Effiziente Allergie-Profil-Diagnostik mit dem EUROASSAY: Schnelle Testdurchführung und automatische Auswertung
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- Martha Salzmann
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Transkript
1 Umfassende Allergiediagnostik EUROASSAY Effiziente Allergie-Profile
2 EUROASSAY Effiziente Allergie-Profile Effiziente Allergie-Profil-Diagnostik mit dem EUROASSAY: Schnelle Testdurchführung und automatische Auswertung Der EUROASSAY Allergie ist ein Testsystem, mit dem spezifisches IgE (sige) gegen bis zu 0 verschiedene Allergene in Einzelansätzen auf einem einzigen Objektträger nachgewiesen werden kann. Die Standardisierung des Testformats ermöglicht eine automatische Testdurchführung und Auswertung, wodurch insbesondere bei großem Probenaufkommen eine höhere Präzision und Reproduzierbarkeit der Ergebnisse erzielt wird. INHALATION EUROASSAY-Objektträger: Inhalation Bestimmung von sige gegen verschiedene Allergene auf Testfeldern Diagnostik von sige gegen bis zu 0 weitere Parameter zusätzlich möglich Verschiedene EUROASSAY-Profile verfügbar: Inhalation, Nahrungsmittel, Atopie, Insektengifte und molekulare Allergiediagnostik Schnelle Durchführung alle Ergebnisse bereits nach Stunden verfügbar Geringes Serumvolumen nur µl pro Testfeld Komfortable und sichere Zuordnung der Patientendaten zu den Ergebnissen mittels Barcode Automatische Auswertung und Archivierung mittels EUROLineScan-Software Ausgabe der Ergebnisse in n Nachweis spezifischer IgE-Antikörper gegen auf allen Profilen bande als Kontrolle für die korrekte Testdurchführung Umfassende interne Qualitätskontrollen der verwendeten Allergene -Bande als zusätzlicher Hinweis für die klinische Relevanz der sige-ergebnisse Der Begriff wird als Abkürzung für Crossreactive Carbohydrate Determinant (kreuzreagierende Kohlenhydratdeterminante) verwendet. Viele Allergene sind Glykoproteine und enthalten Oligosaccharid-Seitenketten. In einigen Fällen entwickeln Patienten gegen diese KohlenhydratStrukturen sige-antikörper, die meistens keine klinische Relevanz haben. Da in einer Vielzahl von Allergenen pflanzlichen Ursprungs enthalten sind, kann es aufgrund dieser strukturellen Ähnlichkeit bei der in-vitro-diagnostik zu einer ausgeprägten Kreuzreaktivität kommen, die sich in einer Vielzahl positiver Ergebnisse äußert. Dies erschwert die Identifikation der tatsächlich für die Symptomatik ursächlichen Allergene. Die Bestimmung der sige-antikörper gegen liefert eine Zusatzinformation und dient als Interpretationshilfe bei der Beurteilung der Testergebnisse. Mögliche Kreuzreaktivität aufgrund von Die Messung ist vor allem hilfreich und essenziell, wenn die klinischen Symptome nicht zum spezifischen IgE-Befund passen, bei einer Vielzahl positiver sige auf pflanzliche Nahrungsmittel und Inhalationsallergene (multiple Sensibilisierung), beim Nachweis von positiven sige gegen Bienen- und Wespengift-Extrakte (Doppelpositivität).
