Hohe Sensitivität und Spezifität: Alle Komponenten sind genauestens aufeinander abgestimmt

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1 BACTOTYPE PCR Amplification Kit Chlamydia sp. Gebrauchsanweisung Technologie Die Produktgruppe BACTOTYPE PCR Amplification Kit umfasst optimierte Systeme zum Nachweis von pathogenen Bakterien mittels Polymerasekettenreaktion (PCR): Hohe Sensitivität und Spezifität: Alle Komponenten sind genauestens aufeinander abgestimmt Einfache und praktikable Anwendung: Die Reagenzien sind inklusive Gel-Beladungspuffer vorpipettiert Zuverlässige Ergebnisse: Das Testkit enthält eine interne Amplifikationskontrolle Das Testkit enthält zwei Primerpaare, die zum einen genus-spezifisch für die Gattungen Chlamydia und Chlamydophila und zum anderen spezies-spezifisches für den Erreger Chlamydia psittaci sind. Die PCR-Produkte werden auf einem herkömmlichen Agarosegel ausgewertet. Die ready-to-load Reagenzien erlauben eine direkte Auftragung auf das Gel ohne Zugabe von Gel-Beladungspuffer. Falsch-negative Ergebnisse werden durch eine interne Amplifikationskontrolle minimiert. Der Arbeitsaufwand im Labor reduziert sich damit auf ein Minimum. Mit Ausnahme der Taq DNA Polymerase enthält das Testkit alle benötigten Reagenzien. Nur für Forschungszwecke geeignet // Stand 08/2012 Pathogener Erreger Chlamydien sind eine heterogene Gruppe von Bakterien, die bei Mensch und Tier ein breites Spektrum an Erkrankungen verursachen können. Basierend auf der Analyse der ribosomalen RNA-Sequenzen wurde 1999 eine neue taxonomische Einteilung in die beiden Genera Chlamydia und Chlamydophila mit insgesamt neun Spezies vorgeschlagen. Die aviären Isolate von Chlamydia psittaci haben ein nachgewiesenes zoonotisches Potential und sind für die Tiermedizin relevant. Bei Vögeln bezeichnet man Chlamydieninfektionen bei Psittaziden als Psittakose (Anzeigepflicht!) und bei Nicht-Psittaziden als Ornithose (Meldepflicht!). Das BACTOTYPE PCR Amplification Kit Chlamydia sp. ersetzt den Nachweis des Erregers durch Immunfluoreszenz nach zeitintensiver Kultur infizierter Zellen und liefert sensitive und spezifische Ergebnisse bereits nach einem Arbeitstag. Bestellinformation BACTOTYPE Chlamydia sp. 10 Reaktionen Artikelnummer BACTOTYPE Chlamydia sp. 50 Reaktionen Artikelnummer

2 Chlamydia sp. 2 08/2012 Inhalt PCR Mix I (gelbe Verschlusskappe) PCR Puffer, dntps, Primergemisch (Chlamydia- und Chlamydophila-spezifisch sowie Amplifikationskontrolle), DNA für Amplifikationskontrolle, NaN 3 Magnesiumchlorid I (grüne Verschlusskappe) MgCl 2, Gel-Beladungspuffer PCR Mix II (lila Verschlusskappe) PCR Puffer, dntps, Primergemisch (Chlamydophila psittaci-spezifisch und Amplifikationskontrolle), DNA für Amplifikationskontrolle, NaN 3 Magnesiumchlorid II (schwarze Verschlusskappe) MgCl 2, Gel-Beladungspuffer Positivkontrolle (rote Verschlusskappe) nicht-infektiöse DNA mit Chlamydia- und Chlamydophila-spezifischen Sequenzen, NaN 3 10 Reaktionen 50 Reaktionen 221 μl 935 μl 80 μl 300 μl 221 μl 935 μl 80 μl 300 μl 25 μl 25 μl Nuklease-freies Wasser (blaue Verschlusskappe) 1.0 ml 1.0 ml Lagerung Die Reagenzien zur Amplifikation sollten im Dunkeln bei -20 C gelagert werden. Bei vorschriftsmäßiger Lagerung ist das Testkit mindestens 12 Monate haltbar. Wiederholtes Auftauen und Einfrieren sollte vermieden werden. Zusätzlich benötigte Reagenzien - Taq DNA Polymerase BACTOTYPE Testkits werden mit der JumpStart Taq DNA Polymerase (Sigma-Aldrich, Art. Nr. D4184) validiert. Nur bei Verwendung dieser Polymerase garantieren wir eine optimale Funktion der BACTOTYPE Produkte. Für Bestellungen oder weitere Informationen zu der o.g. Taq Polymerase kontaktieren Sie bitte Sigma-Aldrich. - Agarose und Ethidiumbromid (für Gelelektrophorese) bp DNA Leiter (für Gelelektrophorese) Warenzeichen und Patente - BACTOTYPE ist ein eingetragenes Warenzeichen der Biotype Diagnostic GmbH. - JumpStart ist ein eingetragenes Warenzeichen von Sigma-Aldrich. - Die PCR ist patentrechtlich geschützt. Patentinhaber sind die Firmen Hoffmann-La Roche Inc. und F. Hoffmann-La Roche (Roche).

