Gewebekultur 1 Zell- und Microplatten 2 HTS- 3 Immunologie/ HLA 4 Mikrobiologie/ Bakteriologie Mehrzweckgefäße 5 Röhrchen/

Transkript

1 13 Reaktions/ 2 HTS 1 Zell und

2 2 HTS Technische Informationen 2 I 2 96 Well 2 I 6 96 Well Polystyrol 2 I 6 96 Well Half Area Polystyrol 2 I 9 96 Well Polypropylen 2 I Well 2 I Well Polystyrol 2 I Well Polypropylen 2 I Well LoBase und HiBase 2 I Deep Well Polypropylen Microplatte 2 I Well 2 I Well Polystyrol 2 I Well LoBase und HiBase 2 I 20 Standard Lagerungsplatten 2 I Well MASTERBLOCK 2 I Well Lagerungsbox 2 I Deep Well MASTERBLOCK 2 I Deep Well Polypropylen Microplatte 2 I 28 Lagerungsplatten für das akustische Liquid 2 I Well Polypropylen Microplatte 2 I Well Cycloolefin Microplatte 2 I Well Cycloolefin 2 I 29 Nonbinding 2 l Well Nonbinding 2 l Well Nonbinding 2 l 32 Streptavidinbeschichtete 2 I 33 SensoPlate TM 2 I Well SensoPlate TM 2 I Well SensoPlate TM 2 I Well SensoPlate TM 2 I Well SensoPlate TM Plus 2 I Well SensoPlate TM 2 I Well SensoPlate TM Plus 2 I 35 UVStar 2 I Well UVStar 2 I Well UVStar Microplatte 2 I Reaktions/ 1 Zell und 2 HTS

3 HTS 1. Standard Format Die Herstellung benutzerfreundlicher Produkte gehört zu unseren wichtigsten Zielen. Alle Greiner BioOne haben einheitliche Grundmaße (Abb. 1), die den Empfehlungen des American National Standards Institute (ANSI) (ANSI/SBS 12004) entsprechen. Für weitere Informationen bezüglich der Außenmaße unserer sowie der Konformität mit den ANSI/SBS Standards besuchen Sie unsere Website: /technische_informationen. Weitere Informationen über die ANSI/SBS Standards finden Sie online unter: Polypropylen zeichnet sich durch eine ausgezeichnete chemische und thermische Beständigkeit aus. Es ist daher der ideale Kunststoff für Lagergefäße oder Lagerungsplatten. Polare Moleküle, wie Proteine oder DNA, binden wesentlich geringer an Polypropylen als an Polystyrol (Abb. 2). 13 Reaktions/ 2 HTS 1 Zell und Abbildung 1: Grundmaße und Toleranzen der Standard 2. Rohmaterial Polypropylen (PP) und Polystyrol (PS) sind die am häufigsten verwendeten Rohstoffe für Laborartikel aus Kunststoff. Polystyrol ist ein hoch er Kunststoff, der hervorragende optische Eigenschaften besitzt und somit sehr gut für präzise optische Messungen geeignet ist. Weiterhin zeichnet sich Polystyrol durch seine Fähigkeit aus, Biomoleküle, wie zum Beispiel Proteine, zu binden und wird deshalb häufig für die Herstellung immunologischer Produkte verwendet. Ebenso eignet es sich für das Arbeiten mit Zellkulturen. Abbildung 2: von humanem IgG an Polystyrol und Polypropylen Neben aus Polystyrol und Polypropylen fertigt Greiner BioOne mit besonderen Anforderungsprofilen, wie zum Beispiel UVStar, aus verschiedenen Polyolefinen. Polyolefine zeichnen sich im Vergleich zu Polystyrol durch ihre geringe Autofluoreszenz (Abb. 3), außerordentlich hohe Transparenz, insbesondere im UVBereich (Abb. 4), sowie höhere Chemikalienbeständigkeit aus. Eine Beständigkeitsliste der verwendeten Kunststoffe ( Technischer Anhang) befindet sich im Greiner BioOne Forum Nr. 3 oder auf unserer Homepage. 2 2