3 Abarbeitung der EUROASSAY-Allergie-Profile I. Manuelle Inkubation ideal für die Durchführung im eigenen Labor Ablauf der Inkubation des EUROASSAY Benötigte Hilfsmittel Blockierung der Testfelder min Entfernen des Blockierungspuffers Probeninkubation * µl Probe/Feld Rotationsschüttler 00 U/min, RT ** Konjugatinkubation µl/feld, 00 U/min, RT Substratinkubation µl/feld, 00 U/min, RT h h min Waschen x Waschen x min min Waschen und Trocknen Auswertung *** mit der EUROLINEScan-Software * Serum oder Plasma, ** Raumtemperatur, *** visuelle Beurteilung möglich Blockieren in der Küvette Inkubieren mit TITERPLANE-Technik Spülen II. Vollautomatische Inkubation ideal für höheren Probendurchsatz Zur vollautomatischen Inkubation der EUROASSAY-Objektträger eignet sich das System IF Sprinter. Das System übernimmt die Identifikation, Verdünnung und den Transfer der Proben sowie die Inkubations- und Waschschritte. Die Probenidentifikation erfolgt durch das automatische Einscannen der Barcodes beim Einschieben der Racks in das Gerät. Das System IF Sprinter ermöglicht die gleichzeitige Inkubation von bis zu Objektträgern pro Testlauf. IF Sprinter Scannen der Barcodes Vollautomatische Inkubation
4 Automatische Auswertung mit der EUROLineScan-Software Die EUROLineScan-Software dient der automatischen Auswertung der inkubierten EUROASSAY sowie der Verwaltung und detaillierten Dokumentation der erzielten Resultate. Die inkubierten EUROASSAY werden mittels Flachbettscan ner (EURO BlotScanner) optisch er fasst. EURO Line Scan erkennt selb stän dig die Positionen der Teststrei fen, identifi ziert die Ban den und misst de ren Intensität. Das Pro gramm rechnet die Banden inten si täten au to - ma tisch in EAST (Enzym-Aller go-sorbent-test)-n um, die in Bezug auf die Konzen tra tions ab stu fungen dem in der Aller giediagnostik weit verbreiteten RAST (Ra dio-allergo- Sorbent-Test)-Sy stem entsprechen. Die automatische Auswertung der Teststreifen kann kontrolliert und bei Bedarf manuell angepasst werden, wobei alle Änderungen automatisch protokolliert werden. Die Ergebnisse werden zusammen mit den Bilddaten elektronisch archiviert, so dass ein Aufheben der EUROASSAY-Objektträger nicht mehr erforderlich ist. Für jeden Patienten kann ein separater Befundbogen erstellt werden. EUROBlotScanner EUROLineScan-Befundausdruck (Beispiel)
5 Hervorragende Korrelationsdaten I. Ringversuchsdaten Zwischen Februar 00 und Mai 0 wurden mit Seren von Ringversuchsanbietern (INSTAND e.v., Deutschland; MQ, Schweiz; NEQAS, UK und RfB, Deutschland) Untersuchungen mit den -Inhalations- Profilen (IgE) durchgeführt. Die Ergebnisse der Inhalations-Profile stimmten zu % mit den Vorgaben der Ringversuchsinstitute überein, zulässige Abweichung betrug ±. * Folgende Allergene wurden getestet: Milben (d, d, d0, d), Pollen (g, g, g, g, t, t, t, t, t, w, w, w), Schimmelpilze (m, m, m), Tiere (e, e, e, e, e) Immunblot Inhalations-Profile (IgE) Inhalationsallergene* (n = ) Vorgaben der Ringversuchsinstitute II. Vergleichsdaten zum Mitbewerber Lieschgras (g; n = ) Dermatophagoides pter. (d; n = ) Katze (e; n = 0) Übereinstimmung: % * Übereinstimmung: % * Übereinstimmung: % * (t; n = ) Dermatophagoides farinae (d; n = ) Pferd (e; n = ) Übereinstimmung: % * Übereinstimmung: % * Übereinstimmung: % * * zulässige Abweichung ±