3 Chlamydia sp. 3 08/2012 Produktgarantie Der gesamte Inhalt des BACTOTYPE PCR Amplification Kit wurde einer intensiven Qualitätssicherung durch die Biotype Diagnostic GmbH unterzogen. Bitte melden Sie jedes aufgetretene Problem. Hinweise Die Einhaltung dieses Protokolls ist unbedingt erforderlich! Um Kontaminationen jeglicher Art auszuschließen, empfehlen wir alle Pipettiervorgänge mit gestopften Pipettenspitzen durchzuführen. DNA Probenvorbereitung, Amplifikation und Elektrophorese sollten in getrennten Räumlichkeiten stattfinden. Beachten Sie die Sicherheitsbestimmungen für das Arbeiten in Laboratorien und tragen Sie Handschuhe. Der PCR Mix und die Positivkontrolle enthalten Natriumazid (NaN 3 ). Natriumazid ist ein Gefahrstoff: Sehr giftig beim Verschlucken, entwickelt bei Berührung mit Säure sehr giftige Gase (R /53, S1/ ). Ebenso ist Ethidiumbromid ein Gefahrstoff. Bitte lesen Sie das entsprechende Sicherheitsdatenblatt und tragen Sie Nitrilhandschuhe. Für BACTOTYPE Komponenten sind die Sicherheitsdatenblätter bei der Biotype Diagnostic GmbH erhältlich. Für Sicherheitsdatenblätter von Reagenzien, die nicht im Testkit enthalten sind, kontaktieren Sie bitte den jeweiligen Hersteller. DNA Isolation Eine erfolgreiche Amplifikation setzt die Verfügbarkeit von hochreiner DNA voraus. Für die DNA Isolierung von Chlamydia sp. aus Kot- und Tupferproben sowie Gewebeproben (z.b. Aborte, Plazenta) werden folgende Kitsysteme empfohlen: - NucleoSpin Tissue Kit; Macherey-Nagel, Düren - QIAamp DNA Mini Kit; QIAGEN, Hilden Bitte folgen Sie dem entsprechenden Protokoll des Herstellers.

