dass für die Erzeugung von Impfstoffen eine hohe Anzahl von Mikroorganismen von den Beständen ferngehalten werden müssen, also sehr wirksame Abschirmungstechniken erforderlich sind und gleichzeitig die verhältnismäßig große Tierzahl je Bestand eine Isolierung vom Betreuungspersonal nicht zulässt. Größere Tierbestände haben auch einen höheren Bedarf an Frischluft, Futter und Wasser, was die Wahrscheinlichkeit des Eintrages von unerwünschten Mikroorganismen erhöht, wenn nicht wirkungsvolle Sicherungssysteme vorgeschaltet werden. Entsprechende Haltungs- und Produktionssysteme sind in 70er Jahren des vergangenen Jahrhunderts entwickelt und seitdem ständig verbessert worden. Haltungssysteme für SPF-Hühner Haltungssysteme für SPF-Hühner müssen die Versorgung mit Futter, Wasser und Frischluft sicherstellen aber gleich- zeitig eine Abschirmung gegen die Kontamination aus der Umwelt gewährleisten. In SPF-Bereichen herrscht ein besonders hoher Hygienestatus.
5 Von einem SPF-Hygienestatus wird dann gesprochen, wenn regelmäßig bestimmt wird, welche pathogenen Mikroorganismen die Versuchstiere tragen. Für die Haltung von größeren SPF-Beständen ist das so genannte Barrieresystem üblich. Die Hygienebarriere umfasst dabei folgende Komponenten: - Lüftungsbarriere: Die Zuluft von SPF-Tierhaltungen wird i.d.r. durch Schwebstofffilter von Kleinstpartikeln gereinigt. Schwebstofffilter können Kontaminationen der Zuluft mit Bakterien, Viren oder Pilzen sehr sicher abfangen. - Materialbarriere: Für die Tierversorgung notwendige Versorgungsmaterialien wie bspw. Futter werden i.d.r. vor Einschleusung in den SPF-Tierhaltungsbereich behandelt. Dies erfolgt üblicherweise durch einen in die Barriere integrierten Autoklaven, der eine sichere Desinfektion gewährleistet. Die Materialbarriere umfasst ebenfalls die mikrobiologische Kontrolle des für die Tiere erforderlichen Trinkwassers. Häufig wird gewöhnliches Leitungswasser zum Tränken der Tiere eingesetzt. Die Kontaminationsgefahr, die von gewöhnlichem Trinkwasser für Versuchstiere ausgeht, ist in Deutschland als äußerst gering einzustufen; da solches Wasser einer standardisierten intensiven mikrobiologischen Qualitätskontrolle unterliegt (Trinkwasserverordnung). In vielen Fällen wird das in SPF-Tierhaltungen zur Tiertränke eingesetzte Wasser zusätzlich desinfiziert oder gar sterilisiert. Zur Trinkwasser-Desinfektion werden meist die Methoden der UV- Bestrahlung, Azidifizierung, Chlorierung oder Ozonierung verwandt, eine Sterilisierung kann durch Autoklavierung erreicht werden. Je tausend gehaltener Tiere sind dies für eine Produktionsphase etwa 45 Tonnen Futter, 80 m³ Wasser und 7500 Eierhöcker. Sofern der Kot nicht für die gesamte Haltungsperiode im Stall verbleibt, was mit zusätzlichen Risiken verbunden ist, müssen im laufenden Betrieb noch ca. 100 Tonnen Exkremente aus dem Stall entfernt werden. Daraus wird deutlich, dass der Organisation der Ein- und Ausschleusung von Material und der Hygienisierung des in den Stall verbrachten Futters und Wassers eine entscheidende Bedeutung für den Erhalt des SPF-Status zukommt.
6 Eine hygienisierende Futterbehandlung kann im Misch futterwerk als Zwischenschritt nach der Herstellung und vor der Anlieferung oder unmittelbar vor dem Verbringen des Futters in den Stall erfolgen. Die zur Anwendung kommenden Verfahren können dabei mitbestimmend sein für den Zeitpunkt der Behandlung in der Kette der Futterversorgung. Grundsätzlich kann eine Hygienisierung mit folgenden drei Verfahren erfolgen: Hitzebehandlung Ionisierende Strahlung Chemische Desinfektion" - Personalbarriere: Ganz allgemein ist der Personalzutritt zu SPF-Tierhaltungen auf das unerlässliche Maß zu reduzieren. Der Zutritt zu SPF-Tierhaltungen erfolgt über Personalschleusen, in denen Schutzkleidung angelegt wird. Die im Stall getragene Kleidung verbleibt in der Regel dort. Sie wird im Stall gewaschen und getrocknet. Zum Teil erfolgt der Zutritt durch Luftduschen, die Staubpartikel und die daran eventuell gebundenen Mikroorganismen vom Personal entfernen. Bei einem Teil der SPF-Anlagen kann der Zutritt erst nach einem obligatorischen Duschvorgang erfolgen. Der Nutzen dieses Zwangseinduschens ist jedoch umstritten, da hierdurch lediglich eine Keimreduktion jedoch keine Desinfektion erreicht wird. - Tierzugangsbarriere: Die Aufnahme neuer Tierstämme in SPF-Tierhaltungen kann selbstverständlich nicht unkontrolliert erfolgen. Zu groß ist die Gefahr, dass durch solche Vorgänge neue Tierpathogene die Hygienebarriere überwinden. SPF-Tiere müssen grundsätzlich aus Beständen mit bestätigtem SPF-Status reproduziert werden. Eine Möglichkeit zur Vermeidung von Umweltkontakten bei der Reproduktion besteht darin, einen bestehenden Bestand im eigenen Stall ständig aus sich selbst zu reproduzieren. Dazu müssen Bruteinrichtungen im Stall vorhanden sein. Nachteilig ist das Vorhandensein unterschiedlicher Altersgruppen im Stall mit entsprechenden Problemen beim Management und die Tatsache, dass der Stall niemals leer wird, also auch nie komplett gereinigt und desinfiziert werden kann. Auch der Filterwechsel in der Zuluftanlage gestaltet sich schwierig, da er im laufenden Betrieb erfolgen muss. Wegen der geringen