4 Polystyrol a) b) Polyolefin Abbildung 5: Mit Methylenblau gefüllte Näpfchen nach dreimaligem Einfrieren und Wiederauftauen: a) einzelnes Näpfchen einer Greiner BioOne UVStar Microplatte b) einzelnes Näpfchen einer 96 Well UVen Microplatte eines Mitbewerbers Die Auswahl geeigneter Folien beeinflusst entscheidend die Qualität einer clear bottom Microplatte. Strenge Kontrollen vor und während der Produktion garantieren eine gleichbleibende Qualität. Polarisiertes Licht wird entweder nicht (UVStar ) oder nur in geringem Maße (µclear ) depolarisiert und die Autofluoreszenz der ist minimiert (Abb. 6). 1 Zell und 2 HTS Abbildung 3: Mehr als 100 x geringere Autofluoreszenz des UVStar Polyolefins im Vergleich zu Polystyrol Abbildung 6: Autofluoreszenz verschiedener 384 Well bei einer Anregungswellenlänge von 485 nm Abbildung 4: Lichttransmission im UVBereich. Vergleich Polystyrol / Polyolefine 3. µclear und UVStar Mit der Einführung nicht radioaktiver Assays (Fluoreszenz / Lumineszenz) und neuen Anwendungsfeldern in den Bereichen Genomics und Mikroskopie stieg die Bedeutung von clear bottom plates, mit pigmentierten Wänden und dünnen Folien als. Bisher werden clear bottom meist im ZweiKomponenten Spritzgussverfahren durch Verkleben oder Verschen der Komponenten hergestellt. Die Entwicklung einer vollständig neuen Verfahrenstechnik ermöglicht es uns, mit sehr dünnen Folien ohne die Verwendung störender Klebstoffe oder Lösungsmittel zu produzieren die µclear und UVStar Produkte. Greiner BioOne hat sich dieses Verfahren patentieren lassen. Die Gefahr undichter Wells besteht bei diesem speziellen Verfahren nicht (Abb. 5). Die 96 Well µclear und 384 Well µclear haben eine Folienstärke von 190 µm / 20 µm. Bei den 1536 Well mit em (µclear ) beträgt die Folienstärke 75 µm /10 µm. UVStar haben generell eine Folienstärke von 135 µm / 10 µm. 13 Reaktions/ 2 3

5 4. Schwarz oder Weiß? Üblicherweise werden e für Lumineszenz Messungen (z.b. Luciferase Reporter Assays) und e für FluoreszenzMessungen (z.b. Green Fluorescence Protein) eingesetzt. Die kritischen Eigenschaften bei diesen Techniken, wie Hintergrund, Autofluoreszenz oder Crosstalk, werden durch den Einsatz oder pigmentierter wesentlich verbessert. Die optischen und physikalischen Eigenschaften der Greiner BioOne wurden in unserem Labor untersucht. Höhere Pigmentkonzentrationen ergaben eine deutlich niedrigere Autofluoreszenz der. Bei kürzeren Wellenlängen ist dieser Einfluss stärker ausgeprägt als bei der für das Fluoreszein üblichen Wellenlängenkombination 485 / 520 nm (Abb. 7 und 8). Beim Vergleich von verschiedenen Weißanteilen wurden die gleichen Ergebnisse für die Phosphoreszenz erzielt. 5. MICROLON, FLUOTRAC TM, LUMITRAC TM MICROLON, FLUOTRAC TM und LUMITRAC TM stehen für die Qualität unserer immunologischen Produkte. MICROLON sind e für Transmissionsmessungen, FLUOTRAC TM sind e für Fluoreszenzmessungen und LUMITRAC TM sind e für Lumineszenzmessungen. MICROLON 600, FLUOTRAC TM 600 und LUMITRAC TM 600 sind hoch bindende () PolystyrolOberflächen, die durch ein spezielles physikalisches Behandlungsverfahren eine erhöhte Proteinbindungskapazität besitzen. MICROLON 200, FLUOTRAC TM 200 und LUMITRAC TM 200 steht für mittel bindende (medium binding) Polystyrol Oberflächen. Die PolystyrolOberfläche einer medium binding Microplatte ist hydrophober als die Oberfläche einer Microplatte und daher eher für unpolare Proteine geeignet. Die Fähigkeit unserer immunologischen Produkte, Proteine gleich bleibend und reproduzierbar zu binden, wird ständig in unserem Qualitätssicherungslabor mit einem ELISA überprüft (Abb. 9). Abbildung 7: Einfluss des Anteils an Schwarzpigmenten und der verwendeten Wellenlänge auf die Autofluoreszenz von 96 Well Abbildung 9: Fluoreszenz ELISA Abbildung 8: Einfluss verschiedener Schwarzpigmente auf die Autofluoreszenz von 96 Well Im Allgemeinen werden hoch bindende für ELISAs empfohlen. Die Proteinbindung an die Polystyrol Oberfläche kann sehr verschieden sein und hängt unter anderem von Eigenschaften wie Ladung oder Größe ab. Deshalb ist es sinnvoll, bei der Entwicklung eines neuen ELISAs hoch bindende und mittel bindende im Vorfeld zu vergleichen ( siehe auch Kapitel 3). Muster für Ihre Tests stellen wir Ihnen gerne zur Verfügung. 13 Reaktions/ 2 HTS 1 Zell und 2 4