4 Chlamydia sp. 4 08/2012 Protokoll Vorbereitung der Reagenzien: Vor Verwendung der Reagenzien empfehlen wir, alle Röhrchen zu vortexen und ca. 5 s bei 3000 U/min zu zentrifugieren. Die blaue Farbe in der Magnesiumchlorid-Lösung ist durch den Gel-Beladungspuffer bedingt. Das PCR-Ergebnis wird hierdurch nicht beeinflusst. Vermeiden Sie zu intensives Zentrifugieren der Magnesiumchlorid- Lösung, das zu einer Aufkonzentrierung des Gel-Beladungspuffers im unteren Bereich des Röhrchens führen kann. Genus-spezifischer Nachweis von Chlamydia/Chlamydophila sp.: PCR Mix I und Magnesiumchlorid I verwenden Spezies-spezifischen Nachweis von Chlamydophila psittaci: PCR Mix II und Magnesiumchlorid II verwenden 1. A) PCR Protokoll bei einer Probenanzahl ungleich der Verpackungseinheit (Multiplikator) Sollte die Probenanzahl kleiner als die der Verpackungseinheit des Testkits sein, so pipettieren Sie wie folgt in ein PCR- Gefäß (siehe auch Pipettierschema Tabelle 1): 17.0 μl PCR Mix μl Magnesiumchlorid μl Nuklease-freies Wasser + 0,4 μl Taq DNA Polymerase (hier: JumpStart 2.5 U/ μl) - Pipettieren Sie von diesem Master-Mix 22.5 μl in ein PCR-Gefäß und fügen 2.5 μl Ihrer DNA-Probe bzw. der Kontrolle hinzu. - Hinweis: Das Reaktionsvolumen sollte immer in Abhängigkeit der verwendeten Taq Polymerase mit Nuklease-freiem Wasser auf 25 μl aufgefüllt werden. 1. B) PCR Protokoll bei einer Probenanzahl entsprechend der Verpackungseinheit Sollte Ihre Probenanzahl der Verpackungseinheit des Testkist entsprechen, empfehlen wir die direkte Zugabe von Magnesiumchlorid, Nuklease-freiem Wasser und Taq DNA Polymerase zum PCR Mix. Für 10 Proben (entsprechend der Verpackungseinheit von 10 Reaktionen) PCR Mix μl Magnesiumchlorid μl Nuklease-freies Wasser μl Taq DNA Polymerase (hier: JumpStart 2.5 U/μL) Für 50 Proben (entsprechend der Verpackungseinheit von 50 Reaktionen) PCR Mix μl Magnesiumchlorid + 33 μl Nuklease-freies Wasser + 22 μl Taq DNA Polymerase (hier: JumpStart 2.5 U/μL) - Pipettieren Sie von diesem Master-Mix 22.5 μl in ein PCR-Gefäß und fügen 2.5 μl Ihrer DNA-Probe bzw. der Kontrolle hinzu. 2. Positivkontrolle Im Testkit ist eine gebrauchsfertige Positivkontrolle (rote Verschlusskappe) enthalten, die neben den DNA Proben stets mitgeführt werden sollte. Hierbei handelt es sich um nicht-infektiöse DNA mit Chlamydia- und Chlamydophila-spezifischen Sequenzen. Die Positivkontrolle ist nur mit PCR Mix I anzuwenden. Eine Positivkontrolle für Chlamydophila psittaci ist im Testkit nicht enthalten.

5 Chlamydia sp. 5 08/ Negativkontrolle Neben den DNA Proben sollte stets eine Negativkontrolle (z. B. Nuklease-freies Wasser) mitgeführt werden. Tabelle 1: Pipettierschema Probe (x1) Positivkontrolle (nur für PCR Mix I, Magnesiumchlorid I) PCR Kontrolle PCR Mix I oder PCR Mix II 17.0 μl 17.0 μl 17.0 μl Magnesiumchlorid I oder II 4.5 μl 4.5 μl 4.5 μl DNA Proben 2.5 μl - - Positivkontrolle μl - Nuklease-freies Wasser 0.6 μl 0.6 μl 3.1 μl Taq DNA Polymerase (1 U) * 0.4 μl 0.4 μl 0.4 μl * 1 Unit pro Amplifikation verwenden (hier: JumpStart 2.5 U/μL). Die Menge der einzusetzenden DNA richtet sich nach ihrer Konzentration und kann zwischen 1 und 3 μl variiert werden. Die Menge an Nuklease-freiem Wasser ist entsprechend zu korrigieren, so dass das Gesamtvolumen des PCR-Ansatzes immer 25 μl beträgt. PCR Amplifikationsparameter Wir empfehlen unbedingt die Verwendung der Sigma JumpStart Taq DNA Polymerase. Temperatur Zeit 94 C 3 min Hot Start * 94 C 30 s 60 C 30 s (RAMPING 1 C/s ** ) 72 C 30 s 72 C 5 min 35 Zyklen 10 C Bis zum Ende * Bei der Verwendung von hot start -Polymerasen sollten die vom Hersteller vorgegebenen Aktivierungszeiten eingehalten werden (für JumpStart Taq DNA Polymerase: 3 min). ** Dieser Wert ist bei den Thermocyclern gerätespezifisch einzustellen. Eine Kontrolle und ggf. Korrektur wird empfohlen. 4. Elektrophorese Die Analyse der PCR-Produkte erfolgt mit einem 2%igen Agarosegel und Anfärbung mit Ethidiumbromid ( μg/ml) in TAE-Puffer. 10 μl des PCR-Ansatzes werden pro Bahn aufgetragen. Die Zugabe von Gel-Beladungspuffer entfällt, da dieser bereits im Master-Mix enthalten ist. Zum Größenvergleich wird ein Längenstandard im niedermolekularen Bereich empfohlen (100 bp DNA Leiter). Die Elektrophorese sollte gerätespezifisch durchgeführt werden.

