Bovine Virus Diarrhoe Schweiz

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1 Nachweis von BVDV (Bovines Virusdiarrhoe Virus) bei jungen Kälbern mittels verschiedener Testmethoden Dr. Monika Hilbe, Institut für Veterinärpathologie, Vetsuisse Fakultät, Zürich Riemser Diagnostiktage 2005 Schweiz Seroprävalenz beträgt je nach Untersuchung: 69-84% Prozentsatz persistent infizierter Tiere schwankt zwischen 0.1 und 0.6 bis 1.7% Alpung: kommt bei der Verbreitung des BVDV eine grosse Bedeutung zu (7,7% infizierte Kälber nach der Alpung) 1

2 Virus Eigenschaften -BVD-Virus Infektion weltweit verbreitet -RNA-Virus -Gehört zu den Pestiviren -Zwei Virusstämme (Biotypen): nicht zytopathogener Stamm (ncp) zytopathogener Stamm (cp) -BVDV 1 und BVDV 2 -BVDV 1: mindestens 11 genetisch unterschiedliche Gruppen (1a bis 1j an deer) BVD-Fälle von 1994 bis 2000 Aborte bis neonatal bis 3 Monate 3 Monate bis 1 Jahr BVD-getestet 79.50% 46% 37.20% 16% 6.30% 5.30% BVD-positiv 3.80% 7.20% 25% 38.30% 2.20% 0% 1,5 bis 3 Jahre 3,5 bis 6 Jahre 7 bis 10 Jahre 2

3 Immuntoleranz ca. 40 bis 120 Tag der Trächtigkeit: Persistente Infektion: VIRUSAUSSCHEIDER, Totgeburt, Abort, Missbildungen. Immuntoleranz: Zustand der immunologischen Nichtreaktivität gegen bestimmte Antigene. Schilddrüse Immunhistologie EnVision-Methode Enzymmoleküle Dextran Rückgrat Primärer Antikörper Sekundärer Antikörper BVDV Antigen 3

4 BVD-Immunhistologie Haarfollikel BVD-Virus hat z.b. einen Tropismus für glatte Muskulatur (Gefässwände), lymphatische Organe bzw. Zellen, Neuronen (Gehirn allgemein), epitheliale Zellen (Epidermis der Haut, v.a. Basalzellschicht, Haarfollikel, usw.), Knochenzellen, etc. 4

5 Akute Infektion: Lungenentzündung, Durchfall, Fieber, usw. Persistente (chronische) Infektion 5

6 Immunhistologie OESOPHAGUS ZUNGE Immunhistologie 6

7 Immunhistologie Missbildungen 7

8 Mucosal Disease Mucosal Disease 8

9 Mucosal Disease Methodenvergleich Immunhistologie (Haut) ELISA (Bommeli BVD-Sero-II und BVD- Virus-III - Ak und Ag: Serum) IDEXX HerdChek ELISA (Haut und Serumproben (255)) TaqMan (real time PCR; Serum) 9

10 Methodenvergleich Ziel der Arbeit: Zuverlässigkeit der Methoden bei Jungtieren jünger als 3 Monate Maskierung durch maternale Antikörper? Transiente versus persistente Infektionen Diagnostische Lücke: Kolostrale Antikörper können den Virusnachweis etwa vom 3. Lebenstag bis zum Ende des 3. Lebensmonat beeinträchtigen. 10

11 Material 258 Kälber/Rinder im Alter von 1 Tag bis 30 Monate Monate 23 > 3 Monate < 7 Monate 11 > 7 Monate Resultate Number of cases IHC Snap frozen BVD-Virus-III BVD-SERO-II IDEXX Skin IDEXX Serum TaqMan (Serum) 26 + (26/26) + (26/26) 4 + / (26/26) +(26/26) + (26/26) (223/223) - (223/223) / (223/223) -(220/220) - (223/223) 9 2/9 5/9 4/9 5/9 5/9 6/9 Total: 258 cases: 10% positive; 86.5% negative; 3.5%?? 11

12 Resultate Case number Age IHC -20 C IHC fomalin TM 1. TM 2. RT- PCR PCR ReA VI GT BVD- VIRUS- III IDEXX Serum BVD- SERO -II IDEXX Skin Interpretation 1 1 day n.d False positive 2 Š3 mo False positive 3 4 mo b Transient mo infection b Transient infection 5 Š3 mo h Transient infection 6 Š3 mo n.d False positive weeks 8 1 week 9 1 week n.d False positive n.d. n.d False negative e False negative Schlussfolgerungen Die vier parallel angewandten Methoden zeigen eine hohe Korrelation (96.5%). 26 BVDV-positive Tiere (4/26 Antikörper positiv, Alter unter 3 Monate) 223 BVDV-negative Tiere (175/223 Antikörper positiv) 12

13 Schlussfolgerungen 9 divergierende Resultate 4 Resultate waren falsch positiv (TaqMan und BVD-Virus-III) Für den Nachweis von persistent infizierten Kälbern scheinen beide Methoden, der Antigen- und der RNA-Nachweis in Haut- respektive Serumproben zuverlässig zu sein. Schlussfolgerungen Maternale Antikörper interferieren nicht mit den Hauttests (IHC, IDEXX HerdChek) und der real time-pcr. 2/6 wurden aufgrund von maternalen AK von dem BVD-Virus-III ELISA nicht erkannt (diagnostische Lücke). 3 transient infizierte Tiere wurden mit der real time-pcr, Ag-ELISA (IDEXX im Serum; BVD- Virus-III) erkannt, nicht aber in der Haut mittels IHC und IDEXX HerdChek. 13

14 Beteiligte Arbeitsgruppen Bestandesmedizin, Vetsuisse Fakultät, Zürich; Hässig M., Nussbaumer M.: Ag-Elisa, Ak-Elisa (Bommeli AG) Institut für Virologie, Vetsuisse Fakultät, Bern; Peterhans, E., Stalder H.P.: Real Time rt-pcr, VI, GT Bommeli AG (IDEXX), Bern; Egli, Ch.: IDEXX HerdChek ELISA Institut für Veterinärpathologie, Vetsuisse Fakultät, Zürich; Ehrensperger, F., Hilbe, M., Zlinszky K.: Immunhistologie (IHC), IDEXX HerdChek ELISA Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit 14