Schnelle Diagnostik durch molekularbiologische und massenspektrometrische Verfahren

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1 Schnelle Diagnostik durch molekularbiologische und massenspektrometrische Verfahren ECMM-Symposium Priv. Doz. Dr. med. Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

2 Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie u. Hygiene Proben/Jahr, davon MRSA-Screenings Varia-Proben Blutkulturen Urinkulturen molekularbiologische Proben Proben auf Pilze ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

3 Inhalt Anzucht und Identifizierung von Pilzen Massenspektrometrie Molekularbiologische Nachweismethoden ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

4 Nachweisverfahren für Pilze Kultur (Spezialmedien) Tage bis Wochen Voraussetzung zur Resistenztestung Serologische Verfahren (Antikörper/Antigen) Tage nur für wenige Organismen Molekularbiologische Verfahren 1-2 Tage ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

5 Kultur und Identifizierung Probe Kultur Wachstum Hefen: 1-3d SP: 1-28d Identifiz. früher 1d heute i.d.r. gleicher Tag C. albicans Spezies Resistenztestung ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

6 Massenspektrometrie (MALDI-TOF MS) Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF-MS) ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

7 Massenspektrometrie Extraktion AS on target Schmierpräp. Bernhard et al., J. Clin. Microbiol. 2014, 52(12): ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

8 Evaluierung von MALDI-ToF Systemen zur Identifizierung von Hefen Vergleich von Biotyper (3.0) und VitekMS (2.0) 210 klin. Hefeisolate aus primär sterilen Materialien d. UK Köln und UK Frankfurt/Main (Blutkulturen und Liquores) 178 Candida spp., 32 non-candida spp ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

9 Ergebnisse d. Identifizierung Biotyper ID VitekMS ID Falsche ID Falsche ID 202 (96.2%) 8 (3.8%) 0 (0%) 202 (96.2%) 3 (1.4%) 5 (2.4%) ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

10 Geschwindigkeit d. Messungen Hamprecht et al., Med Microbiol Immunol Apr;203(2): ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

11 Das Bild kann zurzeit nicht angezeigt werden. Identifizierung von Schimmelpilzen mittels MALDI-ToF ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

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14 MALDI-TOF und Schimmelpilze Ranque et al., Vergleich von konventioneller ID und MALDI- TOF ID von Schimmelpilzen mit eigener Datenbank Ranque et al, Mycoses Mar; 57(3): ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

15 Kultur Probe Antimykotika Kultur Wachstum Hefen: 1-3d SP: 1-28d Identifiz. früher 1d heute i.d.r. gleicher Tag C. albicans Spezies Resistenztestung nicht/schwer anzüchtbare Erreger kein Wachstum ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

16 Molekularbiologische Nachweisverfahren Probe DNA-Isolierung conventional PCR Real-time PCR Genus/ Spezies ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

17 Real time PCR Fluoreszenz Zyklen ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

18 Welche PCR anfordern? Panels Erreger bei Aplasie/Immunsuppression (BAL) PCR Aspergillus spp., Mucorales, Pneumocystis jiroveci PCR Toxoplasma gondii Aspergillus-Ag (BAL) Mikroskopie mit optischen Aufhellern large volume culture Kombination von PCR/Antigennachweis und Kultur ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

19 PCR für Pilze am IMMIH Positiv Aspergillus-PCR (11,7%) Mucorales-PCR (2,7%) Pneumocystis-PCR (5,3%) Candida-PCR (Biopsien) 25 1 (4%) panfungale PCR (Biopsien) (20,4%) ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

20 Fazit Massenspektrometrie/Molekularbiologie Nachweis von Pilzen schwierig; abhängig von richtiger Indikationsstellung/Probennahme MALDI-TOF MS erhebliche Beschleunigung d. Identifikation von Pilzen, v.a. für Hefen Schimmelpilze: weitere Verbesserung d. Datenbanken notwendig Molekularbiologische Methoden erlauben schnellen Nachweis von Pilz- DNA, häufig auch bei antimykotisch vorbehandelten Patienten Multiplex-PCR für wichtigsten Erreger von Mykosen Erhebliche Beschleunigung d. Diagnostik und Therapie ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

21 Danksagung IMMIH Jacqueline Kleffmann Tanja Oestreicher Ahmad Saleh Gunhilde Schröder Yvonne Stelzer Janine Vollmann Astrid Zimmer Frieder Fuchs Ellen Piepenbrock Dr. Jörg Gielen Prof. Martin Krönke PD Dr. Georg Plum Prof. Harald Seifert Alle Kollegen/innen d. UK Köln Infektiologie Intensivmedizin Kooperationspartnern O.Bader/UK Göttingen D. Buchheidt/UK Mannheim F. Dromer/Institut Pasteur S. Göttig/UK Frankfurt M. Koeppel/LMU München O. Kurzai/UK Würzburg/NRZ C. Lass-Flörl/UK Innsbruck ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene

22 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit!

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