6 6. Nichtbindende Oberflächen Die nonbinding Oberfläche von Greiner BioOne zeichnet sich durch eine besonders geringe von Biomolekülen, wie zum Beispiel DNA, RNA, Peptide oder Proteine, aus. Die Molekül abweisenden Eigenschaften der nonbinding Oberfläche können bei empfindlichen biochemischen Tests durch erhöhte Sensitivität, reduzierten Hintergrund und verbessertes SignalRauschVerhältnis von Vorteil sein. Diese nonbinding Oberfläche wird nicht durch die Zumischung einer weiteren Komponente, sondern durch eine chemische Modifikation des Basismaterials Polystyrol erreicht. Dadurch ist die Oberfläche sehr stabil und die funktionellen Gruppen waschen nicht aus. Alle nonbinding finden Sie auf S. 2 l 31 f. 7. Zellkultur Produkte / CELLSTAR / TC Die PolystyrolOberfläche einer unbehandelten Microplatte ist hydrophob und bietet adhärenten Zelllinien keine Wachstumsfläche. Zellkultur aus der CELLSTAR Produktfamilie sind mit einem speziellen physikalischen Verfahren behandelt. Durch dieses werden polare Gruppen, wie Carboxy und Hydroxygruppen, in die Kunststoffoberfläche eingefügt. Diese ermöglichen das Wachstum adhärenter Zelllinien. Die Qualität der CELLSTAR Produkte wird ständig in unserem Qualitätssicherungslabor mit verschiedenen Zelllinien überprüft. Alle zellkulturbehandelten finden Sie in Kapitel n für ( Kapitel 12) Vier verschiedene n aus Polystyrol sind für Greiner BioOne erhältlich: n mit hohem Profil n mit hohem Profil und Kondensationsringen n mit flachem Profil n mit ultraflachem Profil Alle n sind auch steril erhältlich. Werden mit n angeboten, z.b. bei CELLSTAR, so beinhalten 96 Well immer n mit hohem Profil ( lid, high profile ). Höherformatige, wie die 384 Well, beinhalten immer n mit niedrigem Profil ( lid, low profile ). Generell sind alle Produkte auch ohne n erhältlich, so dass die frei gewählt werden kann. Greiner BioOne : werden unter DIN ISO 9001 Bedingungen hergestellt können durch ein definiertes LotNummern System lückenlos rückverfolgt werden sind für automatisierte Systeme geeignet werden regelmäßig in einem durch die FDA zugelassenen kinetischturbidimetrischen LALTest (Limulus Amoebocyte Assay) überprüft und sind Endotoxinfrei (< 0,06 EU/ml) werden nach nachweisbaren Spuren von DNasen, RNasen humaner DNA überprüft ( Qualität S. V) sind auf Anfrage Barcodeetikettiert erhältlich ( S. 14 I 4)! Eine Übersicht aller im Katalog aufgeführten 96 Well, 384 Well und 1536 Well finden Sie im Technischen Anhang S. A I 3 ff. Für mehr Informationen zu unseren (z.b. Qualitätsaspekte, Abmessungen, Anwendungsberichte) besuchen Sie bitte die HTS KnowHowPlattform auf unserer Website /de/hts. 2 HTS 13 Reaktions/ 1 Zell und 2 5