6 Definierte Partial-Allergen-Diagnostik vom Extrakt zum Protein Bislang wurden sige mittels Allergenextrakten nachgewiesen, die eine Mischung verschiedener allergieauslösender Proteine (Komponenten) der jeweiligen Allergenquelle enthalten. Die Zusammensetzung der Extrakte ist aber nicht standar disiert daher können die Ergebnisse der Testsysteme verschiedener Hersteller kaum miteinander verglichen werden. Die definierte Partial-Allergen-Diagnostik (DPA-Dx) hingegen nutzt exakt definierte Proteine, die entweder direkt aus der Allergenquelle isoliert oder rekombinant hergestellt werden. Dadurch werden sowohl eine höhere Standardisierung als auch differenziertere Diagnosen ermöglicht. Allergenquelle Allergenextrakt Allergenkomponenten Begriffserklärung Allergenkomponente Bet v Betula verucosa Bet v Bet v Bet v Gattung Art Reihenfolge der Entdeckung * npollen (t) * oder ggf. Ziffer einer homologen Komponente Vorteile der definierten Partial-Allergen-Diagnostik: Identifizierung von Kreuzreaktionen und Mehrfachsensibilisierungen Die Identifizierung des initialen Allergieauslösers ist entscheidend für die Wahl der optimalen Behandlung, z. B. eine spezifische Immuntherapie (SIT) gegen eine oder mehrere Allergenquellen, Karenzempfehlungen, Verschreibung eines Notfallsets. Risikoanalyse und Risikomanagement Die Information über die Proteinfamilie gibt Hinweise auf das Risiko für systemische allergische Reaktionen. Einige Allergenkomponenten sind hitze- und denaturierungsstabil, z. B. die Speicherproteine der Erdnuss, die mit einem hohen Risiko für systemische Reaktionen assoziiert sind. Die PR--Proteine, wie das Bet v der npollen und seine Homologe wie z. B. Mal d im Apfel, sind hitzelabil und Garprozesse können die Allergenität der Proteine und das Risiko für systemische Reaktionen verringern. Wahl der spezifischen Immuntherapie Die Aussage über die Sensibilisierung auf Major- und/oder Minorallergene ist hilfreich für die Auswahl des richtigen Therapeutikums und für eine Prognose zum Erfolg einer SIT. EUROIMMUN DPA-Dx Produkte für ein besseres Patientenmanagement!
7 EUROASSAY Profile für die definierte Partial-Allergen-Diagnostik DPA-Dx Pollen DE -00- E Feld Code Allergen (n = ) DPA-Dx Pädiatrie DE -0- E Feld Code Allergen (n = ) DPA-Dx Erdnuss DE -00- E Feld Code Allergen (n = ) g0 rphl p (Lieschgras) t rbet v () t rbet v () g rphl p (Lieschgras) f f nbos d (α-lactalbumin, Kuhmilch) nbos d (β-lactoglobulin, Kuhmilch) f rara h (Erdnuss) g rphl p (Lieschgras) f f nbos d (Kasein, Kuhmilch) nbos d (Lactoferrin, Kuhmilch) f rara h (Erdnuss) g rphl p (Lieschgras) g Lieschgras t rbet v () t rbet v () t0 rbet v () t rbet v () t -Marker e0 f f f f f f f nbos d (Rinderserumalbumin, BSA) ngal d (Ovalbumin, Hühnereiweiß) ngal d (Ovomucoid, Hühnereiweiß) ngal d (Conalbumin, Hühnereiweiß) ngal d (Lysozym, Hühnereiweiß) rara h (Erdnuss) rara h (Erdnuss) rara h (Erdnuss) f rara h (Erdnuss) -Marker f rara h (Erdnuss) f rara h (Erdnuss) f rara h (Erdnuss) f rara h (Erdnuss) f rara h (Erdnuss) -Marker DPA-Dx Insektengifte DE E Feld Code Allergen (n = ) i Bienengift i Wespengift i Hornissengift i0 rapi m (Bienengift) i rapi m (Bienengift) i rapi m (Bienengift) i0 rves v (Wespengift) i rves v (Wespengift) -Marker
