ONR CEN/TS ENTWURF ICS ;

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1 ICS ; ENTWURF ONR CEN/TS Lebensmittel Nachweis von Lebensmittelallergenen mit molekularbiologischen Verfahren Teil 3: Haselnuss (Corylus avellana) Qualitativer Nachweis einer spezifischen DNA-Sequenz in Schokolade mittels Real-time PCR (FprCEN/TS :2015) Hinweis: Aufgrund von Stellungnahmen kann die endgültige Fassung dieser ONR vom vorliegenden Entwurf abweichen. Stellungnahmen (schriftlich) bis an Austrian Standards Institute. Foodstuffs Detection of food allergens by molecular biological methods Part 3: Hazelnut (Corylus avellana) Qualitative detection of a specific DNA sequence in chocolate by real-time PCR (FprCEN/TS :2015) Produits alimentaires Détection d'allergènes alimentaires par des méthodes de biologie moléculaire Partie 3: Noisette (Corylus avellana) Détection qualitative d'une séquence d'adn spécifique dans du chocolat, par PCR en temps réel (FprCEN/TS :2015) Ausgabedatum:

2 ENTWURF ONR CEN/TS : Erläuterungen zum Entwurf Der in den Aufgabenbereich des Komitee 205 Lebens- und Futtermitteluntersuchungsverfahren fallende Entwurf einer Europäischen Technischen Spezifikation CEN/TS wurde den CEN-Mitgliedern zur Abstimmung vorgelegt. Im Falle eines positiven Abstimmungsergebnisses im Sinne der CEN/CENELEC-Regeln wird dieser Entwurf zu einer CEN/TS führen. Wie alle Mitgliedsorganisationen des CEN ist Austrian Standards Institute grundsätzlich verpflichtet, Europäische Technische Spezifikationen in geeigneter Weise verfügbar zu machen. Bis zu einer möglichen späteren Umwandlung einer CEN (ISO)/TS in eine EN dürfen entgegenstehende nationale Normen in Gültigkeit bleiben. Austrian Standards Institute legt hiermit diesen Entwurf eines europäischen Normungsdokumentes der Öffentlichkeit zur Information und Stellungnahme als ONR-Entwurf vor. Stellungnahmen zu diesem Entwurf Hier einige praktische Hinweise, die Ihnen und dem zuständigen Komitee die Behandlung von Stellungnahmen und Änderungsvorschlägen erleichtern: Vorlage Gliederung Sprache Schrift/Formatierung Zusendung Patentrechtliche Aspekte Verwenden Sie für Ihre Stellungnahmen/Änderungsvorschläge bitte das entsprechende Formular im Internet. Download unter oder verwenden Sie das Normen-Entwurf-Portal unter Kommentare zu einzelnen Abschnitten oder Punkten des Entwurfs bitte in getrennten Zeilen anführen. Dies erleichtert die Zuordnung der eingelangten Stellungnahmen zu den einzelnen Abschnitten. Fachliche Stellungnahmen zu Europäischen Normen fassen Sie bitte möglichst in englischer Sprache ab. Englisch ist in den meisten europäischen Normungsgremien die gemeinsame Arbeitssprache. Redaktionelle bzw. sprachliche Änderungs-/Verbesserungsvorschläge zu deutschsprachigen Fassungen Europäischer Normen bitte (selbstverständlich) in deutscher Sprache. Verwenden Sie bitte die Schriftart Arial mit 9 pt Schriftgrad. Formate bitte nicht ändern. Die Stellungnahme senden Sie bitte per an den zuständigen Komitee- Manager (a.redelsteiner@austrian-standards.at) Empfänger dieses ÖNORM-Entwurfes werden gebeten, mit ihren Kommentaren jegliche relevante Patentrechte, die Sie kennen, mitzuteilen und unterstützende Dokumentationen zur Verfügung zu stellen. 2

