Schnelle Diagnostik durch molekularbiologische und massenspektrometrische Verfahren 10.10.2017 ECMM-Symposium Priv. Doz. Dr. med. Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie u. Hygiene 300 000 Proben/Jahr, davon 123 000 MRSA-Screenings 40 000 Varia-Proben 30 000 Blutkulturen 19 000 Urinkulturen 29 000 molekularbiologische Proben 72 000 Proben auf Pilze 2 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Inhalt Anzucht und Identifizierung von Pilzen Massenspektrometrie Molekularbiologische Nachweismethoden 3 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Nachweisverfahren für Pilze Kultur (Spezialmedien) Tage bis Wochen Voraussetzung zur Resistenztestung Serologische Verfahren (Antikörper/Antigen) Tage nur für wenige Organismen Molekularbiologische Verfahren 1-2 Tage 4 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Kultur und Identifizierung Probe Kultur Wachstum Hefen: 1-3d SP: 1-28d Identifiz. früher 1d heute i.d.r. gleicher Tag C. albicans Spezies Resistenztestung 5 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Massenspektrometrie (MALDI-TOF MS) Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF-MS) 6 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Massenspektrometrie Extraktion AS on target Schmierpräp. Bernhard et al., J. Clin. Microbiol. 2014, 52(12):4163 7 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Evaluierung von MALDI-ToF Systemen zur Identifizierung von Hefen Vergleich von Biotyper (3.0) und VitekMS (2.0) 210 klin. Hefeisolate aus primär sterilen Materialien d. UK Köln und UK Frankfurt/Main (Blutkulturen und Liquores) 178 Candida spp., 32 non-candida spp. 8 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Ergebnisse d. Identifizierung Biotyper ID VitekMS ID Falsche ID Falsche ID 202 (96.2%) 8 (3.8%) 0 (0%) 202 (96.2%) 3 (1.4%) 5 (2.4%) 9 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Geschwindigkeit d. Messungen Hamprecht et al., Med Microbiol Immunol. 2014 Apr;203(2):93-9. 10 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Das Bild kann zurzeit nicht angezeigt werden. Identifizierung von Schimmelpilzen mittels MALDI-ToF 11 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
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MALDI-TOF und Schimmelpilze Ranque et al., Vergleich von konventioneller ID und MALDI- TOF ID von Schimmelpilzen mit eigener Datenbank Ranque et al, Mycoses. 2014 Mar; 57(3):135-40 14 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Kultur Probe Antimykotika Kultur Wachstum Hefen: 1-3d SP: 1-28d Identifiz. früher 1d heute i.d.r. gleicher Tag C. albicans Spezies Resistenztestung nicht/schwer anzüchtbare Erreger kein Wachstum 15 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Molekularbiologische Nachweisverfahren Probe DNA-Isolierung conventional PCR Real-time PCR Genus/ Spezies 16 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Real time PCR Fluoreszenz Zyklen 17 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Welche PCR anfordern? Panels Erreger bei Aplasie/Immunsuppression (BAL) PCR Aspergillus spp., Mucorales, Pneumocystis jiroveci PCR Toxoplasma gondii Aspergillus-Ag (BAL) Mikroskopie mit optischen Aufhellern large volume culture Kombination von PCR/Antigennachweis und Kultur 18 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
PCR für Pilze am IMMIH 01.10.2016 30.09.2017 Positiv Aspergillus-PCR 402 47 (11,7%) Mucorales-PCR 405 11 (2,7%) Pneumocystis-PCR 551 29 (5,3%) Candida-PCR (Biopsien) 25 1 (4%) panfungale PCR (Biopsien) 54 11 (20,4%) 19 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Fazit Massenspektrometrie/Molekularbiologie Nachweis von Pilzen schwierig; abhängig von richtiger Indikationsstellung/Probennahme MALDI-TOF MS erhebliche Beschleunigung d. Identifikation von Pilzen, v.a. für Hefen Schimmelpilze: weitere Verbesserung d. Datenbanken notwendig Molekularbiologische Methoden erlauben schnellen Nachweis von Pilz- DNA, häufig auch bei antimykotisch vorbehandelten Patienten Multiplex-PCR für wichtigsten Erreger von Mykosen Erhebliche Beschleunigung d. Diagnostik und Therapie 20 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Danksagung IMMIH Jacqueline Kleffmann Tanja Oestreicher Ahmad Saleh Gunhilde Schröder Yvonne Stelzer Janine Vollmann Astrid Zimmer Frieder Fuchs Ellen Piepenbrock Dr. Jörg Gielen Prof. Martin Krönke PD Dr. Georg Plum Prof. Harald Seifert Alle Kollegen/innen d. UK Köln Infektiologie Intensivmedizin Kooperationspartnern O.Bader/UK Göttingen D. Buchheidt/UK Mannheim F. Dromer/Institut Pasteur S. Göttig/UK Frankfurt M. Koeppel/LMU München O. Kurzai/UK Würzburg/NRZ C. Lass-Flörl/UK Innsbruck 21 10.10.2017 ECMM-Symposium Köln Axel Hamprecht Institut für medizinische Mikrobiologie, Immunologie und Hygiene
Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit!
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