8 EUROASSAY-Profile für die Extrakt-basierte Allergiediagnostik Inhalation DE -0 E Feld Code Allergen (n = ) g g g g t t t t w w w w d d es ** e e e e e e m m m m EUROIMMUN AG Seekamp 0 Lübeck Tel 0 / -0 Fax - info@euroimmun.de DE_000_I_DE_A0, 0/0 Ruchgras Knäuelgras Lieschgras Roggen Erle Hasel Eiche Ambrosia artemisiifolia Löwenzahn Beifuß Spitzwegerich Dermatophagoides pter. Dermatophagoides farinae Käfigvögel-Mix Hund Pferd Meerschweinchen Katze Kaninchen Hamster Nahrungsmittel DE -0- E Penicillium notatum Cladosporium herbarum Aspergillus fumigatus Alternaria alternata -Marker Feld Code Allergen (n = ) f f f f0 f f f u f f f f f f0 f f f f f f f f f f f f f f Knoblauch Schweinefleisch Hühnereigelb Pfeffer (schwarz) Sesam nbos d Kasein (Milch) Senf Sonnenblumenkerne Kartoffel Pfirsich Wassermelone Kiwi Garnele (Pazifik) Mandel Hühnereiweiß Erdnuss Roggenmehl Kuhmilch Sojabohne Weizenmehl Tomate Sellerie Karotte Orange Banane Apfel Haselnuss Kabeljau -Marker Inhalation DE -0- E Feld Code Allergen (n = ) Pädiatrie/Atopie DE -0 E Feld Code Allergen (n = ) t t t t gx * g d w w d e e m m t t t g i d0 w w d e u d m m g g t w d d e e e m m m f f f f f f f e0 f f f f f f f f Hasel Esche (weiß) Erle Gräser-Mix Roggen Dermatophagoides pter. Beifuß Ambrosia artemisiifolia Dermatophagoides farinae Katze Hund Alternaria alternata Cladosporium herbarum Eiche Platane Zypresse Lieschgras Küchenschabe (deutsch) Acarus siro Glaskraut (Parietaria judaica) Spitzwegerich Lepidoglyphus destructor Pferd Latex Tyrophagus putrescentiae Aspergillus fumigatus Penicillium notatum -Marker Lieschgras Roggen Beifuß Dermatophagoides pter. Dermatophagoides farinae Katze Hund Pferd Cladosporium herbarium Aspergillus fumigatus Alternaria alternata Hühnereiweiß Hühnereigelb Kabeljau Kuhmilch nbos d α-lactalbumin (Milch) nbos d β-lactalbumin (Milch) nbos d Kasein (Milch) nbos d BSA (Milch) Weizenmehl Reis Sojabohne Erdnuss Haselnuss Karotte Kartoffel Apfel -Marker Nahrungsmittel DE -0 E Feld Code Allergen (n = ) Pädiatrie/Atopie DE -0- E Feld Code Allergen (n = ) f f f f f f f f f f f f f0 f f f f f f f f f f t t t t gx * g d w w d e e m m f f f f f f f f f f f f f f Hühnereiweiß Hühnereigelb Kuhmilch nbos d Kasein (Milch) Bäckerhefe Weizenmehl Roggenmehl Reis Sojabohne Sesam Erdnuss Haselnuss Mandel Kiwi Pfirsich Aprikose Tomate Karotte Kartoffel Sellerie Kabeljau Krabbe Apfel -Marker Hasel Esche (weiß) Erle Gräser-Mix Roggen Dermatophagoides pter. Beifuß Ambrosia artemisiifolia Dermatophagoides farinae Katze Hund Alternaria alternata Cladosporium herbarium Hühnereiweiß Erdnuss Roggenmehl Kuhmilch Sojabohne Weizenmehl Tomate Sellerie Karotte Orange Banane Apfel Haselnuss Kabeljau -Marker * gx: g Knäuelgras, g Wiesenschwingel, g Weidelgras, g Lieschgras, g Wiesenrispengras, g Wolliges Honiggras ** es: e Wellensittichfedern, e Hühnerfedern, e0 Kanarienvogelfedern, e Gänsefedern
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