6 Chlamydia sp. 6 08/ Auswertung und Interpretation der Ergebnisse Die Größe der Amplifikate wird durch Vergleich mit dem DNA-Längenstandard bestimmt. Eine Fotodokumentation ist für Archivierungszwecke empfehlenswert. Schützen Sie Augen und Haut vor UV-Bestrahlung! Positives Ergebnis: Negatives Ergebnis: Ungültiges Ergebnis: Ein Fragment von 449 bp (Basenpaaren) (Chlamydia und Chlamydrophila) bzw. 467 bp (Chlamydophila psittaci) ist vorhanden. Im unten dargestellten Fall gehört der Erreger zur Gattung Chlamydia/Chlamydophila. Durch die spezies-spezifische Bande ist gleichzeitig nachgewiesen, dass es sich um Chlamydophila psittaci handelt. Bei niedriger Erregerkonzentration kann es vorkommen, dass die Bande von 838 bp (Amplifikationskontrolle) ebenfalls sichtbar ist. Der Test ist in diesen Fällen dennoch gültig. Die erregerspezifische Bande muss jedoch deutlich erkennbar sein. Ist nur die Bande von 838 bp (Amplifikationskontrolle) sichtbar, ist das Resultat negativ. Sollte keine der oben genannten Banden erkennbar sein, ist der Test nicht auswertbar und muss wiederholt werden. Möglicherweise wurde die PCR inhibiert. 838 bp Amplifikationskontrolle 467 bp spezies-spezifische Bande (Chlamydophila psittaci) 449 bp genus-spezifische Bande (Chlamydia und Chlamydophila) Spur 1/5: 100 bp DNA Leiter (Invitrogen) Spur 2/3: genus-spezifische Bande / Chlamydia und Chlamydophila (449 bp); DNA Probe positiv Spur 6/7: spezies-spezifische Bande / Chlamydophila psittaci (467 bp); DNA Probe positiv Spur 4/8: nur Amplifikationskontrolle sichtbar (838 bp); DNA Probe negativ Bitte fragen Sie uns, wenn Sie weitere Informationen wünschen.

7 BACTOTYPE PCR Amplification Kit Chlamydia sp. Manual Technology The product group BACTOTYPE PCR Amplification Kit comprises optimised systems for the identification of bacterial pathogens via polymerase chain reaction (PCR): Highest sensitivity and specificity: All components are carefully developed and perfectly optimised Easy and comfortable work: The reagents are ready-to-use and ready-to-load Reliable results: The test kit contains an internal amplification control The two primer pairs of the test kit are genus-specific for Chlamydia and Chlamydophila or species-specific for Chlamydia psittaci. The PCR products are analysed on a conventional agarose gel. The ready-to-load reagents allow direct loading of the samples on the gel without addition of gel loading buffer. False negative results are minimized by using an internal amplification control. Manual work is reduced to a minimum. With exception of Taq DNA Polymerase, the test kit consists of all reagents necessary for the detection of the bacterial germs. For research use only // 08/2012 Pathogenic Germ Chlamydiae belong to a heterogeneous group of bacteria which are responsible for a variety of diseases in men and animals. On basis of phylogenetic analysis of the ribosomal RNA genes the new taxonomy classification of the genus Chlamydia and Chlamydophila consisting of nine species was defined in Chlamydophila psittaci are known to have zoonotic potential and are very important for veterinary medicine. C. psittaci infections in parrots are termed as psittacose or parrot fever and in other birds than parrots as ornithose. BACTOTYPE PCR Amplification Kit Chlamydia sp. substitutes either cultivation of infected cells or immunofluorescent staining and provides sensitive and specific results in about one day. Ordering Information BACTOTYPE Chlamydia sp. 10 Reactions Cat. No BACTOTYPE Chlamydia sp. 50 Reactions Cat. No