3 TECHNISCHE SPEZIFIKATION TECHNICAL SPECIFICATION SPÉCIFICATION TECHNIQUE SCHLUSS-ENTWURF FprCEN/TS September 2015 ICS ; Deutsche Fassung Lebensmittel - Nachweis von Lebensmittelallergenen mit molekularbiologischen Verfahren - Teil 3: Haselnuss (Corylus avellana) - Qualitativer Nachweis einer spezifischen DNA- Sequenz in Schokolade mittels Real-time PCR Foodstuffs - Detection of food allergens by molecular biological methods - Part 3: Hazelnut (Corylus avellana) - Qualitative detection of a specific DNA sequence in chocolate by real-time PCR Produits alimentaires - Détection d'allergènes alimentaires par des méthodes de biologie moléculaire - Partie 3 : Noisette (Corylus avellana) - Détection qualitative d'une séquence d'adn spécifique dans du chocolat, par PCR en temps réel Dieser Technische Spezifikation-Entwurf wird den CEN-Mitgliedern zur formellen Abstimmung vorgelegt. Er wurde vom Technischen Komitee CEN/TC 275 erstellt. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Bulgarien, Dänemark, Deutschland, der ehemaligen jugoslawischen Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, Österreich, Polen, Portugal, Rumänien, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, der Türkei, Ungarn, dem Vereinigten Königreich und Zypern. Die Empfänger dieses Norm-Entwurfs werden gebeten, mit ihren Kommentaren jegliche relevante Patentrechte, die sie kennen, mitzuteilen und unterstützende Dokumentationen zur Verfügung zu stellen. Warnvermerk : Dieses Schriftstück hat noch nicht den Status einer Technischen Spezifikation. Es wird zur Prüfung und Stellungnahme vorgelegt. Es kann sich noch ohne Ankündigung ändern und darf nicht als Technischen Spezifikation in Bezug genommen werden. EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION CEN-CENELEC Management-Zentrum: Avenue Marnix 17, B-1000 Brüssel 2015 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten. Ref. Nr. FprCEN/TS :2015 D

4 ÖNORM ENTWURF FprCEN/TS :2015 (D) Inhalt Seite Vorwort Anwendungsbereich Kurzbeschreibung Reagenzien DNA-Extraktion mit CTAB DNA-Aufreinigung mittels Festphasenextraktion Real-time PCR Geräte und Hilfsmittel DNA-Extraktion PCR Durchführung Allgemeines Probenvorbereitung DNA-Extraktion mit CTAB DNA-Aufreinigung mittels Festphasenextraktion Messung der Massenkonzentration der extrahierten DNA und Einstellen auf Sollkonzentration Real-time PCR Auswertung Allgemeines Nachweis Zuverlässigkeit der Methode Aufbau des Ringversuchs Ergebnisse Spezifität Untersuchungsbericht Literaturhinweise

5 ÖNORM ENTWURF FprCEN/TS :2015 (D) Vorwort Dieses Dokument (FprCEN/TS :2015) wurde vom Technischen Komitee CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik - Horizontale Verfahren erarbeitet, dessen Sekretariat vom DIN gehalten wird. Dieses Dokument ist derzeit zur formellen Abstimmung vorgelegt. 3

6 ÖNORM ENTWURF FprCEN/TS :2015 (D) 1 Anwendungsbereich Diese Technische Spezifikation beschreibt ein Verfahren zum qualitativen Nachweis von Haselnuss (Corylus avellana) in Schokolade. Aus der Schokolade wird DNA extrahiert und eine für Haselnuss spezifische DNA- Sequenz aus dem Gen für cora 1 nachgewiesen [4], [5]. 2 Kurzbeschreibung Aus der Probe wird die Gesamt-DNA extrahiert und der DNA-Gehalt abgeschätzt. Eine 152 bp lange Sequenz aus dem Gen für cora 1 wird mittels Real-time PCR vervielfältigt. Das dabei gebildete Amplikon wird durch Anlagerung einer sequenzspezifischen Sonde und Erzeugung eines Fluoreszenzsignals detektiert [4], [5]. 3 Reagenzien Es sind grundsätzlich analysenreine, für die Molekularbiologie geeignete Reagenzien zu verwenden. Das verwendete Wasser muss bidestilliert oder von vergleichbarer Qualität sein. Soweit nicht anders angegeben, sollten Lösungen durch Lösen der entsprechenden Reagenzien in Wasser hergestellt und autoklaviert werden. 3.1 DNA-Extraktion mit CTAB Chloroform Ethanol, Volumenanteil φ = 96 % Ethylendiamintetraessigsäure Dinatriumsalz (Na 2 EDTA) Cetyltrimethylammoniumbromid (CTAB) Salzsäure, Massenanteil w = 37 % Isoamylalkohol Isopropanol Proteinase K Natriumchlorid Natriumhydroxid Tris(hydroxymethyl)-aminomethan (TRIS) Chloroform-Isoamylalkohol-Gemisch. 24 Volumenteile Chloroform (3.1.1) werden mit einem Volumenteil Isoamylalkohol (3.1.6) gemischt. ANMERKUNG Kommerziell erhältliche und vergleichbare Mischungen können eingesetzt werden CTAB-Extraktionspufferlösung, enthält CTAB (Massenkonzentration ρ = 20 g/l), Natriumchlorid (Stoffmengenkonzentration c = 1,4 mol/l), TRIS (c = 0,1 mol/l), Na 2 EDTA (c = 0,02 mol/l). Der ph-wert wird mit Salzsäure auf ph = 8,0 eingestellt Ethanol-Lösung, φ = 70 %. 4