ZytoDot CEN X Probe. Zum Nachweis der humanen alpha-satelliten von Chromosom X durch chromogene in situ Hybridisierung (CISH) In-Vitro-Diagnostikum

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1 ZytoDot CEN X Probe C (0,4 ml) Zum Nachweis der humanen alpha-satelliten von Chromosom X durch chromogene in situ Hybridisierung (CISH).... In-Vitro-Diagnostikum gemäß EU-Richtlinie 98/79/EG

2 Digoxigenin-markierte Polynukleotid-Sonde für den Nachweis der humanen alpha-satelliten des Zentromers von Chromosom X mittels CISH, gebrauchsfertig Produktbeschreibung Zusammensetzung: Produkt: Spezifität: Lagerung/Stabilität: Verwendung: Sicherheitshinweise: ZytoDot CEN X Probe EmaNRF in Hybridisierungspuffer. Die Sonde besteht aus Digoxigenin-markierten Polynukleotiden, die gegen alpha-satelliten-sequenzen des Zentro-mers von Chromosom X gerichtet sind. C : 0,4 ml (40 Anwendungen à 10 µl) Die Sonde ZytoDot CEN X Probe EmaNRF ist für den Nachweis der alpha-satelliten von Chromosom X in formalinfixierten, paraffineingebetteten Gewebe- oder Zellproben mittels chromogener in situ Hybridisierung (CISH) bestimmt. Die Sonde ZytoDot CEN X Probe EmaNRF muss bei 2 8 C gelagert werden und ist bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Haltbarkeitsdatum stabil. Dieses Produkt ist für den Gebrauch als In-vitro- Diagnostikum (gemäß EU-Richtlinie 98/79/EG) bestimmt. Die Interpretation der Ergebnisse muss im Kontext der klinischen Anamnese unter Einbeziehung weiterer klinischer und pathologischer Daten des Patienten durch einen qualifizierten Pathologen erfolgen! Arbeitsanleitung vor Durchführung der Anwendung lesen! Reagenzien nach Ablauf des Haltbarkeitsdatums nicht mehr benutzen! Dieses Produkt enthält gesundheitsgefährdende Stoffe in geringen Konzentrationen und Volumi

3 na. Der direkte Kontakt mit den Reagenzien muss vermieden werden. Entsprechende Schutzmaßnahmen sind zu treffen (Benutzung von Einmalhandschuhen, Schutzbrille und Laborbekleidung)! Bei Kontakt mit dem Reagenz müssen die betroffenen Stellen sofort mit viel Wasser abgespült werden! Ein Sicherheitsdatenblatt ist auf Anfrage für den berufsmäßigen Verwender erhältlich! Prinzip der Methode Das Vorkommen bestimmter Nukleinsäuresequenzen in Zellen oder Geweben kann mit Hilfe markierter DNA-Sonden durch in situ Hybridisierung nachgewiesen werden. Die Hybridisierung führt zur Duplexbildung zwischen im Untersuchungsgegenstand vorliegenden Sequenzen und der entsprechenden DNA-Sonde. Die Duplexbildung der Digoxigenin-markierten DNA-Sonde (mit Sequenzen der alpha-satelliten von Chromosom X im Untersuchungsmaterial) wird über einen primären (nicht markierten) Anti-Digoxigenin-Antikörper, der von einem sekundären polymerisierten Enzym-konjugierten Antikörper detektiert wird, nachgewiesen. Die enzymatische Umsetzung eines chromogenen Substrates führt zur Bildung eines lichtmikroskopisch erkennbaren Farbpräzipitats

4 Arbeitsanleitung Die Vorbehandlungen des Untersuchungsmaterials (Entparaffinierung, Proteolyse, Postfixierung) unterliegen der Vorgabe des Anwenders. Denaturierung und Hybridisierung der Sonde: NK Die Sonde ZytoDot CEN X Probe EmaNRF vortexen und je 10 µl auf verschiedene Schnitte des Untersuchungsmaterials pipettieren Sonde tropfenweise auf der gesamten Zielfläche verteilen, um eine lokale Konzentration der Sonde zu vermeiden. Alternativ Sonde in die Mitte des Deckglases geben, dieses umdrehen und auf Schnitt legen. Das unmittelbare leichte Erwärmen sowie der Einsatz einer abgeschnittenen Pipettenspitze erleichtern gegebenenfalls das Pipettieren der Sonde. OK Die Schnitte mit einem Deckglas (22 mm x 22 mm) luftblasenfrei abdecken und versiegeln. Deckglasränder z. B. mit einer Schicht Heißkleber mit Hilfe einer Klebepistole oder mit Rubber Cement abdichten PK= Die Objektträger für 5 min bei C (z. B. auf einer Wärmeplatte) inkubieren QK= Die Objektträger in eine feuchte Kammer überführen und zur Hybridisierung über Nacht bei 37 C (z. B. in einem Wärmeschrank) inkubieren Die Gewebe-/Zellschnitte dürfen während der Hybridisierung nicht austrocknen. Weitere Prozessierungsschritte (z. B. Waschen, Detektion und Gegenfärbung) richten sich nach den Vorgaben des Anwenders. Für eine anwenderfreundliche Durchführung empfehlen wir die Verwendung eines ZytoDot-CISH-Systems von ZytoVision. Diese Systeme wurden auch für den Nachweis der Eignung der ZytoDot CEN X Probe EmaNRF herangezogen

5 Ergebnisse In normalen weiblichen Zellen bzw. weiblichen Zellen ohne Veränderung von Chromosom X, erscheinen in der Interphase zwei Chromosom-X-spezifische punktförmige Signale, die sich deutlich vom Hintergrund unterscheiden. In normalen männlichen Zellen erscheint in der Interphase ein Chromosom-X-spezifisches Signal. In Zellen mit einer Aneuploidie von Chromosom X sind abweichende Signalmuster in der Interphase zu erkennen. Aufgrund von Mitose können in einem kleinen Prozentsatz Zellen zusätzliche Signale sichtbar sein. Gelegentlich werden in paraffineingebetteten Gewebeproben Zellkerne mit weniger Signalen beobachtet. Um die Spezifität der erhaltenen Signale beurteilen zu können, sollten bei jedem Testdurchgang Kontrollen mitgeführt werden. Wir empfehlen mindestens einen Kontrollschnitt mit bekannter Chromosom-X-Kopienzahl mitzuführen. Unsere Experten beantworten gerne Ihre Fragen

6 Literatur Durfy SJ, Willard HF (1987) Am J Hum Genet 41: Isola J, Tanner M (2004) Methods Mol Med 97: Speel EJ, et al. (1994) J Histochem Cytochem 42: Tsukamoto T, et al. (1991) Int J Dev Biol 35: Waye JS, Willard HF (1987) Nucleic Acids Res 15: Wilkinson DG: In Situ Hybridization, A Practical Approach, Oxford University Press (1992) ISBN Stand: 1. März 2011 (5.0) Warenzeichen: ZytoVision und ZytoDot sind Warenzeichen der ZytoVision GmbH

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