7 1 Zell und 2 HTS 96 Well 96 Well Die 96 Well Microplatte hat seit ihrer Einführung in den 60er Jahren einen weltweiten Siegeszug angetreten und ist heute aus Forschung und Industrie nicht mehr wegzudenken. Greiner BioOne fertigt seit über 30 Jahren und Streifen für die Diagnostik und die immunologische Forschung. Eine Vielzahl verschiedenster 96 Well mit unterschiedlichen Oberflächenbehandlungen ist erhältlich. Von clear bottom über komplett e oder e bis hin zu UVStar Produkten reicht das Spektrum. 96 Well Polystyrol Transparent 96 Well Polystyrol Weiß Schwarz UBottom U V F Half Area F µclear Half Area F µclear Half Area 13 Reaktions/ 96 Well Polystyrol sind in folgenden Versionen erhältlich: Nicht steril Zellkulturbehandelt ( S. 1 I 11 ff.) In medium binding und Qualität ( S. 3 I 5) In nonbinding Qualität ( S. 2 l 32) Mit oder ohne Die ist bei einer 96 Well Microplatte ein entscheidendes Kriterium. Für jede Anwendung stehen verschiedene n zur Auswahl (Abb. 1 Abb. 4): U Das U beschreibt die runde form (Abb. 1). U sind besonders gut für Agglutinationstests geeignet. Keine Kanten, daher einfach und sauber zu pipettieren Für / Auswertungen geeignet Abbildung 1: : 96 Well U, Polystyrol Mathematisches Volumen: 323 µl Arbeitsvolumen: µl V Das V steht für den konisch zulaufenden Näpfchenboden (Abb. 2). Diese sind besonders gut für Anwendungen geeignet, bei denen das komplette Probenvolumen abpipettiert werden muss. Präzise zu pipettieren Sehr gut geeignet zur Lagerung von Proben Für / Auswertungen geeignet Abbildung 2: : 96 Well V, Polystyrol Mathematisches Volumen: 234 µl Arbeitsvolumen: µl F / Standard (ST) Das F steht für den flachen Näpfchenboden (Abb. 3). Dieser Näpfchentyp ist ideal für genaueste optische Messungen. Der MessLichtstrahl wird durch die nicht abgelenkt. Hervorragende optische Eigenschaften Für präzise optische Messungen Für mikroskopische Anwendungen (Bottom Reading) 2 6

8 96 Well 1 Zell und Abbildung 3: : 96 Well F / ST, Polystyrol Mathematisches Volumen: 382 µl Arbeitsvolumen: µl Wachstumsfläche: 32 mm 2 F / Die Microplatte (Abb. 4) besitzt, wie die Standard F Microplatte, Näpfchen mit flachem (Abb. 3). Der Unterschied zur Standard Microplatte besteht in der kamingleichen Anordnung der Näpfchen. Jedes Näpfchen steht für sich (Abb. 5). Das Kontaminationsrisiko durch Verschleppung von Probenmaterial wird minimiert. a) b) Abbildung 5: a) : 96 Well F / ST, Polystyrol Mathematisches Volumen: 382 µl Arbeitsvolumen: µl Wachstumsfläche: 32 mm 2 b) : 96 Well F /, Polystyrol Mathematisches Volumen: 392 µl Arbeitsvolumen: µl Wachstumsfläche: 34 mm 2 2 HTS Abbildung 4: : 96 Well F /, Polystyrol Mathematisches Volumen: 392 µl Arbeitsvolumen: µl Wachstumsfläche: 34 mm XX nonpyrogenic 655 1XX 650 1XX 96 Well Polystyrol er, Immunologische, S. 3 I 5 Zellkulturbehandelte S. 1 I 12 Kat.Nr U U V V F/ST F/ST 5/100 2/100 5/100 2/100 5/100 2/ Reaktions/ 2 7