8 Chlamydia sp. 2 08/2012 Content 10 reactions 50 reactions PCR Mix I (yellow cap) PCR buffer, dntps, primer mix (Chlamydia and Chlamydophila-specific as well as amplification control), DNA for amplification control, NaN 3 Magnesium Chloride I (green cap) MgCl 2, gel loading buffer PCR Mix II (purple cap) PCR buffer, dntps, primer mix (Chlamydophila psittaci-specific and amplification control), DNA for amplification control, NaN 3 Magnesium Chloride II (black cap) MgCl 2, gel loading buffer 221 μl 935 μl 80 μl 300 μl 221 μl 935 μl 80 μl 300 μl Positive Control (red cap) non-infectious DNA with Chlamydia and Chlamydophila-specific sequences, NaN 3 25 μl 25 μl Nuclease-free Water (blue cap) 1.0 ml 1.0 ml Storage Conditions Reagents of the test kit are stable for at least 12 months when stored at -20 C in darkness. Repeated freezing and thawing should be avoided. Additionally Reagents - Taq DNA Polymerase BACTOTYPE test kits are validated with JumpStart Taq DNA Polymerase (Sigma-Aldrich, Cat. No. D4184). Solely, the use of this DNA Polymerase assures precise function of the BACTOTYPE products. For ordering and further information, please contact Sigma-Aldrich. - Agarose and Ethidium bromide (for gel electrophoresis) bp DNA ladder (for gel electrophoresis) Trademarks and Patents - BACTOTYPE is a registered trade mark of the Biotype Diagnostic GmbH. - JumpStart is a registered trademark of Sigma-Aldrich. - The PCR is under patent laws. Patentees are Hoffmann-La Roche Inc. and F. Hoffmann-La Roche (Roche).

9 Chlamydia sp. 3 08/2012 Product Warranty All contents of the BACTOTYPE PCR Amplification Kit are subjected to extensive quality procedures by Biotype Diagnostic GmbH. In case of any problem, please report immediately. Notes Please, carry out precisely the instructions of the protocol! In order to avoid any kind of contamination we recommend pipetting with filter tips. DNA preparation, amplification, and electrophoresis should be carried out in separate rooms. Take note of safety regulations for working in laboratories, and wear gloves. The PCR Mix and the Positive Control contain sodium azide (NaN 3 ). Sodium azide is hazardous: Very toxic if swallowed, develops toxic gases when it gets in contact with acids (R /53, S1/ ). Ethidium bromide is hazardous, too. Please refer to the Material Safety Data Sheet (MSDS) and wear nitrile gloves. MSDS of all BACTOTYPE components are available from Labor Diagnostic Leipzig. For MSDS of additional reagents to be needed, please contact the corresponding manufactures. DNA Isolation Solely, ultrapure DNA implies the successful amplification. For DNA isolation of Chlamydia sp. from faeces, swabs or tissue samples (i.e. aborts or placenta) the following test systems are recommended: - NucleoSpin Tissue Kit; Macherey-Nagel, Düren - QIAamp DNA Mini Kit; QIAGEN, Hilden Please perform isolation according to the manufacturer s information.

10 Chlamydia sp. 4 08/2012 Protocol Preparation of the reagents: Before using the reagents of the test kit the first time, mix thoroughly and centrifuge the reagents for 5 sec at 3000 rpm. The blue colour in the magnesium chloride solution arises from the gel loading buffer and does not affect the PCR reaction. Please, avoid elongated centrifugation steps of the magnesium chloride solution. The gel loading buffer could be concentrated onto the bottom of the tube. Genus-spezific proof of Chlamydia/Chlamydophila sp.: Use PCR Mix I and Magnesium Chloride I Species-spezific proof of Chllamydophila psittaci: Use PCR Mix II and Magnesium Chloride II 1. A) PCR Protocol for a Number of Samples different from the Packaging Unit (Multiplicator) If there are less samples than the packaging unit, pipette as followed into a PCR reaction tube (also see pipetting scheme table 1): 17.0 μl PCR Mix μl Magnesium Chloride μl Nuclease-free Water μl Taq DNA Polymerase (here: JumpStart 2.5 U/μL) - Pipet 22.5 μl of the master mix into a PCR reaction tube and add 2.5 μl of your DNA sample or control. - Attention: Depending on the used Taq Polymerase, complete with Nuclease-free Water to a total volume of 25 μl per reaction. 1. B) PCR protocol for an Amount of Samples corresponding to Packaging Unit If the number of samples corresponds to the packaging unit, we recommend the addition of Magnesium Chloride, Nuclease-free Water, and Taq DNA Polymerase directly to the PCR Mix. For 10 samples (corresponding to the content of 10 reactions) PCR Mix μl Magnesium Chloride μl Nuclease-free Water μl Taq DNA Polymerase (here: JumpStart 2.5 U/μL) For 50 samples (corresponding to the content of 50 reactions) PCR Mix μl Magnesium Chloride + 33 μl Nuclease-free Water + 22 μl Taq DNA Polymerase (here: JumpStart 2.5 U/μL) - Pipet 22.5 μl of the master mix into a PCR reaction tube and add 2.5 μl of your DNA sample or control. 2. Positive Control The test kit is provided with a ready-to-use Positive Control (red cap) of non-infectious DNA with Chlamydia and Chlamydophila-specific sequences. We strongly recommend performing a positive control for each run. The Positive Control has to be used only in combination with the PCR Mix I. A positive control for Chlamydophila psittaci is not included in the test kit. 3. Negative Control It is strongly recommended to perform a negative control (e. g. Nuclease-free Water) for each run.

