Tipps und Tricks für schnelle LC
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- Jan Kramer
- vor 7 Jahren
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1 Tipps und Tricks für schnelle LC Sebastian Krahe Produktspezialist LC Agilent Technologies Deutschland & Österreich Agilent Forum 2011 im Bayer Forschungszentrum Aprath
2 Agilent 1290 Infinity
3 1290 Pumpe Binäre Pumpe mit zwei Pumpenköpfen pro Eluent Eluentschaltventil für 4 Eluenten Eingebauter Degasser
4 1290 Pumpe - Pflege Pause am Wochenende schwierig für jede Pumpe Vorsicht bei Puffern
5 1290 Pumpe - Was ist Prime und Purge?? Volumen des Degasers: => 1,5 ml Volumen des Leitungen: => 10 ml Nach dem Wochenende PURGE: => Spülen der Pumpe unter definierten Fluss, Komposition und Zeitfenster PRIME: für schnellen und rapiden Fluss zum Spülen der Pumpe Gut gegen Luftblasen in den Leitungen, da maximaler Fluss aller Motoren der Pumpe eingestellt wird
6 1290 Pumpe noch besser als Purge und Prime Geringer Fluss für Nacht und Wochenende einstellen, z.b. 10 µl/min Eventuelle Schwebeteilchen setzen sich nicht ab Pumpenventile bleiben in Bewegung Eluent Recykler einsetzen Isokratischer Fluss im Kreislauf
7 1290 Pumpe Eluenten und Puffer Partikel und Bakterien stören das System, daher => Wasser filtrieren. Puffer mit filtrierten Wasser ansetzen und => nochmal filtrieren. Organische Lösemittel benötigen i.d.r. keine Filtration Aktive Hinterkolbenspülung verhindert, dass Salzkristalle beim Pumpenstillstand sich auf die Kolbenoberflächen legen. Was passiert mit Kapillaren, der Detektorzelle, den Säulen? Besser: Puffer bei kurzer Systemstilllegung entfernen! => Bei TCC mit Ventil: Säule auskoppeln und System über Restriktorkapillare spülen
8 Anschlüsse Ventile und Degasser Drehmomentschlüssel verwenden
9 Ripple Maß für die Gleichgewichtseinstellung im System Bei Systemstart, neuer Säule, neue Eluenten und Temperatureinstellung kann Ripple schwanken und hoch sein. Erst anfangen, wenn Ripple unter 1%.
10 1290 Infinity Autosampler Spülvials Regelmässig Spülmittel tauschen Vial ohne Septum einstellen Bei viskosen Probe Draw Speed und Equilibration Time anpassen langsamer aufziehen und länger equilibrieren Flush Port Nadelaussenseite wird nach Aufziehen der Probe gespült in a) Spülvial b) Flush port
11 Injektionsprinzip: 1) vor Injektion
12 2) Probe aufziehen Ventil auf Bypass geschaltet 12 Agilent Confidential
13 3) Nadelaussenseite spülen 13 Agilent Confidential
14 4) Nadel in Flussweg 14 Agilent Confidential
15 5) Probe injiziert Fluss auf Mainpass 15 Agilent Confidential
16 Beschleunigung durch Überbrückung Nach der Injektion schaltet nach der Injektion auf Bypass Gradient umgeht den Autosampler Einstellung über Aktivierung der Automatic Delay Volume Reduction und Sample Flush out Factor
17 Overlapped Injection Vor Start des neuen Laufes wird die Probe aufgezogen Injektion startet durch Umlegen des Ventils sofort Zeitgewinn
18 Sandwish Injektion Problem: schlechte Injektionspräzision Eluent wässrig Probe in Aceton => Probe hängt an Nadelspitze und verdampft Reihenfolge beachten: Erst Probe, dann Eluent (dann Luftblase)
19 1290 Infinity Inline Filter Designed for low carryover Direct connection to the injection valve or the column 1200-bar compatibility Dead volume 1.3ul Filter 0.3um Rigid or flexible capillaries 1290 Infinity Inline Filter (0.3um) Filter cap Non orderable 2 Filter housing Non orderable 3 Fitting insert Non orderable 4 SST capillary rigid SST capillary flexible Filter frits (0.3um) (5/pk) Page 19 Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X
20 TCC - Säulenofen Säulenofen mit zwei Heizzonen und mehreren Heatexchanger (6 µl, 3 µl, 1.6 µl) Temperiert bis zu 100 C Herausforderung: Temperaturgradient zwischen TCC und Detektor sorgt für unruhige Basislinie
21 Lösung Verwendung der zweiten Heizzone zum Kühlen!
22 Edelstahl oder Polymer-Fittings für Agilent Säulen Edelstahl ist die beste Wahl(SS) für eine zuverlässige Hochdruckdichtung > Agilent benutzt Swagelok Typ Fittings 1/16 mit front and back ferrules in Edelstahl erzielt beste Verbindungsergebinsse für verschiedene LC-Systeme PEEK (< 400 bar Systemdruck) ist ideal wenn > Wenn häufig Verbindungen geändert werden > Fingerfest, kein Werkzeug notwendig Edelstahl Fitting mit Back Ferrule Edelstahl und Front Ferule PEEK > wiederverwendbar > Verwendbar bis 1380 bar p/n > Für Standard 1.6 mm (1/16 ) Edelstahlrohr 22 Confidentiality Label July 12, 2011
23 This information is subject to change without notice Agilent Technologies, Inc Published in Germany, July 2011
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