9 1 Zell und 96 Well 2 HTS nonpyrogenic Well Polystyrol er, / Zellkulturbehandelte S. 1 I 13 Kat.Nr F/ F/ F/ F/ LUMITRAC TM 200 LUMITRAC TM 600 FLUOTRAC TM 600 FLUOTRAC TM 200 5/40 5/40 5/40 5/ Well Polystyrol µclear, / Zellkulturbehandelte S. 1 I 14 UVStar S. 2 I 37 nonpyrogenic Kat.Nr F/ F/ F/ F/ µclear µclear µclear µclear 13 Reaktions/ 2 8

10 (Abb. 6) Abbildung 6: : 96 Well Half Area Mathematisches Volumen: 199 µl Arbeitsvolumen: µl Wachstumsfläche: 15,0 mm2 Für viele Anwendungen im Labor ist die Reduktion des Probenvolumens ein wichtiges Kriterium. Für das pharmazeutische WirkstoffScreening besteht die einfachste Möglichkeit hierzu in der Verwendung von hochformatigen, wie 384 oder 1536 Well. Viele Arbeitsgruppen im Entwicklungsbereich oder Unternehmen im Bereich der ELISADiagnostik scheuen jedoch den Wechsel zu hochformatigen Platten aufgrund der damit verbundenen notwendigen Automatisierung. Die 96 Well Half Area bieten hier eine interessante Alternative. Sie können problemlos von Hand pipettiert werden, ermöglichen aber gleichzeitig eine Reduktion des Probenvolumens um 50%. Die 96 Well Half Area sind als e, e, e und als µclear in ELISA, HTS und ZellkulturQualität erhältlich. 2 HTS 96 Well Half Area Polystyrol 96 Well Half Area Zell und 96 Well Zellkulturbehandelte S. 1 I 14 Immunologische S. 3 I 5 UVStar S. 2 I 37 Standardisierte Schichtdicke (1 cm=170 µl, 0,5 cm=80 µl) Reduktion des Probenvolumens um 50% Half Area Half Area Half Area Half Area Half Area Half Area Half Area Half Area Half Area Half Area µclear µclear µclear µclear 13 Reaktions/ Kat.Nr. 2 9 Kat.Nr. nonpyrogenic

11 96 Well 96 Well Polypropylen 1 Zell und 2 HTS 96 Well Polypropylen U V F 96 Well Polypropylen sind in folgenden Versionen erhältlich: Nicht steril In verschiedenfarbigen Ausführungen (natur,,, rot, grün, gelb, blau) Barcodeetikettiert auf Anfrage ( S. 14 I 4) Polypropylen eignen sich hervorragend für folgende Anwendungen: Langzeitlagerung von Wirkstoffen Lagerung von Patientenproben im diagnostischen Bereich Lagerung von DNA, RNA oder Stammkulturen Polypropylen (PP) bindet kaum Biomoleküle, hat eine hohe Temperaturtoleranz und ist gegen viele gebräuchliche Laborchemikalien, wie z.b. DMSO, beständig. Von en Polypropylen für die Fluoreszenzpolarisation, über e für Scintillation Proximity Assays (SPA) bis hin zu farbigen für eine übersichtliche Lagerung ist alles im 96 Well Polypropylen Programm erhältlich. Abbildung 2: : 96 Well V, Polypropylen Mathematisches Volumen: 340 µl Arbeitsvolumen: µl Abbildung 3: : 96 Well F, Polypropylen Mathematisches Volumen: 392 µl Arbeitsvolumen: µl Abbildung 1: : 96 Well U, Polypropylen Mathematisches Volumen: 355 µl Arbeitsvolumen: µl 13 Reaktions/ 2 10