11 Chlamydia sp. 5 08/2012 Table 1: Pipetting Scheme Sample (x1) Positive Control (only for PCR Mix I, Magnesium Chloride I) PCR Control PCR Mix I or PCR II 17.0 μl 17.0 μl 17.0 μl Magnesium Chloride I or II 4.5 μl 4.5 μl 4.5 μl Sample DNA 2.5 μl - - Positive Control μl - Nuclease-free Water 0.6 μl 0.6 μl 3.1 μl Taq DNA Polymerase (1 U) * 0.4 μl 0.4 μl 0.4 μl * Use 1 Unit for amplification (here: JumpStart 2.5 U/μL). The volume of the DNA to be employed depends on its concentration and may be varied from 1 to 3 μl. Adjust the volume with Nuclease-free Water to a reaction volume of 25 μl in total. PCR Amplification Parameters We strongly recommend the use of Sigma JumpStart Taq DNA Polymerase. Temperature Time 94 C 3 min Hot Start * 94 C 30 s 60 C RAMPING 1 C/s ** 30 s 72 C 30 s 72 C 5 min 10 C hold 35 Cycles * For hot start Polymerase, please follow the activation time conditions specified by the manufacturer (for JumpStart Taq DNA Polymerase: 3 minutes). ** The value is adjusted for most of the thermocyclers. Cyclers that exceed the ramping rate should be monitored and corrected as required. 4. Electrophoresis PCR fragments are analysed on a 2% agarose gel and staining is done with ethidium bromide ( μg/ml) in TAE buffer. Put 10 μl of the PCR product per lane onto the gel (gel loading buffer already included). In order to compare the molecular size of the amplification products a size standard (100 bp DNA ladder) is recommended. Run the electrophoresis as described in the manufacturer s handbook.

12 Chlamydia sp. 6 08/ Analysis and Interpretation of the Results Size designation of the PCR fragments is done by comparison with the DNA size standard on a transilluminator. Photographic documentation is recommended. Protect eyes and skin against UV-radiation! Positive result: Negative result: Invalid result: The genus-specific amplificat of 449 bp (base pairs) (Chlamydia and Chlamydrophila) as well as the species-specific band of 467 bp (Chlamydophila psittaci) are clearly visible. The 838 bp (amplification control) band may be weak or may not appear at all due to low concentrations of bacterial DNA. In the picture below the germ belongs to the genus Chlamydia/Chlamydophila sp. Additionally, the species-specific amplificat detects the germ as Chlamydophila psittaci. If the 838 bp band (amplification control) appears only, germ detection is considered to be negative. If none of the bands mentioned above are detectable, the assay is invalid and has to be repeated. Possibly, the PCR has been inhibited. 838 bp amplification control 467 bp species-specific band (Chlamydophila psittaci) 449 bp genus-specific band (Chlamydia and Chlamydophila) Lane 1/5: 100 bp DNA ladder (Invitrogen) Lane 2/3: genus-specific signal / Chlamydia and Chlamydophila (449 bp); sample is positive Lane 6/7: species-specific signal / Chlamydophila psittaci (467 bp); sample is positive Lane 4/8: only the amplification control is visible (838 bp); sample is negative Please contact us for further information.