7 Tierzahl und der ständigen Verpaarung von verwandten Tieren ist zudem mit Inzuchtdepressionen und damit einem schnellen Leistungsverlust zu rechnen. Eine Möglichkeit dies zu umgehen ist die Vorbrut außerhalb des Stalles unter SPF- Bedingungen und der Schlupf der Küken im Stall. Hierfür muss dann lediglich Schlupfbrutkapazität im Stall vorgehalten werden. Der Transport von vorgebrüteten Eiern unter kontrollierten Bedingungen wird allgemein als einfacher angesehen, als der Transport von Küken. Nachteilig ist, dass zusätzlich Personal zum Schlupf und zur Geschlechtssortierung in den Stall eingeschleust werden muss. Auch der beim Schlupf an fallende Abfall muss aufwändig aus dem Stall ausgeschleust werden. Wenn möglich sollte die Reproduktion bis zum Schlupf deshalb außerhalb des Stalles, aber in räumlicher Nähe unter SPF-Bedingungen durchgeführt und die Küken unter entsprechenden Sicherheitsmaßnahmen transportiert und eingeschleust werden. Abzuraten ist dagegen von einer Trennung von Aufzucht und Produktion in unterschiedlichen Ställen wie sie außerhalb der SPF-Haltung üblich ist. Das Fangen und Transportieren der Junghennen ist mit hohen Kontaminationsrisiken verbunden, die mögliche Vorteile der besseren Kapazitätsnutzung bei weitem überwiegen. Für das Management von SPF-Beständen gilt: Schulung des Betreuungspersonals ist besser als Kontrolle der Bestände durch Tierärzte oder Spezialisten. Bewährt hat sich eine möglichst dichte und zeitnahe Datenerfassung, die bei entsprechender Auswertung frühzeitig Hinweise auf Probleme im Bestand ermöglicht. Reinigung und Desinfektion Der Reinigung und Desinfektion vor der Neubelegung und der Wartung in der Leerstandszeit kommt eine besondere Bedeutung zu. Mit einer sorgfältigen vorbeugenden Wartung aller Aggregate kann vermieden werden, dass während eines laufenden Durchganges Handwerker den SPF-Bereich betreten müssen. Alle wartungsintensiven und technisch anfälligen Komponenten sollten zudem außerhalb des eigentlichen SPF-Bereiches frei zugänglich angeordnet sein. Die Wartung sollte nach der Reinigung und vor der Desinfektion in der Leerstandszeit vorgenommen werden. Für die Desinfektion ist ein mehrstufiges Verfahren mit Präparaten aus unterschiedlichen Wirkstoffgruppen zu empfehlen. Damit werden
8 Wirkungslücken der Präparate kompensiert. Eine biologische Ruhe zwischen den Desinfektionsschritten erhöht die Wirkung. Bedeutung und Zukunft der SPF-Eiererzeugng Die größte Bedeutung haben SPF-Eier heute zweifellos als Substrat für die Produktion von Impfstoffen - und hier insbesondere für Geflügelimpfstoffe. Mit zunehmender Besorgnis beim Einsatz von Antibiotika und anderen Arzneimitteln bei der Nahrungsmittelerzeugung steigt gleich zeitig der Bedarf an wirksamen Impfstoffen an. Die Globalisierung der Produktion und der Warenströme bewirken zudem, dass lokal auftretende neue Krankheiten sich rasch verbreiten. Als einzige wirksame Waffe gegen dieses Geschehen bleibt oft nur die Entwicklung geeigneter Impfstoffe. Dazu kommt, dass die Geflügelerzeugung weltweit ansteigt, da der Verzehr von Eiern und Geflügelfleisch kaum religiösen Beschränkungen unterliegt. Mit zunehmender Eier- und Geflügelfleischproduktion erhöht sich der Bedarf an Impfstoffen und damit auch an SPF-Eiern. Vereinzelt werden noch Veterinärimpfstoffe mit Eiern ohne SPF-Status hergestellt werden. Dies sind zukünftige potenzielle Märkte für SPF-Eier, da die Sicherheit von Impfstoffen auch dort an Bedeutung gewinnen wird. Gegen eine Ausweitung der SPF-Eiererzeugung steht da- gegen die seit Jahrzehnten diskutierte Entwicklung von Alternativen für die Impfstoffherstellung. Bis zum jetzigen Zeitpunkt ergeben sich jedoch keine Hinweise darauf, dass kurzfristig die Impfstoffherstellung mit SPF-Eiern komplett durch alternative Verfahren ersetzt werden könnte. Entscheidend für die Zukunft der SPF-Eiererzeugung wird es sein, ein qualitativ hochwertiges Produkt zu einem wettbewerbsfähigen Preis mit der gebotenen Versorgungssicherheit anbieten zu können. Literatur SEEMANN, G.: Erzeugung und Bedeutung von SPF-Bruteiern (Lohmann Information 3/2005) August 2015
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