12 96 Well 1 Zell und nonpyrogenic Well Polypropylen Einheitliche Außenmaße Näpfchenabstand 9 mm Alphanumerische Codierung der Näpfchen Hohe Chemikalienbeständigkeit Hohe Temperaturbeständigkeit (196 C bis 121 C) Verschbar und verklebbar Verschließbar mit CapMats ( S. 12 I 7) 2 HTS Kat.Nr U/ U/ U/ U/ natur natur Well Polypropylen Einheitliche Außenmaße Näpfchenabstand 9 mm Alphanumerische Codierung der Näpfchen Hohe Chemikalienbeständigkeit Hohe Temperaturbeständigkeit (196 C bis 121 C) Verschbar und verklebbar Verschließbar mit CapMats ( S. 12 I 7) nonpyrogenic Kat.Nr F/ F/ F/ V/ V/ V/ natur natur 13 Reaktions/ 2 11

13 384 Well 384 Well 1 Zell und 2 HTS Eine rasante Entwicklung kennzeichnet das WirkstoffScreening in den letzten Jahren. Die Zahl der Tests mit neuen Zielorten und die Zahl der zu testenden Wirkstoffe steigt ständig an. Volumenreduktion, einfache Testdurchführung und Kostenersparnis sind die entscheidenden Kriterien. Hochformatige mit geringem Näpfchenvolumen sind hierfür eines der wichtigsten Werkzeuge. Eine der ersten höherformatigen war die 384 Well Microplatte, die Greiner BioOne 1994/1995 eingeführt hat. Im Vergleich zur 96 Well Standard Microplatte ist bei dieser Microplatte die Zahl der Näpfchen vervierfacht, verbunden mit einer Volumenreduktion von 382 µl auf 131 µl. Der Abstand zwischen den Näpfchen beträgt 4,5 mm (96 Well Microplatte: 9 mm). Die Grundmaße der 384 Well sind kompatibel mit bereits vorhandenen Pipettierund Messgeräten. Die 384 Well sind als e und e clear bottom (µclear ) in FLUOTRAC TM, LUMITRAC TM, MICROLON oder CELLSTAR Qualität erhältlich. 384 Well Polystyrol 384 Well Polystyrol F Transparent Weiß Schwarz F µclear F µclear 384 Well sind in folgenden Versionen erhältlich: Nicht steril Zellkulturbehandelt ( S. 1 I 15 ff.) In medium binding und Qualität In nonbinding Qualität ( S. 2 l 32) Mit und ohne Barcodeetikettiert auf Anfrage ( S. 14 l 4) Verbesserte Rounded Square Well Alle Näpfchen der 384 Well, mit Ausnahme der Näpfchen der 384 Well Microplatte, sind Rounded Square Wells, das heißt quadratisch mit abgerundeten Ecken (Abb. 2). Dieses Design kombiniert die Vorteile eines quadratischen Näpfchens, d. h. flexibles Arbeitsvolumen von 15 bis 110 µl, mit den Vorteilen eines runden Näpfchens, wie vermindertes Kriechen und verminderte Meniskusbildung. Abbildung 1: : 384 Well, Polystyrol Mathematisches Volumen: 131 µl Arbeitsvolumen: µl Wachstumsfläche: 10 mm 2 Abbildung 2: Das Rounded Square Well Design mit verbessertem Eckradius von 1 mm 13 Reaktions/ 2 12

14 , 781 1XX 384 Well 384 Well Polystyrol er, 1 Zell und 2 HTS nonpyrogenic Zellkulturbehandelte S. 1 I 15 Kat.Nr F F F F F /32 8/ Well Polystyrol er, / Zellkulturbehandelte S. 1 I 15 nonpyrogenic Kat.Nr F F F F LUMITRAC TM 600 LUMITRAC TM 200 FLUOTRAC TM 600 FLUOTRAC TM Reaktions/ 2 13

15 1 Zell und 384 Well 2 HTS Well Polystyrol µclear, / nonpyrogenic Zellkulturbehandelte S. 1 I 16 UVStar S. 2 I 37 Kat.Nr F µclear F µclear F µclear F µclear 13 Reaktions/ 2 14

16 384 Well Polypropylen Neben dem 384 Deep Well MASTERBLOCK ( S. 2 I 27) erweitern 384 Well F (Abb. 1) und V (Abb. 2) das Angebot an Polypropylen. Abbildung 1: : 384 Well F, Polypropylen Mathematisches Volumen: 152 µl Arbeitsvolumen: µl 384 Well Polypropylen (PP) bindet kaum Biomoleküle, hat eine hohe Temperaturtoleranz und ist gegen viele gebräuchliche Laborchemikalien, wie z.b. DMSO, beständig. Von en Polypropylen für die Fluoreszenzpolarisation, über e für Scintillation Proximity Assays (SPA) bis hin zu farbigen für die Lagerung ist alles im 384 Well Polypropylen Programm erhältlich. 384 Well Polypropylen sind in folgenden Versionen erhältlich: Nicht steril Natur, und Barcodeetikettiert auf Anfrage ( S. 14 I 4) 1 Zell und 2 HTS Abbildung 2: : 384 Well V, Polypropylen Mathematisches Volumen: 130 µl Arbeitsvolumen: µl Well Polypropylen er, natur / / nonpyrogenic Kat.Nr F F F V V V natur natur 13 Reaktions/ 2 15

17 1 Zell und 2 HTS 384 Well 384 Well Small Volume LoBase und HiBase Polystyrol 384 Well (Polystyrol) 384 Well HiBase Transparent Schwarz Weiß Transparent 384 Well LoBase Schwarz Weiß Fester Fester Fester Fester Fester µclear Fester µclear Ein geringes Probenvolumen ist ein wichtiges Ziel im HochdurchsatzScreening. Die zu testenden Substanzen und verwendeten Reagenzien sind meist knapp, teuer und aufwändig in ihrer Herstellung. Neben einem hohen Automationsgrad und dem Einsatz empfindlicher Reader Systeme hat die Einführung höherformatiger, wie der 384 Well oder der 1536 Well Microplatte, entscheidend zur Reduktion des Probenvolumens beigetragen. Das Einsparungspotenzial bei der 384 Well Microplatte mit einem durchschnittlichen Arbeitsvolumen von µl ist relativ beschränkt und ein erfolgreicher Einsatz von 1536 Well setzt erhebliche Optimierungsarbeiten bei den zu verwendenden Gerätesystemen voraus. Um ein zur 1536 Well Microplatte vergleichbares Einsparungspotenzial im 384 Well Format zu ermöglichen, entwickelte Greiner BioOne mit den 384 Well eine neue Plattform. Zwei verschiedene 384 Well Versionen sind erhältlich. Beide Versionen haben runde Näpfchen mit einer konischen Geometrie (Abb. 1 und 2). 384 Well HiBase Polystyrol sind in folgenden Versionen erhältlich: Medium binding und (MICROLON, FLUOTRAC TM, LUMITRAC TM ) Nonbinding ( S. 2 l 32) 384 Well LoBase Polystyrol sind in folgenden Versionen erhältlich: Zellkulturbehandelt ( S. 1 I 16) Medium binding und Abbildung 2: : 384 Well Small Volume, LoBase Mathematisches Volumen: 28 µl Arbeitsvolumen: 4 25 µl Wachstumsfläche: 2,7 mm 2 Abbildung 3: Einfluss des Probenvolumens auf die Füllstandshöhe 13 Reaktions/ Abbildung 1: : 384 Well Small Volume, HiBase Mathematisches Volumen: 28 µl Arbeitsvolumen: 4 25 µl Wachstumsfläche: 2,7 mm 2 Die Näpfchen weisen ein mathematisches Volumen von 28 µl und ein Arbeitsvolumen zwischen 4 µl und 25 µl auf (Abb. 3). Abbildung 4: Fokussierter Lichtstrahl in einem 384 Well Small Volume Näpfchen Durch Optimierung der ZAchse an dem zu messenden Flüssigkeitsstand in den Näpfchen (Abb. 4) kann mit klassischen Readern die Nachweisgrenze in Small Volume TM erheblich verbessert und ein mit der 1536 Well Microplatte vergleichbares DetektionsLimit erreicht werden (Abb. 5). 2 16

18 384 Well Der dünne PolystyrolFolienboden mit einer Dicke von 75 µm / 10 µm zeichnet sich durch eine geringe Autofluoreszenz aus und ist besonders gut für zellbasierte Testsysteme geeignet (Abb. 6). Abbildung 5: Signalstärke in einer 384 Well Small Volume Microplatte im Vergleich zu einer 1536 Well Microplatte Neben den klassischen ReaderTechnologien werden im HochdurchsatzScreening immer häufiger Messsysteme mit empfindlichen ChargedCoupled Device (CCD) Kameras verwendet. Aufgrund der Standardhöhe der HiBase Microplatte können diese Systeme ohne langwierige Anpassungsarbeiten eingesetzt werden. Messungen, bei denen die Anregung oder Lichtemission von der Plattenunterseite erfolgt, lassen sich am besten in den µclear LoBase durchführen. Abbildung 6: Fluoreszenzsignal eines zellbasierten Tests in einer 384 Well µclear Small Volume LoBase Microplatte Hinsichtlich der Verdunstungsrate sind 384 Well Small Volume TM mit 1536 Well vergleichbar. 13 Reaktions/ 1 Zell und 2 HTS 2 17

19 1 Zell und 2 HTS 384 Well Well HiBase Polystyrol nonpyrogenic Kat.Nr Plattengeometrie HiBase HiBase 25/150 HiBase Neu HiBase 25/150 HiBase Neu Well LoBase Polystyrol Zellkulturbehandelte S. 1 I 16 nonpyrogenic Kat.Nr µclear µclear 13 Reaktions/ Plattengeometrie 10/80 LoBase 10/80 LoBase 10/80 LoBase 10/80 LoBase 10/80 LoBase 10/80 LoBase 2 18

20 384 Deep Well Small Volume Polypropylen Die 384 Deep Well Small Volume Polypropylen Microplatte eröffnet neue Möglichkeiten für die Wirkstoffforschung: Normierte Grundmaße (ANSI/SBS konform) Großes Arbeitsvolumen von 1 µl bis 90 µl (Abb. 1) Totvolumen < 1 µl Fokussierte Probenmengen (Abb. 2) Kein Verlust wertvoller Wirkstoffe Abbildung 1: : 384 Deep Well Small Volume Mathematisches Volumen: 107 µl (21 µl im Kegelstumpf) Arbeitsvolumen: µl 384 Well Standard V Design 1 µl 5 µl 384 Well Die 384 Deep Well Small Volume Polypropylen Microplatte ist besonders geeignet Für den direkten WirkstoffTransfer und die Vorbereitung von AssayReadyPlates: Durch die Fokussierung der Proben in der Näpfchenmitte (Abb. 2) können mit PinTools oder Kapillarbasierten LiquidGeräten geringe Mengen hoch konzentrierter Wirkstoffe direkt von der Lagerplatte in die Assayplatte transferiert werden. Zwischenverdünnungsschritte sind überflüssig. Ein direkter WirkstoffTransfer von 50 nl ist möglich. Für Vorverdünnungen: Das hohe Arbeitsvolumen von bis zu 90 µl ermöglicht die Verdünnung von hoch konzentrierten Wirkstoffen. DMSO kann ausreichend verdünnt werden, so dass es zu keinerlei zelltoxischen Auswirkungen kommt. Als Lagerplatte: Polypropylen, das Grundmaterial der 384 Deep Well Microplatte hat eine hohe Temperaturtoleranz, bindet kaum Biomoleküle und ist gegen viele gebräuchliche Laborchemikalien, wie zum Beispiel DMSO, beständig. 1 Zell und 2 HTS 384 Deep Well Small Volume Design 1 µl 5 µl Abbildung 2: Position von Flüssigkeiten am unterschiedlicher Näpfchen Zum Versiegeln: Die quadratische Oberseite der Näpfchen mit Siegelrand erleichtert das HeatSealing und ermöglicht das Verschließen mit CapMats ( S. 12 l 7). Für die Automation: Die standardisierte und reduziert den Arbeitsaufwand bei der Integration in automatisierte Systeme. 384 Deep Well Small Volume Polypropylen Microplatte nonpyrogenic Kat.Nr. Weiße und e sind auf Anfrage erhältlich natur Plattengeometrie Deep Well 13 Reaktions/ 2 19